处在检测窗中；所述 外壳上盖检测窗右侧空白处可作为用于记录数据的记录面。
[0048] 本实施例免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒的制备方法，包括以下操作 步骤：
[0049] 1)制备缓冲液:取荧光标记的兔抗人核基质蛋白22抗体15ng，加入60μ1，ρΗ=6.5、 磷酸盐浓度为80mmol/L的磷酸盐缓冲液中，混合均匀，即得缓冲液；
[0050] 2)制备试剂卡:取硝酸纤维素膜，标记出检测线和质控线，然后在检测线上喷点包 被鼠抗人核基质蛋白22抗体，在质控线上喷点包被羊抗兔抗体，然后将硝酸纤维素膜、玻璃 纤维素膜、吸水纸、滤血膜依次搭接在塑料垫板上，并切割成所需宽度，然后装入由上盖和 下盖连接在一起形成的外壳中，即得所述的试剂卡;其中外壳上盖上设置有血样孔和检测 窗，所述血样孔的位置对应滤血膜的位置，所述检测窗的位置对应检测线和质控线的位置， 使检测线和质控线处在检测窗中，所述外壳上盖检测窗右侧空白处可作为记录数据的记录 面；
[0051] 3)将步骤1)制备的缓冲液、步骤2)制备的试剂卡，组装，即得所述的免疫荧光层析 法检测核基质蛋白22用试剂盒。
[0052]本实施例试剂盒储存在4~8°C环境下。
[0053] 实施例3
[0054] 本实施免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒，包括缓冲液和试剂卡；
[0055]其中缓冲液为含有0.92ngAU荧光标记的兔抗人核基质蛋白22抗体的pH=7.0、磷 酸盐浓度为50mmol/L的磷酸盐缓冲液;其中荧光标记采用的荧光素的激发光波长为652nm， 发射光波长为668nm;
[0056]所述试剂卡包括试纸条，所述试纸条宽度为6mm，包括塑料垫板，塑料垫板上设置 硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上左右间隔l〇mm设置检测线和质控线，检测线左侧硝酸纤维 素膜上设置玻璃纤维素膜，质控线右侧硝酸纤维素膜上设置吸水纸，玻璃纤维素膜上设置 滤血膜;所述检测线上每厘米包被160ng鼠抗人核基质蛋白22抗体;所述质控线上每厘米包 被l.Oyg羊抗兔抗体；
[0057] 所述试剂卡还包括外壳，所述外壳包括连接在一起的上盖和下盖，所述上盖上设 置有血样孔和检测窗;所述血样孔的位置对应滤血膜的位置;所述检测窗的位置对应检测 线和质控线的位置，使检测线和质控线处在检测窗中；所述外壳上盖检测窗右侧空白处可 作为用于记录数据的记录面。
[0058] 本实施例免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒的制备方法，包括以下操作 步骤：
[0059] 1)制备缓冲液:取荧光标记的兔抗人核基质蛋白22抗体55ng，加入60μ1，ρΗ=7.3、 磷酸盐浓度为30mmol/L的磷酸盐缓冲液中，混合均匀，即得缓冲液；
[0060] 2)制备试剂卡:取硝酸纤维素膜，标记出检测线和质控线，然后在检测线上喷点包 被鼠抗人核基质蛋白22抗体，在质控线上喷点包被羊抗兔抗体，然后将硝酸纤维素膜、玻璃 纤维素膜、吸水纸、滤血膜依次搭接在塑料垫板上，并切割成所需宽度，然后装入由上盖和 下盖连接在一起形成的外壳中，即得所述的试剂卡;其中外壳上盖上设置有血样孔和检测 窗，所述血样孔的位置对应滤血膜的位置，所述检测窗的位置对应检测线和质控线的位置， 使检测线和质控线处在检测窗中，所述外壳上盖检测窗右侧空白处可作为记录数据的记录 面；
[0061] 3)将步骤1)制备的缓冲液、步骤2)制备的试剂卡，组装，即得所述的免疫荧光层析 法检测核基质蛋白22用试剂盒。
[0062]本实施例试剂盒储存在4~8°C环境下。
[0063] 实施例4
[0064] 上述实施例1~3提供的试剂盒的使用方法，具体操作步骤为：
[0065] I:肝素结合蛋白标准品预处理:取5000U核基质蛋白22标准品加入lml的无核基质 蛋白22的正常人新鲜尿液中，制成母液；用无核基质蛋白22的新鲜尿液将该母液分别稀释 成87U/ml、130U/ml、80U/ml、40U/ml、20U/ml、1 OU/ml、5U/ml、2 · 5U/ml、0 · 5U/ml 的核基质蛋 白22标准溶液；
[0066] Π :取缓冲液，室温下平衡15分钟，取步骤I制备的各浓度的核基质蛋白22标准溶 液各100μΙ分别加入到60μ1平衡后的缓冲液中，混合均匀后通过血样孔加入到试剂卡的滤 血膜上，室温水平放置10~15min后，将试剂卡插入荧光免疫读数仪，设定激发光波长为 652nm，发射光波长为668nm，读取不同浓度核基质蛋白22标准品的荧光值，每个浓度核基质 蛋白22标准溶液各测定5次，并计算荧光值的平均值;将荧光值的平均值为纵坐标，对应的 核基质蛋白22标准溶液的浓度值为横坐标做回归曲线，得出回归曲线方程，得到荧光值和 核基质蛋白22浓度的关系式；
[0067] m:取缓冲液6〇μL，室温下平衡15分钟，取待测样品100μΙ加入到平衡后的缓冲液 中，混合均匀后通过血样孔加入到试剂卡的滤血膜上，室温水平放置15min，将试剂卡插入 荧光免疫读数仪，设定激发光波长为652nm，发射光波长为668nm，读取待测样品的荧光值， 将该荧光值带入步骤Π 得到的关系式中，计算得到待测样品核基质蛋白22的浓度。
[0068] 试验例
[0069] 1、使用实施例1提供的试剂盒采用实施例4所述的方法分别测定浓度为30U/ml、 82U/ml、138U/ml的核基质蛋白22标准品，每个标准品重复测试5次，计算的得到实施例1提 供的试剂盒检测核基质蛋白22浓度的相对偏差< 9%，同样标准品重复测试所得结果的变 异系数CVS 10%，表明本发明试剂盒准确度高、重复性好。
[0070] 2、使用实施例1提供的试剂盒采用实施例4所述的方法分别测定从医院取来的15 例健康人的尿液样本和15例病人尿液样本中核基质蛋白22的浓度(U/ml)，其结果如下表1 所示：
【主权项】
1. 一种免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒，其特征在于，包括缓冲液和试剂 卡； 所述缓冲液为含有〇. 25~0.92ng/yl荧光标记的兔抗人核基质蛋白22抗体的磷酸盐缓 冲液； 所述试剂卡包括试纸条，所述试纸条包括塑料垫板，塑料垫板上设置硝酸纤维素膜，硝 酸纤维素膜上左右间隔设置检测线和质控线，检测线左侧硝酸纤维素膜上设置玻璃纤维素 膜，质控线右侧硝酸纤维素膜上设置吸水纸，玻璃纤维素膜上设置滤血膜;所述检测线上包 被鼠抗人核基质蛋白22抗体;所述质控线上包被羊抗兔抗体。2. 如权利要求1所述的免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒，其特征在于，所述 试剂卡还包括外壳，所述外壳包括连接在一起的上盖和下盖，所述上盖上设置有血样孔和 检测窗;所述血样孔的位置对应滤血膜的位置;所述检测窗的位置对应检测线和质控线的 位置，使检测线和质控线处在检测窗中。3. 如权利要求1所述的免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒，其特征在于，所述 检测线上鼠抗人核基质蛋白22抗体的包被量为50~160ng/cm。4. 如权利要求1所述的免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒，其特征在于，所述 质控线上羊抗兔抗体的包被量为0.3~1. Oyg/cm。5. 如权利要求1所述的免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒，其特征在于，所述 磷酸缓冲液的pH=6.5~7.3，磷酸盐浓度为30~80mmol/L。6. 如权利要求1所述的免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒，其特征在于，所述 检测线和质控线之间的间隔距离为5mm~10mm。7. 如权利要求1所述的免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒，其特征在于，所述 试纸条的宽度为3mm~6mm。8. 如权利要求1所述的免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒，其特征在于，所述 荧光标记的兔抗人核基质蛋白22抗体采用的荧光素的激发光波长为652nm，发射光波长为 668nm〇9. 如权利要求8所述的免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒，其特征在于，所述 试剂盒的使用方法的操作步骤包括： I:取不同浓度的核基质蛋白22标准品加入到缓冲液中，混合均匀后加入到试剂卡的滤 血膜上，室温水平放置10~15min后，将试剂卡插入荧光免疫读数仪，设定激发光波长为 652nm，发射光波长为668nm，读取不同浓度核基质蛋白22标准品的荧光值，并将荧光值与核 基质蛋白22标准品的浓度值进行线性分析，绘制荧光值和核基质蛋白22浓度值标准曲线， 得到荧光值和核基质蛋白22的浓度关系式； Π :取待测样品加入到缓冲液中，混合均匀后加入到试剂卡的滤血膜上，室温水平放置 10~15min，将试剂卡插入焚光免疫读数仪，设定激发光波长为652nm，发射光波长为668nm， 读取待测样品的荧光值，将该荧光值带入步骤I得到的关系式中，计算得到待测样品核基质 蛋白22的浓度。10. -种如权利要求1所述的免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒的制备方法， 其特征在于，包括以下操作步骤： 1)制备缓冲液:取荧光标记的兔抗人核基质蛋白22抗体加入磷酸盐缓冲液中，混合均 匀，即得缓冲液； 2) 制备试剂卡:取硝酸纤维素膜，标记出检测线和质控线，然后在检测线上包被鼠抗人 核基质蛋白22抗体，在质控线上包被羊抗兔抗体，然后将硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、吸 水纸、滤血膜依次搭接在塑料垫板上，并切割成所需宽度的试剂卡； 3) 将步骤1)制备的缓冲液、步骤2)制备的试剂卡，组装，即得所述的免疫荧光层析法检 测核基质蛋白22用试剂盒。
【专利摘要】本发明涉及医疗用品技术领域，具体公开了一种免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒及其制备方法。该试剂盒，包括缓冲液和试剂卡；缓冲液为含有0.25～0.92ng/μl荧光标记的兔抗人核基质蛋白22抗体的磷酸盐缓冲液；试剂卡包括塑料垫板，塑料垫板上设置硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上左右间隔设置检测线和质控线，检测线左侧硝酸纤维素膜上设置玻璃纤维素膜，质控线右侧硝酸纤维素膜上设置吸水纸，玻璃纤维素膜上设置滤血膜；检测线上包被鼠抗人核基质蛋白22抗体；质控线上包被羊抗兔抗体。该试剂盒线性范围好，检测灵敏度高，重复性和准确度高。
【IPC分类】G01N33/68
【公开号】CN105572387
【申请号】CN201610053411
【发明人】王嘎, 程自卿, 王辉武
【申请人】河南生生医疗器械有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月26日