D进行分析。
[0025] 本发明特点在于所分离到的枯草芽孢杆菌FZUL-33具有良好的去除铅的特性与 生物降解乙酰甲胺磷的特性。并且该菌株能同时去除环境中的乙酰甲胺磷及铅离子。并且 对于铅污染问题上，引入乙酰甲胺磷能够促进了枯草芽孢杆菌FZUL-33对铅的去除。
【具体实施方式】
[0026] 实施例1枯草芽孢杆菌的获得 从福建某农药制剂工厂附近土地取土样。称取l〇g 土壤溶解于l〇〇ml无菌水中，混匀 制得样品溶液。通过无菌操作，移取〇. lml与LB固体培养基中，用高压灭菌后的玻璃棒涂 布平板，置于32°C培养，带菌落生长完成后，挑取单菌落与LB液体培养基中，32°C培养48h 后得到菌悬液，用灭菌后接种环蘸取菌悬液与LB固体培养基中划线，待菌落生长完成。重 复上述步骤，直至得到纯的单菌落，挑取该板单菌落培养，并在20%甘油条件下-68Γ保存。
[0027] 实施例2:芽孢杆菌FZUL-33菌泥制备 将活化的芽孢杆菌接入LB液体培养基中，32°C培养2d得到菌悬液，将菌悬液分装为 100ml，通过SOOOrpm转速离心，弃上清液，留下菌泥。将留下的菌泥重悬于去离子水中，按 同样条件离心，弃上清液，留下菌泥如此重复3次得到洗过的菌泥，备用。
[0028] 实施例3 :芽孢杆菌FZUL-33去除Pb2+及其产物分析 配置10〇111110〇1^/1?132+溶液，？!1调至5.5。将实例1中所得菌泥加入，置于25°(：， 180rpm振荡反应2h。将反应溶液通过13000rpm离心，取上清液测得Pb2+去除率为67. 5%， 沉淀通过XRD分析鉴定为Pb5 (P04) 30H。
[0029] 溶液中Pb2+含量通过分光光度法测定。以二甲酚为显色剂，pH为5.5的醋酸-醋 酸钠为缓冲液，在547nm波长下测定Pb 2+含量。
[0030] XRD分析条件：2 Θ扫描角度：5° ~80° ;扫描速率：8° /min ;电压：40 kV ;电流 20 mA 〇
[0031] 实施例4 :芽孢杆菌FZUL-33降解乙酰甲胺磷 配置100ml 400mg/L乙酰甲胺磷溶液，pH调至5. 5。将实例1中所得菌泥加入，置于 25°C，180rpm振荡反应24h，测得乙酰甲胺磷的降解率为81. 7%。
[0032] 乙酰甲胺磷溶度采用高效液相色谱法测定。色谱条件：流动相为纯水：乙腈 =95:5 ;流动相速率;波长：210nm ;柱温：30°C ;进样量：20 μ 1。
[0033] 实施例5 :芽孢杆菌FZUL-33去除乙酰甲胺磷-Pb2+混合物 配置100ml乙酰甲胺磷-Pb2+混合溶液，使乙酰甲胺磷浓度为400mg/L，Pb2+浓度为 100mg/L，溶液pH调节至5. 5。将1中所述菌泥加入，乙酰甲胺磷的降解率为80. 5%，铅的去 除率为91. 3%。发现在加入乙酰甲胺磷后，菌体对铅去除率明显提高。而加入100mg/L铅 后，对菌体降解乙酰甲胺磷没有明显影响。
[0034] 实施例6 :芽孢杆菌FZUL-33菌剂制应用于土壤Pb2+污染，乙酰甲胺磷污染及乙酰 甲胺磷-Pb2+复合污染的修复 菌种复苏：芽孢杆菌FZUL-33 UsciWys办.FZUL-33)种子菌接种到LB固体培养基 上，32°C，培养48h，备用。
[0035] 菌种发酵：将液体发酵种子培养液按3%的接种量接种入发酵罐，32-35 °C培养 36-48h，得到芽孢杆菌发酵液。在发酵液中按10%的质量比通过无菌操作添加碳酸钙、碳酸 氢钠作为喷雾干燥保护剂，振荡使悬浮均匀，制得菌体悬浮液，备用。将所得菌体悬浮液进 行喷雾干燥得到干燥菌剂，喷雾干燥条件为：进风温度为120°C，出风温度为70°C，进样速 度为5ml/min。碳酸妈含量为10wt. %，碳酸氢钠含量为5wt. %。
[0036] 将所得菌剂用无菌水按照3:1000稀释，制得菌剂工作液，备用。
[0037] 取茶山土地，均匀分为等量3份。第1份土样均匀喷洒一定量100mg/L Pb2+;第2 份土样均匀喷洒一定量经1000倍稀释30%乙酰甲胺磷乳油；第3份土样均匀喷洒与上述相 同含量1〇〇〇倍稀释30%乙酰甲胺磷乳油与上述含量相同的100mg/L Pb2+水溶液的混合液。 3份样品静置自然风干后，从三份样品中各取l〇〇g 土样，并分别加入定量上述菌剂工作液， 2d后测定土样中Pb2+与乙酰甲胺磷的含量。测定结果为：
从上表结果发现，实际土壤环境中的情况与实验条件类似。没有乙酰甲胺磷时，菌剂对 铅离子的去除率为66. 47%，当土壤中同时含有乙酰甲胺磷与铅离子，菌剂对铅离子的去除 率为93. 95%，提高了 33. 48%。没有铅离子时，菌剂对土壤中乙酰甲胺磷的降解率为89. 31%， 加入铅离子后，菌剂对土壤中乙酰甲胺磷的降解率为86. 95%，降解率略微向下浮动，无明 显影响。
[0038] 以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与 修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
【主权项】
1. 一株枯草芽孢杆菌在环境中的Pb2+去除、乙酰甲胺磷的降解以及Pb2+-乙酰甲胺磷 复合物的生物修复中的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌为芽孢杆菌 办.）FZUL-33,该菌株已保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心，保藏日期为2014年8月15日，保藏号为：CGMCC No. 9523。3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述菌株在pH=5. 5±0. 5,温度25~30°C 条件下，对Pb2+具有良好的去除特性。4. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：该菌株在pH=5. 5±0. 5,温度25~30°C条 件下，对乙酰甲胺磷具有良好生物降解的特性。5. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：该菌株在pH=5. 5±0. 5,温度25~30°C条 件下，具有同时去除乙酰甲胺磷-Pb2+混合物的特性。
【专利摘要】本发明提供一株枯草芽孢杆菌应用，具体为在降解有机磷及重金属Pb2+-乙酰甲胺磷农药复合物中的应用，所述菌株为芽孢杆菌(<i>Bacillus？Sp</i>.)FZUL-33，该菌株已保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为：CGMCC？No.9523。所分离到的枯草芽孢杆菌FZUL-33具有良好的去除铅的特性与生物降解乙酰甲胺磷的特性，并且该菌株能同时去除环境中的乙酰甲胺磷及铅离子，并且对于铅污染问题上，引入乙酰甲胺磷能够促进了枯草芽孢杆菌FZUL-33对铅的去除。
【IPC分类】B09C1/10
【公开号】CN105234168
【申请号】CN201510803817
【发明人】程扬健, 林文挺
【申请人】福建康德贝生物科技有限公司
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年11月20日