一种酿酒酵母基因工程菌及应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种酿酒酵母基因工程菌及应用。利用基因工程技术将防御素基因改组，重组到酿酒酵母基因组中，筛选出发酵用工程菌。对酵母发酵的基质和配方进行选择优化，选出肉羊可以利用而猪禽等其它畜禽不能作饲料利用的主要基质有酒糟、菌糠、杂粕、秸杆等，配合玉米、小麦、豆粕等，制成营养成分均衡的全混合日粮。该饲料能提高肉羊对营养物质的消化吸收，改善消化机能，促进肉羊生产性能发挥，增强其免疫力。同时又提高了酒糟等基质的营养价值，使其成为新型的蛋白饲料。对于肉羊规模化养殖有着重要的意义。
【专利说明】一种酿酒酵母基因工程菌及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及饲料【技术领域】，尤其涉及一种酿酒酵母基因工程菌及应用。
【背景技术】
[0002]近年来，畜牧业获得快速发展，牛羊肉以其蛋白含量高，脂肪、胆固醇含量低，且含有许多人体必需氨基酸，营养价值极高；牛羊肉性温，能补中益气、开胃健力、养胆明目，经常食用有益于抗癌、治疗久咳哮喘、提高机体免疫力。因此，牛羊养殖产业获得长足的发展。但是，牛羊规模化养殖所需的优质饲草资源价格高，总量不足，地域和时间分布不均，导致部分牛羊营养不良，降低了其生产性能，尤其在冬春季节，草料匮乏问题突出，饲料资源的严重短缺成为亟待解决的重要问题之一。
[0003]酒糟是酿酒的副产物，也是酿酒的主要污染物。据统计，酒糟的产生量是酿酒量的
4-8倍。2012年，全国白酒产量达115.3亿升，丢弃酒糟达五六千万吨。由于一般均是采用高粱、小麦等作为原料，干酒糟中蛋白质的质量分数为23~27%，是一种好的蛋白质资源，同时还含有多种微量元素、维生素、酵母菌等，赖氨酸、蛋氨酸和色氨酸的含量也很高，这是农作物秸杆所不能提供的。酒糟都是经发酵后高温蒸煮后形成的，所以它的粗纤维含量较低，这样就注定了酒糟作为牛羊的饲料有很好的适口性和容易消化的特点，而且还能有效预防牛羊发生瘤胃臌气。但酒糟是经过多次发酵，且含有较大比例的谷壳，因此工厂化生产的酒糟如果直接饲用营养价值比较差。此外，酒糟还含有一定量的酸、醋、醛、醇等发酵产物，需处理后在再利用。
【发明内容】
[0004]本发明提供了一种酿酒酵母基因工程菌，该菌种可用于饲料的发酵，产生更能被牲畜采食消化、吸收的养分·更高且无毒害作用的饲料原料。该酿酒酵母基因工程菌已于2013年11月4日送往中国典型培养物保藏中心进行保藏，分类命名:酿酒酵母SC-pP-DGBD-4Saccharomyce scerevisiae SC-pP_DGBD_4，CCTCC NO:M2013542，地址:中国武汉武汉大学。
[0005]本发明还提供了一种含有酿酒酵母SC-pP-DGBD-4的酵母蛋白饲料的制备方法，方法简单，易行，适用于大规模生产。
[0006]本发明还提供了一种含有酿酒酵母SC-pP-DGBD-4的酵母蛋白饲料在促进肉羊生长上的应用。
[0007]为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施:
[0008]一种重组的酿酒酵母，其制备过程如下:
[0009]I) DGBD-4基因的PCR扩增:引物Pl、P2、P3互为模板和引物进行PCR，反应体系为:引物 PU P2、P3 分别加入 2μ L、1 μ L、2y L，2.5mM dNTPs3.5 μ L, IOXEasyTaqBuffer5 μ L, EasyTaqDNA Polymerasel μ L,补无菌双蒸水至 50 μ L ;扩增条件:94°C预变性4min ；94°C 30s, 62 °C 30s, 72 °C 30s, 32 个循环；72°C 充分延伸 IOmin ;PCR 产物经 2% 琼脂糖凝胶电泳后，用DNA凝胶纯化回收试剂盒回收目的片段，编号为1-2-3 ;引物Pl、l-2-3、P4再互为模板和引物进行PCR，反应体系为:引物P1、1-2-3、P4分别加入2 μ L、I μ L、2 μ L，
2.5mMdNTPs3.5 μ L, 10 XEasyTaq Buffer5 μ L, EasyTaqDNA Polymerasel μ L,补无菌双蒸水至 50yL;扩增条件:94°C预变性 4min;94°C 30s, 62°C 30s, 72°C 30s, 32 个循环；72°C充分延伸IOmin ；PCR产物经2.0%琼脂糖凝胶电泳后，用DNA凝胶纯化回收试剂盒回收目的片段，该目的片段即为改造的山牛羊防御素基因，其序列为SEQ ID N0.1所示；
[0010]所述的引物为:
【权利要求】
1.一种酿酒酵母基因工程菌，其特征在于:酿酒酵母(Saccharomyce scerevisiae)SC-pP-DGBD-4, CCTCC NO:M 2013542。
2.—种人工合成的基因，其序列为SEQ ID N0.1所示。
3.一种含有权利要求1所述的基因工程菌的酵母蛋白饲料，其配方如下: 1)按照质量百分比玉米40~50%、麸皮2~30%、豆柏I~20%、预混料I~4%、酒糟20~50%的比例称取原料，粉碎，测出其含水量，计算出干物质的重量； 2)将复合水解酶制剂按加入量为干物质重量4%加入到步骤I)中的获得基质中，然后混合均匀； 3)将酿酒酵母SC-pP-DGBD-4按每克干物质含酵母菌0.7亿个加入到步骤2)中的获得基质中，加水调整含水量至45%进行初始保温培养；初始保温培养的温度为30°C，保温培养时间为30~45小时； 4)将糖蜜按照干物质重量的8%加入到步骤3)中得到的基质中，30°C保温培养时间50小时，再将尿素按含氮量计为每公斤干物质含0.5克纯氮继续加入，30°C保温培养时间70小时； 5)将最终保温培养的物料用常规方法进行烘干、粉碎后制粒，即获得带有防御素的酵母蛋白饲料成品。
4.权利要求1所述的基因工程菌在制备酵母蛋白饲料中的应用。
5.权利要求1所述的基因工程菌或权利要求3中制得的酵母蛋白饲料在促进肉羊生长中的应用。
【文档编号】A23K1/00GK103710277SQ201310610398
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年11月26日 优先权日:2013年11月26日
【发明者】姜勋平, 刘桂琼, 康建锋, 赵勤涛, 马东升 申请人:姜勋平