照组来使用。印迹浓度使用Lab Works program来定量化。测定值用平均土标准偏差来表示(η = 4)。
[0029]图10是表示在对MDCK细胞诱发氧化压力之后初级纤毛从细胞分离到培养基内的免疫蛋白印迹结果。利用ImM过氧化氢对作为肾脏肾小管细胞的MDCK进行4小时处理之后，由此获取培养基，并以上述所获取培养基为对象实施了使用乙酰化微管蛋白抗体的免疫蛋白印迹。
[0030]图11是表示利用乙酰化微管蛋白抗体且通过免疫蛋白印迹法确认从薄肾小球基底膜肾病(TGBM, Thin glomerular basement membrane)患者尿液中检测出初级纤毛断片与否的结果的图。
[0031]图12是表示利用乙酰化微管蛋白抗体且通过免疫蛋白印迹法确认从局灶节段性肾小球硬化(FSGS, Focal segmental glomerulosclerosis)或 BK 病毒肾病(BK virusnephropathy)患者尿液中检测出初级纤毛断片与否的结果的图。
[0032]图13是表示利用乙酰化微管蛋白抗体且通过免疫蛋白印迹法确认从膜性肾小球肾炎(MGN, Membranous glomerulonephritis)或糖尿病肾病(DM nephropathy)患者尿液中检测出初级纤毛断片或其组成蛋白质与否的结果的图。
[0033]图14是表示利用乙酰化微管蛋白抗体且通过免疫蛋白印迹法确认从微小病变肾病(MCD，Minimal change disease)或过敏性紫癜性肾炎(HSPnephritis, Henoch-Schonlein Purpura (过敏性紫癜)nephritis)患者尿液中检测出初级纤毛断片或其组成蛋白质与否的结果的图。
[0034]图15是表示利用乙酰化微管蛋白抗体且通过免疫蛋白印迹法确认从肾小管间质性肾炎(TIN, Tubulointerstitial nephritis)、急性细胞性排斥反应(Acute cellularreject1n)、慢性抗体介导的排斥反应(Chronic antibody mediated reject1n)、|丐调磷酸酶抑制剂慢性毒性(Chronic calcineurin inhibitor toxicity)或急性肾小管损伤(Acute tubular injury)患者尿液中检测出初级纤毛断片或其组成蛋白质与否的结果的图。
[0035]图16是表示利用乙酰化微管蛋白抗体且通过免疫蛋白印迹法从IgA肾病(IgAN, IgA nephropathy)或C4d患者尿液中检测出初级纤毛断片或其组成蛋白质与否的结果的图。
[0036]图17是表示利用乙酰化微管蛋白抗体且通过免疫蛋白印迹法确认从肾移植(kidney transplantat1n)患者尿液中检测出初级纤毛断片或其组成蛋白质与否的结果的图。
[0037]图18的A和B是表示将注射链脲佐菌素(streptozotocin)而诱发第1类型糖尿病肾病(DM nephropathy)的鼷鼠尿液进行电泳，并通过库马西染色显示蛋白质从尿液排出的现象的图，即为表示发生了糖尿病性肾病的图，C是表示利用乙酰化微管蛋白抗体且通过免疫蛋白印迹法确认从该鼷鼠的尿液中检测出初级纤毛断片或其组成蛋白质与否的结果的图。
[0038]图19是表示在急性肝(liver)损伤之后所诱发的肾脏损伤时，利用乙酰化微管蛋白抗体且通过免疫蛋白印迹法确认检测出初级纤毛断片或其组成蛋白质与否的结果的图。
【具体实施方式】
[0039]作为实现上述目的的一种方式，本发明提供一种用于诊断肾脏疾病的尿液检查用组合物，该组合物包含特异性地检测从肾脏组织分离出的初级纤毛或其组成成分或者从肾脏组织分离出的初级纤毛基体或其组成成分的制剂。
[0040]本发明最先查明了利用肾脏疾病的特异性从尿液中检测出初级纤毛或初级纤毛基体，由此完成了通过在尿液中检测从肾脏组织分离出的初级纤毛或初级纤毛基体来诊断出肾脏疾病的发明。
[0041]本发明中确认了从患有肾脏疾病的患者和诱发肾脏疾病的鼷鼠中脱落的初级纤毛通过尿液排出，但在正常人和正常老鼠的情况下未检测到该初级纤毛，因此确认了在尿液中确认初级纤毛或初级纤毛基体的存在与否的情况下能够迅速确认是否患有肾脏疾病。
[0042]特别是，通过关于初级纤毛特性的观察研究，确认了尿液中的初级纤毛或其基体的检测对肾脏疾病具有特异性。具体来讲，初级纤毛除肾脏组织之外还存在于多个组织中，但即使其它组织的初级纤毛从细胞分离出也无法通过尿液排出。从肾脏组织之外的其它组织脱落的初级纤毛为了通过尿液排出，必须先通过血管壁进入到血管之后，重新经过肾脏过滤并通过膀胱从尿道排出，但初级纤毛通过血管壁这一现象不仅物理上无法实现，而且即使能通过也因在肝部被代谢或无法通过肾脏的肾小球而无法以尿液排出。但是，在肾脏中因初级纤毛从作为尿液排出通道的肾小管内腔面伸出而初级纤毛脱落能直接通过尿液排出，因此确认了在尿液中确认初级纤毛或初级纤毛基体的存在与否的情况下，能够以高的特异性确认是否患有肾脏疾病。
[0043]此外，从尿液中检测初级纤毛或组成该初级纤毛的蛋白质或初级纤毛基体的存在与否的方法不仅容易获得待检测的样本，而且可通过显微镜或对初级纤毛具有特异性的反应(例如，显色、免疫化学法等)迅速执行。从尿液中检测初级纤毛的方法与在组织内检测初级纤毛的方法相比更简单，并且可容易诊断出肾脏疾病。
[0044]此外，本发明中确认了也可以在10 μ 1左右的少量尿液中检测出初级纤毛、初级纤毛基体及组成该初级纤毛、初级纤毛基体的蛋白质的存在及其含量，从而确认了从尿液中检测出初级纤毛以诊断肾脏疾病的方法具有高敏感度。
[0045]此外，本发明查明了在患有多种肾脏疾病的患者和动物尿液中能检测出初级纤毛，从而不仅可用于早期确认是否患有多种肾脏疾病，而且查明了具有也可以根据含量用于肾脏疾病的进行程度、预后预测和治疗效果的预后预测中的优点。
[0046]本发明中所使用的用语“从肾脏组织分离出的初级纤毛或初级纤毛基体”包含因肾脏疾病或肾脏肾小管初级纤毛的结构损伤等而从肾脏分离出的初级纤毛或初级纤毛的组成蛋白质，还包含初级纤毛基体或其组成蛋白质。此外，从肾脏分离出的初级纤毛或初级纤毛基体也可以是如存在于肾脏组织上的完整的初级纤毛或其基体等的形态，但还可以是该初级纤毛或其基体的断片(一部分)。
[0047]由本发明的目的来看，从上述肾脏组织分离出的初级纤毛或初级纤毛基体是在肾脏疾病或具有肾脏损伤的细胞组的尿液中被大部分检测出的细胞结构物。上述经分离的初级纤毛或初级纤毛基体在正常对照组的尿液中几乎不存在，因此通过检测该初级纤毛或初级纤毛基体的存在及含量，能诊断出肾脏疾病的发病，进行程度，治疗效果及预后。
[0048]本发明中所使用的用语“初级纤毛”是指从包含肾小管上皮细胞的大部分哺乳动物细胞表面扩张的、以微管为基础的非-运动性细胞内器官。在构成肾脏的髓质部和皮质部细胞的表面上具有初级纤毛。图1中示出了上述初级纤毛的结构及组成该初级纤毛的代表性的蛋白质。
[0049]本发明中所使用的用语“从肾脏组织分离出的初级纤毛的组成成分或从肾脏组织分离出的初级纤毛基体的组成成分”的代表例中也包含蛋白质或非肽类化合物。
[0050]本发明中所使用的用语“特异性地检测从肾脏分离出的初级纤毛或初级纤毛基体或者其组成成分的制剂”包含可利用与从肾脏分离出的初级纤毛或初级纤毛基体(basalbody)或其断片整体或者组成上述初级纤毛或初级纤毛基体的一个以上组成成分相互作用等检测出这些的制剂。
[0051]特异性地检测从肾脏分离出的初级纤毛或初级纤毛基体的制剂也可以是对于初级纤毛或其基体直接检测出作为其组成成分的蛋白质的制剂。优选通过与特异性地存在于初级纤毛中的蛋白质结合来测定其存在或含量的制剂。特别是，优选特异性地检测组成上述初级纤毛或初级纤毛基体的蛋白质的制剂为检测出特异性地存在于初级纤毛或其基体上的蛋白质的制剂。
[0052]作为特异性地存在于上述初级纤毛中的蛋白质的非限制性例，具有乙酰化微管蛋白(acetylated a -tubulin)、EVC2、INPP5E、INVERSIN、NPHP3、Broad-Minded(bromi)、FAM49B、GTL3、TSGA14、WDR60、WDR11、多囊蛋白-1 (polycystin-1)、多囊蛋白-2 (polycystin-2)、NME7、SEPT2、SEPT7、SEPT9、小鸟苷三磷酸酶 Ran (small GTPaseRan)、输入蛋白(importin)、IFT57、IFT74、IFT80、IFT88、IFT122 或 IFT172 等，但作为组成初级纤毛的蛋白质几乎不会以除初级纤毛或其断片之外的形态存在于尿液中，从而如果是能够区分正常人和肾脏疾病者的蛋白质，不管是何种蛋白质，在本发明中均可用于初级纤毛的特异性检测。本发明的实施例中采用了作为存在于初级纤毛的代表性蛋白质的乙酰化微管蛋白抗体。
[0053]本发明中所使用的用语“乙酰化微管蛋白(acetylateda -tubulin) ”是组成初级纤毛蛋白质的一种。从本发明的目的来看，上述乙酰化微管蛋白为过量包含在肾脏疾病患者的尿液样本中的蛋白质，通过从尿液中检测出上述蛋白质，从而测定初级纤毛、初级纤毛断片、初级纤毛组成蛋白质的存在或含量，来诊断出肾脏疾病。
[0054]特异性地检测从上述肾脏分离出的初级纤毛基体的制剂优选为与构成初级纤毛基体(basal body)的蛋白质结合的制剂。上述基体为在细胞中与初级纤毛直接连接的部位，在初级纤毛分离时与初级纤毛一同从细胞中释放出，从而也可以从尿液中检测出该基体。作为特异性对地存在于上述初级纤毛基体的蛋白质的非限制性的例，具有ARL13B、tektins、pf_ribbon、CEP164、0DF2或CEP170等，但作为组成初级纤毛的蛋白质几乎不会以除初级纤毛断片之外的形态存在于尿液中，从而如果是能够区分正常人和肾脏疾病者的蛋白质，不管是何种蛋白质，均可使用。本发明的实施例中采用了 Arll3b抗体。
[0055]这种初级纤毛基体的尿液内检测与初级纤毛相比在疾病程度更严重的情况下能检测到，因此调查这种基体和初级纤毛的量变检测也可用于疾病的强度和经过等的判断。因此，本发明的尿液检查用组合物可包含所有特异性地检测从肾脏组织分离出的初级纤毛或其组成成分的制剂及特异性地检测从肾脏组织分离出的初级纤毛基体或其组成成分的制剂。
[0056]作为特异性地检测从肾脏分离出的初级纤毛或初级纤毛基体或其组成成分的制剂的非限制性的例，可以是抗体或核酸适配子等，但并不特别限于此。
[0057]本发明中的用语“抗体”是指能够与蛋白质或肽分子的抗原性部位特异性地结合的蛋白质性分子。关于上述抗体的形态并不特别限制，如果是多克隆抗体、单克隆抗体或具有抗原结合性的抗体，则这些抗体的一部分也包含在本发明的抗体中，而且不仅包含所有免疫球蛋白抗体，也还可以包含人源化抗体等特殊抗体。与此同时，上述抗体不仅是包含具有两个整体长度的轻链及两个整体长度的中链的完整形态，也包含抗体分子的功能性断片。所谓抗体分子的功能性断片是指至少具有抗原结合功能的断片，可以是Fab、F(ab’)、F(ab’)2 及 Fv 等。
[0058]本发明中的用语“核酸适配子”是指其本身