一种多不饱和脂肪酰磷脂衍生物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种化合物的系列衍生物，尤其是涉及一种多不饱和脂肪酰磷脂衍生 物及其制备方法与应用，且该系列多不饱和脂肪酰磷脂衍生物在制备调节血脂异常的药 物、保健品或食品中的应用。
【背景技术】
[0002] 物质生活条件的改善和生活方式的改变，导致高血脂症发病率在不断地逐年上 升，由高血脂症引起的营养代谢疾病如异常脂血症、动脉粥样硬化等已成为严重威胁人类 健康的一类疾病。据世界卫生组织发布一项各国肥胖的调查报告，报告显示，当今世界至少 有16亿人超重或肥胖。
[0003] 磷脂（PC)是一类存在于生物界的含磷脂类，在植物的种子、动物的血液、脏器、蛋 黄及细菌中与油脂并存，是生命的基础物质之一。磷脂具有乳化、分解油脂的作用，可增 进血液循环，改善血清脂质，清除过氧化物，使血液中胆固醇及中性脂肪含量降低，减少脂 肪在血管内壁的滞留时间，促进粥样硬化斑的消散，防止由胆固醇引起的血管内膜损伤， 因而可预防和治疗动脉硬化症，是血管的"清道夫"（李立，磷脂的药用价值，粮油与油 脂，2001，8, 34-36 ;Silva，VM et.al Plasma Lipids, Lipoprotein Metabolism and HDL Lipid Transfers are Equally Altered in Metabolic Syndrome and in Type 2Diabete s，Lipds，2014, 49, 677-684)。然而，磷脂和现有多不饱和脂肪酰磷脂虽然有一定的降血脂活 性，但是其药效相比现有的降血脂药物相差甚远，因此并没有被开发成药用制剂。
【发明内容】
[0004] 鉴于现有技术的不足，本发明人通过大量试验对天然卵磷脂的某些基团进行替换 或修饰，从而得到了一系列降血脂活性更好，同时具有调节饮食失调及减肥功效的多不饱 和脂肪酰磷衍生物。
[0005] 基于发明人的试验结果，本发明的第一个目的在于提供一系列多不饱和脂肪酰磷 脂衍生物。
[0006] 另外，本发明的第二个目的在于提供一种条件温和、操作方便的多不饱和脂肪酰 磷脂衍生物的制备、精制方法。
[0007] 再者，本发明的第三个目的在于所提供上述多不饱和脂肪酰磷脂衍生物在制备调 节血脂异常的药物、保健品或食品中的应用。
[0008] 本发明的第一个目的是通过如下技术方案完成的：一种多不饱和脂肪酰磷脂衍生 物，该衍生物的结构通式如下：
[0009]
[0010] 其中，m = 5 或 6 ;n = 2,3 或 5 ;k = 2,3,4,5 或 6。
[0011] 优选地，如上所述的多不饱和脂肪酰磷脂衍生物，其包括如下具体的化合物：
[0012] (0, 0)_二异丙基-[0-(二十二碳六稀酰基-2-乙醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0013] (0, 0)-二异丙基-[0-(二十二碳六烯酰基-3-丙醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0014] (0, 0)-二异丙基-[0_(二十二碳六烯酰基-4- 丁醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0015] (0, 0)-二异丙基-[ο-(二十二碳六烯酰基-5-戊醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0016] (0, 0)-二异丙基-[0-(二十二碳六烯酰基-6-己醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0017] (〇, 〇) _二异丙基-[0-(二十碳五稀酰基-2-乙醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0018] (0, 0)-二异丙基-[0_(二十碳五烯酰基-3-丙醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0019] (0, 0)-二异丙基-[0_(二十碳五烯酰基-4- 丁醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0020] (0, 0)-二异丙基-[ο-(二十碳五烯酰基-5-戊醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0021 ] (0, 0)-二异丙基-[0-(二十碳五烯酰基-6-己醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0022] (0, 0)-二异丙基-[0-(二十二碳五烯酰基-2-乙醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0023] (0, 0)-二异丙基-[0-(二十二碳五烯酰基-3-丙醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0024] (0, 0)-二异丙基-[0-(二十二碳五烯酰基-4- 丁醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0025] (0, 0)-二异丙基-[0-(二十二碳五烯酰基-5-戊醇胺基）]-亚磷酸脂；
[0026] (0, 0)-二异丙基-[0-(二十二碳五烯酰基-6-己醇胺基）]-亚磷酸脂。
[0027] 本发明的第二个目的是通过如下技术方案完成的：一种多不饱和脂肪酰磷脂衍生 物的制备方法，该方法包括以下步骤：将多不饱脂肪酸和磷酰化醇胺混合均匀，在酯缩合剂 的作用下，制备得到多不饱和脂肪酰磷脂衍生物；所述的酯缩合剂包括N，N-二甲基甲酰 胺、三乙胺和草酰氯。
[0028] 优选地，如上所述多不饱和脂肪酰磷脂衍生物的制备方法，其中的多不饱和脂肪 酸选自二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸和二十二碳五烯酸中的一种。
[0029] 优选地，如上所述多不饱和脂肪酰磷脂衍生物的制备方法，其中的磷酰化醇胺选 自磷酰化乙醇胺、磷酰化丙醇胺、磷酰化丁醇胺、磷酰化戊醇胺和磷酰化己醇胺中的一种。
[0030] 优选地，如上所述多不饱和脂肪酰磷脂衍生物的制备方法，其中的酯缩合剂为 N，N-二甲基甲酰胺、三乙胺和草酰氯按体积用量比为（1. 2-1. 6) : (3. 0-4. 8) : (0. 8-1. 4)配 制的二氯甲烷混合溶液。
[0031] 进一步优选地，如上所述多不饱和脂肪酰磷脂衍生物的制备方法是将多不饱脂肪 酸和磷酰化醇胺混合均匀，在酯缩合剂的作用下，于〇°C下搅拌反应l-3h，得到多不饱和脂 肪酰磷脂衍生物。
[0032] 一种多不饱和脂肪酰磷脂衍生物的精制方法，取上述制备方法得到的反应物，加 入饱和碳酸钠溶液，以二氯甲烷萃取1-5次，萃取液经干燥，浓缩，然后先后上硅胶柱层析、 高效液相制备色谱纯化，收集特征保留时间的组分，即得多不饱和脂肪酰磷脂衍生物精品； 所述硅胶柱层析的流动相为体积比1 : 2的乙酸乙酯-石油醚溶液；所述高效液相制备色 谱的流动相为体积比95 : 5的甲醇-水溶液。
[0033] 在本发明所有的实施例中，如上所述多不饱和脂肪酰磷脂衍生物的精制方法，其 高效液相制备色谱的型号为Agi I ent XDB-C18Z0RBAX，流速20ml/min，所述的特征保留时间 为 t1/2= 5. 5-11. Omin0
[0034] 以饮食性诱导小鼠急性高脂血症模型，利用本发明提供的多不饱和脂肪酰磷脂衍 生物对小鼠进行降脂作用的治疗；实验结果表明，多不饱和脂肪酰磷脂衍生物可以显著地 降低模型小鼠血清中TC，TG的含量，提高HDL-C的含量，并且能抑制食物摄取，促进脂肪水 解并防止脂肪堆积。因此，本发明的第三个目的是通过如下技术方案完成的：上述的多不饱 和脂肪酰磷脂衍生物在制备降低血清总胆固醇、甘油三酯或/和提高高密度脂蛋白的药物 中的应用；以及上述的多不饱和脂肪酰磷脂衍生物在制备调节饮食失调或/和治疗超重或 肥胖的药物、保健品或食品中的应用。
[0035] 与现有技术相比，本发明提供的多不饱和脂肪酰磷脂衍生物是一种结构新颖的、 具有显著降血脂功效的活性物质，不但具有抑制脂肪吸收，促进脂肪水解的功能，而且还能 促进脂肪水解并防止脂肪堆积，同时不影响患者的食欲，有望在将来被开发成为安全有效 的降低血脂，调节饮食失调、治疗超重或肥胖等营养性疾病的药物。另外，本发明的制备方 法条件温和、操作方便，适合工业化生产。
【附图说明】
[0036] 图1为化合物2a的1H NMR氢谱图。
[0037] 图2为化合物2a的13C NMR碳谱图。
[0038] 图3为化合物2a的31P NMR碳谱图。
[0039] 图4为化合物2a的IR红外谱图。
【具体实施方式】
[0040] 具体来说，本发明多不饱和脂肪酰磷脂衍生物的制备方法包括以下步骤：将多不 饱和脂肪酸、磷酰化胺醇混合均匀，慢慢滴入酯缩合剂，酯缩合剂为N，N-二甲基甲酰胺、三 乙胺和草酰氯按体积用量比为（1.2-1. 6) :(3.0-4.8) :(0.8-1.4)配制的二氯甲烷混合溶 液，〇°C下搅拌反应2h，反应结束后，反应液加入饱和碳酸钠溶液，以二氯甲烷萃取，无水硫 酸镁干燥，过滤后减压浓缩，粗产品快速硅胶柱层析: Vwm=I : 2)，纯化得到黄 色粘稠状产物；Agilent XDB-C18ZORBAX高效液相制备色谱进一步纯化，流动相: V水 =95 : 5)，流速20ml/min，收集保留时间t1/2= 5. 5-11.0min的组分，即得淡黄色粘稠状 产物。以下通过具体地实施例对本发明作进一步的说明。
[0041] 实施例1 :制备DHA-PC (2)化合物（2a)，化合物（2a)的结构式为：
[0042] ? H °/> < CH3^CH2 CH=CH^( ( H2 >2 C O ( ( H2 ) , N IV〇
[0043] 将12mmol多不饱和脂肪酸，IOmmol磷酰化乙醇胺混合均勾，慢慢滴入醋缩合剂， 它包括I. 4mL DMF，3. 6mL Et3N* I. 2mL(C0Cl)^ 30mL二氯甲烷混合溶液，(TC下搅拌反应 2h。反应结束后，反应液加入饱和碳酸钠溶液（IOOmL)，二氯甲烧萃取两次（50mL)，无水硫 酸镁干燥，过滤后减压浓缩，粗产品快速硅胶柱层析: Vwm=I : 2)，纯化得到黄 色粘稠状产物。Agilent XDB-C18Z0RBAX高效液相制备色谱进一步纯化，室温，流动相（V甲 醇：V水=95 : 5)，流速20ml/min，收集保留时间t1/2= 6. Imin的组分，即得淡黄色粘稠状 产物（产物的氢谱图见图1，13C NMR碳谱图见图2,31P NMR碳谱图见图3, IR红外谱图见图 4)〇
[0044] 化合物（2a)的主要物理及化学性质如下：
[0045] 淡黄色液体，1H NMR (400MHz, CDCl3) δ (ppm) : 5. 41-5. 33 (m, 12H, 6 - CH = CH-)，4 .60-4. 57 (m, 2H, 20CH), 4. 14-4. 11 (m, 2H, NHCH2), 3. 15-3. 12 (m, 2H, OCH2), 2. 85-2. 79 (m, IOH ,5CH2), 2. 39-2. 38 (m, 4H, 2CH2), 2. 09-2. 05 (m, 2H, CH2), I. 33-1. 30 (m, 12H, 4CH3) I. 30 (s, IH ,NH), 0. 97 (t, J = 8Hz, 3H, CH3) ；13C NMR: 172. 9 (C = 0), 132. 0, 129. 5, 128. 5, 128. 3, 128. 2 ，128. I, 128. I, 128. 0, 128. 0, 127. 9, 127. 8, 127. 0 (烯碳），71. 0 (OSH)，70. 9 (OSH)，64. 6 (SH2 0), 40. 4 (NHCH2), 34. 0, 25. 6, 25. 5, 25. 5, 23. 8, 23. 8, 22. 7, 20. 5, 14. 3 (CH3) ；31P NMR: 6. 72 ； IR(KBr) v (cm-1) :3482 (N-H), 2978 (HC = CH), 1737 (C = 0), 1387, 1018,990,897 ；MS m/z:5 36[M+H]+, 558[M+Na]+, 274 〇
[0046] 实施例2 :制备DHA-PC (3)化合物（2b)，化合物（2b)的结构式为：
[0047]
[0048] 将12mmol多不饱和脂肪酸，IOmmol磷酰化丙醇胺混合均勾，慢慢滴入醋缩合剂， 它包括I. 2mL DMF，3. OmL Et3N* 1.0 mL(COCl)^ 30mL二氯甲烷混合溶液，(TC下搅拌反应 2h。反应结束后，反应液加入饱和碳酸钠溶液（IOOmL)，二氯甲烧萃取两次（50mL)，无水硫 酸镁干燥，过滤后减压浓缩，粗产品快速硅胶柱层析: Vwm=I : 2)，纯化得到黄 色粘稠状产物。Agilent XDB-C18Z0RBAX高效液相制备色谱进一步纯化，室温，流动相（V甲 醇：V水=95 : 5)，流速20ml/min，收集保留时间t1/2= 5. 9min的组分，即得淡黄