酬醇部位，真空 浓缩，回收溶剂，得到黄颜木素和3，4'，7-=径基二氨黄酬醇样品，将黄颜木素和3，4'，7-= 径基二氨黄酬醇进行HPLC分析，含量为95% W上。 HPLC分析条件为:4.6X250mm，5皿的C18 Gold AQ反相柱，流动相为体积比为40: 60(v:v)的甲醇:体积比0.5-l%(v/v)醋酸水溶液，紫外检测器，检测波长为280 nm,流速为 ImL/min。 经过MS、IR、1H-NM和13C-NMR鉴定为黄颜木素。白色粉末，ESI-MS (m/z):287[M-H]-， 分子式:Cis化2〇6。盐酸-儀粉反应呈红色，说明该化合物为黄酬类化合物。IR: 3338，1670， 1606,1463，1：344，1257，1107cm-i，UV/Vis Amax (Me0H):233,278nm。Ih NMR(300MHz， DMSO-ds): S7.65 (lH，d，J=8.7Hz，H-5),6.88(lH，d，J=1.7Hz，H-2'），6.74(lH，d，J=7.OHz， H-5'），6.51(lH，dd，J=8.6 and 2.2 Hz，H-6)，6.29(lH，d，J=2.1Hz，H-8)，4.95(lH，d，J= 11.3Hz，H-2)，4.4(lH，dJ=11.3Hz，H-3)。"C NMR(300MHz，DMSO-ds): 5192.3(04)， 164.6(C-9)，162.7(C-7)，145.5(C-4'），144.8(C-3'），128.64(C-r)，128.33(05)， 119.34(C-6，），115.33(C-2，），115.0(C-5，），112.33(C-10)，110.76(C-6)，102.36(C-8)，83.50(C-2)，72.56(C-3)。 经过MS、IR、1H-M1R和13C-M1R鉴定为3,4'，7-S径基二氨黄酬醇。白色粉末，ESI-MS (m/z):271[M-Hr，分子式为:Cl曲2〇5。盐酸-儀粉反应呈紫红色，说明该化合物为黄酬类化 合物。IR: 3231，2973，1660，1597，1517,1462，1339，1252，1164,1103 cm-i，UV/Vis 入 max (Me0D):232,270,310nmDiH 醒R(300MHz， MeOH-d4):S7.73(lH，d，J=9Hz，H-5)， 7.37 (lH，d，J=l.細z，H-2'）， 6.84(2H，d，J=7.2HZ，H-5'，H-3'），6.53(lH，dd，J=8.8 and I.細z， H-6),6.32(lH，d，J-2.OHz，H-8),4.96(lH，d，J=II.甜Z，H-2),4.48(lH，d，J=Il.4Hz，H-3)。 1化匪R(300MHz，Me0H-d4) :8195.04(C-4)，167.34(09)，165.61(07)，159.64(04'）， 130.86(C-r)，130.0(C-5)，116.62(C-6'，C-2'），113.94(03'，C-5'），112.61 (C-IO)， 110.88(C-6)a〇4.21(C-8), 85.96(C-2) ,75.02(C-3) 〇 实施例2 第一步 将漆树木粉，干燥去渣，按质量体积比为1:10~1:30(g:mU，加入质量分数为50~95%的 甲醇水溶液，减压回流提取2~3次，每次1~化，过滤，滤液合并，于40~60°C下减压蒸发除去溶 剂，得到含水粗提液； 第二步 粗提液按质量比1:3~l:10(g:mL)加入蒸馈水，揽拌溶解，加入石油酸萃取^5次，分离， 在40~60°C下减压蒸发除去溶剂，得到石油酸萃取物；水层继续用乙酸乙醋萃取1~5次，分 离，在40~60°C下减压蒸发除去溶剂，干燥得到乙酸乙醋萃取物； 第=步 将乙酸乙醋萃取物与硅胶填料按质量比1:15-50吸附，柱长50-150 cm,柱直径4-20 cm,采用不同比例石油酸与乙酸乙醋进行洗脱，收集抗氧化活性较高的石油酸：乙酸乙醋体 积比为7:3-3:7(巾:巾)的部位，真空浓缩，回收溶剂，得到富含黄颜木素和3,4'，7-^径基二 氨黄酬醇的提取物； 第四步 将富含黄颜木素和3,4'，7-=径基二氨黄酬醇的提取物与中低压色谱填料60 A,20-60 叫1的ODS C8按质量比1:15-50吸附，中压柱柱长20-80畑1，柱直径2-8 cm,采用不同比例的 乙醇和体积比〇.5%-2%(v:v)的醋酸水进行洗脱，柱压为0.5-10 M化，检测波280皿，流速 3-50 mL/min，分别收集黄颜木素和3，4 '，7-S径基二氨黄酬醇部位，真空浓缩，回收溶剂， 得到黄颜木素和3，4'，7-=径基二氨黄酬醇样品，将黄颜木素和3，4'，7-=径基二氨黄酬醇 进行HPLC分析，含量为95% W上。 实施例3 第一步 将漆树木粉，干燥去渣，按质量体积比为1:10~1:30(g:mU，加入质量分数为50~95%的 乙醇水溶液，减压回流提取2~3次，每次1~化，过滤，滤液合并，于40~60°C下减压蒸发除去溶 剂，得到含水粗提液； 第二步 粗提液按质量比1:3~1:10(g:mL)加入蒸馈水，揽拌溶解，加入石油酸萃取次，分离， 在40~60°C下减压蒸发除去溶剂，得到石油酸萃取物；水层继续用乙酸乙醋萃取1~5次，分 离，在40~60°C下减压蒸发除去溶剂，干燥得到乙酸乙醋萃取物； 第=步 将乙酸乙醋萃取物与硅胶填料按质量比1:15-50吸附，柱长50-150 cm,柱直径4-20 cm,采用不同比例石油酸与乙酸乙醋进行洗脱，收集抗氧化活性较高的石油酸：乙酸乙醋体 积比为7:3-3:7(巾:巾)的部位，真空浓缩，回收溶剂，得到富含黄颜木素和3,4'，7-^径基二 氨黄酬醇的提取物； 第四步 将富含黄颜木素和3,4'，7-S径基二氨黄酬醇的提取物与中低压色谱填料Sephedex LH-20按质量比1:15-50吸附，中压柱柱长20-80 cm,柱直径2-8 cm,采用不同比例的甲醇和 体积比〇.5%-2%(v:v)的醋酸水进行洗脱，柱压为0.5-10 M化，检测波长220-280皿，流速 3-50 mL/min，分别收集黄颜木素和3，4 '，7-S径基二氨黄酬醇部位，真空浓缩，回收溶剂， 得到黄颜木素和3，4'，7-=径基二氨黄酬醇样品，将黄颜木素和3，4'，7-=径基二氨黄酬醇 进行HPLC分析，含量为95% W上。 实施例4 DPKl自由基清除作用 取0.15mmo 1 /L的DPPH醇溶液15化L，加入50化的不同浓度的样品溶液，混合均匀后在黑 暗处室溫下反应30min后，在517nm波长下测吸光度(Ai),每个样品平行3次，取平均值。样 品液对DPKl自由基清除率计算公式见式(1)
(1) 式中:艦一待测样品、DPPH在样品溶剂存在体系反应30min的吸光值； AO-待测样品在样品溶剂存在下的吸光值； Al -DPKl在样品溶剂存在下的吸光值。 将黄颜木素和3,4'，7-S径基二氨黄酬醇用于清除DPKl自由基来评价化合物的抗氧化 功能。如附图2所示，黄颜木素和3,4'，7-=径基二氨黄酬醇均不同程度表现出较强的清除 DPPH自由基的能力，其清除活性与化合物的浓度呈正相关，黄颜木素拟合的线性方程为Y= 2.347X+4.135，3，4 '，7-S径基二氨黄酬醇拟合的线性方程为Y=I. 747X-0.604，黄颜木素和 3，4'，7-S径基二氨黄酬醇的IC50值分别为19.54和28.97 mg/L，介于Vc和BHT之间。 实施例5 ABTS自由基清除作用 储备液的制作:将7.4mmol/L的ABTS溶液与2.6mmol/L的过硫酸钟溶液等量混合，在黑 暗处常溫静置反应15h，然后取ImL溶液用甲醇稀释，得到溶液在732nm处的吸光度为0.74。 取不同浓度的样品溶液50化加入15化L的上述储备液，在96孔板中，放置4min后，在 734nm波长下测吸光度(Ai),每个样品平行3次，取平均值。样品液对ABTS自由基清除率计算 见公式(2): 式中:AO为样品溶剂与样品溶液的混合液的吸光值； Al为ABTS工作液与样品溶剂的吸光值； Ai为ABTS工作溶液与样品溶液的吸光值。