专利名称：促进铁皮石斛茎段增殖扩繁的改良培养基及增殖扩繁方法
技术领域：
本发明属于农业技术领域，具体涉及ー种促进铁皮石斛茎段増殖扩繁的改良培养基及利用该培养基进行增殖扩繁方法。
背景技术：
铁皮石斛(Dendrobium officinale)为多年生草本植物,属附生兰类,俗名铁皮枫斗，因其老茎外呈黑色，又名为黑节草，石斛是常用的名贵中药，应用历史悠久，在《神农本草经》中被列为上品，现已证实它具有滋阴清热、生津益胃、止咳润肺、润喉明目、提高人体免疫功能、防治肿瘤和心血管疾病以及改善睡眠、防治白内障、延年益寿等功效。但由于生长环境特殊和分布局限，以及长期采挖，自然资源日趋枯竭，已被国家列为重点保护的野生药材。铁皮石斛主要分布在亚热带地区，我国分布在西南和南方沿海各省，铁皮石斛种子极小，无胚乳，自然条件下需与某些真菌共生才能萌发，很难用实生苗栽培，而传统的分株、扦插等方式的繁殖率极低，加上人为地过度采挖，已濒临灭绝，为了保持品种的优良性状，又能快速大量繁殖，通过茎尖组织培养技术产生原球茎，在原球茎阶段进行増殖培养，再使原球茎繁育成小植株，再通过不断地继代培养获得生产用苗，但是这样的过程至少得花费I年的时间才能通过炼苗直接栽种。为了提高生产效益，节约生产成本和生产时间，我们采用直接通过铁皮石斛茎段(选择有腋芽的茎段)的増殖扩繁来得到生产用苗，以茎段为外植体的繁育途径相对简单，从茎段一丛生芽一完整植株只需30 50天，叶浓绿，苗木生长健壮，不需经过壮苗可以直接用于生根。这样不但节约时间，而且炼苗后的栽培成活率更高，更适合大規模的エ厂化生产。由于铁皮石斛具有巨大的药用价值，导致了长期无节制的采摘，致使资源濒临枯竭。1987年国家已将铁皮石斛列为重点保护野生珍稀药材品种，国家第一批《中国珍稀濒危保护植物名录》也将其列入其中。为了更好地保护铁皮石斛野生资源，变野生为家种，应大力发展规模化人工栽培，切实保障铁皮石斛资源的可持续利用。从20世纪70年代起，国内外有关机构便开始了铁皮石斛的研发工作，尤其在铁皮石斛的组织培养技术领域，但是组织培养过程中培养基的配制需要大量蒸馏水和蔗糖，蒸馏水的配制和蔗糖的制取都需要专门的仪器并且耗电量很大，増加成本负担，造成了很大的浪费。
发明内容
针对现有技术上存在的上述问题，本发明的目的在于提供ー种更加节约、省时、方便的促进铁皮石斛茎段増殖扩繁的改良培养基及其増殖扩繁方法。本发明培养基減少材料浪费和时间消耗，更加环保，更加高效的组培生产，为大規模的组培生产提供有利条件。本发明的目的是通过以下方式实现的—种促进铁皮石斛茎段増殖扩繁的培养基，该培养基包括以下组分MS基本培养基(又称MS培养基，市售常规)，蔗糖20g/l，琼脂6g/l，6-BA(苄氨基嘌呤)2mg/l，NAA( α -萘乙酸)O. 2 O. 5mg/l,香蕉泥 15 20g/l, 土豆泥 15 20g/l ；pH5. 6 5· 8,该
培养基由自来水定容。所述的土豆泥和香蕉泥均为新鲜土豆和新鲜香蕉捣碎成泥获得，更加天然，营养成分更加丰富，促进铁皮石斛茎段的增殖扩繁利用上述培养基进行铁皮石斛增殖扩繁的方法包括以下步骤取有腋芽的铁皮石斛茎段，在上述培养基中，在培养温度23 27°C、光照度1500 20001x、光照时间12h/d条件下培养30 50天，优选培养30 35天。茎段选择有腋芽的茎段，这样可以使得诱导率达到95%以上。铁皮石斛组织培养过程中培养基的配制非常重要，培养基不但要求在无菌条件下，最重要的是要给铁皮石斛的生长提供所需的元素及适宜的生长环境。更重要的是培养基在满足植物生长的条件下，能够降低生产成本，更加环保，适应于生产需求。传统MS培养基的配制需要大量元素、微量元素、有机物、铁盐、蔗糖、琼脂和蒸馏水。而蒸馏水的制取需要专业的设备，不但耗电，而且要浪费更多的专业设备、电资源和时间才能得到蒸馏水。本发明培养基用普通的自来水代替了需要专业设备制备的蒸馏水，不但对铁皮石斛茎段增殖扩繁没有任何影响，而且大大的降低生产成本，节约生产时间，达到了中药材生产过程中高效、安全、可控的要求。而且，本发明采用促进铁皮石斛茎段增殖扩繁的改良培养基将蔗糖含量30g/l从降低到20g/l，在铁皮石斛茎段增殖扩繁的组培过程中，铁皮石斛生长并未变化，石斛多糖和生物碱的含量依然稳定。与现有技术比较本发明的有益效果本发明直接采用自来水配制的改良MS培养基代替蒸馏水配制的一般培养基，降低了蔗糖含量，选择适合的茎段在改良培养基中的增殖扩繁更加便于生产需要，在组培技术上成熟可行，经济上效益可观，利国利民，采用这项技术使得铁皮石斛的组织培养技术更加方便、高效的同时节约资源。
图I为采用自来水配制的改良MS培养基和蒸馏水配制的MS培养基的铁皮石斛茎段增殖扩繁比较图。其中，右瓶为本发明采用自来水配制的改良MS培养基的铁皮石斛茎段增殖扩繁，左瓶为采用蒸馏水配制的MS培养基的铁皮石斛茎段增殖扩繁。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明做进一步说明。实施例I在无菌条件下取长有3 4节茎段的长度为I. 5 2cm的有腋芽的铁皮石斛茎段作为外植体(来源于铁皮石斛的无菌苗)，将配制好的改良培养基(PH5. 8)进行高温灭菌后，将该铁皮石斛茎段在自来水配制的改良培养基中，在温度为(25±2) °C，光照度1500 20001x，光照时间12h/d的条件下培养30天，测定并记录普通自来水配制的改良培养基中铁皮石斛多糖含量，培养30天后进行下一次继代培养后进行炼苗移栽。自来水配制的改良培养基组分(自来水定容至1L)
权利要求
1.一种促进铁皮石斛茎段增殖扩繁的改良培养基，其特征在于该培养基的组成为MS基本培养基，蔗糖20g/l，琼脂6g/l，苄氨基嘌呤2mg/l，α -萘乙酸O. 2 O. 5mg/l，香蕉泥15 20g/l，土豆泥15 20g/l ；pH5. 6 5· 8，该培养基由自来水定容。
2.根据权利要求I所述的促进铁皮石斛茎段增殖扩繁的改良培养基，其特征在于所述的香蕉泥和土豆泥分别为新鲜土豆和新鲜香蕉捣碎成泥。
3.一种利用权利要求I所述的培养基进行铁皮石斛增殖扩繁的方法，其特征在于取有腋芽的铁皮石斛茎段，在权利要求I所述的培养基中，在培养温度23 27°C、光照度1500 20001x、光照时间12h/d条件下培养30 50天。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述的培养时间为30 35天。
全文摘要
本发明公开了一种促进铁皮石斛茎段增殖扩繁的改良培养基及增殖扩繁方法，该培养基包括MS基本培养基+蔗糖20g/l+琼脂6g/l+6-BA(苄氨基嘌呤)2mg/l+NAA(α-萘乙酸)0.2～0.5mg/l+香蕉泥15～20g/l+土豆泥15～20g/l，采用普通自来水代替蒸馏水配制定容。本发明选择有腋芽的铁皮石斛茎段采用改良MS培养基来增殖扩繁，石斛生物碱类成分、多糖含量显著提高，铁皮石斛的生长状况正常。本发明方法不但减少了蔗糖的使用量，而且直接用自来水代替蒸馏水，使得铁皮石斛的组织培养技术更加方便、高效的同时节约资源。
文档编号A01H4/00GK102613082SQ201210097238
公开日2012年8月1日 申请日期2012年3月31日 优先权日2012年3月31日
发明者向增旭, 杨岚 申请人:南京农业大学