一种稀佛碱锰配合物及其制备方法
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及一种对临床分离金黄色葡萄球菌有明显的抑菌效果的含锰化合物及 其制备方法，属于医学技术领域。
【背景技术】：
[0002] 感染性疾病是一种严重危害人类健康的疾病，也是多器官疾病晚期的主要并发症 和致死原因之一。抗感染药物的使用为治疗感染性疾病发挥了重要的作用。但随着抗感染 药物的广泛应用，各种抗菌药物的耐药性发生率逐年增加，例如耐甲氧西林金黄色MRSA、产 ESBLS肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、热带念珠菌等菌株，细菌的多重耐药问题已成为全球 关注的热点。细菌耐药性情况的不断加剧，为此类疾病的治疗加深了难度，细菌耐药性的传 播与蔓延将导致多种耐药菌感染无药可医的严峻局面。为了寻求解决办法，致力于研究新 型抗耐药菌药物刻不容缓。
【发明内容】
：
[0003] 针对上述问题，本发明要解决的技术问题是提供一种稀佛碱锰配合物及其制备方 法。
[0004] 本发明的一种稀佛碱锰配合物及其制备方法，它为黄色块状晶体，其化学名为 N，N'-二（邻羟亚苄基）-4,5_二甲基邻苯二胺缩联胺合锰（II)，简称[Mn(C3qH24N2O3)],其 分子式C30H24MnN2O3,其分子量FW= 514. 94,其特征结构参数（％)的理论值为：C，69. 91 ; H，4. 66 ;N，5. 44,实验值为：69. 85 ;H，4. 56 ;N，5. 41。
[0005] 作为优选，其制备方法为：1、称取4,5_二甲基邻苯二胺（2mmol，0. 3085g)溶解在 IOml无水乙醇溶液中，再称取2-羟基-1-萘醛（5mmol，0. 8609g)溶解在15ml无水乙醇 溶液中，在60°C恒温油浴中将4, 5-二甲基邻苯二胺逐滴加入到2-羟基-1-萘醛中，混合 均匀后，回流搅拌4个小时，冷却静止一夜后过滤用无水乙醇洗涤三次，烘干可得到配体 (0? 7122g，产率：80%);
[0006] 2、称取MnC12 ? 4H20(0.Immol, 0. 01899g)溶解在3ml无水甲醇中，取上述得到配 体（lmmol，0. 383g)溶解在6ml二氯甲烷和2mlDMF中，将MnC12 ? 4H20逐滴加到配体中， 常温搅拌30min，过滤静置十天后得到可测的黑色块状晶体，适合X-射线单晶衍射，产率为 60%〇
[0007] 本发明的有益效果为：它可用于抗菌治疗中，具有明显的抑菌活性，解决了多种细 菌耐药性无药可医的问题。
【附图说明】：
[0008] 为了易于说明，本发明由下述的具体实施及附图作以详细描述。
[0009] 图1为本发明中稀佛碱锰配合物制备过程的反应流程图，
[0010] 图2为本发明中稀佛碱锰配合物的化学结构式。
【具体实施方式】：
[0011] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面通过附图中示出的具体 实施例来描述本发明。但是应该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范 围。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的 概念。
[0012] 本【具体实施方式】采用以下技术方案：它为黄色块状晶体，其化学名为N，N'_二 (邻羟亚苄基）-4,5_二甲基邻苯二胺缩联胺合锰（II)，简称[Mn(C3l3H24N2O3)],其分子式 C30H24MnN2O3,其分子量FW= 514. 94,其特征结构参数（％)的理论值为：C，69. 91 ;H，4. 66 ; N，5. 44,实验值为：69. 85 ;H，4.56 ;N，5. 41。其化学结构式如图2所示。
[0013] 进一步的，如图1所示，其制备方法为：1、称取4,5_二甲基邻苯二胺 (2mmol，0. 3085g)溶解在IOml无水乙醇溶液中，再称取2-羟基-1-萘醛（5mmol，0. 8609g) 溶解在15ml无水乙醇溶液中，在60°C恒温油浴中将4, 5-二甲基邻苯二胺逐滴加入到2-羟 基-1-萘醛中，混合均匀后，回流搅拌4个小时，冷却静止一夜后过滤用无水乙醇洗涤三次， 烘干可得到配体（〇? 7122g，产率：80%);
[0014] 2、称取MnC12 ? 4H20(0.Immol, 0. 01899g)溶解在3ml无水甲醇中，取上述得到配 体（lmmol，0. 383g)溶解在6ml二氯甲烷和2mlDMF中，将MnC12 ? 4H20逐滴加到配体中， 常温搅拌30min，过滤静置十天后得到可测的黑色块状晶体，适合X-射线单晶衍射，产率为 60%〇
[0015] 实施例：
[0016] 耐药菌株鉴定
[0017] 耐药菌株分离自本院临床感染性标本，常法增菌培养。金葡菌株耐药性按抗菌素 药敏常规测试方法（K-B纸片法）进行，以CLSI2007版（第17版）推荐的头孢西丁药敏纸 片操作方法及判据确认。
[0018] 耐药菌药敏测试
[0019] 耐药菌药敏测试按照CLSI2007版（CLSI，2007)抗生素药敏常规测试方法（纸片 法）进行。
[0020] 粗筛
[0021] 按照美国临床实验试标准委员会（CLSI)上的方法和标准进行测定[15]，实验 前一天，待测标准细菌接种于MH培养基、真菌接种于沙保培养基，在35°C恒温箱中培养 18-24h，使活化。以5 %DMSO为溶剂，使配合物1晶体溶解并配制成30mg/mL的浓度，放 置待用。再以无菌棉签蘸取已制备好的标准细菌浓度为I. 5*10~8CFU/ml和标准真菌浓度 为I. 0*l(T6CFU/mL的菌悬液，均匀涂抹相应的培养基，用微量移液器将50uL配好的药液 (30mg/mL)加入在培养基平板上打好的孔中中，置35°C恒温箱中培养18-24h，测量抑菌圈 大小。用5 %DMSO作空白对照。
[0022] 耐药菌筛选与药敏纸片对比实验
[0023] 选取6株金葡萄球菌的临床耐药菌株，药敏纸片取米诺环素、头孢西丁、青霉素G、 万古霉素、左氧沙星、利福平、妥布霉素；选取4株大肠产ESBLS埃希菌的临床耐药菌株，药 敏纸片取依替米星、环丙沙星、氨苄西林、氨曲南、头孢他啶、泰能、左氧沙星、头孢他啶/克 拉维酸钾，平板涂抹法同I. 4. 1，配制药液浓度为30mg/mL，分别进行抗菌活性实验，测量抑 菌圈大小。5 %DMSO作为对照组。
[0024] 最低抑菌浓度MIC值的测定
[0025] 选取对耐药菌株敏感（抑菌圈直径不小于IOmm)的配合物，根据美国临床和实验 室标准协会（CLSI)推荐的微量稀释法来测定不同菌株对不同配合物的MIC值（细菌用M-H 肉汤培养液，真菌用沙保氏液体培养液），每组平行操作3次，得出浓度平均值。选择无菌 96孔平底微量培养板，在每排第一孔中加入200uL培养液作为阴性对照；在每排第二孔中 加入IOOuL菌液和IOOuL培养液作为阳性对照；在每排第3-12各孔中加入培养液100uL， 然后于每排第3孔加入受试药物100uL，混合均匀，并取出IOOuL移至第4孔中，以此类推直 至第12孔混匀后吸取IOOuL弃去，最后于各孔中加入混匀后的细菌（5*l(T5CFU/mL)及真 菌（l*l(T4CFU/mL)的菌悬液100ul。将培养板置于35°C恒温箱中培养18h观察结果，测定 其MIC值。选择黑色背景观察，以溶液清晰透亮的最低浓度孔中的药物浓度为MIC。
[0026] 最低杀菌浓度MBC值的测定
[0027] 当确定MIC值后，取MIC值前3-5个孔的培养物，转种在MH琼脂平板上，置35°C 的培养箱中，培养22h左右后取出观察，细菌菌落数平均小于5个的最低药物浓度即确定为 该化合物的MBC。
[0028] 配合物的抗菌活性分析
[0029] 判断标准：抑菌圈小于IOmm表示抑菌作用弱或无抑菌活性；等于IOmm为轻度敏 感；为中度敏感；大于16mm为高度敏感。金属配合物对标准菌的抑菌结果见表1。
[0030] 表1配合物体外抑菌试验的抑菌圈直径数据表
[0031]
[0032] 根据表1结果可判断，配合物对标准金黄色葡萄球菌敏感。
[0033] 配合物对金黄色葡萄球菌临床分离株的抑菌活性分析
[0034] 体外抑菌实验采用纸片扩散法，所用菌种为：临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球 菌。测试结果如表2及其对常用抗生素药敏敏纸片抑菌结果如表3。
[0035] 表2配合物对金黄色葡萄球菌临床分离株的抑菌圈直径数据表
[0036]
[0037] 表3金黄色葡萄球菌临床分离株对临床常用抗生素药敏纸片抑菌圈直径数据表
[0038]
[0039] 基于标准菌的粗筛结果，选取相应标准菌株的临床耐药菌株进行进一步的试验， 结果分别见表1，表2，表3。表2表明，配合物对大多数金黄色葡萄球耐药菌株敏感，进一 步分析结果发现，配合物的抗菌活性优于青霉素G和利福平。
[0040] 配合物对金葡菌和大肠的MIC/MBC的测定结果
[0041] 通过抑菌圈结果的筛选，选取抑菌圈直径大于12mm的配合物对其进行MIC及MBC 的测定，其测定结果见表4:
[0042] 表4配合物对金葡的MIC及MBC的测定数据表。
[0043]
[0044] 在本实验中，配合物对金黄色葡萄球菌的MIC值为125~250ug/ml，MBC值为 250~500ug/ml;表明配合物对金黄色葡萄球菌有一定的抑菌效果。
[0045] 以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术 人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本 发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变 化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其 等效物界定。
【主权项】
1. 一种稀佛碱锰配合物，其特征在于：它为黄色块状晶体，其化学名为N，N' -二（邻 羟亚苄基)-4,5_二甲基邻苯二胺缩联胺合锰（II)，简称[Mn(C3QH24N203)]，其分子式C3。H24 MnN203，其分子量FW=514. 94,其特征结构参数（%)的理论值为：C，69. 91 ;H，4. 66 ;N，5. 44， 实验值为：69. 85 ;H，4. 56 ;N，5. 41。2.根据权利要求1所述的一种稀佛碱锰配合物的制备方法，其特征在于：（1)称取4， 5-二甲基邻苯二胺（2mmol，0.3085g)溶解在10ml无水乙醇溶液中，再称取2-羟基-1-萘 醛（5mmol，0.8609g)溶解在15ml无水乙醇溶液中，在60°C恒温油浴中将4,5_二甲基邻苯 二胺逐滴加入到2-羟基-1-萘醛中，混合均匀后，回流搅拌4个小时，冷却静止一夜后过滤 用无水乙醇洗涤三次，烘干可得到配体（0.7122g，产率：80%); (2)称取MnC12*4H20(0.lmmol，0. 01899g)溶解在3ml无水甲醇中，取上述得到配体（1mmol，0. 383g)溶解在6ml二氯甲烷和2mlDMF中，将MnC12*4H20逐滴加到配体中，常温搅 拌30min，过滤静置十天后得到可测的黑色块状晶体，适合X-射线单晶衍射，产率为60 %。
【专利摘要】本发明公开了一种稀佛碱锰配合物及其制备方法，它涉及医学技术领域，它为黄色块状晶体,其化学名为N,Nˊ-二(邻羟亚苄基）-4，5-二甲基邻苯二胺缩联胺合锰(I)，简称[Mn(C30H24N2O3)]，其分子式C30H24MnN2O3，其分子量FW=514.94，其特征结构参数(%)的理论值为：C，69.91；H，4.66；N，5.44，实验值为：69.85；H，4.56；N，5.41。它可用于抗菌治疗中，具有明显的抑菌活性，解决了多种细菌耐药性无药可医的问题。
【IPC分类】C07C249/02, C07F13/00, C07C251/24, A61P31/04
【公开号】CN105085577
【申请号】CN201510489847
【发明人】谢明进, 余巍, 赵琦华, 卢春梅, 唐宜芳
【申请人】云南大学
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年8月11日