专利名称：一种凝乳酶粉的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种凝乳酶的制备，更具体地说涉及一种从幼小吮乳小牛或羔羊皱胃提取凝乳酶(又称皱胃酶)粉的制备方法。
背景技术：
凝乳酶的作用是水解k-酶蛋白的phe105-Met106肽键，产生副k-的酶蛋白和糖巨肽，在Ca2+存在下使乳凝固，形成凝块。虽然近年来，在市场上出现了来源于动物、植物及微生物的各种凝乳酶，但传统的小牛或羔羊皱胃酶因其凝结牛乳的活力强，能得到没有苦味，组织状态适宜和产品得率高优点，故至今乃是干酪生产中使用最多，质量最好的凝乳酶。用小牛或羔羊皱胃浸泡提取凝乳酶由来已久，形成了许多方法。公知的提取方法是把屠宰后的小牛或羔羊皱胃取出，清除内含物，剥去皱胃表面的脂肪及结缔组织，洗涤干净，将其绞碎。采用不同的方法进行浸泡提取。例如有的用氯化钠为提取剂，硼酸作防腐剂来提取凝乳酸，有的用氯化钠为提取剂，乙醇作防腐剂，或用氯化钙为提取剂，乙醇作防腐剂。这表明了他们都是浸泡出来的液体凝乳酶，因其体积大，又不易保存，如欲制得粉末，则步骤烦琐，故多直接用于牛乳或羊乳的凝固。有的用过饱和氯化钠将其沉淀，制成粉末，可这不但成本提高很多，而且酶的活性也有所下降，况且液体凝乳酶含有大量的杂蛋白、无机盐和防腐剂等成分。一则使酶液混浊不清，二则也影响了干酪产品的质量，会有令人不快的异味。由此可见，对小牛或羔羊皱胃加氯化钠和防腐剂进行浸泡提取还是存在一定的缺点和不足。目前我国用于干酪的凝乳酶生产还是一项空白，所需的凝乳酶主要依靠进口，且价格昂贵。我们急需选择更简便易行、在经济上更为合理的方法。
发明内容
本发明的目的是在于避免上述已有技术的不足，提供一种从小牛或羔羊的皱胃中提取凝乳酶，制备成粉状的一种凝乳酶粉的制备方法。
本方法有下述顺序步骤a、以幼小吮乳的小牛或羔羊皱胃为原料，清除内含物，剥去皱胃表面的脂肪结缔组织，洗涤干净，将其绞碎，然后加水，其固液比为1∶6-10。再加食盐，其浓度为1-4mol/l，在常温下搅拌浸泡48-120小时，进行离心，除去残渣，得到含酶的上清液，再进行超滤浓缩，真空冷冻干燥，得到初步的粗制凝乳酶粉。
b、在粗制凝乳酶粉中加水，其固液比为1∶10-20，使其成为浓的含酶水溶液，然后在其中加入γ-氧化铝，其浓度为每100毫升中加2-5克(w/v)，进行搅拌，静置1-10小时，再离心去掉上清液，得到γ-氧化铝沉淀。
c、用pH为5.0-5.3的水溶液，对γ-氧化铝沉淀进行洗脱解析，再经离心，去掉γ-氧化铝残渣，得到高纯度的含酶溶液。
d、将含酶溶液再经超滤仪浓缩，得到含酶的浓溶液，然后用饱和氯化钠水溶液进行盐析、离心，去上清液，得到酶沉淀，用蒸馏水溶解、透析，最后真空冷冻干燥得到精致的凝乳酶粉。
所述的γ-氧化铝，其表面积为150-200m2/g，平均孔径为150-200。
本发明的优点是提取方法简便易行，直接用氯化钠液体进行浸泡，不加防腐剂-硼酸或酒精等，用γ-氧化铝进行吸附，避免了对最终产品的污染，同时也降低了生产成本。酶活性高，已达1∶500,000的比例凝结牛乳。
具体实施例方式
实施例1本方法有下述顺序步骤a、用吮乳的小牛皱胃为原料，清除内含物，剥去皱胃表面的脂肪及结缔组织，洗涤干净。将1000克的小牛皱胃用电动绞肉机绞碎，然后加水5000毫升，加浓度为1mol/l的食盐，在常温下搅拌浸泡72小时后，用4000r/min离心15min，除去残渣，得到含酶的上清液，再进行超滤浓缩，真空冷冻干燥，得到初步的粗制凝乳酶粉。
b、在粗制凝乳酶粉中加水500毫升，使其成为浓的含酶水溶液，然后在其中加入浓度为每100毫升中加2克(w/v)的γ-氧化铝(γ-氧化铝其表面积为150-200m2/g，平均孔径为150-200)，对其进行凝乳酶的吸附，进行搅拌，静置5小时，再离心去掉上清液，得到γ-氧化铝沉淀。
c、用pH为5.3的水溶液500毫升，对γ-氧化铝沉淀进行洗脱解析，再经离心，去掉γ-氧化铝残渣，得到含酶溶液450毫升。
d、将含酶溶液450毫升，再经超滤仪浓缩，得到含酶的浓溶液，然后用饱和氯化钠水溶液进行盐析、离心，去上清液，得到酶沉淀，用蒸馏水溶解、透析，最后真空冷冻干燥得到精致的凝乳酶粉。
实施例2本方法有下述顺序步骤a、用吮乳的小牛皱胃为原料，清除内含物，剥去皱胃表面的脂肪及结缔组织，洗涤干净。将1000克的小牛皱胃用电动绞肉机绞碎，然后加浓度为2mol/l氯化钠的水溶液7000毫升，在常温下搅拌浸泡48小时。
b、然后在其中加入浓度为每100毫升中加3克(w/v)的γ-氧化铝(γ-氧化铝其表面积为150-200m2/g，平均孔径为150-200)，进行凝乳酶的吸附，搅拌，静置5小时，再离心去掉上清液，得到γ-氧化铝沉淀。
c、用pH为5.3的水溶液600毫升，对γ-氧化铝沉淀进行洗脱解析，再经离心，去掉γ-氧化铝残渣，得到含酶溶液500毫升。
d、将含酶溶液500毫升再经超滤仪浓缩，得到含酶的浓溶液，然后用饱和氯化钠水溶液进行盐析、离心，去上清液，得到酶沉淀，用蒸馏水溶解、透析，最后真空冷冻干燥得到精致的凝乳酶粉。
实施例3该实施例的方法步骤与实施例1相同，所不同的是浸泡时间为60小时，浓度每100毫升中加4克(w/v)的γ-氧化铝(γ-氧化铝其表面积为150-200m2/g，平均孔径为150-200)。
最后真空冷冻干燥得到精致的凝乳酶粉，它是一种白色或淡黄色的固体粉末，有轻微的咸味和吸潮性，无异味，在干燥的状况下酶活性稳定。在水溶液中不稳定，温度15℃以下或55℃以上就会没有活性，最适温度为37-43℃。
权利要求
1.一种凝乳酶粉的制备方法，该方法有下述顺序的步骤a、以幼小吮乳的小牛或小羊皱胃为原料，清除内含物，剥去皱胃表面的脂肪结缔组织，洗涤干净，将其绞碎，然后加水，其固液比为1∶6-10，再加食盐，其浓度为1-4mol/l，在常温下搅拌浸泡48-120小时，然后离心除去残渣，得到含酶的上清液，再进行超滤浓缩，真空冷冻干燥，得到初步的粗制凝乳酶粉；b、在粗制凝乳酶粉中加水，其固液比为1∶10-20，使其成为浓的含酶水溶液，然后在其中加入γ-氧化铝，其浓度为每100毫升中加2-5克(w/v)，进行搅拌，静置1-10小时，再离心去掉上清液，得到γ-氧化铝沉淀；c、用pH为5.0-5.3的水溶液，对γ-氧化铝沉淀进行洗脱解析，再经离心，去掉氧化铝残渣，得到高纯度的含酶溶液；d、将含酶溶液再经超滤仪浓缩，得到含酶的浓溶液，然后用饱和氯化钠水溶液进行盐析、离心，去上清液，得到酶沉淀，用蒸馏水溶解、透析，最后真空冷冻干燥得到精致的凝乳酶粉。
2.根据权利要求1所述的一种凝乳酶粉的制备方法，其特征在于所述的γ-氧化铝，其表面积为150-200m2/g，平均孔径为150-200。
全文摘要
本发明涉及一种凝乳酶的制备，更具体地说涉及一种从幼小吮乳小牛或羔羊皱胃提取凝乳酶(又称皱胃酶)粉的制备方法。本发明以小牛皱胃为原料，用氯化钠作提取剂，通过氧化铝吸附，将酶与溶液中的杂质分开。然后用洗脱剂将酶从γ－氧化铝上洗脱解析下来，得高浓度的含酶溶液，再用过饱和氯化钠盐析、沉淀，干燥得酶活性较高的粗凝乳酶粉。本发明的优点是提取方法简便易行，直接用氯化钠液体进行浸泡，不加防腐剂－硼酸或酒精等，用γ－氧化铝进行吸附，避免了对最终产品的污染，同时也降低了生产成本。酶活性高，已达1∶500,000的比例凝结牛乳。
文档编号C12N9/64GK1800380SQ20051012450
公开日2006年7月12日 申请日期2005年11月30日 优先权日2005年11月30日
发明者马忠仁, 印明善, 冯玉萍, 乔自林 申请人:马忠仁, 印明善