一种检测结核病的试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及microRNA的检测及其运用，更具体的，本发明涉及microRNA451a， microRNA542,microRNA125b,microRNA146a,microRNA29c,microRNA365,microRNA889, microRNA335,microRNA342在结核病诊断及治疗评估中的作用。
【背景技术】
[0002] 结核病是全球最严重的传染性疾病之一，给全人类的健康带来了重大的威胁。然 而，目前却缺乏有效的诊断技术。结核诊断金标准-结核菌培养，耗时2-6周，检出率只有 30%左右；痰涂片检出率不到30%左右；结核抗体快速检测(胶体金检测)，虽然快速，但是检 出率不到50% ;核酸检测（GeneXpert)虽然方便快速，但是对于菌阴患者灵敏低且费用高； 干扰素释放检测（IGRA)，虽然灵敏，但是操作复杂，且价格昂贵，而且还不能却分潜伏感染 和活性结核。因此，新的诊断技术对于结核病的防治具有重要的意义。
[0003]MicroRNA是一类长约19~24nt的非编码单链小RNA分子。在细胞内microRNA发挥了重要的作用，它可以通过与靶基因3'UTR区互补结合，抑制靶基因翻译，进而调控 生物体的生长发育，并参与多种疾病过程。研究表明microRNA在细胞生长、凋亡、分化、 极性形成、分泌、代谢等过程中发挥重要作用。通过对microRNA在不同组织和疾病中的 表达谱分析发现，microRNA的表达谱具有明显的组织特异性，在一些疾病中microRNA的 表达谱改变具有明显的特征，因此可以作为疾病诊断及治疗标志物。MicroRNAs作为分子 标志物，克服了蛋白质分子标志物在抗体制备和定量分析上所遇到的瓶颈。尤其是血清 microRNAs具有样本易于采集、保存期长及检测手段简便等特点，临床应用价值也更明显， 已成为生物标志物及转化医学研究的热点领域。
[0004] 关于microRNA与结核病的相关性，目前已经有些报道。但是目前还没有确定哪些 microRNA和TB具有明确的相关，可以用于TB的诊断或者治疗评估。本专利公开了几个与 TB相关的microRNA，及其检测引物和在TB诊断和治疗评估中的运用。
【发明内容】
[0005] 为了解决以上问题，本发明公开了与结核病相关的microRNA序列及其检测引物 和探针，以及在结核病的检测、预后中的运用。
[0006] 本发明的目的在于提供一种检测结核病的试剂盒。
[0007] 本发明所采取的技术方案是： 一种检测结核病的试剂盒，该试剂盒含有对microRNA451a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342 和microRNA889 中至少一种 microRNA进行定量检测的试剂。
[0008]microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、 microRNA335、microRNA542、microRNA342 和microRNA889 联合作为结核病检测和 / 或预后 的生物标记物的应用。
[0009] 一种检测结核病的试剂盒，该试剂盒含有对microRNA451a、microRNA125b、 microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342 和 microRNA889进行定量检测的试剂。
[0010] 进一步的，该试剂盒含有对microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、 microRNA29c、microRNA365、mic;roRNA335、mic;roRNA542、mic;roRNA342 和microRNA889 进行 荧光定量PCR检测引物SEQIDNO: 10~27。
[0011] 进一步的，该试剂盒中含有对microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、 microRNA29c、microRNA365、mic;roRNA335、mic;roRNA542、mic;roRNA342 和microRNA889 进行 反转录的引物SEQIDNO: 1~9。
[0012] 进一步的，该试剂盒中含有如下探针序列SEQIDNO:28~36。
[0013] 一种检测结核病的核酸芯片该芯片含有对microRNA451a、microRNA125b、 microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342 和 microRNA889进行定量检测的试剂。
[0014] -种结核病的预后诊断试剂盒，该试剂盒含有对microRNA451a、microRNA125b、 microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342 和 microRNA889进行定量检测的试剂。
[0015] -种结核病的预后诊断核酸芯片，其特征在于：该芯片含有对microRNA451a、 microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、 microRNA342和microRNA889进行定量检测的试剂。
[0016] 本发明的有益效果是： 本发明为结核病提供了新的诊断和预后评估的方法。本发明检测血浆/血清中的稳定 的microRNA，而传统潜在分子诊断方案检测蛋白质，在定量测定方面，microRNA的定量精 度和灵敏度非常高，使用qPCR技术甚至可以达到单分子检测的能力；而传统方法检测蛋白 质，灵敏度较低，且定量精度较差。
【附图说明】
[0017] 图 1 为microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、 microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342 和microRNA889 在结核病不同阶段 的表达情况； 图 2 为microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342 和microRNA8895 单独区分TB感染者和健康者的 ROC曲线； 图 3 为microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、microRNA335、microRNA542、microRNA342 和microRNA8895 联合区分TB感染者和健康者的 ROC曲线。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
[0019] 实施例1 样本：健康人血清50份，结核菌潜伏感染者血清50份，活动性结核病患者血清50份， 结核病治愈者血清50份； 本实施例对上述样本血清中的microRNA451a、microRNA125b、microRNA146a、microRNA29c、microRNA365、mic;roRNA335、mic;roRNA542、mic;roRNA342 和microRNA889 进行 定量检测，具体操作步骤如下： 1)血清microRNA提取：提取试剂盒：GIAGEN公司的miRNeasySerum/PlasmaKit0