[0151]为了确认是否因脱纤毛化而缩小初级纤毛的长度，本发明人在从对照组或经过氧化氢处理的MDCK细胞中获取的培养基中确认了作为初级纤毛断片的标记的乙酰化微管蛋白，并将该结果表示在图10中。由于过氧化氢处理呈现出与由缺血/再灌注引起的肾脏细胞损伤的方法类似的结果，因此使用了该过氧化氢的处理。
[0152]其结果，如图10所示，在经过氧化氢处理后经过4小时的时间点检测到乙酰化微管蛋白，并与时间的经过成比例地增加。与此不同地，在对照组的培养基中没有检测到乙酰化微管蛋白，这表示因氧化压力而在肾小管细胞中发生了初级纤毛脱落的脱纤毛化。
[0153]实施例8:从多种肾脏疾病患者的尿液中检测初级纤毛断片
[0154]通过实施例2、5及7，确认在尿液中以缺血/再灌注模式特异性地检测到肾脏的初级纤毛。进而，本发明人通过蛋白免疫印迹法确认在薄肾小球基底膜肾病(TGBM，Thinglomerular basement membrane)、微小病变肾病(MCD, Minimal change disease)、膜性肾小球肾炎(MGN, Membranous glomerulonephritis)、局灶节段性肾小球硬化(FSGS, Focalsegmental glomerulosclerosis)、糖尿病肾病(DM nephropathy)、IgA 肾病(IgAN, IgA nephropathy)、肾小管间质性肾炎(TIN, Tubulointerstitial nephritis)、过敏性紫療性肾炎(HSP nephritis, Henoch-Schonlein Purpura (过敏性紫療)nephritis)、急性肾小管损伤(Acute tubular injury)、BK 病毒肾病(BK virus nephropathy)、急性细胞性排斥反应(Acute cellular reject1n)、慢性抗体介导的排斥反应(Chronicantibody mediated reject1n)和慢性 CIN 毒性(Chronic calcineurin inhibitortoxicity)患者尿液样本中是否检测到初级纤毛断片。将该结果表示在图11至16。在此，蛋白免疫印迹法中所使用的患者尿液样本在10 μ 1以内。
[0155]其结果，呈现出如下结果:虽然在正常对照组尿液中未检测到初级纤毛断片，但在上述疾病患者的情况下，在大部分患者尿液中存在初级纤毛断片(图11至16)。
[0156]此外，关于实施肾脏移植(allograft，同种异体移植)的患者尿液，在移植后按每个时间收集，并通过蛋白免疫印迹法确认初级纤毛蛋白质在移植后初期即肾脏损伤严重的时期被排泄到尿液中，并将该结果表示在图17中。此时，与用作肾脏损伤标记的MM-1蛋白质进行了比较，其结果呈现出初级纤毛蛋白质的表现形式与MM-1的表现形式相似的倾向。
[0157]实施例9:第1型糖尿病肾病鼷鼠模式及急性肝损伤(acute hepatic injury)鼷鼠模式的尿液中的初级纤毛断片检测
[0158]此外，通过蛋白免疫印迹法确认是否在表现出第1型糖尿病肾病的鼷鼠尿液中检测到初级纤毛断片即蛋白质，并将结果表示在图18中。
[0159]其结果，确认出在表现出第1型糖尿病肾病的鼷鼠尿液中检测到初级纤毛断片。
[0160]此外，通过蛋白免疫印迹法确认了是否在诱发急性肝损伤的鼷鼠尿液中检测到初级纤毛断片即蛋白质，并将结果表示在图19中。
[0161]其结果，确认了在诱发急性肝损伤的鼷鼠尿液中检测到初级纤毛断片。
[0162]S卩，如上所述的实施例中的所有结果给出了在尿液中特异性地检测初级纤毛或其断片的方法能诊断出多种肾脏疾病的启示。此外，在少量尿液中也能检测初级纤毛的存在与否，因此给出了从尿液分离出的初级纤毛、其断片或乙酰化微管蛋白对多种肾脏疾病具有高敏感度及特异度的启示。
[0163]从上述的说明中，本发明所属技术领域的技术人员应能理解，本发明在不变更其技术思想或必要特征的情况下，可以以其它具体方式实施。与此相关联地，应理解为上述实施例在所有方面均为示意性的，而不是限定性的。本发明的范围应解释为，与上述详细的说明相比，从后述的权利要求书的意义及范围和其等价概念中导出的所有变更或变型的方式包括在本发明的范围内。
【主权项】
1.一种用于诊断肾脏疾病的尿液检查用组合物，包含特异性地检测从肾脏组织分离出的初级纤毛或其组成成分或者从肾脏组织分离出的初级纤毛基体或其组成成分的制剂。2.根据权利要求1所述的组合物，其中， 所述检测制剂为收容或吸附在被溶解于尿液中的衬底上的制剂。3.根据权利要求1所述的组合物，其中， 进一步包含用于将所述初级纤毛或其基体分解为组成该初级纤毛或其基体的蛋白质的处理剂。4.根据权利要求1所述的组合物，其中， 所述制剂与初级纤毛或其基体的特异性蛋白质结合。5.根据权利要求4所述的组合物，其中， 所述初级纤毛的特异性蛋白质为选自由乙酰化微管蛋白(acetylated a-tubulin)、EVC2、INPP5E、INVERSIN、NPHP3、Broad-Minded (bromi)、FAM49B、GTL3、TSGA14、WDR60、WDR11、多囊蛋白-l(polycystin-l)、多囊蛋白-2 (polycystin-2)、NME7、SEPT2、SEPT7、SEPT9、小鸟苷三磷酸酶 Ran (small GTPase Ran)、输入蛋白(importin)、IFT57、IFT74、IFT80、IFT88、IFT122 和 IFT172 组成的组中的一种。6.根据权利要求4所述的组合物，其中， 所述初级纤毛基体的特异性蛋白质为选自由ARL13B、tektins、pf-ribbon、CEP164、0DF2和CEP 170组成的组中的一种。7.根据权利要求1所述的组合物，其中， 所述肾脏疾病为选自由薄肾小球基底膜肾病(TGBM, Thin glomerular basementmembrane)、微小病变肾病(MCD, Minimal change disease)、膜性肾小球肾炎(MGN, Membranous glomerulonephritis)、局灶节段性肾小球硬化(FSGS, Focal segmentalglomerulosclerosis)、糖尿病肾病(DM nephropathy)、IgA肾病(IgAN, IgA nephropathy)、肾小管间质性肾炎(TIN, Tubulointerstitial nephritis)、过敏性紫癜性肾炎(HSPnephritis, Henoch-Schonlein Purpura (过敏性紫療)nephritis)、急性肾小管损伤(Acute tubular injury)、BK 病毒肾病(BK virus nephropathy)、急性细胞性排斥反应(Acute cellular reject1n)、慢性抗体介导的排斥反应(Chronic antibody mediatedreject1n)、慢性活动性抗体介导的排斥反应(Chronic active antibody mediatedreject1n)、慢性 CIN 毒性(Chronic calcineurin inhibitor toxicity)、急性肾损伤(Acute kidney injury)、缺血性肾脏疾病、肾小球肾炎、狼疮性肾炎、先天性异常、肾盂肾炎、肾结石、肾结核、肾肿瘤、慢性肾功能衰竭、末期肾功能衰竭、败血症、肝损伤等引起的肾脏损伤和由这些疾病组合构成的组中的疾病。8.根据权利要求1所述的组合物，其中， 包含特异性地检测从肾脏组织分离出的初级纤毛或其组成成分的制剂以及特异性地检测从肾脏组织分离出的初级纤毛基体或其组成成分的制剂。9.根据权利要求1所述的组合物，其中， 所述检测制剂为特异性地检测乙酰化微管蛋白(acetylateda -tubulin)或Arll3b的制剂。10.一种用于诊断肾脏疾病的尿液检查用试剂盒，包含用于吸附或收容从肾脏组织分离出的初级纤毛或其组成成分或者从肾脏组织分离出的初级纤毛基体或其组成成分，或者用于使从肾脏组织分离出的初级纤毛或初级纤毛基体从尿液中分离的衬底。11.根据权利要求10所述的试剂盒，其中， 所述衬底进一步包含用于确认尿液接触时其接触与否的生色团。12.根据权利要求10所述的试剂盒，其中， 用于使所述初级纤毛或初级纤毛基体分离的衬底为筛选初级纤毛或初级纤毛基体的筛子(sieve)。13.根据权利要求10所述的试剂盒，其中， 所述试剂盒进一步包含第1项至第9项中的任一项所述的尿液检查用组合物。14.根据权利要求10所述的试剂盒，其中， 所述试剂盒也可以从1至50 μ 1的尿液中检测到肾脏疾病与否。15.一种检测从肾脏组织分离出的初级纤毛或其组成成分或者从肾脏组织分离出的初级纤毛基体或其组成成分的方法，包括以下步骤:在分离出的尿液样本中确认初级纤毛或其组成成分或者初级纤毛基体或其组成成分的存在与否。16.根据权利要求15所述的检测方法，其中， 进一步包括以下步骤:利用处理剂对分离出的尿液样本进行处理，所述处理剂将所述初级纤毛或初级纤毛基体分解为组成该初级纤毛或初级纤毛基体的蛋白质。17.根据权利要求15所述的检测方法，其中， 所述确认步骤通过对第1项至第9项中的任一项所述的尿液检查用组合物进行处理，来确认初级纤毛或其组成成分或者初级纤毛基体或其组成成分的存在与否。18.—种诊断肾脏疾病的发病或经过的方法，包括以下步骤:在分离出的尿液样品中确认从肾脏组织分离出的初级纤毛或其组成成分或者从肾脏组织分离出的初级纤毛基体或其组成成分的存在与否、浓度或初级纤毛长度。19.根据权利要求18所述的方法，其中， 进一步包括以下步骤:利用处理剂对分离出的尿液样本进行处理，所述处理剂将所述初级纤毛或初级纤毛基体分解为组成该初级纤毛或初级纤毛基体的蛋白质。20.根据权利要求18所述的方法，其中， 所述确认步骤通过对第1项至第9项中的任一项所述的尿液检查用组合物进行处理，来确认初级纤毛或其组成成分或者初级纤毛基体或其组成成分的存在与否。21.根据权利要求18所述的方法，其中， 通过利用特异性地检测从肾脏组织分离出的初级纤毛或其组成成分的制剂以及特异性地检测从肾脏组织分离出的初级纤毛基体或其组成成分的制剂这两种制剂对分离出的尿液样本进行处理，来调查初级纤毛及初级纤毛基体的量变，以诊断疾病的强度或经过。
【专利摘要】本发明涉及一种用于肾脏疾病诊断的尿液检查用组合物、用于肾脏疾病诊断的尿液检查用试剂盒、检测从肾脏组织分离出的初级纤毛或其组成成分或者从肾脏组织分离出的初级纤毛基体或其组成成分的方法以及肾脏疾病发病或经过的诊断方法。本发明的尿液检查用组合物及试剂盒具有通过从肾脏疾病患者的尿液中检测出初级纤毛或其基体或组成该初级纤毛或其基体的蛋白质，从而能够迅速简便地检测肾脏疾病与否的优点。
【IPC分类】G01N33/68
【公开号】CN105283764
【申请号】CN201480025295
【发明人】朴权懋, 金智忍, 朴善姬, 张喜成
【申请人】国立庆北大学校产学协力团
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2014年3月5日
【公告号】EP2966449A1, WO2014137158A1