专利名称：虫荧光素酶稳定剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种酶稳定剂，特别是涉及一种虫荧光素酶稳定剂。
背景技术：
生物发光是在自然界广泛存在的、有生命的生物产生的一种发光现象。发光的生物种 类有很多，包括发光细菌、发光萤火虫、发光鱼、发光海星、发光甲虫等。而能催化荧光 素或脂肪醛氧化产生生物发光的一类酶即为荧光素酶。从20世纪50年代就已经开始了对 荧光素酶的研究。应用荧光素酶大大增加了生物发光免疫分析技术的灵敏度和应用范围， 并且由于具有敏感性高，特异性好，反应迅速，操作简单，应用范围广等特点，已成为医 学、生物学、环境科学等研究领域中一种新的手段。
虫荧光素酶能有效的催化由三磷酸腺苷(ATP)，荧光素，氧气组成的反应，将生物能转 变成光能发出荧光。虫荧光素酶生物发光技术在食品，医学，农业，生命科学等领域有广 阔的应用前景。但虫荧光素酶对温度及冻融等因素极为敏感，使用时需分装保存在-18'C冰 箱中，否则极易失活。虫荧光素酶的酶活不稳定性，较大的影响了其开发应用。亟需一种 虫荧光素酶稳定剂，为虫荧光素酶的大规模应用扫除障碍。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种虫荧光素酶稳定剂。
本发明的技术方案概述如下
荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油80g/L-120g/L，海藻糖0.08-0.12 mol/L，余量为
双蒸水。
荧光素酶稳定剂中还可以包括还原性谷胱甘肽0.4 -0.6 mmol/L或二硫苏糖醇0.4 -0.6 mmol/L。
荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油80g/L-120g/L,海藻糖0.08-0.12 mol/L，还原性 谷胱甘肽0.4 -0.6 mmol/L和二硫苏糖醇0.4 -0.6 mmol/L，余量为双蒸水。 所述甘油优选为100g/L。 所述海藻糖优选为0.1mol/L。 所述还原性谷胱甘肽优选为0.5mmol/L。 所述二硫苏糖醇优选为0.5mmol/L。 本发明的优点
本发明的虫荧光素酶稳定剂对虫荧光素酶的活性有保护作用，使虫荧光素酶对温度及 冻融等因素不敏感，使用时分装保存在4'C冰箱中。虫荧光素酶稳定性加强，保存时间长， 使用更为方便快捷。
图1为甘油和海藻糖组成的荧光素酶稳定剂对酶保护作用。
图2为甘油、海藻糖和还原型谷胱甘肽(GSH)组成的荧光素酶稳定剂对酶保护作用。 图3为甘油、海藻糖和二硫苏糖醇(DTT)组成的荧光素酶稳定剂对酶保护作用。
3图4为甘油、海藻糖、GSH和DTT组成的荧光素酶稳定剂(混合保护剂)对酶保护作 用。 '
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明作进一歩的说明。
实施例1
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油100g/L，海藻糖0.1mol/L，余量为双蒸水。 实施例2
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油80g/L，海藻糖0.08 mol/L，余量为双蒸水。 实施例3
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油100g/L,海藻糖0.12mol/L，余量为双蒸水。 实施例4
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油120g/L，海藻糖0.1mol/L，余量为双蒸水。 实施例5
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油100g/L，海藻糖0.1mol/L，还原性谷胱甘肽 0.5mmol/L,余量为双蒸水。 实施例6
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油80g/L，海藻糖0.08mol/L，还原性谷胱甘肽 0.4mmol/L，余量为双蒸水。 实施例7
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油100g/L，海藻糖0.12 mol/L，还原性谷胱甘 肽0.5mmol/L，余量为双蒸水。 实施例8
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油120g/L，海藻糖0.1mol/L，还原性谷胱甘肽 0.6mmol/L，余量为双蒸水。 实施例9
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油100g/L,海藻糖0.1 mol/L， 二硫苏糖醇0.5 mmol/L，余量为双蒸水。 实施例10
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油80g/L,海藻糖0.08 mol/L， 二硫苏糖醇0.4 mmol/L，余量为双蒸水。 . '
实施例11
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油100g/L，海藻糖0.12 mol/L， 二硫苏糖醇0.6 mmol/L，余量为双蒸水。
实施例12 ,
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油100g/L,海藻糖0.12 mol/L， 二硫苏糖醇0.5 mmol/L，余量为双蒸水。
4实施例13
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油100g/L，海藻糖0.1mol/L，还原性谷胱甘肽 0.5mmol/L， 二硫苏糖醇0.5 mmol/L，余量为双蒸水。 实施例14
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油80g/L，海藻糖0.08mol/L，还原性谷胱甘肽 0.4mmol/L， 二硫苏糖醇0.5 mmol/L，余量为双蒸水。 实施例15
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油100g/L，海藻糖0.12 mol/L，还原性谷胱甘 肽0.5mmol/L， 二硫苏糖醇0.6 mmol/L，余量为双蒸水。 实施例16
虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油120g/L，海藻糖0.1mol/L，还原性谷胱甘肽 0.6mmol/L， 二硫苏糖醇0.4 mmol/L，余量为双蒸水。 实验效果
按照以上实施方案并各选用4个浓度水平，分别选用不同因素不同浓度水平进行正交 试验，按照设计规定的水平进行试验，共16组平行试验。记录试验数据后，按照正交表的 极差和方差分析方法分析所得以下结论。
_正交试验的因素和水平_
因素 甘油 海藻糖 GSH DTT 水平_
1 100g/L 0.1mol/L 0.5mmol/L 0.5mmol/L
2 80g/L 0.08mol/L0,4mmol/L 0.4mmol/L
3 100g/L 0.12mol/L0.5mmol/L 0.6mmol/L
4 120g/L 0.1mol/L 0.6mmol/L 0.5mmol/L
结论一通过前四组中的甘油和海藻糖的IH交比较发现甘油和海藻糖都有提高酶稳定作用
但是不同的浓度效果不同，当甘油是100g/L，海藻糖是O. lraol/L时保护效果最佳。 结论二当在甘油和海藻糖混合剂的基础上加入GSH时保护作用进一歩加强，其中GSH 的最适浓度为0.5mmol/L;同样在甘油和海藻糖混合剂的基础上加入DTT也有进一歩保护 作用其中DTT的最适浓度为0.5mmol/L。
结论三当把四种保护剂同时加到荧光素酶缓冲液中保护作用最强，通过正交试验发现最 佳组合是甘油100g/L，海藻糖0.1mol/L， GSH0.5mmol/L， DTT0.5mmol/L。
权利要求
1. 虫荧光素酶稳定剂，其特征是包括下述组分甘油80g/L-120g/L，海藻糖0.08-0.12mol/L，余量为双蒸水。
2. 根据权利要求1所述的虫荧光素酶稳定剂，其特征是还包括还原性谷胱甘肽0.4 -0.6mmol/L。
3. 根据权利要求1所述的虫荧光素酶稳定剂，其特征是还包括二硫苏糖醇0.4 -0.6 mmol/L。
4. 根据权利要求1所述的虫荧光素酶稳定剂，其特征是还包括:还原性谷胱甘肽0.4-0.6 mmol/L， 二硫苏糖醇0.4 -0.6 mmol/L。
5. 根据权利要求l-4之一所述的虫荧光素酶稳定剂，其特征是所述甘油为100g/L。
6. 根据权利要求l-4之一所述的虫荧光素酶稳定剂，其特征是所述海藻糖为0.1mol/L。
7. 根据权利要求2或4所述的虫荧光素酶稳定剂，其特征是所述还原性谷胱甘肽为 0.5mmol/L。
8. 根据权利要求3或4所述的虫荧光素酶稳定剂，其特征是所述二硫苏糖醇为 0.5mmol/L。
全文摘要
本发明公开了一种虫荧光素酶稳定剂，包括下述组分甘油80g/L-120g/L，海藻糖0.08-0.12mol/L，余量为双蒸水。本发明的虫荧光素酶稳定剂对虫荧光素酶的活性有保护作用，使虫荧光素酶对温度及冻融等因素不敏感，使用时分装保存在4℃冰箱中。虫荧光素酶稳定性加强，保存时间长，使用更为方便快捷。
文档编号C12N9/96GK101463347SQ20081015459
公开日2009年6月24日 申请日期2008年12月26日 优先权日2008年12月26日
发明者刘艳杰, 霍刘杰, 鹤 黄 申请人:天津大学