专利名称：一种药物组合物的检测方法
技术领域：
本发明涉及的是一种治疗经前期综合症的复方药物的质量控制方法。具体讲是以高效液相色谱法同时检测所含的三种主要成分对乙酰氨基酚、帕马溴(Pamabrom)及顺丁烯二酸新安替根(Pyrilamine Maleate)含量的方法。
背景技术：
含对乙酰氨基酚、帕马溴及顺丁烯二酸新安替根的组合物可用于育龄妇女在月经前反复出现一系列精神、行为及体质等方面的症状即经前期综合征(PMS)，控制含该三种成分的药品质量时，需准确测定三种成分的含量，目前尚无有关其测定方法的文献报道。
对乙酰氨基酚为常用非甾体抗炎药，文献报道的含量测定方法较多，分析方法有容量分析法、紫外分光光度法和高效液相色谱法。容量分析法需要从制剂中把各组分分别提取出来进行测定，该方法操作繁琐、费时，精密度和准确度均较差。紫外分光光度法也需进行样品的前处理，以排除各组分间的相互干扰。
目前文献报道采用HPLC法测定对乙酰氨基酚含量的条件也有多种。采用的色谱系统主要有甲醇-水、甲醇-乙腈-水或甲醇-乙腈-H3PO4溶液等几种。《中国药学杂志》2000，35(11)中伏光华、刘梅娟的“高效液相色谱法同时测定复方氯唑沙宗片中两组分血药浓度”一文中，采用甲醇-水(45∶55)作流动相可测定对乙酰氨基酚的含量；《解放军药学学报》2000，16(5)中张跃新的“HPLC法测定复方感冒分散片中4种有效成分的含量”一文中，采用氰基柱，甲醇-乙腈-H3PO4-三乙醇胺(48∶26∶26∶0.25∶0.05)作流动相，可同时测定对乙酰氨基酚、伪麻黄碱、右美沙芬、氯苯那敏的含量；《牡丹江医学院学报》2001，22(03)中于万军、周金霞的“HPLC法测定维C银翘片中对乙酰氨基酚的含量”一文中，采用C18柱，乙腈-甲醇-水(10∶40∶50)作流动相，可用于对乙酰氨基酚的含量测定等等。
上述条件均是针对对乙酰氨基酚及其与其它药物组合物的分析方法，经试验上述色谱系统对本发明中三种组分的分离度低，分析时间长，均不适用于该三种组分的含量测定，经检索亦未发现有同时测定这三组成分的检测方法。
USP24-NF19 supplement2中pamabrom项下茶碱检查的色谱条件为水-甲醇-冰醋酸(69∶30∶1)，Pyrilamine Maleate项下有关物质检查的色谱条件为0.01mol/L乙酸铵-甲醇-三乙胺(40∶60∶0.1)。经试验每个色谱体系只能用于其中一种成分的含量测定，不能同时测定三种组分。
针对三种组分的含量测定进行的试验研究中，我们惊奇地发现，当采用水相与有机相的混合溶剂，而且水相的PH值范围为4.0～5.5之间时，三种组分均能得到较好分离，可应用同一体系在30分钟内同时测定三种组分的含量，大大简化了实验过程，节约大量的时间及人力、物力成本。
发明内容
本发明的目的是研究一种操作简便、准确度高、重现性好，可同时测定含对乙酰氨基酚、帕马溴及顺丁烯二酸新安替根组合物含量的方法。
经大量试验，我们惊奇地发现，当采用水相与有机相的混合溶剂，而且水相的PH值范围为4.0～5.5时三种组分均能得到较好分离，准确度高而且重现性好。
本发明采用高效液相色谱法，以特定PH值的水相与有机相的混合溶剂为流动相进行分离测定。其中水相PH值优选为PH4.0～5.5，更优选为4.3～5.2，最优选为4.5～5.0。
本发明流动相体系中，水相所占比例为40％～85％，优选50％～80％，最优选为55％～75％。
无论水相中是否含有盐类，只要在特定PH条件下，均可同时测定这三种组分的含量。水相中若含有盐类，优选为醋酸盐和磷酸盐，但并不意味着只是这两种盐类。
本发明流动相体系中，有机相为低级醇或腈类。低级醇优选为甲醇、乙醇或异丙醇，更优选为甲醇或乙醇，最优选为甲醇。腈指乙腈。有机相可以是单一醇或腈，也可以是它们的混合。
采用本发明可一次同时测定药物组合物中对乙酰氨基酚、帕马溴及顺丁烯二酸新安替根的含量。该药物组合物的制剂剂型为片剂、胶囊剂或其它可药用剂型。
本发明色谱体系中，样品仅需用流动相溶解，过滤后即可直接进样，测定一次不超过30分钟，三种组分峰的理论板数均大于2000。本方法精密度高，稳定性好，样品辅料不影响测定，高、中、低浓度的回收率均较好，重现性较好，方法操作简便，稳定可靠，实用性强，非常适合用于此类复方制剂产品质量控制。
对比例1采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×150mm)，以甲醇-水(45∶55)为流动相，流速1ml/min，检测波长280nm。取样品(约含对乙酰氨基酚0.5mg/ml，帕马溴0.025mg/ml，顺丁烯二酸新安替根0.015mg/ml)20μl注入液相色谱仪，记录色谱图(
图1)，三种成分未得到有效分离，调节甲醇与水的不同配比，三种成分均不能得到有效分离，可见单纯的甲醇-水系统不能用于该三种成分的分离。
对比例2用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×150mm)，以乙腈-水(20∶80)为流动相，流速1ml/min，检测波长280nm。取样品(约含对乙酰氨基酚0.5mg/ml，帕马溴0.025mg/ml，顺丁烯二酸新安替根0.015mg/ml)20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，三种成分未得到有效分离。调节乙腈与水的不同配比，三种成分均不能得到有效分离，可见单纯的乙腈-水系统也不能用于该三种成分的分离。
对比例3用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-水(用醋酸调节PH值为3.9)(48∶26∶26)为流动相，流速1ml/min，检测波长280nm。取样品(约含对乙酰氨基酚0.5mg/ml，帕马溴0.025mg/ml，顺丁烯二酸新安替根0.015mg/ml)20μl注入液相色谱仪，记录色谱图(图2)，三种成分未得到有效分离。调节甲醇、乙腈和水的不同配比，三种成分均不能得到有效分离，可见不同配比的甲醇、乙腈和调节PH值为3.9水的组合也不能用于该三种成分的分离。
对比例4用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.005mol/L磷酸钾溶液(用磷酸调节PH值为5.7)(30∶70)为流动相，流速1ml/min，检测波长280nm。取样品(约含对乙酰氨基酚0.5mg/ml，帕马溴0.025mg/ml，顺丁烯二酸新安替根0.015mg/ml)20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，三种成分未得到有效分离。调节甲醇、乙腈和水的不同配比，三种成分均不能得到有效分离，可见不同配比的甲醇、乙腈和PH值为5.7的磷酸钾溶液的组合也不能用于该三种成分的分离。
实施例1用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×150mm)，以0.005mol/L醋酸铵溶液(用醋酸调PH值为4.6)-甲醇(50∶50)为流动相，流速0.8ml/min，检测波长280nm。取样品，精密称定适量(约相当于对乙酰氨基酚500mg，帕马溴25mg，顺丁烯二酸新安替根15mg)，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积；另取对乙酰氨基酚、帕马溴及顺丁烯二酸新安替根对照品，同样测定，按外标法以峰面积分别计算即得。本法对乙酰氨基酚回收率为99.70％，RSD＝0.41％，帕马溴回收率为100.1％，RSD＝0.47％，顺丁烯二酸新安替根回收率为100.0％，RSD＝0.59％。
试验证明该三组分应用上述方法可获得良好的分离检测效果。
实施例2用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×150mm)，以0.05mol/L醋酸铵溶液(含三乙胺0.05mol/L，用醋酸调PH值为4.9)-甲醇(70∶30)为流动相，流速1ml/min，检测波长280nm。取样品，精密称定适量(约相当于对乙酰氨基酚500mg，帕马溴25mg，顺丁烯二酸新安替根15mg)，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积；另取对乙酰氨基酚、帕马溴及顺丁烯二酸新安替根对照品，同样测定，按外标法以峰面积分别计算即得。本法对乙酰氨基酚回收率为99.70％，RSD＝0.22％，帕马溴回收率为100.4％，RSD＝0.64％，顺丁烯二酸新安替根回收率为99.89％，RSD＝0.62％。
试验证明该三组分应用上述方法可获得良好的分离检测效果。
实施例3
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水(用醋酸调PH值为5.3)-甲醇(70∶30)为流动相，流速1ml/min，检测波长280nm。取样品，精密称定适量(约相当于对乙酰氨基酚500mg，帕马溴25mg，顺丁烯二酸新安替根15mg)，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积；另取对乙酰氨基酚、帕马溴及顺丁烯二酸新安替根对照品，同样测定，按外标法以峰面积分别计算即得。本法对乙酰氨基酚回收率为100.2％，RSD＝0.44％，帕马溴回收率为99.8％，RSD＝0.38％，顺丁烯二酸新安替根回收率为100.1％，RSD＝0.37％。
试验证明该三组分应用上述方法可获得良好的分离检测效果。
实施例4用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.005mol/L的磷酸铵溶液(用磷酸调PH值为4.8)-甲醇(60∶40)为流动相，流速1ml/min，检测波长280nm。取样品，精密称定适量(约相当于对乙酰氨基酚500mg，帕马溴25mg，顺丁烯二酸新安替根15mg)，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积；另取对乙酰氨基酚、帕马溴及顺丁烯二酸新安替根对照品，同样测定，按外标法以峰面积分别计算即得。本法对乙酰氨基酚回收率为100.1％，RSD＝0.44％，帕马溴回收率为100.4％，RSD＝0.63％，顺丁烯二酸新安替根回收率为100.1％，RSD＝0.55％。
试验证明该三组分应用上述方法可获得良好的分离检测效果。
实施例5用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.005mol/L的磷酸铵溶液(用磷酸调PH值为4.7)-乙腈(80∶20)为流动相，流速1ml/min，检测波长280nm。取样品，精密称定适量(约相当于对乙酰氨基酚500mg，帕马溴25mg，顺丁烯二酸新安替根15mg)，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积；另取对乙酰氨基酚、帕马溴及顺丁烯二酸新安替根对照品，同样测定，按外标法以峰面积分别计算即得。本法对乙酰氨基酚回收率为99.8％，RSD＝0.37％，帕马溴回收率为100.1％，RSD＝0.50％，顺丁烯二酸新安替根回收率为100.0％，RSD＝0.56％。
试验证明该三组分应用上述方法可获得良好的分离检测效果。
实施例6用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.005mol/L的磷酸铵溶液(用磷酸调PH值为5.0)甲醇(60∶40)为流动相，流速1ml/min，检测波长280nm。取样品，精密称定适量(约相当于对乙酰氨基酚500mg，帕马溴25mg，顺丁烯二酸新安替根300mg)，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图(图3，1#对乙酰氨基酚，2#帕马溴，3#新安替根，4#顺丁烯二酸)，量取峰面积；另取对乙酰氨基酚、帕马溴及顺丁烯二酸新安替根对照品，同样测定，按外标法以峰面积分别计算即得。本法对乙酰氨基酚回收率为99.9％，RSD＝0.41％，帕马溴回收率为100.3％，RSD＝0.47％，顺丁烯二酸新安替根回收率为100.1％，RSD＝0.52％。
试验证明三种成分在上述混合溶剂也可获得良好的分离检测效果。
权利要求
1.一种检测含对乙酰氨基酚、帕马溴及顺丁烯二酸新安替根组合物的方法，其特征在于采用高效液相色谱法，以适当PH值的水相与有机相的混合溶剂为流动相的体系中进行分离测定。
2.根据权利要求1所述，其特征在于水相PH值为4.0～5.5。
3.根据权利要求2所述，其特征在于水相PH值为4.3～5.2。
4.根据权利要求3所述，其特征在于水相PH值为4.5～5.0。
5.根据权利要求1所述，其特征在于有机相为低级醇类或腈类，或低级醇与腈的混合。
全文摘要
本发明是一种药物组合物的检测方法，可同时测定三种组分的含量。采用高效液相色谱法，以适当pH值的水相与有机相的混合溶剂为流动相进行分离测定。本测定方法专属性强，分离效果好，可大大简化试验过程。
文档编号G01N30/00GK1603815SQ0315448
公开日2005年4月6日 申请日期2003年9月30日 优先权日2003年9月30日
发明者向东, 王映辉, 李梅 申请人:北京东方凯恩医药科技有限公司