化合物Yaequinolone B的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物来源杀菌剂，具体的说是化合物Yaequinolone B的应用。
【背景技术】
[0002] 冬赛（Zizyphus jujube Mill. cv. Dongzao)是我国特有的晚熟赛品种，因 果实鲜食、品质极优而被推崇为果中珍品，极具经济效益。冬枣锈病（Phakopsora ziziyiphi-vulgaris)是侵染赛树叶片的一种流行性病害，常在冬赛果实膨大期造成大量 落叶及枣果皱缩，使果肉含糖量减少，失去食用价值。目前防治手段主要依靠加强栽培管 理，以及大量使用甲基托布津、粉锈宁等化学合成农药，因此也带来环境污染与农药残留超 标等问题。与传统的化学合成农药相比，微生物来源杀菌剂具有环境兼容性好，无农药残留 等优点。因此，微生物来源农药的开发与应用对现代农业的可持续发展具有重要的意义。
[0003] 式（一）所示化合物是由青霉菌FKI-2140经发酵培养、提取分离而获得（Uchida R, et al. Yaequinolones, new insecticidal antibiotics produced by Penicillium sp. FKI-2140. J. Antibiot. , 2006, 59 (10), 646 - 651)。式（一）所示化合物为上述文献的 化合物（3)，该文献通过实验证明：该化合物具有卤虫致死活性；在100y g/mL时，没有杀线 虫活性；在10 y g/6mm平皿，对所选的9种细菌及5种真菌无抗菌活性。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供如式（一）所示的化合物Yaequinolone B在制备防治冬 枣锈病菌的农用杀菌剂方面的应用。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：化合物Yaequinolone B的应用，所 述化合物Yaequinolone B对冬赛锈病菌（Phakopsora ziziyiphi-vulgaris)具有较好的 抑制效果，可用于制备农用杀菌剂；所述化合物Yaequinolone B的结构如式（一）所示。
[0007]
[0008] 所述的农用杀菌剂为：以式（一）所示的化合物为活性成分，加入农业上常用的助 剂制备成可湿性粉剂、颗粒剂或缓释剂等。
[0009] 本发明所具有的优点：式（一）所示化合物可由肉桂紫正青霉经发酵培养、提取分 离而获得，其对冬枣锈病菌具有较好抑制活性，最小抑制浓度（Mic)为4 y g/mL，表明化合 物Yaequinolone B对冬枣锈病菌具有较好抑制效果，可以作为具有杀菌作用的新农药成分 或先导化合物。
[0010] 本发明所涉及的化合物YaequinoloneB可以利用微生物进行规模发酵，具有生 产工艺简单，周期短、产品成本低等特点；且只含有碳、氢、氧、氮4种元素，在环境中易于降 解，对人畜毒性较低。
【具体实施方式】
[0011] 为阐明对本发明特征的理解，下面结合一些非限定性的实施实例对本发明做进一 步阐述。
[0012] 实施例1 :化合物YaequinoloneB的制备
[0013] 式（一）所示的化合物YaequinoloneB的制备过程可参见文献Uchida R，etal.Yaequinolones,newinsecticidalantibioticsproducedbyPenicillium sp.FKI-2140.J.Antibiot.，2006, 59 (10)，646-651。
[0014] 实施例2 :抑菌活性试验
[0015] 采用微量稀释法，测定式（一）所示化合物对冬赛锈病菌（Phakopsora ziziyiphi-vulgaris)的抑菌活性（《从天然产物到新农药创制-原理方法》，吴文君，2006， 化学工业出版社）。
[0016] 1)菌悬液的制备
[0017] 将供试真菌接种于PDA培养基表面于28°C培养72h后，吸取2mL无菌0. 85% NaCl 溶液（含〇. 25%吐温-20)洗涤培养物，并用玻璃刮刀将菌落轻轻刮下。吸取适量菌悬液于 无菌试管中，调至0.5麦氏比浊（相当于1.5X 108CFU/mL)备用；
[0018] 2)样品的配制
[0019] 分别取Img待测样品（式（一）化合物）和阳性对照（两性霉素B)，溶解于IOOyL DMSO中，充分混匀后，吸取50 y L样品溶液到另一只离心管中，接着加入50 y L DMS0,得到 浓度减半的样品溶液。按照此方法，得到12组浓度依次减半的样品溶液。
[0020] 3)MIC测定方法
[0021] (1)采用无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的样品溶液分别加到无菌的96孔聚苯 乙烯板中，第1至第12孔各加5yL的样品溶液，并以不加样品孔作为空白对照，加5yL DMSO溶液孔为溶剂对照。
[0022] (2)将相当于0. 5麦氏比浊度的指示菌悬液，经沙氏培养基稀释1000倍后，取 95 y L依次加入到96孔板中，使得第1至第12孔的样品浓度依次为512、256、128、64、32、 16、8、4、2、1、0. 5和0. 25 yg/mL。以上所有样品均重复三次。轻轻震荡混匀后，将96孔板 密封置于28°C生化培养箱中培养72h。
[0023] (3)在600nm波长下使用酶标仪测定每孔的吸光值，以在小孔内完全抑制指示菌 生长的最低样品浓度为该化合物的MIC。（注意：当阴性对照孔内指示菌明显生长实验才有 意义；当实验出现单一的跳孔时，应记录抑制菌株生长的最高药物浓度；如出现多处跳孔， 则不应报告结果，需重复实验。）
[0024] 试验结果为：式（一）所示化合物对冬赛锈病菌（Phakopsora ziziyiphi-vulgaris)的MIC值为4 y g/mL，具有较好抑菌活性。
[0025] 上述实验结果证明本发明所涉及的化合物具有较好抑菌活性，可用于制备农用杀 菌剂。
[0026] 实施例3 :农用可湿性粉剂
[0027] 由肉桂紫正青霉经发酵培养（发酵培养过程可参见上述文献）；将发酵液进行压 滤和沉淀，将上清液浓缩，使式（一）所示化合物的含量为I. 5-2. Owt%，以浓缩上清液质量 为基数，加入25-35 %白炭黑进行吸附，然后添加3-8 %十二烷基硫酸钠，0. 8-1. 2 % CMC和 2-4%拉开粉，再加入凹凸棒土制成式（一）所示化合物的含量为0.5wt%的可湿性粉剂。
[0028] 使用方法：500倍液喷雾在冬枣叶片上。
【主权项】
1. 如式（一）所示的化合物Yaequinolone B在制备防治冬赛锈病菌的农用杀菌剂方 面的应用，2. 如权利要求1所述的应用，其特征是，所述农用杀菌剂为可湿性粉剂、颗粒剂或缓释 剂。
【专利摘要】本发明公开了化合物Yaequinolone B的应用。该化合物的结构如式(一)所示，该化合物对冬枣锈病菌具有较好的抑制活性，最小抑制浓度(MIC)为4μg/mL，表明化合物Yaequinolone B对冬枣锈病菌具有较好抑制效果，可以作为具有杀菌作用的新农药成分或先导化合物。本发明所涉及的化合物Yaequinolone B作为微生物来源天然产物，在环境中易于降解，对人畜毒性较低，且易于规模化生产。
【IPC分类】A01N43/42, A01P3/00, A01N25/14
【公开号】CN104886063
【申请号】CN201510330477
【发明人】杜丰玉, 牛赡光, 李鹏, 李泉涌, 雷音, 张淑静
【申请人】牛赡光, 李鹏
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月15日