[0250] 实施例7.用于制备大粒径化合物1游离碱的一锅法
[0251]
[0252] 于反应器中添加水（200mL，lOmL/g)及4-{6-[6_(l-丁氧基-乙烯基）-8_环戊 基-5-甲基-7-氧代-7, 8-二氢吡啶并[2, 3-d]嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-哌 嗪-1-甲酸叔丁酯（20g，33. 1毫摩尔，1. 0当量），然后添加l-BuOH(232mL，11. 6mL/g)以将 任何固体冲入反应器。将该黄色淤浆加温至70°C。形成两液相混合物。在大约10分钟期 间将浓HC1溶液（16. 3g，165. 5毫摩尔，5. 0当量）加入该反应器。使该反应混合物保持在 70°C为时4至6小时。在3小时后获致透明黄色双相溶液。
[0253] 于该反应混合物中添加茴香醚（356mL，17. 8mL/g)。在将该混合物维持在70°C时， 在20分钟期间将NaOH (17. 2g，172. 1毫摩尔，5. 2当量）水溶液（40wt %溶液）添加至该反 应器以使该反应混合物提高至pH>10。于NaOH添加完成之后，搅拌该两相混合物30分钟。
[0254] 将所述相分离并以水清洗有机相两次。然后将该批料加热至80°C并无碎肩过滤至 结晶容器，以丁醇冲洗该过滤器。然后蒸馏该批料以除去水并达到120°C的温度。然后将 该批料冷却至80°C，以化合物1游离碱（A型）晶种晶体（(0. 015g，0. 033毫摩尔，0. lwt% wrt化合物1)及l-Bu0H(10mL，0. 5mL/g)的晶种淤浆加晶种。然后以0. 2°C /分钟将该批 料冷却至30°C，然后以每次使温度逐步下降10°C的三个回合使其成熟。在最终回合时，将 该批料冷却至l〇°C、粒化及过滤。以庚烷清洗该滤饼两次，并在真空下干燥。干燥后，确认 该样品为单晶A型多晶型。
[0255]:H NMR(600MHz, DMS0-d6/TFA) ：8 10. 41 (s, 0. 75H) , 9. 03 (s, 0. 25H), 8. 98 (s, 2H) , 8. 12 (d, J = 3. 0Hz, 1H), 7. 90 (d, J = 9. 1Hz, 1H) , 7. 63 (dd, J = 9. 1，3. 0Hz, 1H), 5. 84(m, 1H), 3. 40(宽，4H), 3. 29(宽，4H), 2. 43(s, 3H), 2. 33(s, 3H), 2. 2 1 (m，2H)，1. 91 (m，2H)，1. 79 (m，2H)，1. 59 (m，2H) ;13C NMR(150MHz，DMS0-d6/TFA) : S 202. 4， 160. 7, 154. 8, 158. 3, 158. 0, 144. 9, 142. 3, 142. 0, 134. 6, 129. 7, 126. 7, 115. 3, 107. 0, 53. 0 ，45.6,42.6,31.3,27.6,25.2，13.7;11冊5:(：24113。队0 2(]\1+11)+的计算值：448.24555，发现值： 448. 24540〇
[0256] 以下提供化合物1游离碱的小原生粒径及大原生粒径制剂的对比PSA、SSA及表面 能数据。在所有情况下，所述游离碱作为A型多晶型分离。
[0257] 粉末X射线衍射（PXRD)
[0258]实验：
[0259] 使用配备Cu福射源、固定狭缝（发散=1. 0mm，抗散射=0? 6mm及接收= 0.6mm)及闪烁计数器检测器的Bruker D8衍射仪进行粉末衍射分析。数据于Cu波长 10% =1.S4056A从3. 0至40. 0度的2 0使用0. 040度的步幅及2. 0秒的步时收集在 0-0测角仪中。X射线管电压及安培值分别设于40kV及40mA。样品通过放置在镍盘 (Gasser&Sons, Inc. Co_ack，NY)中来制备并于数据收集期间使其旋转。收集数据并使用 Bruker DIFFRAC Plus软件（2. 6版）分析。PXRD数据文件（.raw)在峰搜寻之前未经处理。 通常，使用临限值1及宽度值〇. 3来进行初步峰指定。目视检查自动化指定的输出以确保 有效性及视需要进行人工调整。另外，若情况适当，在光谱内人工指定峰。
[0260] SSNMR 实验：
[0261] A型的碳光谱在4mm转子上2048次扫描获取，其中再循环延迟为25秒及交叉极化 为2ms。于获取期间应用100kHz质子去耦。B型的碳光谱在4mm转子上2048次扫描获取， 针对再循环延迟为4. 5秒及交叉极化为2ms的128次扫描收集。于获取期间应用70kHz质 子去耦及旋转边带总抑制（TOSS)。
[0262] 仪器方法：
[0263] 将大约80毫克的样品装入4mm Zr02转子。在周围温度及压力下，于定位于大口径 Bruker-Biospin Avance III 500MHz (4频率）NMR光谱仪内的Bruker-Biospin 4mm CPMAS 探针上收集光谱。该经装填的转子以魔角定向且在15. 0kHz下旋转。13C固态光谱使用质 子去耦交叉极化魔角旋转（CPMAS)实验收集。交叉极化接触时间设为2. 0ms。在获取期间 施加大约100kHz的质子去耦场。获取再循环延迟为25秒的512次扫描的化合物1A型的 碳光谱。该光谱示于图2,且数据列表于表2。获取再循环延迟为4. 5秒的2048次扫描的 化合物1B型的碳光谱。这些碳光谱使用高场共振设于29. 5ppm的结晶金刚烷的外部标准 参考。该光谱示于图4中，且数据列表于表4中。
[0264] 粒径分析
[0265] 粒径使用激光衍射（或小角度光散射）技术，通过压缩空气分散干燥样品粉末来 分析。特别是，该粒径分布使用配备Vibri干粉进料器的Sympatec HEL0S R0D0S系统来分 析。该粉末样品以0.5巴的分散压力来分散。在一些实施例中，使用Aspiros微调剂装置， 且以0.2巴的分散压力分散该粉末样品。选择适用的透镜以涵盖每一样品的粒径范围。
[0266] 结果
[0267] API四个批料的对照数据提供于下表11中，使用Vibri或Aspiros装置来分散样 品。4号批料具有约75 y m的D90,然而1号及2号批料二者均具有大约45微米的D90。激 光衍射粒径数据确认这些批料的SEM观察。
[0268] 表11.比较性尺寸分布数据
[0269]
[0270] 扫描电子显微术（SEM)
[0271] 扫描电子显微术在标准条件下进行。图5提供从40% BuOH/茴香醚再结晶的化合 物1游离碱A型的SEM(200倍放大倍率）图像。图6提供从标准游离碱化程序分离的化合 物1游离碱A型的SEM(1500倍放大倍率）图像。
[0272] 黏附分析
[0273] 内部开发MASS (用于黏附的物质粘着筛选）冲压以通过在一系列压制之后秤重可 除去冲压尖端上黏附的粉末的量来定量评估片剂制剂的黏附倾向。此测试使配制者能客观 且迅速评估药品发展期间的冲压黏附风险以及排除临床片剂制备期间所观察到的黏附问 题。
[0274] 为了制备MASS冲压用的样品，将10g的API稀释于经稍微润滑的标准掺合物中 (10%API，89.75%Avicel PH102及0.25%硬脂酸镁）且在瓶（500mL琥珀色玻璃瓶）中 旋转500次掺合的。使用微量天平，在目前固体摩擦力为0. 85下定期评估至高达100次压 制~250mgW片剂时黏附于该可除去冲压尖端（1/2〃圆形平面）的粉末重量。
[0275] 混合于该标准掺合物中的化合物1游离碱的MASS冲压曲线显示正响应。压制结 束时的冲压尖端的相片确认粉末黏附于这些尖端（数据未显示）。为了供参考，该标准掺合 物的对照样品不具黏附性，且具有少于10 y g的黏附粉末。已发现该测试方法将新API批 料的黏附倾向相对于已知物质的黏附做排序。
[0276] 比表面积（SSA)测量（BET氮）
[0277] 装置
[0278]比表面积（SSA)测量（BET 氮）使用 Micromeritics TriStar II 3020 比表面积 分析仪与 Micromeritics SmartPrep 站（Micromeritics U. K. Ltd. , Ste 2, The Stables Hexton Manor, Hexton, Hertfordshire SG53JH,英格兰）一起测定。对样品进行该 BET-氮 吸附分析以测定这些样品的比表面积。
[0279] 设定
[0280]软件版本 TriStar II Confirm(l. 03 或等效物）
[0281] 被吸附物：氮
[0282] 样品管：具有玻璃填料棒的3/8"mm平底单元
[0283] 样品量*:单元的大约3/4满
[0284] 样品制备：SmartPrep(使用氮流动脱气）
[0285] 脱气条件：于25°C在气体流下16小时（升温速率为10°C /分钟）
[0286] 等温套：使用
[0287] 等温收集点：在0. 05-0. 30P/PO范围中的11点BET
[0288] 等温数据分析范围：在0. 05-0. 20P/P〇范围中的7点BET
[0289] 渗漏测试：120s
[0290] 自由空间：测得
[0291] 抽空时间：lhr
[0292] 脱气测试持续期间：180s
[0293] 平衡化间隔：10s
[0294] 平衡化时限：600s
[0295] *样品的量根据测试样品的粒径而变化。就粒径相对小的样品而言，需要大约 〇. 50g的物质以填满该单元圆头的3/4,及而样品的粒径较大的情况下，需要0. 75g的物质 填满该单元圆头的3/4。
[0296] 计算及报告
[0297] 使用来自一式三份测定的7点BET报告在0. 05-0. 20P/PO范围内的比表面积。测 定各复制物的样品量、比表面积、BET常数（"C"值）及相关数。
[0298] 结果
[0299] 表12提供4批化合物1游离碱API批料的BET-N2SSA，其中一者包含通过传统盐断 裂法所制备的小原生粒径API (批料5)，及三种批料包含根据本发明所制备的大粒径API。 批料5含有具有小初级粒子及大型聚结物的化合物1游离碱，其非常容易产生静电及非常 粘。批料6使用温度循环制备，且具有大粒径化合物1游离碱的典型粒径分布（PSD)，VMD 为大约17微米。批料7显示与批料6相似的PSD。批料8为显示大粒径化合物1游离碱的 代表性ICH批料，其亦通过温度循环制备。在以下表面能测定中使用相同批料。
[0300] 表12?使用队的BET SSA
[0301]
[0302] 反相气相色谱法（IGC)表面能测量：
[0303]将充分量的样品装填于硅烷化玻璃管中，这些粉末通过插在两端的玻璃羊毛塞固 定在该管内。该管通过使干燥氮气流流动经过所述粉末充分时间以使任何表面被吸附物被 除去来调理。通过将一系列烷烃蒸气探针（壬烷、辛烷、庚烷及己烷）注入该载体气体流使 其浓度低到足以假设所述烷烃蒸气在所述氮气流中无限稀释，并记录各蒸气经由该管洗出 所花费的时间来进行测量。保留时间（针对该装填的管内的填隙空间的"死体积"校准）与 横断面积及所使用的烷烃蒸气探针分子的表面张力的函数作图产生直线，斜率表示被检验 的固态粉末的表面能。
[0304] 结果
[0305] 表13提供针对SSA数据所产生的四批化合物1游离碱批料（即，上述批料5至8) 的分散表面能（mj/m 2)数据。批料5为小粒径游离碱，及批料6至8包括大粒径游离碱API。
[0306] 表13?分散表面能（mj/m2)
[0307]
[0308] 本说明书中所提及的所有公开案及专利申请及其中引用的所有参考数据以引用 方式并入本申请中的程度如同个别公开案或专利申请或参考数据明确个别指示为以引用 方式并入。虽然前述发明已经由为求清楚理解的说明及实施例而详细描述，但本技术的一 般技术人士根据本发明教示将很容易理解可对其进行特定改变及修改而不违背附录申请 专利范围的精神与范围。
【主权项】
1. 6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基）-8H-吡啶并 [2, 3-d]嘧啶-7-酮的结晶游离碱，其具有< 2平方米/克的比表面积。2. 权利要求1的游离碱，其具有< 1平方米/克的比表面积。3. 权利要求1或2的游离碱，其中该结晶游离碱为该游离碱的A型多晶型。4. 权利要求3的游离碱，其具有包含在衍射角（2 0 ) 10. 1±0. 2的峰的粉末X射线衍射 图案。5. 权利要求3的游离碱，其具有包含在衍射角（2 0 ) 8. 0±0. 2及10. 1±0. 2的峰的粉 末X射线衍射图案。6. 权利要求3的游离碱，其具有包含在衍射角（2 0 )8.0±0. 2、10. 1 ±0.2及 11. 5±0. 2的峰的粉末X射线衍射图案。7. 权利要求3的游离碱，其具有包含在衍射角（2 0 )8. 0±0. 2、10. 1±0. 2、10. 3±0. 2 及11. 5±0. 2的峰的粉末X射线衍射图案。8. 权利要求3的游离碱，其具有包含在实质上与图1中所示相同的衍射角（2 0 )的峰 的粉末X射线衍射图案。9. 权利要求1~8任一项的游离碱，其具有包含以下共振（ppm)值的13C固态NMR光 谱：12. 5ppm±0. 2ppm〇10. 权利要求9的游离碱，其具有包含以下共振（ppm)值的13C固态NMR光谱：12. 5ppm 及 112. 4ppm±0. 2ppm〇11. 权利要求9或10的游离碱，其具有包含以下共振（ppm)值的13C固态NMR光谱： 12. 5ppm、112. 4ppm 及 143. 2ppm±0. 2ppm〇12. 权利要求1~8任一项的游离碱，其具有约5微米至约150微米的原生粒径。13. 权利要求1~12任一项的游离碱，其具有特征如下所示的原生粒径分布：（i)约5 微米至约10微米的DlO值；（ii)约30微米至约125微米的D90值；或（iii)约10微米至 约45微米的D50值；或⑴、（ii)及（iii)的组合。14. 权利要求1~13任一项的游离碱，其具有（D90-D10)/D50为约2至约3的原生粒 径分布比。15. -种药物组合物，其包含权利要求1~14任一项的游离碱及至少一种药学上可接 受的载体、稀释剂或赋形剂。16. -种胶囊，其包含权利要求15的药物组合物，其含有0. 1至200毫克的6-乙酰 基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧 啶-7-酮游离碱的A型多晶型。17. -种治疗癌症的方法，其包括给予需要该治疗的人治疗有效量的权利要求15的药 物组合物。18. -种制备具有彡2平方米/克的比表面积的6-乙酰基-8-环戊基-5-甲 基-2- (5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮的游离碱（A型） 的方法，其包括： (a)将6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2- (5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基）-8H-吡啶 并[2, 3-d]嘧啶-7-酮游离碱悬浮于正丁醇及茴香醚的混合物中，并加热至约95~100°C 以获得溶解； (b) 冷却至约80 °C并提供6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡 啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮游离碱（A型）的晶种； (c) 将所述混合物维持在约80°C约3小时，然后逐渐冷却至约KTC以获得结晶；以及 (d) 过滤以分离具有< 2平方米/克的比表面积的6-乙酰基-8-环戊基-5-甲 基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮的游离碱（A 型）。19. 一种制备具有彡2平方米/克的比表面积的6-乙酰基-8-环戊基-5-甲 基-2- (5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮的游离碱（A型） 的方法，其包括： (幻将4-{6-[6-(1-丁氧基-乙烯基）-8-环戊基-5-甲基-7-氧代-7,8-二氢吡啶 并[2, 3-d]嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯悬浮于水及正丁醇的混 合物中，并加热至约70°C以获得溶解； (b) 添加浓HCl并在约70°C加热达4~6小时； (c) 添加茴香醚及NaOH水溶液以获得pH为>10的双相混合物； (d) 分离层并加热该有机层至约120°C以馏出水； (e) 冷却至约80 °C并提供6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡 啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮游离碱（A型）的晶种； (g)在约80°C将所述混合物维持约3小时，然后逐渐冷却至约KTC以获得结晶；以及 (g)过滤以分离具有< 2平方米/克的比表面积的6-乙酰基-8-环戊基-5-甲 基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮的游离碱（A 型）。 20. 6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2- (5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基）-8H-吡啶并 [2, 3-d]嘧啶-7-酮的游离碱（A型），其是根据权利要求18或19的方法制备的。
【专利摘要】本发明涉及具有改善的性质的式(<u>1</u>)乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮的结晶游离碱、包含该游离碱的药物组合物及剂型、以及制备及使用所述化合物、组合物及剂型用于治疗细胞增生疾病(诸如癌症)的方法。
【IPC分类】A61K31/519, A61P35/00, C07D471/04
【公开号】CN105008357
【申请号】CN201480009556
【发明人】B·P·柴卡尔, N·D·伊德
【申请人】辉瑞大药厂
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2014年2月8日
【公告号】CA2900322A1, WO2014128588A1