专利名称：一种牛口涎酶粗品的制备方法
技术领域：
本发明属于生化试剂酶技术领域，它解决了目前没有牛口涎酶制 品的问题。具体涉及一种牛口涎酶粗品的制备方法。 脊景技术目前，我国对牛口涎成分、作用机理研究的很少，还没有关于牛 口涎酶制品的发明专利。据资料表明唾涎是由遍布口腔粘膜深处的 许多大大小小的唾涎腺分泌出来的。大的唾液现有三对腮腺、颌下 腺、舌下腺，小的有唇腺、舌腺、颊腺、腭腺等。唾涎95%以上是水 分，还有动物健康必需的淀粉酶、溶菌酶、过氧化酶、过氧化氢酶、 粘蛋白、球蛋白、肾上腺皮质激素、高血糖、维生素C、氨基酸、磷 酸锌'、钾、钠、钙、镁、氯等多种成分。唾涎淀粉酶是三大唾液腺中 腮腺所分泌的一种水解的酶类，其主要作用是分解淀粉，使淀粉链中 a-1，4葡萄糖苷键水解，生成麦芽糖，麦芽丙糖和糊精混合物，因 而，唾液淀粉酶是消化代谢过程中必不可少的酶类；唾液还有可以清 除口腔中食物残渣和异物，保持口腔的清洁；唾涎具有抗菌和凝血 的作用，如口腔里的伤口往往比其它地方好得快，主要原因在于唾涎 中的溶菌酶有杀菌的能力，可阻止口腔内细菌的大量繁殖；唾涎中的 过氧'化物酶、过氧化氢酶和维生素C等具有抗癌能力，能过消除致癌 物质的毒性。牛口涎酶的功效牛口涎酶是可能是一种复合酶，它含有a-1,4淀粉酶，还可能含有蛋白酶、纤维素酶、溶菌酶、过氧化物酶及过氧化氢酶等等。中医认为牛口涎的功能是治噎膈，反胃呕吐；外用可治 疣目，目睛损伤等症。
发明内容
本发明牛口涎酶粗品的制备方法解决了目前没有牛口涎酶制品 的问题，其产品便于生化研究和生物制品的应用。 本发明的技术方案如下'一种牛口涎酶粗品的制备方法，其特征在于，它是由以下的制备 方法获得的。1、 实验动物长春市奋进乡5头黄牛，身体健康，检疫合格。2、 牛口涎采收和储藏牛口涎为牛科动物黄牛或水牛的唾涎。 以水洗牛口，从试验牛的口腔中拉出舌头，涂抹少放食盐或生姜， 稍候接取自然流出口腔外的唾涎，用塑料袋收集，鲜用或冷藏。3、 粗酶提取方法制备条件是牛口涎酶制备温度小于1(TC， 将收集的牛口涎用40目筛网过滤，去杂质，取滤液，在搅拌下加 5mol/LHCl，调pH值为4一5，加0. 6mol/L ZnCh适量，再用5mol/L NaOH在搅拌下调pH值为8—9，离心或过滤，弃上清液或滤液，取 沉淀，采用自然风干或小于4(TC低温干燥法(气流干燥、冷冻干燥)， 水分小于16%，即得牛口涎酶粗品。4、蛋白质含量测定法采用考马斯亮蓝法(Bradford法)。5、 唾涎淀粉酶活性的测定按崔福生《医学生化检测手册》天津天津科学技术出版社，1982， 785—795记载的方法进行唾涎淀 粉,活性的测定。6、 工艺流程验验无病的牛口涎一制备条件是牛口涎温度小于10°C—用40目 筛网过滤一弃杂质一留滤液一在搅拌下加5mol/L HC1，调pH值为4 一5—加牛口涎体积的三分之一的0.6mol/L ZnCl2—用5mol/L NaOH 在搅拌下调pH值为8—9—离心或过滤一弃上清液或滤液一取沉淀一 用自然风干或小于4(TC低温干燥法(气流干燥、冷冻干燥)，水分小 于16%—包装即得牛口涎酶粗品，4'C冷藏保存。7、 技术要点(1) 牛口涎原料验收试验动物必须经过严格检验，来源于非 疫区、无疾病牛的牛口涎。制备条件是牛口涎温度小于10'C。(2) 去杂质用40目筛网过滤，弃杂质，留滤液。(3) 调酸性在搅拌下加5mol/L HC1，调pH值为4一5，便于 下面的ZnCl2更好溶解。,(4)中性盐沉淀加牛口涎体积的三分之一的0.6mol/L ZnCl2 使牛口涎中的酶和蛋白质沉淀。选择氯化锌是因为用量少、盐析作用 强、对粗酶的使用无毒副作用及不良影响。(5)调碱性用5mol/L Na0H调pH值8—9是从沉淀和产品含 量考虑。 一方面pH越高越有利于沉淀，另一方面牛口涎中的中性蛋白酶在pH值7处对牛口涎中各种酶和蛋白质分解越大，还有pH值 太低与太高都不有利于牛口涎酶的稳定。(6) 离心或过滤离心方法是离心机转速大于4000转/分，过 滤方法可采用真空过滤、加压过滤或常压过滤，弃上清液或滤液，取 沉淀。(7) 干燥用自然风干或小于4(TC低温干燥法(气流干燥、冷 冻干燥)，水分小于16%。(8) 包装放入瓶内或塑料袋包装，也可采用真空包装，4t冷 藏保存。本发明产品的特点粉状、色泽灰白，可溶于水。本发明的优点工艺稳定，收率高，适合广大农户从牛口涎中提 取粗酶制品。
具体实施方式
实施例本发明牛口涎酶粗品原辅料如下牛口涎 l公斤5mol/L HC1 约20ml0. 6mol/L ZnCl2 330ml(约0. 027公斤ZnCl2)5mol/L Na0H 约50ml制作过程制备条件是牛口涎温度小于l(TC，将收集的牛口涎用40目筛网 过滤，去杂质，取滤液，在搅拌下加5mol/L HC1，调pH值为4一5， 加0. 6mol/L ZnCl2适量，再用5mol/L NaOH在搅拌下i周pH值为8— 9，离心或过滤，弃上清液或滤液，取沉淀，采用自然风干或小于 4CTC低温干燥法(气流干燥、冷冻干燥)，水分小于16%，即得牛 口涎酶粗品约10克。水分分析法采用烘干法测水分，牛口涎酶粗的水分含量15% 。蛋白质含量测定法采用考马斯亮蓝法(Bradford法)，牛口 涎酶粗的蛋白质含量为45%。唾涎淀粉酶活性的测定按崔福生《医学生化检测手册》天津 天津科学技术出版社，1982， 785—795记载的方法进行唾涎淀粉酶 活性的测定。牛口涎酶粗的唾涎淀粉酶活性为11 IU/g ( IU/g指每 克粗酶样中唾涎淀粉酶活性为酶的国际单位)。
权利要求
1、一种牛口涎酶粗品的制备方法，其特征在于它用中性盐氯化锌制备牛口涎酶粗品。
2、 如权利要求l所述的一种牛口涎酶粗品的制备方法，其特征 是制备步骤和条件如下制备条件是牛口涎制备粗酶的反应温度小 于1(TC，将收集的牛口涎用40目筛网过滤，去杂质，取滤液，在搅拌下加HCl，调pH值为4一5，加ZnCl2溶液适量，再用NaOH在搅 拌下调pH值为8—9，离心或过滤，弃上清液或滤液，取沉淀，采 用自然风干或小于40'C低温干燥法(气流干燥、冷冻干燥)，水分 小于16%，即得牛口涎酶粗品。
全文摘要
本发明属于生化试剂酶技术领域，具体涉及一种牛口涎酶粗品的制备方法，其产品便于生化研究和生物制品的应用。本发明通过中性盐氯化锌制备牛口涎粗酶，其的优点是工艺稳定，收率高，便于操作，适合广大基层农户从牛口涎中提取粗酶。
文档编号C12N9/98GK101245341SQ20081005053
公开日2008年8月20日 申请日期2008年3月24日 优先权日2008年3月24日
发明者丽 焦, 王有为 申请人:焦 丽;王有为