浓度调至小于7 %后用酶联免疫法测定粪便乙醇提 取物中睾酮及其他指标的含量。
[0069] 实施例2、粪便乙醇提取物中乙醇体积百分比浓度对酶联免疫反应测定睾酮含量 影响的验证
[0070] 实验重复三次，每次重复实验的具体步骤如下：
[0071] ( -）较大范围不同乙醇体积百分比浓度梯度对酶联免疫反应测定睾酮含量影响
[0072] 将实施例1的标准品S3、S4和S5分别按照表6的各液体的体积进行稀释，分别得 到乙醇体积百分比浓度分别为0 %、2 %、5 %、7 %、10 %、15 %、20 %、30 %和50 %的S3、 S4和S5待测液。
[0073] 表6、不同乙醇体积百分比浓度的S3、S4和S5待测液中各液体的体积 [00741
[0075] ^按照实施例1步骤2的酶联免疫法测定上述各S3待测液中睾酮的含量，结果如表 7及图2所示。使用SPSS16. 0软件对各S3待测液中睾酮的含量进行单因素方差分析（one way-ANOVA)及不同乙醇浓度与乙醇浓度为0的S3待测液中睾酮含量测定值间的差异显著 性分析，显著性水平设置为P = 0. 05 ;结果如表8和表9所示。
[0076] 表7、不同乙醇体积百分比浓度的S3待测液中的睾酮含量的测定值
[0077]
[0078] 表8、单因素方差分析
[0079]
[0080] 表9、不同乙醇浓度与乙醇浓度为0的S3待测液中睾酮含量测定值间的差异显著 性分析
[0081]
[0082] 以乙醇体积百分比浓度为0%的S3待测液中的睾酮含量的测定值作为标准对照 值，在乙醇体积百分比浓度大于等于10 %时，睾酮含量的测定值出现较大的波动，测定值 与乙醇体积百分比浓度为0%时的测定值差异显著。当乙醇体积百分比浓度为30 %及50 %时，睾酮含量的测定值与标准值的差异极显著。
[0083] 按照实施例1步骤2的酶联免疫法测定上述各S4待测液中睾酮的含量，结果如表 10及图3所示。使用SPSS16. 0软件对各S4待测液中睾酮的含量进行单因素方差分析（one way-ANOVA)及不同乙醇浓度与乙醇浓度为0的S4待测液中睾酮含量测定值间的差异显著 性分析，显著性水平设置为P = 0. 05 ;结果如表11和表12所示。
[0084] 表10、不同乙醇体积百分比浓度的S4待测液中的睾酮含量的测定值
[0085]
[0086] 表11、单因素方差分析
[0087]
[0088] 表12、不同乙醇浓度与乙醇浓度为0的S4待测液中睾酮含量测定值间的差异显著 性分析
[0089]
[0090] 以乙醇体积百分比浓度为0%的S4待测液中的睾酮含量的测定值作为标准对照 值，在乙醇体积百分比浓度大于等于15 %时，睾酮含量的测定值出现较大的波动，测定值 与乙醇体积百分比浓度为0%时的测定值差异显著。当乙醇体积百分比浓度为50 %时，睾 酮含量的测定值与标准值的差异极显著。
[0091] 按照实施例1步骤2的酶联免疫法测定上述各S5待测液中睾酮的含量，结果如表 13及图4所示。使用SPSS16. 0软件对各S5待测液中睾酮的含量进行单因素方差分析（one way-ANOVA)及不同乙醇浓度与乙醇浓度为0的S5待测液中睾酮含量测定值间的差异显著 性分析，显著性水平设置为P = 0. 05 ;结果如表14和表15所示。
[0092] 表13、不同乙醇体积百分比浓度的S5待测液中的睾酮含量的测定值
[0095] 表14、单因素方差分析 [0096]
[0093]
[0094]
[0097] 表15、不同乙醇浓度与乙醇浓度为0的S5待测液中睾酮含量测定值间的差异显著 性分析
[0098]
[0099] 以乙醇体积百分比浓度为0%的S3待测液中的睾酮含量的测定值作为标准对照 值，在乙醇体积百分比浓度大于等于7 %时，睾酮含量的测定值出现较大的波动，测定值与 乙醇体积百分比浓度为〇%时的测定值差异显著。当乙醇体积百分比浓度为20 %、30 %及 50 %时，睾酮含量的测定值与标准值的差异极显著。
[0100](二）较小范围不同乙醇体积百分比浓度梯度对酶联免疫反应测定睾酮含量影响 [0101] 将实施例1的标准品S3、S4和S5分别按照表16的各液体的体积进行稀释，分别得 到乙醇体积百分比浓度分别为0 %、5 %、6 %、7 %、8 %、9 %、10 %、15 %和20 %的S3，、 Sf和S5'待测液。
[0102] 表16、不同乙醇体积百分比浓度的S3'、Sf和S5'待测液中各液体的体积
[0103]
[0104] 按照实施例1步骤2的酶联免疫法测定上述各S3'待测液中睾酮的含量，结果如 表17及图5所示。使用SPSS16. 0软件对各S3'待测液中睾酮的含量进行单因素方差分析 (one way-ANOVA)及不同乙醇浓度与乙醇浓度为0的S3^待测液中睾酮含量测定值间的差 异显著性分析，显著性水平设置为P = 0. 05 ;结果如表18和表19所示。
[0105] 表17、不同乙醇体积百分比浓度的S3'待测液中的睾酮含量的测定值
[0106]
[0107] 表18、单因素方差分析
[0108]
[0109] 表19、不同乙醇浓度与乙醇浓度为0的S3'待测液中睾酮含量测定值间的差异显 著性分析
[0110]
[0111] 以乙醇体积百分比浓度为〇%的S3'待测液中的睾酮含量的测定值作为标准对 照值，在乙醇体积百分比浓度大于等于9 %时，睾酮含量的测定值出现较大的波动，测定值 与乙醇体积百分比浓度为0%时的测定值差异显著。
[0112] 按照实施例1步骤2的酶联免疫法测定上述各S4'待测液中睾酮的含量，结果如 表20及图6所示。使用SPSS16. 0软件对各S4'待测液中睾酮的含量进行单因素方差分析 (one way-ANOVA)及不同乙醇浓度与乙醇浓度为0的Sf待测液中睾酮含量测定值间的差 异显著性分析，显著性水平设置为P = 0. 05 ;结果如表21和表22所示。
[0113] 表20、不同乙醇体积百分比浓度的S4'待测液中的睾酮含量的测定值
[0114]
[0115] 表21、单因素方差分析
[0116]
[0117] 表22、不同乙醇浓度与乙醇浓度为0的Sf待测液中睾酮含量测定值间的差异显 著性分析
[0118]
[0119] 以乙醇体积百分比浓度为〇%的S4'待测液中的睾酮含量的测定值作为标准对 照值，在乙醇体积百分比浓度大于等于7 %时，睾酮含量的测定值出现较大的波动，测定值 与乙醇体积百分比浓度为0%时的测定值差异显著。
[0120] 按照实施例1步骤2的酶联免疫法测定上述各S5'待测液中睾酮的含量，结果如 表23及图7所示。使用SPSS16. 0软件对各S5'待测液中睾酮的含量进行单因素方差分析 (one way-ANOVA)及不同乙醇浓度与乙醇浓度为0的S5^待测液中睾酮含量测定值间的差 异显著性分析，显著性水平设置为P = 0. 05 ;结果如表24和表25所示。
[0121] 表23、不同乙醇体积百分比浓度的S5'待测液中的睾酮含量的测定值
[0122]
[0123] 表24、单因素方差分析
[0124]
[0125] 表25、不同乙醇浓度与乙醇浓度为0的S5'待测液中睾酮含量测定值间的差异显 著性分析
[0126]
[0127] 以乙醇体积百分比浓度为0%的S5'待测液中的睾酮含量的测定值作为标准对 照值，在乙醇体积百分比浓度大于等于15 %时，睾酮含量的测定值出现较大的波动，测定 值与乙醇体积百分比浓度为〇%时的测定值差异显著。
[0128] 结果表明，当待测液中乙醇体积百分比浓度大于等于7 %时，待测液中的乙醇对 睾酮含量的测定影响较大，不能用酶联免疫测定法来检测睾酮及其他指标的含量，可将待 测液中乙醇体积百分比浓度调至小于7 %后用酶联免疫法测定待测液中睾酮及其他指标 的含量。
【主权项】
1. 检测动物粪便乙醇提取物中待测物含量的方法，包括下述1)和2): 1) 调节所述粪便乙醇提取物中乙醇的浓度，得到待测粪便乙醇提取物，所述待测粪便 乙醇提取物中乙醇的体积百分比浓度大于〇小于7% ; 2) 利用酶联免疫法检测所述待测粪便乙醇提取物中所述待测物的含量，得到所述粪便 乙醇提取物中所述待测物的含量。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述动物为林麝（Moschusberezovskii)。3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述待测粪便乙醇提取物中乙醇的 体积百分比浓度大于0小于等于6%。4. 根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述待测粪便乙醇提取物中乙 醇的体积百分比浓度大于〇小于等于5%。5. 根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述待测粪便乙醇提取物中乙 醇的体积百分比浓度大于〇小于等于4%。6. 根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述粪便乙醇提取物为用乙醇 水溶液浸提所述动物粪便得到的浸提液。7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓 度为90%。8. 根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：所述动物为雄性动物；所述待测 物为睾酮。
【专利摘要】本发明公开了检测动物粪便乙醇提取物中待测物含量的方法。本发明所提供的检测动物粪便乙醇提取物中待测物含量的方法，包括下述1)和2)：1)调节所述粪便乙醇提取物中乙醇的浓度，得到待测粪便乙醇提取物，所述待测粪便乙醇提取物中乙醇的体积百分比浓度大于0小于7％；2)利用酶联免疫法检测所述待测粪便乙醇提取物中所述待测物的含量，得到所述粪便乙醇提取物中所述待测物的含量。实验证明，可将动物粪便乙醇提取物中乙醇体积百分比浓度调至小于7﹪后利用本发明的检测动物粪便乙醇提取物中待测物含量的方法测定睾酮及其他待测物的含量。
【IPC分类】G01N21/78, G01N33/74
【公开号】CN104914098
【申请号】CN201510252953
【发明人】王毅花, 胡德夫, 刘树强, 魏雨婷, 张天祥
【申请人】北京林业大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月18日