莫哈韦芽孢杆菌kjs-3作为饲料添加剂的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了莫哈韦芽孢杆菌KJS-3作为饲料添加剂的应用。该莫哈韦芽孢杆菌KJS-3（保藏编号：KCCM10961P），其芽孢转化率达99%以上，可实现工业化生产。本菌株对常见的各种致病真菌、致病细菌，特别是对抗耐万古霉素肠球菌和抗药性金黄色葡萄球菌等有害菌具有广谱抗菌特性。本菌株能产生各种消化酶、维生素以及乳酸等物质，是对动物安全无毒的益生菌，可以作为饲料添加剂，动物实验证实，能促进动物的生长。
【专利说明】莫哈韦芽孢杆菌KJS-3作为饲料添加剂的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及莫哈韦芽孢杆菌KJS-3作为饲料添加剂的应用，属于微生物领域。
【背景技术】
[0002]莫哈韦芽孢杆菌最早是1994年从莫哈韦沙漠地区分离得到的一类新的芽孢杆菌属，它在菌种分类学上，与解淀粉芽孢杆菌、萎缩芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌有着密切的关系。最初在1996年，莫哈韦芽孢杆菌被证实是一种植物内生菌，能减少由植物内的内生真菌产生的霉菌毒素的积累。经过进一步的研究证实发现，莫哈韦芽孢杆菌属这一类的所有菌株都具有内生拮抗真菌的作用。并且在2002年证实这类菌种还能生存于植物细胞间隙而促进植物生长。在2007年，经实验证实，对禾谷镰刀菌引起的小麦赤霉病有极强的防治作用，同年3月13日报道的海南省香蕉“巴拿马病”(被称为香蕉世界的SARS)就是由于感染此类镰刀菌所致。最近又有报道证实，莫哈韦芽孢杆菌产生的二次代谢产物环脂肽具有极强的抗菌活性。虽然目前对莫哈韦芽孢杆菌属的研究还不是很多，还面临着发酵生产工艺复杂、活性物质分离难等诸多难题，但随着生物科技的快速发展，莫哈韦芽孢杆菌所具有的巨大潜力和开发价值必将被--证实。
[0003]莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis) KJS-3是由韩国姜在璿教授从食物垃圾里霉菌无法生长的一片洁净部分中分离得到的，经过电子显微镜观察、16srDNA序列分析确认本菌株是一个新发 现的新型莫哈韦芽孢杆菌，于2008年8月22日保藏于韩国微生物保藏中心，保藏编号为KCCM10961P。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis)KJS-3作为饲料添加剂的用途。
[0005]莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis)KJS_3是由韩国姜在璿教授于2008年8月22日保藏于韩国微生物保藏中心，保藏编号为KCCM10961P。该菌的生长条件为:20~50°C, pH=6 ~7.5。
[0006]本发明的莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis)KJS_3,采用自动化液体发酵罐发酵，发酵原料为98%水和2%培养基原料，生产成本低廉；发酵一次一般为2-3天，发酵周期短；经过2天左右时间发酵后，芽孢转化率达到99%以上，几乎全部由营养细胞转化为芽孢，世界少见；生产过程中无需不断添加除泡剂，节省原料成本；经过离心过滤，沉淀干燥制粉，每升发酵液制得纯活菌粉2-3克，每克含菌种数约为3~5X10ncfu/g，产率高，浓度大；经离心分离的上层清液再经过酸处理、逐项分离提纯，又可提炼出抗菌活性物质；整个发酵过程，利用率高，几乎没有“三废”产品，环保无污染，少量废水可回收再利用。
[0007]本发明的莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis) KJS-3是一种可以附着于动物肠道内正常生长的益生菌，通过Caco-2细胞的附着率实验证实，本菌种约有51.2±8.14%的附着能力，与目前效果得到证实的Lactobacillus casei TMC0409菌株的61.1±7.1%的附着率不相上下，说明其具有较强的肠道附着作用。
[0008]本发明的莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis)KJS-3是一种内生细菌，对常见的各种致病真菌、致病细菌，特别是对抗耐万古霉素肠球菌和抗药性金黄色葡萄球菌等有害菌的广谱抗菌特性，可用作生物抗菌制剂等产品。本菌株能产生各种消化酶、维生素以及乳酸等物质。
[0009]本发明的莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis) KJS-3可以比较牢固的附着于动物肠道内，加上其广谱抗菌特性，添加在动物饲料中喂食动物后，附着于动物肠道内不仅可以阻止有害菌、病毒的侵袭，还能杀菌抗菌，从而保护动物健康，提高动物免疫力。
[0010]本发明的莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis)KJS_3能产生各种消化酶,提高动物的消化功能，并且利用本菌种的高效的乳酸转化率，还能帮助动物分解饲料中高分子糖类等动物不易消化的成分，最后转化成的乳酸和生成的各种维生素均是促进动物生长的营养成分。
[0011]本发明的莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis) KJS-3作为饲料添加剂安全可靠性，经动物实验，大剂量喂食也无毒性，安全可靠。
[0012]总之，本发明提供了莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis)KJS_3作为动物饲料添加剂的用途，以及莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis)KJS_3在制备动物饲料添加剂上的用途。
[0013]从另外一个角度，本发明还提供了一种动物饲料添加剂，其中含有莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis) KJS-3。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1，莫哈韦芽孢杆菌KJS-3附着率对比图(左图为革兰氏染色后用光学显微镜观察细胞的效果图，右图为左图被附着细胞的放大图像，明显看到很多小黑点为本菌种)。
[0015]图2，莫哈韦芽孢杆菌KJS-3 —级代谢产物酶活性测试。
【具体实施方式】
[0016]实施例1，莫哈韦芽孢杆菌KJS-3附着率实验
[0017]试验方法:
[0018]1.先将浓度为lX105cells/4ml的Caco_2细胞在组织培养皿中培养。
[0019]2.再将本菌种和对照组菌种(L.rhamnosus GG)分别配制成4.lX105cfu/ml、
4.9X105cfu/ml的浓度的溶液后再加入到预先准备的Caco_2细胞培养液中。
[0020]3.在37°C，5%C02培养机中，将两组培养皿培养2个小时。
[0021]4.培养结束后，用无菌磷酸盐缓冲液(pH=7.4)处理3遍后，再将附着后的细胞用胰蛋白酶回收处理，用PBS洗涤后，再用TSA培养液覆盖。
[0022]实验结果:对照组菌种(L.rhamnosus GG)是世界公认的附着率最高的菌种,其附着率达到83.6±6.8%，但一般常用附着率高的菌种为Lactobacillus casei TMC0409，其附着率为61.10±7.1%，本菌种附着率为51.2±8.14%，与常用菌种附着率不相上下，体现出较强的动物肠道内附着作用。如图1所示。莫哈韦芽孢杆菌KJS-3具有开发成动物用药物以及饲料产品的潜力。[0023]实施例2，莫哈韦芽孢杆菌KJS-3抗菌实验
[0024]为检测莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis)KJS_3的抗菌性特征,将莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis) KJS-3对超级病毒抗耐万古霉素肠球菌(VRE)的2种亚型和抗药性金黄色葡萄球菌(MRSA)的4种亚型进行实验:
[0025]试验方法一从含有莫哈韦芽孢杆菌KJS-3的培养皿中取适量菌种置于含有TSB培养液的试管中制成4毫升菌体培养液,过夜培养后，于次日接种于100毫升的TSB培养液中继续培养3小时以上，培养完成后将100毫升菌液投入到发酵罐中制得4升发酵液再次培养2日后，离心分离，取上层清液，加入3摩尔盐酸进行pH值调整，调至pH值为2后，置于4°C冰柜进行保管，次日再进行离心分离，取沉淀溶于甲醇溶液，配成浓度不同的溶液对上述两种病毒的6种亚型进行测定，观察菌种旁的透明区间大小，来判断本菌株是否具有抗菌性。
[0026]结果显示如下:
【权利要求】
1.莫哈韦芽孢杆菌KJS-3作为动物饲料添加剂的用途。
2.莫哈韦芽孢杆菌KJS-3在制备动物饲料添加剂上的用途。
3.一种动物饲料添加剂，其中含有莫哈韦芽孢杆菌KJS-3。
【文档编号】A23K1/00GK103960461SQ201410168267
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2014年4月24日 优先权日:2014年4月24日
【发明者】姜在璿, 欧黎虹, 刘杰 申请人:武汉虹睿生物科技开发有限公司