专利名称：磁性微球固定化纤维素酶的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种磁性微球固定化纤维素酶的制备方法，它包括物理吸附过程。
磁性高分子微球可结合各种功能分子，如酶、抗体、细胞、DNA等，因而在细胞生物学、分子生物学、医学等领域得到广泛应用。如US5053332，即公开了掺入生物材料的琼脂糖珠的制备方法。这种方法主要用于细胞的包埋。
本发明的目的是提供一种磁性微球固定化纤维素酶的制备方法，本方法用磁性琼脂糖微球与纤维素酶混合经物理吸附来制备，本方法所制的磁性微球固定化纤维素酶，其活性回收率可达70％以上，与天然酶相比，对热、酸碱稳定性均有所提高。
本发明的目的是由如下措施来完成的以工业纤维素酶制剂加蒸馏水在烧杯中均匀混合，工业纤维素酶和蒸馏水的比例为1g20～100ml，经细筛过滤，滤液加固体硫酸铵至20％饱合度，以2000～6000转/分，离心5～30分钟，弃沉淀，在上清液中加磁性琼脂糖微球，工业纤维素酶制剂与微球的用量质量比为1∶1～10，混匀后再加入固体硫酸铵至60％饱和度，在4～10℃下振荡吸附1～24小时，烧杯下放永久磁铁，磁场强度＞0.04T，沉淀沉降后弃上清液，再用蒸馏水洗至无酶蛋白为止，所得沉淀即为磁性微球固定化纤维素酶。
本发明的优点是
本方法以磁性琼脂糖微球为载体，通过物理吸附将工业纤维素酶制剂固定到微球上，制备成具有磁响应性的磁性微球固定化纤维素酶。本产品具有高蛋白载量、高比活、高活性回收率。本方法通过施以外部磁场便可方便、简捷地将酶回收、反复使用，从而提高了纤维素酶的利用率，降低了成本。本制备过程无需采用高温、有机溶剂或复杂的生产设备。本产品应用于食品工业、发酵工业、纤维素的糖化、燃料酒精的生产都可产生明显的经济效益。
吸附时间对磁性固定化纤维素酶的影响平行取磁性琼脂糖复合微球11.8g和工业纤维素酶制剂10g各5份，恒定其他条件，在不同时间下反应，结果见表1。表1吸附时间对磁性固定化纤维素酶的影响
磁性固定化纤维素酶的操作稳定性取磁性固定化纤维素酶0.2g和10％(质量分数)的羧甲基纤维素钠溶液20ml，在PH5.0条件反应30min，用DNS法测其活力。如此重复使用10次，其活性保持情况见表2。
表2磁性固定化纤维素酶操作稳定性
本附图
为制备工艺流程图
实施例取10g工业纤维素酶制剂加蒸馏水500ml，在烧杯中均匀混合，经细筛过滤，滤液加固体硫酸铵至20％饱合度，以4000转/分，离心20分钟，弃沉淀，在上清液中加11.8g磁性琼脂糖微球，混匀后再加入固体硫酸铵至60％饱和度，在6℃下振荡8小时，烧杯下放永久磁铁，磁场强度为0.05T，沉淀沉降后弃上清液，再用蒸馏水洗至无酶蛋白为止，所得沉淀即为磁性微球固定化纤维素酶。该磁性酶固定化纤维素酶的蛋白载量为100mg/g微球、比活为1.92U/mg蛋白、活性回收率为73.1％。
权利要求
1.磁性微球固定化纤维素酶的制备方法，它包括物理吸附过程，其特征在于以工业纤维素酶制剂加蒸馏水在烧杯中均匀混合，工业纤维素酶和蒸馏水的比例为1g20～100ml，经细筛过滤，滤液加固体硫酸铵至20％饱合度，以2000～6000转/分，离心5～30分钟，弃沉淀，在上清液中加磁性琼脂糖微球，工业纤维素酶制剂与微球的用量质量比为1∶1～10，混匀后再加入固体硫酸铵至60％饱和度，在4～10℃下振荡吸附1～24小时，烧杯下放永久磁铁，磁场强度＞0.04T，沉淀沉降后弃上清液，再用蒸馏水洗至无酶蛋白为止，所得沉淀即为磁性微球固定化纤维素酶。
全文摘要
本发明是一种磁性微球固定化纤维素酶的制备方法,本方法以磁性琼脂糖微球为载体通过物理吸附将工业纤维素酶固定到微球上,制备出具有磁响应性、高蛋白载量、高比活、高活性回收率的磁性微球固定化纤维素酶,本制备方法可简单地将工业纤维素酶分离反复使用,提高纤维素酶的利用率、降低生产成本。
文档编号C12N11/00GK1376792SQ0111002
公开日2002年10月30日 申请日期2001年3月27日 优先权日2001年3月27日
发明者邱广亮 申请人:内蒙古师范大学