一种新的黄烷酮类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从广枣的干燥成熟果实中分离得到的一种具 有心肌保护作用的黄烷酮类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 广率为漆树科南酸率属药用植物南酸率Choerospondiasaxillaris(Roxb.) BurttetHill的干燥成熟果实，又名南酸枣、五眼果、山枣等。南酸枣为单属种植物，国内主 要分布在西藏、云南、贵州、广西、广东、湖南、湖北、江西、福建等地，国外印度、中南半岛和 日本也有分布。南酸枣果实含有丰富的营养成分，在产地都有生食其果的习惯，是食品生产 的好原料。干果实入药名为广枣，为蒙医和藏医习用药材，具有行气活血，养心，安神的功 效，用于气滞血瘀，胸痹作痛，心悸气短，心神不安。鲜果实可用于食滞腹痛；果核用于烧烫 伤；树皮入药有解毒收敛、止血止痛之效，外用治大面积水火烧烫伤。由于广枣在临床用于 心血管疾病疗效显著，已经成为国内外学者的研究热点。
[0003] 国内外学者对广枣的果实、树皮和叶的化学成分进行了系列研究，从果实中分离 鉴定了 25个化合物，已发现的化学成分主要包括黄酮和酚酸，其次还有留醇、脂肪酸等。广 枣中的总黄酮被认为是其具有防治心血管疾病的有效成分，到目前为止，从广枣的果实中 分离鉴定的黄酮类化合物共有5个，其中，二氢黄酮（醇）类化合物1个，黄酮（醇）类化 合物3个和黄烷类化合物1个。
[0004] 现代药理研究表明，广枣中大量的黄酮类成分的存在使其具有多种生理活性。包 括抗心律失常作用、保护缺血心肌作用、影响血液动力学、抗氧化、增强免疫力等。广枣在中 医、藏医和蒙医临床广泛应用于治疗胸痹心痛和冠心病。从20世纪80年代初期，国内学 者就开始关注广枣在心血管方面的活性，普遍认为其发挥疗效的物质基础是其含有的总黄 酮。较早的研究资料表明广枣总黄酮能拮抗多种实验性心律失常，可使因心肌缺血而发生 的心律失常和心率减慢现象得以改善。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从广枣的干燥成熟果实中分离得到的一种具有心肌保 护作用的黄烷酮类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)广枣的干燥成熟果实粉 碎，用70~80 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤 (a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗 脱12个柱体积，收集70 %乙醇洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤（b)中 70 %乙醇洗脱物浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、50:1、30:1、10:1和1:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次 用体积比为15:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中 组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗 脱，收集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0010] 进一步地，步骤（a)中，用75%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] -种药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物（I) 和药学上可接受的载体。
[0013] 所述的化合物（I)在制备心肌保护的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备心肌保护的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物（I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)理论E⑶值与实验E⑶值比较。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021] 实施例1 :化合物（I)分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023] 制备方法：（a)将广枣的干燥成熟果实（8kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取 (25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3 次）和水饱和的正丁醇（3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（347g) 和正丁醇萃取物；(b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用15%乙醇 洗脱8个柱体积，再用70 %乙醇洗脱12个柱体积，收集70 %乙醇洗脱液，减压浓缩得70% 乙醇洗脱物浸膏（129g) ;(c)步骤（b)中70%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积 比为80:1 (8个柱体积）、50:1 (8个柱体积）、30:1 (6个柱体积）、10:1 (8个柱体积）和1:1 (5 个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4 (31g)用正相 硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1 (8个柱体积）、10:1 (10个柱体积）和5:U6个柱体 积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (14g)用十八烷基硅 烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体 积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)(28mg)。
[0024] 结构确证：HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z361. 1410，结合核磁特征可得分子式 为C21H2204,不饱和度为 11。核磁共振氢谱数据SH(ppm，DMS0-d6,400MHZ) :H-2(5.41，dd， J= 12. 7, 3· 0)，H-3 (2· 82,m)，H-3 (2· 96,dt，J= 24. 8,12. 4)，H-5 (7· 84,d，J= 8· 8)， H-6 (6. 59,m)，H-2' -6'（7. 35,m)，H-7"（5. 93,d，J= 12. 5)，H-8"（5. 79,d，J= 12. 5)， 9"-Me(l. 12,s)，9"-Me(l. 13,s)，9"-0Me(3.84,s);核磁共振碳谱数据Sc(ppm，DMS0-d6， 100Hz) :79. 8 (CH，2-C)，44. 1 (CH2, 3-C)，191. 1 (C，4-C)，115. 4 (C，4a-C)，127. 9 (CH，5-C)， 105. 2 (CH，6-C)，162. 0 (C，7-C)，115. 3 (C，8-C)，158. 8 (C，8a-C)，138. 4 (C，Γ-C)，126. 3 (CH， 2'，6' -C)，128. 7(CH，3'，5' -C)，125. 7(CH，4' -C)，116. 6(CH，7"-C)，142. 0(CH，8"-C)， 71. 2(C，9"-C)，29. 3(CH3,9"-Me)，30. 1(CH3,9"-Me)，56. 2(CH3,9"-0Me);碳原子标记参见图 1。4NMR谱显示了典型的黄酮类化合物信号，δΗ5. 41(dd，J= 12. 7,3. 0Hz，H-2)，2. 82(m， H-3)和 2. 96(dt，J= 24. 8，12. 4Hz，H-3)。iNMR谱也显示了两个双峰信号δΗ5. 79(d，J =12. 5Hz，H-8"）和 5. 93(d，J= 12. 5Hz，H-7"），它们为两个烯烃质子。13CNMR光谱显 示21个碳信号，包含三个甲基（δC29. 3,9"-Me，30. 1，9"-Me和56. 2,9"-0Me)，一个亚甲 基（δC44. 1，3-C)，十个次甲基（δC79. 8,2-C;127. 9,5-C;105. 2,6-C;126· 3,2'，6'-C; 128. 7,3'，5'-C;125· 7,4'-C;116· 6,7"-C;142· 0,8"-C)，七个季碳（δC191. 1，4-C;115· 4， 4a-C;162. 0,7-C;115. 3,8-C;158. 8,8a-C;138· 4,Γ-C;71. 2,9"-C)。NOESY谱中H-8" 与 甲氧基质子（δH3. 84,s)的相关性，以及H-8"和H-7"的相关性，表明C-9"（δC71. 2)位 连有一个甲氧基。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据， 可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本 一致（图2)。
[0025] 实施例2 :化合物（I)药理作用试验
[0026] -、材料和仪器
[0027] 新生1~3天SD大鼠乳鼠（SPF级），雌雄不拘，由广西医科大学实验动物中心提 供（试验动物生产许可证：SCXK桂2009-0002)。化合物（I)(纯度多98% )为自制。胎 牛血清购于办（：1〇1^公司，01^]\1培养基购于6180)公司，二甲基亚砜（0130)、0.25%胰酶 (含EDTA)购于Solarbio公司，5-溴脱氧尿苷（5-Brdu)、四甲基偶氮唑盐（MTT)购于美国 Sigma公司，LDH测试盒购于南京建成生物工程研究所，N0S试剂盒（分型）南京建成生物 工程研究所，ATP酶试剂盒（南京建成生物工程研究所），cTnl酶联免疫吸附测试试剂盒、 CK-MB酶联免疫吸附测试试剂盒购于武汉优尔生。
[0028] C02培养箱（ThermoForma)，CKX41 相差显微镜（OLUMPUS)，Model450 自动酶标仪 (美国Bio-Rad公司），96孔板（JET)，722sp可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）， 可调