取代的苯并二氢吡喃衍生物、药物及其在治疗中的应用的制作方法

专利名称：：取代的苯并二氢吡喃衍生物、药物及其在治疗中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及某些新型苯并二氢吡喃衍生物及它们的盐和衍生物，含有它们的组合物，它们的制备方法及其作为治疗性药物，特别是作为抗癌症和化疗选择性药物的应用。
背景技术：
：已知有超过700种天然产生的不同的异黄酮，其中一些的生物学特性可能有治疗益处。US5,726,202总体上公开了某些异黄烷(isoflavan)化合物，特别是用于治疗良性前列腺肥大的3，4-二芳基苯并二氢吡喃与苯并二氢吡喃(centchroman)。WO01/17986也公开了某些异黄烷化合物。发明概述令人惊奇的是，本发明人发现显示重要治疗活性的一组新的通式(I)所示化合物，所述活性包括对癌症的强抗癌症活性、化疗选择性和辐射敏化。因此，本发明的一方面提供通式(I)所示化合物或其盐或衍生物R1是氢、羟基、卤素(halo)、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C1-6氟烷基或任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-6烷基；图样“”和R2一起表示双键或者图样“”表示单键，R2是氢、羟基、NR10R11、C1-3烷氧基、C1-3氟烷基、卤素或任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-3烷基；R3是氢、羟基、卤素、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C1-6氟烷基、C2-6烯基、COOR12、COR13、(O)nC1-4亚烷基NR14R15或任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-6烷基；R4、R5、R6、R7、R8和R9独立为氢、羟基、卤素、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C1-6氟烷基、C2-6烯基、COOR12、COR13或任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-6烷基；R10、R11和R12独立为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基或三烷基甲硅烷基；R13是氢、C1-6烷基、C3-6环烷基或NR10R11；n表示0或1；和R14和R15独立代表氢或C1-6烷基或NR14R15，当二者结合在一起时代表5或6元的杂芳基或杂环基；及其药学上可接受的盐，前提是当R1代表氢且“”是单键，则R2不代表氢。本发明另一方面提供了制备式(I)所示化合物的方法。本发明另一方面提供一种药物组合物，其含有联合了一种或多种药物载体、赋形剂、辅助物质和/或稀释剂的一种或多种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或衍生物。因此，本发明另一方面提供了式(I)所示化合物在治疗，特别是化疗和作为辐射敏化剂中的应用。本发明另一方面提供了治疗、预防或缓解疾病或病症的方法，所述方法包括给予对象与载体和/或赋形剂联合的一种或多种有效量的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或衍生物。本发明另一方面提供用于治疗、预防或缓解疾病或病症的药物，该药物含有一种或多种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或衍生物。附图简述图1.显示了下文鉴定的1号化合物在血清、粪便和尿液中的药物动力学和分布。该化合物的游离的和总的浓度的平均值(±SEM)表示为A图中的半对数图和B图中的标准线性图。发明详述本发明发现通式(I)所示化合物显示惊人和出乎意料的生物学和药学特性。据信，本发明式(I)所示化合物对正常细胞具有优良的毒性分布状况和良好的生物利用度。令人惊奇的是，本发明化合物显示的抗癌症活性明显优于已知的癌症治疗(药物)或至少与之相当。式(I)所示化合物具有抵御各种人和动物来源癌细胞的细胞生长抑制(活性)和细胞毒性。癌细胞表示这些细胞显示恶性特征，其与非癌细胞的区别在于不受控制的生长和除非成功治愈否则最终威胁生命的特性。发现能对式(I)所示化合物起反应的癌细胞是上皮来源(例如，前列腺、卵巢、子宫颈、乳腺、胆囊、胰腺、结肠直肠、肾脏和非小细胞肺癌细胞)，间充质来源(例如，黑色素瘤、间皮瘤和肉瘤癌细胞)和神经来源(例如，神经胶质瘤癌细胞)。发现一组相关化合物对癌细胞显示如此强的细胞毒性是极其罕见且令人吃惊的。此外，也认为本发明化合物对非癌细胞，例如源自人包皮的角化细胞具有低毒性。这种癌细胞选择性极其罕见且出乎意料。式(I)所示化合物的优点是对标准抗癌药物不灵敏的熟知癌细胞显示有细胞毒性。发现对癌症，例如对已知抗癌药物高度耐受的胆管癌、胰腺癌和黑色素瘤有如此强的活性极其罕见且出乎意料。有利地，式(I)所示化合物也似乎显示能使癌细胞对辐射敏感，这意味着这些化合物可降低杀伤这些细胞所需的γ-射线用量，或者它们能将癌细胞从辐射耐受状态转化为辐射敏感状态。此外，认为式(I)所示化合物具有化疗致敏活性，即它们增加化疗药物(特别是对癌细胞)的细胞毒性和/或将癌细胞从化疗耐受性转化为化疗敏感状态。本发明化合物也为非癌细胞提供化疗和/或辐射保护性特性。由于常规治疗方法对非癌细胞的毒性可导致化疗和放疗产生创伤性副作用，这具有明显的治疗意义。上述特性能提供明显的临床益处。可利用本发明化合物的辐射和/或化学保护特性来保护健康个体免遭辐射和/或化学毒素作用，或减轻其作用。上述特性能提供明显的临床益处。因此，本发明也提供式(I)所示化合物通过单用所述化合物和/或彼此联用和/或联用其它抗癌症药物和/或联用放疗治疗进行治疗来降低所述肿瘤的生长速率或减小所述肿瘤的大小，从而治疗癌症患者的应用。在本发明的式(I)所示化合物中，取代基R8和R9的分布一般如下所示在本发明的式(I)所示化合物中，取代基R3、R4和R5的分布一般如下所示式(I)所示化合物中图样“”优选表示单键。在本发明化合物中(包括式(I)所示化合物)，R3最好处于对位。在本发明化合物中(包括式(I)所示化合物)，当R3代表(O)nC1-4亚烷基NR14R15时，其最好代表-OC2亚烷基NR14R15，其中NR14R15代表吡咯烷基。本发明提供式(I-a)所示化合物或其盐或衍生物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8如以上式(I)所示化合物的定义，前提是当R1代表氢且“”是单键时，R2不代表氢。以上式(I)所示化合物的R3、R4和R5的位置同样适用于式(I-a)所示化合物。以上式(I)所示化合物的R8和R9的位置同样适用于式(I-a)所示化合物。在式(I-a)所示的化合物中，R7最好代表C1-6烷氧基或羟基，特别是甲氧基或羟基。在式(I-a)所示化合物中，“”最好代表单键。本发明另一方面提供式(I-b)所示化合物或其盐或衍生物其中R1代表羟基、卤素、NR10R11、C3-6环烷基、C-6烷氧基、C2-6烯基、C1-6氟烷基、任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-6烷基；和R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9如以上式(I)所示化合物的定义。以上式(I)所示化合物的R3、R4和R5的位置同样适用于式(I-b)所示化合物。以上式(I)所示化合物的R8和R9的位置同样适用于式(I-b)所示化合物。在式(I-b)所示化合物中，R1最好代表羟基、C1-6烷氧基、C1-6氟烷基、任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-6烷基，特别是C1-6烷基，特别是甲基。在式(I-b)所示化合物中，R3最好代表羟基、C1-6烷氧基或任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-6烷基，特别是C1-6烷氧基或羟基，特别是甲氧基。在(I-b)所示化合物中，R3最好处于对位。以式(I-b)所示化合物中，R4、R5和R6独立代表氢。在式(I-b)所示化合物中，R7最好代表羟基或C1-6烷氧基，特别是羟基或甲氧基。在式(I-b)所示化合物中，R8最好代表氢、羟基或C1-6烷氧基，特别是氢、羟基或甲氧基，特别是氢。在(I-b)所示化合物中，R8最好处于3位。在式(I-b)所示化合物中，R9最好代表氢、羟基或C1-6烷氧基，特别是羟基或C1-6烷氧基，特别是羟基或甲氧基。因此，本发明另一方面提供式(I-bb)所示化合物或其盐或衍生物其中R1、R3、R4、R7、R8和R9如以上式(I-b)所示化合物的定义。在一高度优选的实施方案中，“”代表单键。对于以上式(I-b)所示化合物所表达的偏好同样适用于式(I-bb)所示化合物。本发明该第一方面范围内的具体化合物如下所示或它们的盐或衍生物。式(I-bb)所示化合物最优选具有以下结构或它们的盐或衍生物。本发明另一方面提供式(I-c)所示化合物或其盐或衍生物其中R2代表羟基、卤素、NR10R11、C1-3烷氧基、C1-3氟烷基、任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-3烷基；R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9如以上式(I)所示化合物的定义。以上式(I)所示化合物所示R3、R4和R5的位置同样适用于式(I-b)所示化合物。以上式(I)所示化合物所示R8和R9的位置(其中R9处于对位)同样适用于式(I-b)所示化合物。式(I-c)所示化合物中的NR10R11最好代表氢或C1-3烷基，特别是氢或甲基。在式(I-c)所示化合物中，R2最好代表羟基、甲氧基、甲基或三氟甲基。在式(I-c)所示化合物中，R3最好代表羟基、C1-6烷氧基或任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-6烷基，特别是诸如甲氧基的C1-6烷氧基，特别是甲氧基。在式(I-c)所示化合物中，R4、R5和R6最好独立地代表氢。在式(I-c)所示化合物中，R8最好代表氢、羟基或C1-6烷氧基，更优选氢或甲氧基，特别是氢。在式(I-c)所示化合物中，R8最好位于3位。在式(I-c)所示化合物中，R9最好代表氢、羟基或C1-6烷氧基，特别是羟基或C1-6烷氧基，特别是羟基或甲氧基。在此第二方面，本发明更优选提供式(I-cc)所示化合物或其盐或衍生物其中R2、R3、R4、R6、R7、R8和R9如以上式(I-c)所示化合物的定义。对于以上式(I-c)所示化合物所表达的偏好同样适用于式(I-cc)所示化合物。式(I-cc)所示的具体化合物或其盐或衍生物如下所示本发明式(I)所示化合物包含两个手性中心。本发明包括所有对映体和非对映体以及它们任何比例的混合物。本发明也可延伸至分离的对映体或对映体对。本领域技术人员熟知分离对映体和非对映体的方法。本领域技术人员很清楚在本发明化合物中，杂环上的芳基取代基相对于彼此可以是顺式或反式。在本发明的式(I)所示化合物中，这些取代基最好是顺式。本发明特别优选的化合物是上面标记为(1)号化合物的顺式异构体。类似地，特别优选的化合物是顺式构象的(2)-(9)号化合物。本发明化合物的盐最好是药学上可接受的盐。术语“烷基”应包括1-6个碳原子的直链和支链饱和烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基等。烷基更优选含有1-4个碳原子，特别是甲基、乙基、丙基或异丙基。环烷基包括C3-6环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基和环己基。烷基或环烷基可任选被一个或多个以下基团取代氟、氯、溴、碘、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、C1-C4-烷基氨基-羰基、二-(C1-C4-烷基)-氨基-羰基、羟基、C1-C4-烷氧基、甲酰氧基、C1-C4-烷基-羰氧基、C1-C4-烷硫基、C3-C6-环烷基或苯基。烷基优选不具有任何取代基。术语C1-6烷氧基包括其烷基部分是直链或支链烷基部分的基团。C1-6烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基和仲丁氧基。C1-6烷氧基取代基最好是甲氧基或乙氧基，特别是甲氧基。术语氟烷基包括其中一个或多个(例如，1、2、3、4或5个)氢被氟取代的“烷基”。氟烷基可以是直链或支链“烷基”单元。优选的氟烷基包括三氟甲基和五氟甲基。术语“芳基”应包括苯基、苄基、联苯基和萘基，这些基团可任选被以下的一个或多个基团取代C1-4烷基、羟基、C1-4烷氧基、羰基、C1-4-烷氧基羰基、C1-4烷基羰氧基、硝基或卤素。术语“卤代”应包括氟代、氯代、溴代和碘代，优选氟代、氯代。5或6元杂环和杂芳环包括吡咯、吡咯啉、吡咯烷、唑啉、噻唑、咪唑、咪唑啉、咪唑烷、吡唑、吡唑啉、吡唑烷、异唑、异噻唑、二唑、呋咱、三唑、噻二唑、吡啶、哌啶、吗啉、硫代吗啉、哒嗪、嘧啶、吡嗪、哌嗪、三嗪、噻二嗪(thiadiazone)和二噻嗪，它们各自可任选被以下一个或多个基团取代氟、氯、溴、碘、羧基、C1-4烷氧基羰基、C1-4烷基氨基-羰基、二-(C1-4烷基)-氨基-羰基、羟基、C1-4烷氧基、甲酰氧基、C1-4烷基-羰氧基、C1-4烷硫基或C3-6环烷基。本发明化合物包括各种盐，例如酸加成盐、阴离子盐和两性离子盐，特别包括本领域技术人员已知的药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”指带电荷并能与药学制剂联合给予(例如作为盐的抗衡阳离子或抗衡阴离子)的有机或无机部分。本领域技术人员已知药学上可接受的阳离子，其包括但不限于钠、钾、钙、锌和季胺。本领域技术人员已知药学上可接受的阴离子，其包括但不限于氯离子、乙酸根、甲苯磺酸根、柠檬酸根、碳酸氢根和碳酸根。药学上可接受的盐包括从以下酸形成的盐乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、苯磺酸、柠檬酸、肉桂酸、乙磺酸、延胡索酸、谷氨酸、戊二酸、葡糖酸、盐酸、氢溴酸、乳酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、萘甲酸、羟基萘甲酸、萘磺酸、萘二磺酸、萘丙烯酸、油酸、草酸、草酰乙酸、磷酸、丙酮酸、对甲苯磺酸、酒石酸、三氟乙酸、三苯基乙酸、丙三羧酸、水杨酸、硫酸、氨基磺酸、磺胺酸和琥珀酸。术语“药学上可接受的衍生物”或“药物前体”指给予受者后能直接或间接提供母体化合物或代谢物，或能自身显示活性的活性化合物衍生物，包括例如磷酸酯衍生物和磺酸酯衍生物。因此，衍生物包括溶剂化物、药学上的活性酯、药物前体等。本发明的优选化合物也包括具有生理上可断裂(cleavable)的离去基团的所有衍生物，所述衍生物可在体内断裂从而提供本发明化合物或它们的活性部分。离去基团可包括酰基、磷酸酯(基团)、硫酸酯(基团)、磺酸酯(基团)，优选单、二和全酰氧基取代的化合物，其中一个或多个侧羟基(pendanthydroxy)受酰基，优选乙酰基的保护。本发明的酰氧基取代化合物通常容易断裂为相应的羟基取代的化合物。在适于促进本发明化合物和它们的起始材料合成的场合，可采用本领域技术人员已知的化学官能团保护、脱保护、合成子和其它技术。可采用本领域熟知的方法对本发明化合物和衍生物上的官能团进行保护，例如T.W.Greene，《有机合成的保护基团》(ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis)，JohnWiley&amp;Sons，纽约，1981所述。羟基保护基团包括但不限于羧酸酯，例如乙酸酯；芳酯，例如苯甲酸酯；缩醛/缩酮，例如丙酮化合物和亚苄基；醚，例如邻-苄基和对-甲氧基苄基醚；四氢吡喃醚和甲硅烷基醚，例如叔丁基二甲基甲硅烷基醚。可通过，例如酸或碱催化水解或还原，如氢化来除去保护基团。甲硅烷基醚可能需要氟化氢或氟化四丁铵来断裂。医药化学领域的技术人员应明白可将式(I)所示化合物转化为式(I)所示其它化合物，例如当式(I)所示化合物带有一个或多个羟基取代基时，可通过用卤化试剂处理所述醇将这些羟基取代基中的一个或多个转化为卤素，例如溴、氯或碘，可能需要利用保护基团来保护分子中的其它官能团。卤化试剂包括诸如NBS、氢溴酸、氯气的化合物。酚型羟基不难通过用卤化试剂处理转化为相应的卤素化合物。然而，所需卤素化合物的制备可通过，例如有HCl存在时在温度降低条件下，如0℃用NaNO2处理合适的芳基胺起始物质以形成相应的叠氮盐。然后用CuCl、CuBr、KI或HBF4处理将叠氮(盐)转化为所需的卤素化合物。制备式(I)所示化合物的通用方法包括以下步骤i)用式(III)所示化合物或其受保护的衍生物处理式(II)所示化合物或其受保护的衍生物其中式(III)所示化合物或其受保护的衍生物为式(III)中R3代表氢、羟基、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C1-6氟烷基、C2-6烯基、COOR12、COR13、(O)nC1-4亚烷基NR14R15或任选为一个或多个羟基或NR10R11基团取代的C1-6烷基；R4和R5独立代表氢、羟基、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C1-6氟烷基、C2-6烯基、COOR12、COR13或任选用一个或多个羟基或NR10R11基团取代的C1-6烷基；和X代表金属卤代部分；式(II)所示化合物或其受保护的衍生物为式(II)中，R1是氢、羟基、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C1-6氟烷基、任选用一个或多个羟基或NR10R11基团取代的C1-6烷基；R6、R7、R8和R9独立地代表氢、羟基、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C1-6氟烷基、COOR12、COR13或任选用一个或多个羟基或NR10R11基团取代的C1-6烷基，和ii)随后任选将所形成产物的杂环上的叔醇基团转化为另一取代基，和iii)随后任选脱保护。在上述步骤i)中，式(III)所示化合物最好是有机金属试剂，其在以下条件下与式(II)所示酮化合物反应无水；惰性气氛，例如氮气或氩气气氛中；惰性溶剂，例如THF(四氢呋喃)；非极端温度，例如室温；或低温，例如0℃。合适的有机金属试剂包括有机锂试剂、有机镁试剂和有机铜试剂。所用的芳基化试剂更优选是有机镁试剂，例如格利雅试剂，所述试剂可通过使式(III)所示化合物(其中X代表卤素，例如溴)与镁金属在无水条件下在惰性气氛中反应来制备。在上述步骤ii)中，亲核加成反应所形成的产物中杂环上的叔醇取代基可通过已知方法转化为其它R2取代基。例如，可利用对甲苯磺酸处理将叔醇转化为良好的离去基团。然后可用亲核(试剂)，例如氢化物来源、醇类或胺类处理此中间体甲苯磺酸酯以提供R2部分的所需取代。或者，可利用卤化剂将叔羟基转化为卤素。在本发明其它方面，使所述亲核加成反应的产物脱水形成通式(I-d)所示化合物或其受保护的衍生物其中R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9如以上式(I-b)所示化合物的定义。例如，可用酸或碱催化脱水或通过将叔醇转化为较好的离去基团而促进脱水。式(III)所示化合物最好是脱水的，例如通过对甲苯磺酸处理。以上式(I-b)所示化合物所表达的偏好同样适用于式(I-d)所示化合物。式(I-d)所示具体化合物如下所示如果需要，可用还原剂处理以除去式(I-d)所示化合物中杂环的双键从而提供式(I)所示其它化合物。还原剂是本领域技术人员熟知的，包括氢化物来源，如硼氢化物和碱金属硼氢化物，但应包括可利用适当的催化剂，例如钯碳的催化氢化中的氢。其它合适的氢化物来源包括三乙酰氧基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化四丁基铵(tetrabutylammoniumtriacetoxyborohydride)和氰基硼氢化钠。最好通过氢化还原双键。可通过还原，优选氢化式(IV)所示化合物的杂环的双键来制备式(II)所示化合物或其受保护的衍生物其中R1、R6、R7、R8和R9如以上式(II)所示化合物所定义的。通过以下方案1所示和公布的国际申请号WO01/17986(其内容纳入本文作为参考)所述的通用合成方法可得到式(IV)所示化合物。通用合成方法如方案1所示。本发明优选合成方法所用的化合物可衍生自本领域技术人员不难鉴定的任何来源。例如，黄豆苷原是可得到的或可用本领域已知的标准方法合成。合适的方法见，例如公布的国际专利申请WO98/08503和WO00/49009及其引用的参考文献，这些文献均全文纳入本文作为参考。当进行具体处理或步骤时，一种或多种上述方案明显需要利用一种或多种保护基团来保护分子其它部分的官能团。较佳地，例如在亲核加成反应中，将任何游离的醇、酯或其它这种反应性基团保护为叔丁基二甲基甲硅烷基醚。如本领域技术人员所知道的，可对本发明化合物进行化学修饰和操作。例如，1号化合物与烷化试剂反应得到在游离的酚基团处的醚衍生物。也可对芳环进行卤化，例如，与N-溴琥珀酰亚胺反应得到主要组分8-溴衍生物(化合物42)，含量较低的是6-溴异构体。其它反应可包括例如利用在乙酸中的溴化氢进行烷氧基的脱甲基化得到三羟基化合物43。本发明合成的其它化合物包括本文所用的术语“治疗”、“预防”或“防止”、“缓解”等可认为是其最广的范围。具体地说，术语“治疗”不必意味着治疗某动物直至完全康复。因此，“治疗”包括缓解某具体病症的症状或严重性或防止或减轻患有某具体病症的风险。治疗性治疗所需的一种或多种本发明化合物的用量取决于许多因素，包括具体的应用，所用具体化合物的性质，所治疗的疾病，给药方式和患者的状况。可以常规实施的方式和用量给予式(I)所示化合物。参见，例如Goodman和Gilman，《治疗学的药理学基础》(Thepharmacologicalbasisoftherapeutics)，第七版，(1985)。所用的具体剂量取决于所治疗的病症、对象的状态、给药途径和上述其它熟知的因素。总之，每位患者的日用剂量可以是0.1mg-5g；通常是0.5mg-1g；优选50mg-200mg。取决于待治疗或缓解病症的严重性给药长度，给药的长度范围可以为在视需要的一周到数月或数年时间内每日或每两日给予一剂量到每日给药两次剂量或三次剂量。还应知道对于任何具体的对象，可根据个体需要和实施或监督化合物给予的人的专业判断来随时调节具体剂量方案。可采用利用活性化合物的较短期治疗来稳定或降低或缓解癌症。可采用较长期的治疗来防止高危患者中癌症的发生。一般通过将本发明化合物(为方便起见下文称为“活性化合物”)与本领域熟知的一种或多种药学上或兽医学上可接受的载体和/或赋形剂混合来制备用于治疗本文所述治疗性适应症的药物组合物。当然，就与制剂中的任何其它成分相容而言，载体必须是可接受的，并且必须对对象无害。载体或赋形剂可以是固体或液体，或(同时是)二者，优选与化合物配制为单位剂量，例如片剂，以重量计其最多可含有100％活性化合物，优选以重量计0.5％-59％的活性化合物。药物组合物中活性化合物的优选浓度取决于药物的吸收、分布、灭活和排出率以及本领域技术人员已知的其它因素。可将一种或多种活性化合物掺入本发明制剂。本发明制剂包括适合于口服、直肠、眼部、含服(例如，舌下)、胃肠外(例如，皮下、肌肉内、皮内或静脉内)、透皮给药(包括经鼻、口、阴道或直肠的粘膜给药)以及作为吸入剂的那些制剂，虽然在任何给定的情况中最合适的途径取决于所治疗疾病的性质和严重性以及所用具体活性化合物的性质。适合于口服给药的制剂可以离散单位存在，例如各含有预定含量活性化合物的胶囊、囊剂、糖锭或片剂；粉末或粒剂；水性或非水性液体配制的溶液或悬浮液；水包油或油包水乳剂。可采用任何合适的药学方法制备这种制剂，所述方法包括混合活性化合物与合适的载体(可含有一种或多种上述辅助成分)。一般可通过均匀且紧密混合活性化合物与液体或细分级(finely-divided)的固体载体(或二者)，然后(如果需要)使得到的混合物成形，例如形成单位剂量来制备本发明制剂。例如，可通过压缩或模塑含有活性化合物与(任选)一种或多种其它成分的粉末或颗粒来制成片剂。可在合适的机器中压缩自由流动的化合物，例如任选与黏合剂、润滑剂、惰性稀释剂和/或表面活性/分散剂混合的粉末或颗粒来制备压缩片剂。可在合适的机器中模塑用惰性液体黏合剂润湿的粉末状化合物来制作模塑片剂。适合于含服(舌下)给药的制剂包括含有用调味基(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)配制的活性化合物的糖锭；和含有惰性基(例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)配制的化合物的软锭剂。适合于眼部给药的制剂包括含有用眼可接受的载体或稀释剂配制的活性化合物的液体、凝胶和乳膏。适合于胃肠外给药的本发明组合物可方便地含有活性化合物的无菌水性制品，所述制品宜与所需受者的血液等渗。这些制品优选静脉内给予，虽然也可通过皮下、肌肉内或真皮内注射给予。通过混合所述化合物与水或甘氨酸缓冲液并使得到的溶液无菌并且与血液等渗不难制备这种制品。本发明的可注射制品通常含有0.1％-60％w/v的活性化合物，以0.1ml/分钟/kg的速率给予。适合于直肠给药的制剂优选以单位剂量栓剂存在。适合于阴道给药的制剂优选以单位剂量阴道栓剂存在。可通过混合活性化合物与一种或多种常规固体载体，例如可可油，然后使得到的混合物成形来制备这些制剂。适合于局部给予皮肤的制剂或组合物宜采取软膏、乳膏、洗剂、糊剂、凝胶、喷剂、气溶胶或油的形式。可用的载体包括凡士林、含香料的润滑剂(lanoline)、聚乙二醇、醇类或其中两种或更多种的组合。活性化合物的浓度通常是0.1％-5％w/w，更具体地说是0.5％-2％w/w。这种组合物的实例包括化妆品护肤乳膏。适合于透皮给药的制剂可以离散的贴剂存在，所述贴剂适应于长期与受者表皮紧密接触。对于所述活性化合物，这种贴剂含有的活性化合物宜是例如，0.1M-0.2M浓度的任选缓冲的水溶液。参见例如Brown，L.等，(1998)。适合于透皮给药的制剂也可通过离子电渗递送(参见，例如PanchagnulaR等，2000)，其通常采取活性化合物的任选缓冲的水溶液形式。合适的制剂包含柠檬酸或Bis/Tris缓冲液(pH6)或乙醇/水并含有0.1M-0.2M活性成分。适合于吸入的制剂可作为溶液、悬浮液或乳液形式的喷剂组合物递送。吸入喷剂组合物还可含有药学上可接受的推进剂，例如含有氢的碳氟化合物，如1，1，1，2-四氟乙烷或1，1，1，2，3，3，3-六氟-正丙烷。活性化合物可以食品的形式提供，例如加入、混合入、涂布于、组合或以其它方式加入食品。术语食品以其最广泛的含义使用，包括液体制剂，例如饮料(包括奶制品)和其它食品，如健康棒(healthbar)、甜食等。按照标准操作不难制备含有本发明化合物的食物制品。本发明优选的方面提供通过给予有效量的一种或多种本发明化合物或含有它的组合物来治疗人的方法。活性化合物或其药学上可接受的衍生物、药物前体或盐也可与不损害所需作用的其它活性物质共同给予，或与能增加所需作用的物质，例如抗生素、抗真菌剂、抗炎药或抗病毒化合物共同给予。所述活性药物可包含两种或多种异黄酮或其衍生物的组合或协同混合物。活性化合物也可与降脂药，例如丙丁酚和烟酸；血小板凝集抑制剂，如阿司匹林；抗血栓药物，例如酮苄香豆素；钙通道阻断剂，例如异搏定、地尔硫和硝苯吡啶；血管紧张肽转化酶(ACE)抑制剂，例如开搏通和依那普利；和β-阻断剂，例如心得胺、特布他林和拉贝洛尔联合给予。这些化合物也可与非类固醇抗炎药，例如布洛芬、吲哚美辛、阿司匹林、非诺洛芬、甲灭酸、氟灭酸和亚磺酰茚乙酸或止吐药，例如zofran联合给予。这些化合物也可与皮质类固醇联合给予。式(I)所示化合物似乎特别适合于和其它抗癌药，例如顺式铂氨和/或脱氢牛尿酚和/或红豆杉醇联用。与只用一种药物相比，这提高了治疗作用。共同给药可同时或依次进行。可通过在同时或相似时间在同一单位剂量中或在单独和分开的单位剂量中同时给予化合物。依次给药可视需要以任何顺序进行，给予第二种或后面的活性药物时，通常第一种或先给予的活性药物正发挥其生理作用，特别需要累积或协同作用时。本发明也可延伸至制备本发明化合物所用的新型中间体。本发明化合物可用于治疗、预防或缓解与细胞异常存活、细胞异常增殖、细胞异常迁移、血管生成异常、雌激素/雄激素平衡异常、类固醇生成失调或异常、退化(包括血管壁内的退化改变)、炎症和免疫失衡相关的疾病。以下非限制性的实施例和附图进一步阐述了本发明。实施例实施例13-(4-羟苯基)-4-(4-甲氧基苯基)-8-甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-7-醇步骤11-(2，4-二羟基-3-甲基-苯基)-2-(4-羟基-苯基)-乙酮将2-甲基间苯二酚(4.00g，1当量)和4-羟苯基乙酸(5.00g，1当量)加入圆底烧瓶中。将该圆底烧瓶与冷凝器相连并置于油浴中，整个系统维持于氮气下。向混合物中加入蒸馏的BF3.OEt2(20ml，5当量)，同时搅拌。回流混合物(110℃)。20分钟时形成黄色固体表明反应结束。再加热反应(体系)10分钟，然后冷却至室温。抽滤收集黄色固体，用蒸馏水(200ml)洗涤以除去存在的过量BF3.OEt2。在d-DMSO中的1HNMR表明该黄色固体是纯度＞95％的1-(2，4-二羟基-3-甲基-苯基)-2-(4-羟基-苯基)-乙酮。固体用冻干机(freezedrier)干燥24小时(8.93g，99％)。步骤27-羟基-3-(4-羟基-苯基)-8-甲基-苯并吡喃-4-酮将1-(2，4-二羟基-3-甲基-苯基)-2-(4-羟基-苯基)-乙酮(3.99g)和N，N-DMF(115ml)加入500ml2-颈圆底烧瓶中，将该烧瓶与冷凝器相连并置于油浴中。给该圆底烧瓶装上滴液漏斗，整个系统维持于氮气下。加热烧瓶使之维持于50℃。在15分钟期间向溶液中滴加BF3.OEt2(57ml，29当量)，产生烟雾。向滴液漏斗中的N，N-DMF(14ml)加入甲磺酰氯(MeSO2Cl)(14ml，12当量)。然后在10分钟期间将此混合物滴入该圆底烧瓶。一旦滴加完，将温度升高至回流(110℃)。通过HPLC(NV06_R&amp;D.m)监测反应，反应在1小时44分钟时完成。将混合物冷却至室温，倒入冷冻的(chilled)搅拌的蒸馏水中(4L)。立即产生亮黄色絮状沉淀物，在冷藏室中搅拌混合物过夜。然后经布氏漏斗过滤混合物得到黄色固体。固体在d-DMSO中的1HNMR表明其是纯度＞95％的7-羟基-3-(4-羟基-苯基)-8-甲基-苯并吡喃-4-酮。固体用冻干机干燥24小时。固体干燥后称重(2.73g，66％)。步骤3乙酸3-(4-羟基-苯基)-8-甲基-4-氧代-4H-苯并吡喃-7-基酯将羟基-3-(4-羟基-苯基)-8-甲基-苯并吡喃-4-酮(35.18g)加入圆底烧瓶(1L)。向该圆底烧瓶中加入吡啶(38ml，2当量)和乙酸酐(576ml，47当量)，同时在室温搅拌。通过HPLC监测反应，该反应瞬间完成。观察到颜色有变化，反应混合物最初是暗棕色，搅拌后变为亮橙色并有棕褐色絮状颗粒(产生)。将反应混合物倒入冷冻的蒸馏水中(4L)，室温下搅拌30分钟。抽滤收集灰白色固体。固体在d-CDCl3中的1HNMR表明其是纯度＞95％的乙酸3-(4-羟基-苯基)-8-甲基-4-氧代-4H-苯并吡喃-7-基酯。固体用冻干机干燥24小时。固体干燥后称重(31.80g，69％)。步骤4乙酸3-(4-羟基-苯基)-8-甲基-4-氧代-苯并二氢吡喃-7-基酯将乙酸3-(4-羟基-苯基)-8-甲基-4-氧代-4H-苯并吡喃-7-基酯(26.32g)，10％Pd/Al2O3(12.93g，50％)和乙酸乙酯(EtOAc)(1.5L)加入氢化圆底烧瓶(2L)。将该烧瓶置于氢化器中，抽真空，通以氮气(×5)和氢气(×5)。HPLC监测反应。在第40小时向圆底烧瓶中加入10％Pd/Al2O3(9g，35％)，表明没有产物峰存在，只有起始原料存在。62小时(进行的)HPLC表明主要峰是产物峰，起始原料峰高是产物峰高的一半。向圆底烧瓶中加入10％Pd/Al2O3(5.69g，20％)以加快反应速率。第64小时反应完成。硅藻土(celite)过滤反应混合物以除去Pd/Al2O3催化剂，用EtOAc(1L)清洗硅藻土以确保收集到大部分产物。利用旋转蒸发仪除去EtOAc得到黄色固体。固体在95％EtOH(650ml)中重结晶，置于冰箱(freezer)中过夜。抽滤收集灰白色晶体。在d-CDCl3中的1HNMR表明该灰白色晶体是纯度＞95％的8乙酸3-(4-羟基-苯基)-8-甲基-4-氧代-苯并二氢吡喃-7-基酯。将晶体保存在干燥器中24小时后称重(18.37g，69％)。步骤57-羟基-3-(4-羟基-苯基)-8-甲基-苯并二氢吡喃-4-酮将乙酸3-(4-羟基-苯基)-8-甲基-4-氧代-苯并二氢吡喃-7-基酯(18.37g)、咪唑(21.18g，6当量)和100％EtOH(536ml)加入一圆底烧瓶(2L)。回流反应混合物并用HPLC监测。反应在8小时时完成。用旋转蒸发仪浓缩反应混合物(约130ml)，将其倒入搅拌的冷冻的蒸馏水中(1.9L)。在冷藏室中搅拌水析出物(watercrashout)过夜。抽滤收集淡粉色固体。固体的1HNMR表明其是纯度＞95％的7-羟基-3-(4-羟基-苯基)-8-甲基-苯并二氢吡喃-4-酮。用冻干机干燥该固体3小时(8.31g，59％)。步骤67，4’-二叔丁基二甲基甲硅烷氧基-8-甲基-二氢黄豆苷原在一250mL圆底烧瓶中混合8-甲基二氢黄豆苷原4.2g、咪唑13g、叔丁基二甲基甲硅烷基氯12.7g(70毫摩尔)和N，N-DMF50ml，室温下在氮气气氛中搅拌16小时。加入冷冻的水(100ml)以猝灭反应，同时在冰浴中冷却反应混合物。滤出白色固体，用水清洗。乙醇重结晶得到絮状白色晶体3.2g。步骤77-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-3-(4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-4-(4-甲氧基苯基(penyl))-8-甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-4-醇将2.5g步骤6的产物称入2-颈圆底烧瓶，用氮气吹扫(flush)。向反应容器中加入无水THF10ml得到澄清的淡黄色溶液。连接上冷凝器并将反应容器置于冰浴中。在10分钟期间向反应混合物中滴加可购得的4-甲氧基苯基溴化镁(THF配制的0.5M溶液)22.5ml。滴加湿醚(50∶50H2O∶乙醚)以猝灭反应，同时仍维持在氮气气氛中，随着加入的水量增加形成白色沉淀物。向反应混合物中加入更多的水，然后用乙醚萃取。合并有机层，用水、盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，真空除去溶剂得到清澈的黄色油状物，其过夜后固化得到灰白色固体。因该物质的油性本质不能计算精确的产率。该物质无需进一步纯化即可用于下一步反应。因该物质的油性本质不能计算精确的产率。步骤83-(4-羟苯基)-4-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-醇在连接有冷凝器的500mL2-颈圆底烧瓶中混合4.2g步骤7的产物，pTsOH(对甲苯磺酸(sulphoricacid))4.5g，沸石和200ml乙醇。反应(体系)加热回流3小时。真空浓缩溶剂至约20ml，然后倒入搅拌的冷冻的水中(100ml)。然后用乙酸乙酯萃取混合物，用水(3×100ml)、盐水(1×100ml)洗涤合并的有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂得到红色/棕色油状物。将该油状物溶解于甲醇(约15ml)，置于冰箱中过夜。过夜后形成白色沉淀物，滤出并用甲醇清洗。真空浓缩滤液得到棕色油状物。步骤93-(4-羟苯基)-4-(4-甲氧基苯基)-8-甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-7-醇在100mL的2-颈圆底烧瓶中混合2.5g步骤8的产物，10％Pd/Al2O30.4g和50ml乙醇。采用标准条件低压氢化反应(体系)3小时。硅藻土(Celite)过滤反应液以除去催化剂，用乙醇(100ml)清洗。将滤液浓缩至约15ml，然后倒入搅拌的冷冻水中(300mL)。形成淡橙色沉淀物，随后其形成棕色油状物。然后用乙醚萃取混合物，用水(3×100ml)、盐水(1×100ml)洗涤合并的有机层，无水硫酸镁干燥并过滤。真空除去溶剂得到红色/棕色油状物。产物经乙醚(约15ml)重结晶得到棕色固体，用冷冻的乙醚清洗后得到灰白色晶体。4批(crop)(IV)，约1g。1HNMR图谱和编号示意图如下所示。实施例23-(4-羟苯基)-4-(4-甲氧基苯基)-3’，4’-二甲氧基-8-甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-7-醇步骤1.11-(2，4-二羟基-3-甲基-苯基)-2-(3，4-二甲氧基-苯基)乙酮将2-甲基间苯二酚(6.285g，1当量)和3，4-二甲氧基苯基乙酸(9.251g，1当量)加入一圆底烧瓶。将该圆底烧瓶连上冷凝器并置于油浴中，整个系统维持于氮气气氛中。向反应混合物中加入蒸馏的三氟化硼二乙基醚合物，BF3.OEt2(42ml，5当量)，同时搅拌。使混合物回流(110℃)。75分钟时形成黄色固体表明反应完成。反应(体系)再加热10分钟，冷却至室温。抽滤收集黄色固体，用蒸馏水(200ml)洗涤以除去存在的任何过量BF3.OEt2。d-DMSO中的1HNMR表明该黄色固体是纯度＞95％的1-(2，4-二羟基-3-甲基-苯基)-2-(3，4-二甲氧基-苯基)乙酮。冻干机干燥该固体24小时(6.303g，43％)。步骤2.13-(3，4-二甲氧基-苯基)-7-羟基-8-甲基-苯并吡喃-4-酮将1-(2，4-二羟基-3-甲基-苯基)-2-(3，4-二甲氧基-苯基)乙酮(1078-1-49；9.999g，34.4mmol)溶解于N，N-DMF(15mL)中，MgSO4干燥。室温下在N2气氛中滴加蒸馏的BF3-OEt2(16.08.04)。20分钟后开始加热。1小时后，在50℃缓慢加入DMF(20mL)配制的甲磺酰氯(8mL)。反应混合物加热回流1.5小时。将暗黄色溶液加入1.2L剧烈搅拌的冷水中，4℃静止过夜。过滤收集暗黄色固体，然后置于水中除去残留的BF3-OEt2。过滤收集固体，用冻干机干燥过夜。d-DMSO中的1HNMR表明该黄色固体是纯度90％的3-(3，4-二甲氧基-苯基)-7-羟基-8-甲基-苯并吡喃-4-酮(8.85g，82％)。步骤3.1乙酸3-(3，4-二甲氧基-苯基)-8-甲基-4-氧代-4H-苯并吡喃-7-基酯在圆底烧瓶中混合3-(3，4-二甲氧基-苯基)-7-羟基-8-甲基-苯并吡喃-4-酮(9.82g，31mmol)、乙酸酐(62ml)和吡啶(6.2ml)，加热至回流。加热3小时后，反应(体系)冷却至室温，形成结晶固体。滤出固体，用H2O(1L)清洗。d-CDCl3中的1HNMR表明淡棕色晶体是纯度90％的乙酸3-(3，4-二甲氧基-苯基)-8-甲基-4-氧代-4H-苯并吡喃-7-基酯(7.214g，71％)。步骤4.1乙酸3-(3，4-二甲氧基-苯基)-8-甲基-4-氧代-苯并二氢吡喃-7-基酯将3-(3，4-二甲氧基-苯基)-8-甲基-4-氧代-4H-苯并吡喃-7-基酯(1.12g，3mmol)、10％Pd/Al2O3(0.501g，45％w/w)和干燥EtOAc(100ml)置于2-颈圆底烧瓶中，将该烧瓶置于氢化器中。4小时后，观察到1种主要产物。吹扫(purge)反应(体系)，硅藻土滤出催化剂。浓缩滤液得到白色固体。d-CDCl3中的1HNMR表明该固体是纯度的85％乙酸3-(3，4-二甲氧基-苯基)-8-甲基-4-氧代-苯并二氢吡喃-7-基酯(1.1g)。步骤5.13-(3，4-二甲氧基-苯基)-7-羟基-8-甲基-苯并二氢吡喃-4-酮使乙酸3-(3，4-二甲氧基-苯基)-8-甲基-4-氧代-苯并二氢吡喃-7-基酯(1.1g，3.2mmol)和咪唑(3.2g，47mmol)在EtOH(100ml)中回流。90分钟后反应完成，冷却至室温，然后倒入搅拌的H2O(800ml)中。滤出细小的白色沉淀物，d-CDCl3中的1HNMR表明该固体是纯度＞95％的3-(3，4-二甲氧基-苯基)-7-羟基-8-甲基-苯并二氢吡喃-4-酮(0.31g，30％)。步骤6.17，4’-双叔丁基二甲基甲硅烷氧基-3’，4’-二甲氧基-8-甲基-二氢黄豆苷原在250mL的圆底烧瓶中混合3’，4’二甲氧基-8-甲基二氢黄豆苷原2g，咪唑6.8g，叔丁基二甲基甲硅烷基氯6.3g和N，N-DMF50ml，室温下在氮气气氛中搅拌16小时。另外加入冷冻水(100ml)猝灭反应，同时使反应混合物在冰浴中冷却。滤出白色固体，用水清洗。乙醇重结晶得到白色絮状晶体2.2g。步骤7.17-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-3-3-(4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)苯基)-4-(4-甲氧基苯基(penyl))-3’，4’二甲氧基-8-甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-4-醇将以上步骤6.1的产物2g称入2-颈圆底烧瓶，在氮气下吹扫。向反应容器中加入无水THF10ml得到澄清的淡黄色溶液。连接上冷凝器，将反应容器置于冰浴中。在10分钟期间向反应混合物中滴加可购得的4-甲氧基苯基溴化镁(THF配制的0.5M溶液)22.5ml。滴加湿醚(50∶50H2O∶乙醚)以猝灭反应，同时仍维持在氮气气氛中，随着加入的水量增加形成白色沉淀物。向反应混合物中加入更多量的水，然后用乙醚萃取。合并有机层，用水、盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，真空除去溶剂得到清澈的黄色油状物，其固化过夜后得到灰白色固体。因该物质的油性本质不能计算精确的产率。该物质无需进一步纯化即可用于下一步反应。因该物质的油性本质不能计算精确的产率。步骤8.13-(4-羟苯基)-4-(4-甲氧基苯基)-3’，4’-二甲氧基-8-甲基-2H-苯并吡喃-7-醇在连接有冷凝器的500mL2-颈圆底烧瓶中混合2g步骤7.1的产物，pTsOH4.5g，沸石和100ml乙醇。反应(体系)加热回流3小时。真空浓缩溶剂至约10ml，然后倒入搅拌的冷冻水中(100ml)。然后用乙酸乙酯萃取混合物，用水(3×100ml)、盐水(1×100ml)洗涤合并的有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂得到红色/棕色油状物。将该油状物溶解于甲醇(约15ml)，置于冰箱中过夜。过夜后形成白色沉淀物，滤出并用甲醇清洗。真空浓缩滤液得到棕色油状物，该物质在水中析出得到淡棕色固体。步骤9.13-(4-羟苯基)-4-(4-甲氧基苯基)-3’，4’-二甲氧基-8-甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-7-醇在100mL的2-颈圆底烧瓶中混合1g步骤8.1的产物，10％Pd/Al2O30.2g和25ml乙醇。采用标准条件低压氢化反应(体系)3小时。硅藻土过滤反应液以除去催化剂，用乙醇(100ml)清洗。将滤液浓缩至约5ml，然后倒入搅拌的冷冻水中(100mL)。形成淡橙色沉淀物，随后其形成棕色油状物。然后用乙醚萃取混合物，用水(3×100ml)、盐水(1×100ml)洗涤合并的有机层，无水硫酸镁干燥并过滤。真空除去溶剂得到红色/棕色油状物。产物经乙醚(约5ml)重结晶得到棕色固体，用冷冻的乙醚清洗后得到灰白色晶体。4批(crop)(IV)，约0.2g。1HNMR图谱和编号示意图如下所示。<tablesid="table2"num="002"><tablewidth="692">H化学位移峰形JHz积分注释C2平伏4.05m1C2直立4.25m1C33.38m1部分被水峰遮盖C44.45m1C56.80d8.41C66.38d8.41C8-Me2.1s-3C2’7.1d2.11C5’6.95d8.41C6’6.98dd2.1，8.41C2”，C6”6.66d8.72C3”，C5”6.33d8.72OMex33.8，3.82，3.83s09</table></tables>归属了以下化合物的1HN.m.r.化合物14<tablesid="table3"num="003"><tablewidth="801">Hδppm峰形JHz积分注释C23.30dd3.293，11.7091dd略在H2O峰下C24.05dd3.659，10.6121C34.62dd10.612，12.0751dd是重叠的C56.45d在C3’，C5’双重峰下C66.20dd2.561，8.4161C86.23d2.1961毗邻OC2’，C6’6.70d8.7822C3’，C5’6.45d8.7822包括C5在内的总积分为3C2”，C6”7.11m2与4”，3”，5”重叠，不能测定JC3”，C5”7.11m2与4”，2”，6”重叠，不能测定JC4”7.11m1与3”，5”，4”重叠，不能测定J</table></tables>化合物30化合物12化合物28化合物31化合物10化合物11化合物272.0.材料与方法2.1.组织培养人胰腺癌细胞系HPAC(CRL-2119)常规培养在含有HEPES(15mM)、胰岛素(0.002mg/ml)、转铁蛋白(0.005mg/ml)、氢化可的松(40ng/ml)、表皮生长因子(10ng/ml)的1∶1混合的DMEM(Sigma)加HamF12(Sigma)培养基中。卵巢癌细胞系CP70由GilMor(耶鲁大学)博士馈赠，培养在1∶1混合的DMEM加HamF12培养基中，SKOV-3购自ATCC，培养在McCoys5a培养基中。乳腺癌细胞系MDA-MB-468培养在LeibovitzL-15培养基中。黑色素瘤细胞系MM200由PeterHersey(纽卡斯尔大学)馈赠，A2058由PeterParsons博士(QIMR)馈赠。二者均培养在DMEM培养基中。所有培养液中均补加了10％FCS(CSL，澳大利亚)、青霉素(100U/ml)、链霉素(100mg/ml)、L-谷氨酰胺(2mM)和碳酸氢钠(1.2g/L)，37℃培养在5％CO2的加湿气氛中。除另有说明之处，所有细胞系均购自ATCC(马里兰，美国)。正常细胞系NFF(新生儿包皮成纤维细胞)由PeterParsons博士(昆士兰医学研究院(QueenslandInstituteofMedicalResearch))馈赠。RK(家兔肾脏)细胞得自MillerWhalley(MacquarieUniversity)。两种细胞系均培养在补加了10％FCS(CSL，澳大利亚)、青霉素(100U/ml)、链霉素(100mg/ml)、L-谷氨酰胺(2mM)和碳酸氢钠(1.2g/L)的RPMI中，37℃培养在5％CO2的加湿气氛中。2.2.增殖试验测定各细胞系的IC50值。将细胞按照生长动力学分析测定的合适细胞密度接种于96-孔板中，在有和没有测试化合物存在下培养5天。在37℃，根据生产商的使用说明加入20μL3-4，5二甲基噻唑-2，5-二苯基溴化四唑(MTT，用PBS配制为2.5mg/ml，Sigma)3-4小时后，评估细胞增殖。从y轴上的对照增殖％对x轴上的log剂量的半对数图计算IC50值。2.3.1号化合物的药物动力学-口服用1％CMC(m∶v，水)将以上标记的1号化合物制备为均匀悬浮液。采用管饲法将制剂以50mg/kg剂量口服递送至雌性BALB/c小鼠。各时间点(15分钟、30分钟、1小时、4小时和24小时)均分配有3只小鼠。在各时间点通过颈脱椎处死小鼠并收集血液。通过质谱分析游离化合物的浓度。3.0.结果3.1.正常细胞毒性对家兔肾细胞的一式两份细胞毒性试验证实1号化合物对这些细胞具有轻微毒性(表1)。当与能检测潜在的抗癌症药物的顺式铂氨和phenoxodiol[3-(4-羟苯基)-2H-苯并吡喃-7-醇](另一种基准药物)相比时，1号化合物显示的毒性程度高于这两种参比化合物(1号化合物的2μM对顺式铂氨的9.9μM)。表1.1号化合物和顺式铂氨对家兔肾细胞的相对毒性3.2.抗癌细胞的体外效力当比较phenoxodiol和1号化合物的IC50值时，1号化合物证实对以下细胞系具有优秀活性(约大2-10倍)卵巢癌细胞系(CP70)，AR阴性、p53Mt前列腺癌细胞系(PC3)，ER阴性(p53mt)乳腺癌细胞系(分别是MDA-MB-468)，p53Mt胶质瘤(HTB-138)和p53Mt小细胞肺癌(细胞系)(表2)。除了作为结肠直肠细胞系的HT-29以外，1号化合物对测试的所有其它细胞系(表2)显示与phenoxodiol相当的抗癌症活性。1号化合物对黑色素瘤细胞系MM200也同样有效(表2.1)。因此，1号化合物对许多癌细胞类型，包括卵巢(癌)、前列腺(癌)、乳腺(癌)、胶质瘤、胰腺(癌)、肺(癌)、结肠直肠(癌)和黑色素瘤显示良好的活性。表2.1比较1号化合物和phenoxodiol对代表不同恶性肿瘤的细胞系的细胞毒性对1号化合物的类似物测试了许多癌细胞系，比较了它们的IC50值。结果显示对很宽范围的细胞系1号化合物是最好的，而20号化合物对卵巢(癌)、前列腺(癌)、乳腺(癌)、白血病和黑色素瘤细胞系也显示良好的结果。15和17号化合物对卵巢(癌)和黑色素瘤细胞系也分别显示良好的结果(表2.2)。表2.2(a)比较1、10、11、12和14-20号化合物对代表不同恶性肿瘤的细胞系的细胞毒性表2.2(b)比较1、10、11、12和14-20号化合物对代表不同恶性肿瘤的细胞系的细胞毒性3.3.1号化合物的药物动力学-口服在雌性BALB/c小鼠中测定口服药物动力学。给药15分钟后，在血清中观察到游离1号化合物的Cmax为27.3μM。1号化合物从血清中快速消除，30分钟后观察到浓度为8.2μM，1小时后观察到浓度为2.4μM，故药物的半衰期约30分钟(图1和表3)。血清中大多数1号化合物以其偶联状态存在，给药15分钟后1号化合物(游离的加偶联物)的总浓度达到约100μM(1∶4；游离的∶总的)。游离的∶总的比值随时间降低(30分钟后是1∶12，1小时后是1∶13)。给药15分钟后，1号化合物在尿液中迅速出现高浓度(815μM)证明1号化合物从胃肠道吸收，经肾脏排出。30分钟时1号化合物在尿液中达到峰值浓度(2640μM)，给药后1小时和4小时其水平分别降至约1500μM和545μM。大多数所述化合物以其偶联形式存在，未在任何时间点注意到超过2％的游离实体。很大比例的所述化合物也在粪便中排出，可在给药1小时后观察到。然而，不能证实肝脏排出是否为该化合物除去的方式之一，因为未进行肝脏样品评估并且在粪便中观察到化合物可能是因为化合物未从胃肠道吸收而残留的粉末。令人感兴趣的是注意到粪便中回收的化合物几乎100％是游离形式。表3.1号化合物在血清、粪便和尿液中的药物动力学和分布。数据表示为平均值±SEM当与phenoxodiol的口服药物动力学数据相比时，1号化合物显示相似的半衰期，然而15和30分钟后1号化合物的游离浓度高10-20倍。1小时后观察到浓度约高2倍。表4.1号化合物和phenoxodiol的比较性口服药物动力学数据4.0对用LPS刺激的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)的效力在补加了胎牛血清(FCS)、2mM谷氨酰胺和50U/ml青霉素/链霉素的DMEM中培养小鼠巨噬细胞细胞系RAW264.7。从烧瓶上轻柔地刮下亚汇合的细胞，以5×105个细胞每孔接种于24-孔板，使之黏附1小时。然后用10μM浓度的测试化合物(0.025％DMSO配制)或只用载体处理细胞，培育1小时。然后加入50ng/mlLPS(LPS-Sigma-Aldrich)。培育16小时后，收集培养液并保存于-80℃用于酶免疫计量测定检测内生性荷尔蒙(ecosanoid)(PGE2和TXB2-CaymanChemical)。表5.与只用载体培育相比，用10μM测试化合物培育后类十二烷酸合成的变化百分比。正值表示合成增强；负值表示合成抑制，因此提示抗炎性活性。5.0结论1号化合物在低于顺式铂氨的浓度对非转化的新生儿包皮成纤维细胞的原始植入物显示明显毒性(1号化合物与顺式铂氨的IC50分别＝2μM和9μM)。然而，对家兔肾细胞注意到较轻微的毒性(1号化合物的IC50＞60μM)。疗效研究证实1号化合物对代表黑色素瘤(MM200)和胶质瘤(HTB-128)的细胞系有活性。然而，该化合物似乎对代表胰腺癌(PC3)、乳腺癌(MDA-MB-468)和肺癌(NCIHH-H23)的细胞系特别有活性，这些癌症是常规方法极难治疗的癌症。1号化合物对结肠直肠细胞系HT-29有中等活性。在给药15和30分钟后，与类似给予的phenoxodiol相比，1号化合物的药物动力学分析显示口服给予该药物产生的该药物游离形式的浓度明显较高。1号化合物和phenoxodiol分别显示相似的t1/2(约30分钟)。1号化合物的初步制剂研究表明该分子在20％HPBCD中具有中低溶解度(11.2mg/ml)。为使读者能实施本发明而无需过多实验，本文参考某些优选的实施方案描述了本发明。然而，本领域普通技术人员不难理解可在一定程度上可改变或修饰许多组分和参数而不脱离本发明的范围。此外，给予名称、标题等是为了便于读者理解本发明，不应理解为限制了本发明的范围。本文引用的所有申请、专利和出版物(如果有的话)均全文纳入本文作为参考。除非上下文需要，在本说明书和以下的权利要求书中，词语“包含”及其变化形式，例如“包含的”或“含有”应理解为表示包括所述整数或步骤或一组整数或步骤，而不排除任何其它整数或步骤或一组整数或步骤。本领域技术人员应知道，除了专门描述的那些，本文所述发明不难作出改变和改进。应知道本发明包括所有这些改变和改进。本发明也包括说明书中个别或共同提及或指示的所有步骤、特征、组合物和化合物，以及任两个或多个所述步骤或特征的任意和所有组合。本说明书中的参考文献不是，也不应理解为承认或以任何形式提示该现有技术构成所致力领域的公知知识。选择的参考文献ConstantinouAI，MehtaR，HusbandA.，2003，“一种新型的异黄酮衍生物，phenoxodiol在雌性Sprague-Dawley大鼠中抑制二甲基苯并蒽(DMBA)诱导的乳腺致癌作用”(Phenoxodiol，anovelisoflavonederivative，inhibitsdimethylbenz[a]anthracene(DMBA)-inducedmammarycarcinogenesisinfemaleSprague-Dawleyrats)，EurJCancer.，39，1012-8。ConstantinouAI，HusbandA.，2002，“一种新型异黄酮衍生物，phenoxodiol(2H-1-苯并吡喃-7-0，1，3-(4-羟苯基))能通过稳定可切割的复合物来抑制DNA拓扑异构酶II”(Phenoxodiol(2H-1-benzopyran-7-0，1，3-(4-hydroxyphenyl))，anovelisoflavonederivative，inhibitsDNAtopoisomeraseIIbystabilizingthecleavablecomplex)，AnticancerRes.，22，2581-5。Gamble，JR.，Xia，P.，Hahn，C.，Drew，J.，Drogemuller，C.，Carter，C.，Walker，C.，Brown，DM.，Vadas，MA.，2003，“一种植物类黄酮衍生物，phenoxodiol显示强抗肿瘤和抗血管生成特性”(Phenoxodiol，aderivativeofplantflavanoids，showspotentanti-tumourandanti-angiogenicproperties)，NatureMedicine.，已提交。Hersey，P和Zhang，X.D.，2001，“黑色素瘤细胞如何规避Trail-诱导的凋亡”(HowmelanomacellsevadeTrail-inducedapoptosis)，Naturereviews，Cancer，1，142-150。Kamsteeg，M.，Rutherford，T.，Sapi，E.，Hanczaruk，B.，Shahabi，S.，Flick，M.，Brown，D.M和Mor，G.，2003，“phenoxodiol，一种异黄酮类似物能在化学耐受卵巢癌细胞中诱导凋亡”(Phenoxodiol-anisoflvoneanalogue-inducesapoptosisinchemo-resistantovariancancercells)，Oncogene，22，2611-20。权利要求1.一种通式(I)所示的化合物或其盐或衍生物式中，R1是氢、羟基、卤素、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C1-6氟烷基或任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-6烷基；图样“”和R2一起代表双键或者图样“”表示单键，R2是氢、羟基、NR10R11、C1-3烷氧基、C1-3氟烷基、卤素或任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-3烷基；R3是氢、羟基、卤素、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C1-6氟烷基、C2-6烯基、COOR12、COR13、(O)nC1-4亚烷基NR14R15或任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-6烷基；R4、R5、R6、R7、R8和R9独立为氢、羟基、卤素、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C1-6氟烷基、C2-6烯基、COOR12、COR13或任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-6烷基；R10、R11和R12独立为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基或三烷基甲硅烷基；R13是氢、C1-6烷基、C3-6环烷基或NR10R11；n表示0或1；和R14和R15独立地代表氢或C1-6烷基或NR14R15，当二者结合在一起时代表5或6元的杂芳基或杂环基；及其药学上可接受的盐，前提是当R1代表氢且“”是单键时R2不代表氢。2.如权利要求1所述的式(I-a)所示的化合物或其盐或衍生物式中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8如权利要求1所定义。3.如权利要求2所述的式(I-b)所示的化合物或其盐或衍生物式中R1代表羟基、卤素、NR10R11、C3-6环烷基、C-6烷氧基、C2-6烯基、C1-6氟烷基、任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-6烷基；和R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9如权利要求2所定义。4.如权利要求3所述的式(I-bb)所示的化合物或其盐或衍生物式中R1、R3、R4、R7、R8和R9如权利要求3所定义。5.如权利要求4所述的化合物，其特征在于，它选自1-9、42和43号化合物。6.如权利要求1所述的式(I-c)所示的化合物或其盐或衍生物式中R2代表羟基、卤素、NR10R11、C1-3烷氧基、C1-3氟烷基、任选用一个或多个羟基、氯、溴、碘或NR10R11基团取代的C1-3烷基；R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9如权利要求1所定义。7.如权利要求6所述式(I-cc)所示化合物或其盐或衍生物式中R2、R3、R4、R6、R7、R8和R9如权利要求6所定义。8.如权利要求4所述的化合物，其特征在于，它选自10-25号化合物。9.如权利要求1所述的式(I-d)所示的化合物或其受保护的衍生物式中R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9如权利要求1所定义。10.如权利要求4所述的化合物，其特征在于，它选自26-41和44-45号化合物。11.一种制备权利要求1所述的式(I)所示化合物的方法，包括以下步骤i)用式(III)所示化合物或其受保护的衍生物处理式(II)所示化合物或其受保护的衍生物其中式(III)所示化合物为式(III)中R3代表氢、羟基、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C1-6氟烷基、C2-6烯基、COOR12、COR13、(O)nC1-4亚烷基NR14R15或任选为一个或多个羟基或NR10R11基团取代的C1-6烷基；R4和R5独立代表氢、羟基、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C1-6氟烷基、C2-6烯基、COOR12、COR13或任选用一个或多个羟基或NR10R11基团取代的C1-6烷基；和X代表金属卤代部分；式(II)所示化合物为式(II)中，R1是氢、羟基、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C1-6氟烷基、任选用一个或多个羟基或NR10R11基团取代的C1-6烷基；R6、R7、R8和R9独立地代表氢、羟基、NR10R11、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C1-6氟烷基、COOR12、COR13或任选用一个或多个羟基或NR10R11基团取代的C1-6烷基，和ii)随后任选将所形成产物的杂环上的叔醇基团转化为另一取代基，和iii)随后任选脱保护。12.一种或多种式(I)所示化合物在化疗或作为辐射敏化或化学敏化剂中的应用。13.一种治疗、预防或缓解疾病的方法，包括给予对象任选与载体和/或赋形剂组合的一种或多种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或衍生物。14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述疾病是癌症或肿瘤块。15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述癌症或肿瘤块是上皮来源(包括前列腺、卵巢、子宫颈、乳腺、胆囊、胰腺、结肠直肠、肾脏和非小细胞肺癌细胞)，间充质来源(包括黑色素瘤、间皮瘤和肉瘤癌细胞)和神经来源(包括神经胶质瘤癌细胞)。16.一种或多种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或衍生物在制备治疗疾病或病症的药物中的应用。17.一种治疗、预防或缓解疾病或病症的制剂，所述制剂包含一种或多种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或衍生物。18.一种药物组合物，包含与一种或多种药物载体、赋形剂、辅助剂和/或稀释剂组合的一种或多种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或衍生物。19.如权利要求18所述的药物组合物，其特征在于，还包含其它化疗药物。20.一种饮料或食品，含有一种或多种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或衍生物。21.一种本文参考实施例和/或附图所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐。22.一种如本文所述的式(II)、(III)或(IV)所示化合物，其药学上可接受的盐和/或其应用。全文摘要描述了新型取代的苯并二氢吡喃衍生物和中间体化合物，含有它们的组合物，它们的制备方法和作为治疗性药物，特别是抗癌症和化疗选择性药物的应用。文档编号A23L2/38GK101056868SQ200580038117公开日2007年10月17日申请日期2005年9月21日优先权日2004年9月21日发明者A·希顿,A·J·赫斯本德申请人:诺沃根研究控股有限公司