一种替代抗生素饲料添加剂的地衣芽孢杆菌及其应用_2

文档序号:9466771阅读:来源:国知局
l~0. 2份、 硫酸氨0. 02~0. 1份、硫酸儘0.Ol~0. 5份,水88. 4~98. 67份。
[0031] 根据本发明优选的,所述步骤(4)中过滤为通过加入助滤剂和过滤剂,然后进行 板框压滤;进一步优选的,所述助滤剂为氯化巧,过滤剂为轻质碳酸巧。
[0032] 根据本发明优选的,所述步骤(4)中,干燥为沸腾干燥,干燥进风口溫度为100~ Iicrc。
[0033] 根据本发明优选的,所述步骤(4)中,稀释剂为轻质碳酸巧。
[0034] 上述培养基中的原料均为本领域常用配制培养基原料,均可市场购得。 阳0对有益效果
[0036] 本发明首次发现了地衣芽抱杆菌度acillusIicheni化;rmis)SDZD02菌株,通过深 层液体发酵技术,最大限度提高发酵效率并保持菌种的活性功能,可W替代抗生素饲料添 加剂,具有促进生长、防病抗病,提高饲料转化率,无残留、无污染等特点。
【具体实施方式】
[0037] 下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步说明,本发明的优点和特点将会随 着描述而更为清楚。但运些实施例仅是范例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本 领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可W对本发明技术方案的细 节和形式进行修改或替换,但运些修改和替换均落入本发明的保护范围内。 阳0測实施例1
[0039] 上述地衣芽抱杆菌度acillusIicheni化rmis)SDZD02为发明人从±壤中分离筛 选并鉴定。该菌2015年4月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、 (CGMCC),保藏编号为CGMCCNO. 10682。
[0040] 该菌革兰氏阳性,直杆状,培养48小时形成大量芽抱,抱子囊柱状,次端生,壁薄, 抱子囊不膨胀,菌体大小0.6~0.8ymX 1. 5~3.0ym,芽抱大小0.6~0.8ymX 1.0~ 1.5ym。可W在15°C~55°C溫度下生长,最适生长溫度范围为30°C~40°C;该菌可W在 化Cl浓度为0. 1 %~8%范围内生长良好,当化Cl浓度为12%时,生长被抑制;最适生长抑 范围为7. 0~8. 0 ;该菌的生理生化特征与伯杰鉴定手册中Bacillus Iicheni化rmis的典 型特征完全一致。 阳O川使用细菌通用16s引物扩增SDZD02基因组DNA,得到约HOOpb碱基克隆产物,经 测序分析,此序列长度为1424bp,将该序列进行分子系统进化分析,知该菌株与Bacillus Iicheniformis16sDNA序列具99 %相似性,分子鉴定结果表明SDZD02为Bacillus Iicheniformis属。 柳42] 实施例2
[0043] 实施例1所述地衣芽抱杆菌度acillus Iicheni化rmis)SDZD02在制备替代畜牧 业饲料抗生素添加剂中的应用。
[0044] 上述替代畜牧业饲料抗生素添加剂的制备方法,步骤如下: W45] (1)将地衣芽抱杆菌度acillusIicheni化rmis)SDZD02接种于活化培养基中, 32°C活化培养3地,制得活化后的地衣芽抱杆菌度acillusIicheniformis)SDZD02斜面种 子;
[0046] 所述活化的固体培养基,每升组分如下:
[0047] 蛋白腺10克,酵母膏5克,氯化钢10克,琼脂粉15克,蒸馈水定容至1L。
[0048] 将活化后的地衣芽抱杆菌度acillusIicheni化rmis)SDZD02,于无菌条件下,接 种于12rc灭菌摇瓶培养基中,摇瓶=角瓶培养基装量为容积的60%,培养溫度32°C,转速 200rpm,培养时间16h,得摇瓶种子液;
[0049] 摇瓶培养基组分如下,均为重量份:
[0050] 蛋白腺10份,酵母膏5份,氯化钢10份,蒸馈水75份。
[005U似将步骤(1)制得的摇瓶种子液W体积百分比4%的接种量接种于种子培养基 中,在通气揽拌条件下发酵罐培养,种子培养基占罐体容体积的65%,培养溫度32°C、通气 量W发酵液体积m/空气体积m3 ?分钟计为1 : 1. 0、罐压0. 02MPa,揽拌速度为23化pm,发 酵罐培养17h,,制得发酵罐种子液;
[0052] 所述种子培养基组分如下,均为重量份:
[0053] 蛋白腺0.5份、酵母膏0.5份、玉米淀粉1份、大豆粉1. 5份、氯化钢0.05份、硫酸 氨0. 05份、硫酸儘0. 1份,水96. 3份;
[0054] 做将步骤似制得的发酵罐种子液按照体积百分比8%的接种量接种于发酵培 养基进行发酵培养,在溫度32°C、通风量为1 : 1.0、罐压为0. 02MPa、揽拌速度为22化pm的 条件下,发酵培养20h,经检测,芽抱率高于90%;然后将发酵液经80°C处理30分钟,得到 芽抱含量为2. 3Xl〇i°FU/mL的发酵液; 阳化5] 所述的发酵培养基组分如下,均为重量份:
[0056] 玉米淀粉2份、豆饼粉2份、糖蜜1份、氯化钢0.05份、硫酸氨0.04份、硫酸儘0.2 份,水95. 71份。
[0057] (4)将步骤(3)制得的发酵液加入助滤剂氯化巧和过滤剂轻质碳酸巧,板框压 滤,沸腾干燥,制得地衣芽抱杆菌菌粉,加入轻质碳酸巧,制得地衣芽抱杆菌芽抱含量为 2.OXl〇i°CFU/克的替代畜牧业抗生素饲料添加剂。 阳0郎]实施例3
[0059] 如实施例2所述的地衣芽抱杆菌制备方法,不同之处在于,
[0060] 所述步骤(3)中,发酵培养步骤如下:
[0061] 将步骤(2)制得的发酵罐种子液按照体积百分比10%的接种量接种于发酵培养 基进行发酵培养,在溫度35°C、通风量为1 : 1. 1、罐压为0.02MPa、揽拌速度为23化pm的条 件下,发酵培养16h,经检测,芽抱率高于90% ;然后将发酵液经80°C处理30分钟,得到芽 抱含量为2. 5X1〇1中U/血的发酵液
[0062] 所述的发酵培养基组分如下,均为重量份:
[0063] 玉米淀粉4份、豆饼粉3份、糖蜜1份、氯化钢0.1份、硫酸氨0.1份、硫酸儘0.3 份,水91. 5份。
[0064] 所述步骤(4)制得菌量为2.6XIQiiCFU/克的地衣芽抱杆菌菌粉,用轻质碳酸巧作 为稀释剂配成含有地衣芽抱杆菌2.OXl〇i°CFU/克的饲料添加剂。 阳0化]试验例1本发明地衣芽抱杆菌饲料添加剂替代金霉素养殖试验
[0066] 用实施例2所制得的替代畜牧业抗生素饲料添加剂替代金霉素进行养殖试验。使 用剂量为每吨全价料添加800克。
[0067] 本试验采用单因子随机试验设计,将1200只15日龄AA鸡随机分为3组,即对照 组、处理组1、处理组2,每组设4个重复,每个重复100只肉仔鸡,分养在相临的12个栏内, 要求各组肉仔鸡平均体重差异不显著(P> 0. 05)。对照组日粮中不加复合芽抱杆菌制剂 和促生长剂金霉素;处理1日粮中添加金霉素600克/吨全价饲料(推荐使用量;处理组2 日粮中添加本发明地衣芽抱杆菌制剂SOOg/吨全价饲料g。基础日粮配制标准参照中华人 民共和国农业部2004年发布的鸡饲养标准(NY/T33-2004)。整个试验期保持肉仔鸡自由 采食,自由饮水,肉仔鸡在育成舍地面平养,木屑垫料,为保持舍内溫度,舍内半通风,免疫 按试验场自定免疫程序进行、搞好环境卫生,其它按《肉仔鸡饲养管理手册》进行。 W側试验结果
[0069] 各处理组平均个体日增重、日耗料量、料肉比及死淘率情况见表1。与对照组相 比,金霉素组试鸡只均日增重比对照组提高0.56% ;本发明地衣芽抱杆菌制剂试鸡只均日 增重提高0.60%,与对照相比均达到显著水平,本发明地衣芽抱杆菌制剂与金霉素相比差 异不显著(表1)。本发明地衣芽抱杆菌制剂料肉比与对照相比下降0.11,与金霉素基本一 致。本发明地衣芽抱杆菌制剂和金霉素均降低了鸡只死亡数量,与对照相比达到显著水平 (P&
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