S测定的样品，也可以含有内部标准物质，该内部标准物质是作为诊 断标记物的化合物的电泳时间及含量的测定标准。内部标准物质只要不影响作为诊断标记 物的化合物的电泳及质谱分析的效率就不作特别限定，例如，优选的是蛋氨酸砜或樟脑磺 酸（l〇-camphorsulfonic acid、CSA)〇
[0069] 用于毛细管电泳的毛细管优选的是熔融石英毛细管。此外，鉴于分离性能的提 高，毛细管的内径较好的是小于或等于100 μ m，更好的是50 μ m。毛细管的全长优选的是 50cm ~150cm〇
[0070] 确定通过上述毛细管电泳所得的各分离物中含有作为目标诊断标记物的化合物 的分离物的方法，没有特别限定，例如，可以是利用目标化合物的标准样品，预先测定该化 合物的电泳时间的方法，或利用与内部标准物质的电泳时间的相对时间的方法。
[0071] 然后，以峰面积测定确定了含有作为目标诊断标记物的化合物的分离物中的具有 目标化合物的m/z的化合物的含量。该峰面积可以通过与内部标准物质的峰面积的比而标 准化。此外，通过使用目标化合物的标准样品绘制标准曲线，能够从测到的峰面积求出采集 到的血液中含有的作为目标诊断标记物的化合物的绝对浓度。该标准曲线优选的是通过标 准加入法绘制，而不是标准曲线法。
[0072] *诊断标记物的使用方法*
[0073] 诊断标记物的使用方法例如包括如下的方式。
[0074] 抑郁症的诊断方法
[0075] 首先，通过使用从人或人以外的脊椎动物采血所得的血液测定诊断标记物的含量 (在本说明书中也称作标记物量），能够进行疾病的诊断。这里，虽然血液中的生标记物的 含量优选的是生物标记物的绝对浓度，但是只要是与生物标记物的绝对浓度相关、能够比 较各个体的绝对浓度的值就不作限定，也可以是相对浓度、单位体积对应的重量、为了得出 绝对浓度而测量的原始数据（例如，将CE-TOFMS测定所得的图表的峰面积标准化所得的 值）等。
[0076] 诊断时，预先测定被诊断为罹患抑郁症的脊椎动物（在本说明书中，也称作患病 脊椎动物）及被诊断为非抑郁症的脊椎动物（在本说明书中，也称作健康正常脊椎动物） 的血液中的生物标记物量的范围，受诊脊椎动物的血液中的生物标记物量在健康正常脊椎 动物的血液中的生物标记物量的范围内时，该脊椎动物没有患病的可能性高，而在患病脊 椎动物的血液中的生物标记物量的范围内时，患病的可能性高。此外，患病脊椎动物也可以 是罹患非典型抑郁症的动物。此外，患病脊椎动物和受诊脊椎动物也可以并发焦虑障碍、边 缘型人格障碍、惊恐障碍等其它疾病。
[0077] 此外，作为健康正常脊椎动物的血液中的生物标记物量的范围，也可以是预先测 定受诊脊椎动物在健康正常时的血液中的生物标记物量的范围，然后对较诊断时的标记物 量与健康正常时的生物标记物量的范围进行比较。
[0078] 这里，健康正常脊椎动物的血液中的生物标记物量的范围，也可以是在从各动物 的多次测定值的平均值减去标准偏差所得的值到平均值加上标准偏差所得的值的范围内， 也可以是从平均值的下限值到上限值的范围，没有特别限定，只要根据诊断标记物，在诊断 疾病时选择最好的值或范围便可。
[0079] 或者，也可以确定用于辨别患病脊椎动物与健康正常脊椎动物的血液中的生物标 记物量的阈值。例如，预先测定多个患病脊椎动物及多个健康正常脊椎动物的血液中的生 物标记物量，然后确定阈值。阈值的确定方法没有特别限定，只要用本领域的技术人员的常 规方法便可，只要确定阈值使得低于阈值（或者高于或等于阈值）的范围包含第一指定比 例的患病脊椎动物，而高于或等于阈值（或者低于阈值）的范围包含第二指定比例的健康 正常脊椎动物便可。作为具体的方法，例如可以使用SAS公司的统计软件JMP等，求出用于 辨别的卡方值为最佳时的值。作为诊断标记物，第一指定比例和第二指定比例都是越高越 好，较好的是高于或等于70 %，更好的是高于或等于80 %，甚至更好的是高于或等于90 %， 最好的是100%。两者的值都设定为高时，特异度（specificity)和敏感度（sensitivity) 也高。但是，当第一和第二指定比例两者都不能设定为高时，只要确定阈值使特异度和敏感 度中的任一者高也可。最好是特异度与敏感度都高，较好的是高于或等于70%，更好的是高 于或等于80%，甚至更好的是高于或等于90%，最好的是100%。此外，特异度是指（高于 或等于阈值或者低于阈值的健康正常脊椎动物数V(健康正常脊椎动物总数）的百分比， 敏感度是指（低于阈值或者高于或等于阈值的患病脊椎动物数V(患病脊椎动物总数）的 百分比。特异度高的生物标记物优选用作确定抑郁症患者的生物标记物（在本说明书中， 这些生物标记物也称作患病标记物），因该生物标记物量在低于阈值或者高于或等于阈值 时罹患抑郁症的概率高。敏感度高的生物标记物优选用作从抑郁症患者中排除健康正常者 的生物标记物（在本说明书中，这些生物标记物也称作健康正常标记物），因该生物标记物 量在高于或等于阈值或者低于阈值时没有罹患抑郁症的概率高。
[0080] 本说明书所述的诊断标记物能够用作患病标记物也能够用作健康正常标记物，磷 酸乙醇胺、牛磺酸、天冬氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、2-氨基己二酸、组氨酸、异白氨酸、ADP-核 糖、酪氨酸、ATP、ADP、天冬酰胺、AMP、5-羟色胺、缬氨酸、色氨酸、犬尿氨酸、磷酸胆碱、 SDMA(对称性二甲基精氨酸）、哌啶、2-哌啶酸、肌酸酐、烟酰胺能够用作患病标记物也能够 用作健康正常标记物，利用受诊脊椎动物测定其血浆中浓度，例如，作为人的情况，在如表1 所示的范围内时，诊断为抑郁症的可能性高或者健康正常的可能性高。此为，天冬酰胺、苯 基丙氨酸、葡糖二酸、羟脯氨酸、胱硫醚、丙氨酸、2-氨基己二酸、N-乙酰天门冬氨酸、谷氨 酸、萌芦巴碱、肌酸、胍基乙酸、肌氨酸及甜菜碱优选作为患病标记物，利用受诊脊椎动物测 定其血浆中浓度，例如，作为人的情况，在如表1所示的范围内时，诊断为患抑郁症的可能 性高。再者，亚牛磺酸、磷酸胆碱、精氨酸、3-氨基丁酸、β -丙氨酸、赖氨酸、磷酸肌酸、丙氨 酸、尿酸、胆碱、异柠檬酸、白氨酸、苹果酸、酪胺、缬氨酸、ADM(非对称性二甲基精氨酸）、 苏氨酸、甘油酸、丝氨酸、2-甲基丝氨酸、鞘氨醇、高香草酸、蛋氨酸亚砜、二氢神经鞘氨醇、 异丁酸优选用作健康正常标记物，利用受诊脊椎动物测定其血浆中的浓度，例如，作为人的 情况，在如实施例1所得的表1或实施例2所得的表2所示的范围内时，诊断为健康正常的 可能性高。磷酸乙醇胺和牛磺酸的阈值分别选用2. 41和50.54( μΜ)更好。此外，这里列 举的阈值只不过是在特定的群体中通过特定的方法算出的一个例子，很可能随群体发生变 化而变化。
【主权项】
1. 一种筛选罹患抑郁症的模型动物的方法，包括下述步骤： 测量来自候选动物的血样中的磷酸乙醇胺的含量，以及 将所述血样中的磷酸乙醇胺的含量与表示健康动物血液中磷酸乙醇胺水平下限的阈 值进行比较， 其中，如果所述血样中的磷酸乙醇胺水平低于所述阈值，则候选动物是罹患抑郁症的 模型动物。
2. 如权利要求1所述的方法，其中设定的阈值低于或等于2. 41yM。
3. 如权利要求1所述的方法，其中设定的阈值低于或等于1. 91yM。
4. 一种筛选针对抑郁症患者的候选治疗剂的方法，包括下述步骤： 向罹患抑郁症的模型动物施用针对候选治疗剂的候选物质， 对施用所述候选物质之前和之后来自所述模型动物的血样中的磷酸乙醇胺的含量进 行测定，以及 对施用所述候选物质之前和之后的血样中的磷酸乙醇胺的含量进行比较， 其中，如果施用所述候选物质之后的血样中的磷酸乙醇胺的含量较之施用所述候选物 质之前的血样中的磷酸乙醇胺的含量增加，则所述候选物质对抑郁症有效。
5. 如权利要求4所述的方法，其中所述患者是非典型抑郁症患者。
【专利摘要】本发明涉及生物体内的低分子化合物作为抑郁症的生物标记物的使用，该低分子化合物具体是ADP-核糖、ATP、ADP、AMP、5-羟色胺、色氨酸、犬尿氨酸、SDMA、苏氨酸、甘油酸、丝氨酸、N-乙酰天门冬氨酸、谷氨酸、葫芦巴碱、肌酸、2-甲基丝氨酸、鞘氨醇、高香草酸、哌啶、蛋氨酸亚砜、2-哌啶酸、二氢神经鞘氨醇、γ-丁酰甜菜碱、胍基乙酸、异丁酸、肌酸酐、肌氨酸、3-甲基丁酸、烟酰胺、甜菜碱、鸟氨酸、肉碱、乙醇胺、磷酸乙醇胺、牛磺酸、亚牛磺酸、天冬氨酸、蛋氨酸、酪氨酸等中的至少一种的化合物。
【IPC分类】G01N33-68
【公开号】CN104777314
【申请号】CN201510161121
【发明人】川村则行, 篠田幸作, 大桥由明, 石川贵正, 佐藤基
【申请人】福满代谢组技术有限公司, 川村则行
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2010年8月12日
【公告号】CN102667485A, CN102667485B, EP2466312A1, EP2466312A4, US8951739, US20120282592, US20150126623, WO2011019072A1