专利名称：固定化微生物细胞酶法制备l-2-氨基脂肪酸的方法
技术领域：
本发明涉及利用固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基脂肪酸的方 法，更具体的说本发明涉及将含氨基酰化酶的微生物细胞固定化，通 过固定化细胞内酶的作用将底物N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸拆分为L-2-氨基脂肪酸和N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸，N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸经消 旋后再次酶法拆分又可得到L-2-氨基脂肪酸。属酶工程技术领域。
二背景技术：
2-氨基丁酸是抑制人体神经信息传递的脂肪族氨基酸，临床可用 于脑血管病后遗症，并具有降压作用；2-氨基丁酸还是一种重要的化 工原料和医药中间体，已广泛应用于药物合成，如盐酸乙胺丁醇、左 乙拉西坦等。2-氨基戊酸(正缬氨酸)是合成药物培哚普利的关键中 间体，此外在枯草芽孢杆菌产生的一种抗真菌多肽中也发现了正缬氨 酸。2-氨基己酸(正亮氨酸)也是一种应用广泛的药物中间体。根据 目前文献报导，以上三种2-氨基脂肪酸的制备方法主要有以下三种 1、化学法
2007年，奚强等(武汉工程大学学报，Vol. 29， No.4， 2007)以 正丁酸和溴为原料合成了 2-溴丁酸，再以2-溴丁酸与氨水反应制备 了 DL-2-氨基丁酸，其收率为62.5%。
2007年，陈新志等(CN 101007772A, 2007)以正丁醛、氰化钠 和氯化铵为原料首先制备了氨基戊腈，经腈基酰胺化、L-酒石酸拆分、水解等步骤得到L-正缬氨酸。 .
2006年，陈新志等(CN 100427460C, 2006)以正戊酸为原料， 经酰氯化、溴化、氨化得到外消旋2-氨基戊酰胺，利用L-酒石酸拆 分后水解得到L-正缬氨酸。
2004年，王旭(CN 100352801C， 2004)以正丁醛和丙酮氰醇为 主要起始原料，依次经过氰基化、氨化、氰基酰胺化得到外消旋2-氨基戊酰胺，利用L-酒石酸拆分后水解得到L-正缬氨酸。
1991年，Tadashi等(Bull. Chen. Soc. Jpn.， 64， 1991)以N-乙 酰-L-丙氨酸铵盐为共溶物，以替代结晶法在乙醇中光学拆分了 N-乙 酰-DL-氨基丁酸铵盐、N-乙酰-DL-正缬氨酸铵盐以及N-乙酰-DL-正 亮氨酸铵盐，其中N-乙酰-L-正缬氨酸铵盐收率达800/0。
1986年，Compagnone等(J. Org. Chem.， 51(10)， 1986)将L-蛋氨酸在T-1雷尼镍作用下脱去甲硫基生成L-2-氨基丁酸。
1978年，Jeffery等(Aust. J. Chem.， 31(1)， 1978)利用荥电极 在氨水或氯化铵溶液中电催化还原其相应的酮式氨基酸(或氨基酸钠 盐)的方法，制备了DL-2-氨基丁酸，产率仅为48%，且有副产物谷 氨酸生成。
1970年，Mahendra等(Canadian Journal of Chemistry, 48， 1970)
以氢氰酸加成希夫碱的方法不对称合成了正缬氨酸、正亮氨酸以及亮 氨酸，收率40%-60%。其具体步骤为利用甲基苄胺和脂肪醛制备 希夫碱，然后氢氰酸加成得到氨基腈，酸水解得到N-取代的氨基酸， 加氢催化得到苯乙烷和a-氨基酸。1965年，Babievskii等(Seriya Khimicheskaya， No.l， 1965)将
硝基乙酸甲酯、乙醛和乙酰氯的反应产物经催化加氢后得DL-2-氨基 丁酸甲酯，水解后制备了 DL-2-氨基丁酸，产率较低还有副产物苏氨 酸生成。
1954年，Losse等(Chemische Berichte， 87(9)， 1954)利用手性 拆分剂D-酒石酸或联苯甲酰-D-酒石酸拆分DL-2-氨基丁酸分别得到
其对应光学异构体。
2、 发酵法
2000年，Tomoihiro等(JP 2000279163 (A)， 1983)利用高红曲 生产L-2-氨基丁酸。
1997年，Andrey等(Applied and Environmental Microbiology, Dec. 1997)利用重组大肠杆菌生物合成了 L-亮氨酸、L-缬氨酸、L-正缬氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸和L-酪氨酸，收率80%以上。
1983年，中西俊秀等(JP 63287493 (A), 1983)采用大肠杆菌属 或谷氨酸棒杆菌属的微生物发酵法制备了 L-2-氨基丁酸。
1977年，Masahiko等(Applied and Environmental Microbiology, Aug. 1977)以Serratiamarcescens正亮氨酸耐受突变株发酵法积累正 亮氨酸。
3、 酶法
2009年，焦庆才等(CN 200910030982.8， 2009)利用微生物来 源或基因工程来源的氨基酰化酶，以N-乙酰-DL-2-氨基丁酸为底物制 备了L-2-氨基丁酸，收率达78%以上。
62008年，Daniel等(Eur. J. Org. Chem.， 2008， 3506-3512)利用
碱性蛋白酶A在醛存在的条件下动态拆分DL-正缬氨酸乙酯得到L-
正缬氨酸。
2008年，苗维娟等(过程工程学报，8(1)， 2008)将甘油脱氢酶 和亮氨酸脱氢酶偶联，以甘油和2-丁酮酸为底物，同时合成l, 3-二 羟基丙酮和L-2-氨基丁酸。.
1999年，Fotheringham等(Bioorganic & Medicinal Chemistry, 7 (10)， 1999)利用大肠杆菌K12菌体细胞以L-苏氨酸和L-天冬氨酸 为底物通过转氨反应合成了 L-2-氨基丁酸。
1989年,Chenault等(J. Am. Chem. Soc.， 1989， 6354-6364)以 猪肾和米曲霉来源的氨基酰化酶I拆分了 N-乙酰-DL-氨基丁酸、N-乙酰-DL-正缬氨酸等50几种N-乙酰-a-氨基酸及其衍生物。
1945年，Greenstein等(Journal of Biological Chemistry, 182(2)， 1945)利用猪肾中提取的氨基酰化酶不对称水解N-氯乙酰外消旋正 亮氨酸、正缬氨酸和a-氨基丁酸得到了其对应的L-型和D-型异构体， 其中L-型和D-型的收率分别为70%和60%。
利用游离细胞或酶转化制备L-2-氨基脂肪酸，转化液中会含有少 量菌体蛋白或其它杂质，不利于产物的分离纯化，菌体细胞或酶的重 复利用率也不高。
到目前为止，利用固定化含氨基酰化酶的微生物细胞酶法制备 L-2-氨基脂肪酸的方法还未见报导。 三、发明内容1、 发明目的
本发明目的在于提供一种固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基 脂肪酸的方法。
2、 技术方案
一种利用固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基脂肪酸的方法，其 特征在于制备步骤如下
(1) 细胞固定化
将发酵获得的含氨基酰化酶的菌体细胞和包埋剂混合均匀，加入 成型剂中固化成型，或固化成型后再加入强化剂进行强化处理，即得 固定化细胞；
(2) N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸生物转化
将固定化细胞装柱，使N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸水溶液流经酶柱 进行生物转化，收集流出的转化液，转化液重复上柱，直至转化液中 N-乙酰-L-2-氨基脂肪酸反应完全；
(3) L-2-氨基脂肪酸分离纯化 上述转化液用活性炭脱色去除杂质，浓縮、冷却结晶或用活性炭
脱色除杂质后用阳离子交换柱分离，得到L-2-氨基脂肪酸和N-乙酰 -D-2-氨基脂肪酸，其中N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸经消旋，得N-乙酰 -DL-2-氨基脂肪酸再次用于酶柱拆分。
上述步骤(1)中所述含氨基酰化酶的菌体为刺孢小克银汉霉 9980、米曲霉、基因工程菌1016或基因工程菌DM202。
上述步骤(1)中所述菌体细胞和包埋剂混合后的浓度为10 200g/L，在成型剂中固定化时间为l 48h，强化剂处理时间为10 180min。
上述步骤(1)中所述的包埋剂为海藻酸钠、卡拉胶、明胶或壳 聚糖，所述的成型剂为氯化钙、氯化钾或磷酸钠溶液，所述的强化剂 为戊二醛。其中包埋剂海藻酸钠或卡拉胶浓度为10 50g/L，成型剂 氯化钙或氯化钾水溶液浓度为10 60g/L;包埋剂明胶浓度为50 200g/L，胶体强化剂戊二醛的浓度为5 30g/L;包埋剂壳聚糖浓度为 10 100g/L，成型剂为pH6 8的磷酸钠溶液。
上述步骤(2)中所述的N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸为N-乙酰-DL-2-氨基丁酸、N-乙酰-DL-2-氨基戊酸或N-乙酰-DL-2-氨基己酸。
上述步骤(2)中所述的N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸水溶液浓度为 50 400g/L， pH6.0 9.0，流经酶柱的速度为100 1000mL/h，转化 温度为25 60°C。 3、有益效果
本发明利用固定化微生物细胞酶法拆分N-乙酰-DL-2-氨基脂肪 酸得到L-2-氮基脂肪酸，反应条件温和，酶法转化效率高，产物易于 分离纯化且固定化细胞可重复使用，具有生产成本低、工艺流程简单、 适合工业化生产等优点。具体实施例方式
实施例1固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基丁酸的方法
取1000mL剌孢小克银汉霉9980发酵液，2000r/min离心20min 收集菌体，菌体湿重40g。洗入700mL30g/L海藻酸钠水溶液中，混匀，然后用注射器将含有菌体的海藻酸钠水溶液滴入lOOOmL 20g/L 氯化钙水溶液中，固化2h后去除氯化钙溶液，并用生理盐水洗涤三 次。
将所得固定化细胞装入直径4cm，高50cm的玻璃柱中。1000mL 10% N-乙酰-DL-2-氨基丁酸钠水溶液以300mL/h流经酶柱，控制温度 45°C， pH6.5，流出液重复上柱直至底物转化完全。
将转化完全的流出液升温至7(TC加入活性炭脱色，真空浓縮至 150mL，冷却结晶，真空过滤得L-2-氨基丁酸粗品，烘干得26g;将 26g粗品加入到150mL75。/o乙醇中，搅拌洗涤，真空抽滤得L-2-氨基 丁酸18.3g;将乙醇滤液蒸发浓縮，将浓缩液与粗品母液合并，用6 mol/L盐酸调pH2.0，冷却结晶，真空过滤得N-乙酰-D-2-氨基丁酸粗 品，烘干得47g，粗品母液循环套用。N-乙酰-D-2-氨基丁酸经消旋后 再次用于酶柱拆分。
实施例2固定化微生物细胞酶法制备L-正缬氨酸的方法
取1000mL米曲霉发酵液，2000r/min离心20min收集菌体，菌 体湿重34g。洗入600mL30g/L海藻酸钠水溶液中，混匀，然后用注 射器将含有菌体的海藻酸钠水溶液滴入1000mL 20g/L氯化钙水溶液 中，固化2h后去除氯化钙溶液，并用生理盐水洗涤三次。
将所得固定化细胞装入直径4cm，高50cm的玻璃柱中。1000mL 10% N-乙酰-DL-正缬氮酸钠水溶液以300mL/h流经酶柱，控制温度 45°C， pH7.5，流出液重复上柱直至底物转化完全。
将转化完全的流出液升温至7(TC加入活性炭脱色，真空浓縮至180mL，冷却结晶，真空过滤得L-正缬氨酸粗品，烘干得31g;将31g 粗品加入到180mL 75%乙醇中，搅拌洗涤，真空抽滤得L-正缬氨酸 24.7g;将乙醇滤液蒸发浓縮，将浓縮液与粗品母液合并，用6mol/L 盐酸调pH2.0，冷却结晶，真空过滤得N-乙酰-D-正缬氨酸粗品，烘 干得51.5g，粗品母液循环套用。N-乙酰-D-正缬氨酸经消旋后再次用 于酶柱拆分。
实施例3固定化微生物细胞酶法制备L-正亮氨酸的方法
取1000mL刺孢小克银汉霉9980发酵液，2000r/min离心20min 收集菌体，菌体湿重41g。洗入700mL30g/L海藻酸钠水溶液中，混 匀，然后用注射器将含有菌体的海藻酸钠水溶液滴入lOOOmL 20g/L 氯化钙水溶液中，固化2h后去除氯化钙溶液，并用生理盐水洗涤三 次。
将所得固定化细胞装入直径4cm，高50cm的玻璃柱中。1000mL 10% N-乙酰-DL-正亮氨酸钠水溶液以300mL/h流经酶柱，控制温度 45°C， pH7.0，流出液重复上柱直至底物转化完全。
将转化完全的流出液升温至7(TC加入活性炭脱色，真空浓縮至 200mL，冷却结晶，真空过滤得L-正亮氨酸粗品，烘干得32.3g;将 32.3g粗品加入到200mL75。/。乙醇中，搅拌洗涤，真空抽滤得L-正亮 氨酸25g;将乙醇滤液蒸发浓縮，将浓縮液与粗品母液合并，用6 mol/L 盐酸调pffi.O，冷却结晶，真空过滤得N-乙酰-D-正亮氨酸粗品，烘 干得55g，粗品母液循环套用。N-乙酰-D-正亮氨酸经消旋后再次用 于酶柱拆分。实施例4固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基丁酸的方法
取1000mL米曲霉发酵液，2000r/min离心20min收集菌体，菌 体湿重36g。洗入600mL30g/L卡拉胶水溶液中，混匀，然后用注射 器将含有菌体的卡拉胶水溶液滴入1000mL 40g/L氯化钾水溶液中， 固化4h后去除氯化钾溶液，并用生理盐水洗涤三次。
将所得固定化细胞装入直径4cm，高50cm的玻璃柱中。lOOOmL 20% N-乙酰-DL-2-氨基丁酸钠水溶液以200mL/h流经酶柱，控制温度 45°C， pH7.0，流出液重复上柱直至底物转化完全。
将转化完全的流出液升温至7(TC加入活性炭脱色，真空浓縮至 250mL，冷却结晶，真空过滤得L-2-氨基丁酸粗品，烘干得53.2g; 将53.2g粗品加入到250mL75。/。乙醇中，搅拌洗涤，真空抽滤得L-2-氨基丁酸36g;将乙醇滤液蒸发浓縮，将浓縮液与粗品母液合并，用 6mol/L盐酸调pH2.0，冷却结晶，真空过滤得N-乙酰-D-2-氨基丁酸 粗品，烘干得98g，粗品母液循环套用。N-乙酰-D-2-氨基丁酸经消旋 后再次用于酶柱拆分。
实施例5固定化微生物细胞酶法制备L-正缬氨酸的方法
取1000mL基因工程菌1016发酵液，4000r/min离心20min收集 菌体，菌体湿重15g。洗入300mL30g/L卡拉胶水溶液中，混匀，然 后用注射器将含有菌体的卡拉胶水溶液滴入600mL 40g/L氯化钾水 溶液中，固化4h后去除氯化钾溶液，并用生理盐水洗涤三次。
将所得固定化细胞装入直径4cm，高50cm的玻璃柱中。1000mL 20% N-乙酰-DL-正缬氨酸钠水溶液以200mL/h流经酶柱，控制温度45°C， pH7.0，流出液重复上柱直至底物转化完全。
将转化完全的流出液升温至7(TC加入活性炭脱色，真空浓缩至 300mL，冷却结晶，真空过滤得L-正缬氨酸粗品，烘干得59g;将59g 粗品加入到300mL 75%乙醇中，搅拌洗涤，真空抽滤得L-正缬氨酸 44g;将乙醇滤液蒸发浓縮，将浓缩液与粗品母液合并，用6 mol/L 盐酸调pH2.0，冷却结晶，真空过滤得N-乙酰-D-正缬氨酸粗品，烘 干得105g，粗品母液循环套用。N-乙酰-D-正缬氨酸经消旋后再次用 于酶柱拆分。
实施例6固定化微生物细胞酶法制备L-正亮氨酸的方法
取1000mL基因工程菌DM202发酵液，4000r/min离心20min收 集菌体，菌体湿重15g。洗入300mL30g/L卡拉胶水溶液中，混匀， 然后用注射器将含有菌体的卡拉胶水溶液滴入600mL 40g/L氯化钾 水溶液中，固化4h后去除氯化钾溶液，并用生理盐水洗涤三次。
将所得固定化细胞装入直径4cm，高50cm的玻璃柱中。1000mL 20% N-乙酰-DL-正亮氨酸钠水溶液以200mL/h流经酶柱，控制温度 45°C， pH7.0，流出液重复上柱直至底物转化完全。
将转化完全的流出液升温至7(TC加入活性炭脱色，真空浓縮至 350mL，冷却结晶，真空过滤得L-正亮氨酸粗品，烘干得63g;将63g 粗品加入到350mL 75%乙醇中，搅拌洗涤，真空抽滤得L-正亮氨酸 47.6g;将乙醇滤液蒸发浓縮，将浓缩液与粗品母液合并，用6mol/L 盐酸调pH2.0，冷却结晶，真空过滤得N-乙酰-D-正亮氨酸粗品，烘 干得110g，粗品母液循环套用。N-乙酰-D-正亮氨酸经消旋后循再次用于酶柱拆分。
实施例7固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基丁酸的方法
取1000mL基因工程菌1016发酵液，4000r/min离心20min收集 菌体，菌体湿重15g。洗入300mL60g/L明胶水溶液中，混匀，然后 置于4"凝固，固化10h后将胶块切成5mmx5mm的胶粒，并用600mL 1%戊二醛交联lh。去除戊二醛水溶液，并用生理盐水洗涤三次。
将所得固定化细胞装入直径4cm,高50cm的玻璃柱中。1000mL 30% N-乙酰-DL- 2-氨基丁酸钠水溶液以150mL/h流经酶柱，控制温 度45。C， pH7.0，流出液重复上柱直至底物转化完全。
将转化完全的流出液升温至7(TC加入活性炭脱色，真空浓縮至 350mL，冷却结晶，真空过滤得L-2-氨基丁酸粗品，烘干得79.4g; 将79.4g粗品加入到350mL 75%乙醇中，搅拌洗涤，真空抽滤得L- 2-氮基丁酸54.8g;将乙醇滤液蒸发浓縮，将浓縮液与粗品母液合并， 用6mol/L盐酸调pH2.0，冷却结晶，真空过滤得N-乙酰-D-2-氨基丁 酸粗品，烘干得153g，粗品母液循环套用。N-乙酰-D-2-氨基丁酸经 消旋后再次用于酶柱拆分。
实施例8固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基丁酸的方法
取1000mL基因工程菌DM202发酵液，4000r/min离心20min收
集菌体，菌体湿重15g。洗入500mL20g/L壳聚糖水溶液中，混匀，
然后将含有菌体的壳聚糖溶液滴入pH7.5， 40g/L磷酸钠溶液中固化
24h。去除磷酸钠溶液，并用生理盐水洗涤三次。
将所得固定化细胞装入直径4cm，高50cm的玻璃柱中。1000mL30% N-乙酰-DL- 2-氨基丁酸钠水溶液以150mL/h流经酶柱，控制温 度45。C， pH7.5，流出液重复上柱直至底物转化完全。
将转化完全的流出液升温至7(TC加入活性炭脱色，真空浓缩至 350mL，冷却结晶，真空过滤得L-2-氨基丁酸粗品，烘干得77.8g; 将77.8g粗品加入到350mL75。/。乙醇中，搅拌洗涤，真空抽滤得L-2-氨基丁酸52g;将乙醇滤液蒸发浓缩，将浓縮液与粗品母液合并，用 6mol/L盐酸调pH2.0，冷却结晶，真空过滤得N-乙酰-D-2-氨基丁酸 粗品，烘干得158g，粗品母液循环套用。N-乙酰-D-2-氨基丁酸经消 旋后再次用于酶柱拆分。
权利要求
1、一种固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基脂肪酸的方法，其制备步骤如下(1)细胞固定化将发酵获得的含氨基酰化酶的菌体细胞和包埋剂混合均匀，加入成型剂中固化成型，或固化成型后再加入强化剂进行强化处理，即得固定化细胞；(2)N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸生物转化将固定化细胞装柱，使N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸水溶液流经酶柱进行生物转化，收集流出的转化液，转化液重复上柱，直至转化液中N-乙酰-L-2-氨基脂肪酸反应完全；(3)L-2-氨基脂肪酸分离纯化上述转化液用活性炭脱色去除杂质，浓缩、冷却结晶或用活性炭脱色除杂质后用阳离子交换柱分离，得到L-2-氨基脂肪酸和N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸，其中N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸经消旋，得N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸再次用于酶柱拆分。
2、 根据权利要求1所述的固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于步骤(1)中所述含氨基酰化酶的菌体为刺孢 小克银汉霉9980、米曲霉、基因工程菌1016或基因工程菌DM202。
3、 根据权利要求1所述的固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于步骤(1)中所述菌体细胞和包埋剂混合后的 浓度为10 200g/L，在成型剂中固定化时间为1 48h,强化剂处理时间为10 180min。
4、 根据权利要求1所述的固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于步骤(1)中所述的包埋剂为海藻酸钠、卡拉 胶、明胶或壳聚糖，所述的成型剂为氯化钙、氯化钾或磷酸钠溶液， 所述的强化剂为戊二醛。
5、 根据权利要求1所述的固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于步骤(2)中所述的N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸 为N-乙酰-DL-2-氨基丁酸，N-乙酰-DL-2-氨基戊酸或N-乙酰-DL-2-氨基己酸。
6、 根据权利要求1所述的固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于步骤(2)中所述的N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸 水溶液浓度为50 400g/L， pH6.0 9.0，流经酶柱的速度为100 1000mL/h,转化温度为25 60°C 。
7、 根据权利要求4所述的固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于所述的包埋剂海藻酸钠或卡拉胶的浓度为10 50g/L，成型剂氯化钙或氯化钾水溶液的浓度为10 60g/L。
8、 根据权利要求4所述的固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于所述的包埋剂明胶的浓度为50 200g/L，胶体 强化剂戊二醛的浓度为5 30g/L。
9、 根据权利要求4所述的固定化微生物细胞酶法制备L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于所述的包埋剂壳聚糖的浓度为10 100g/L，成 型剂为pH6.0 8.0的磷酸钠溶液。
全文摘要
本发明是以N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸为原料的固定化细胞酶法制备L-2-氨基脂肪酸的方法。将发酵得到的含氨基酰化酶的微生物细胞用不同固定化载体包埋装柱，使一定浓度的N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸水溶液以一定速度流经固定化细胞填充柱，收集流出液，浓缩结晶或用阳离子交换柱分离纯化得L-2-氨基脂肪酸和N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸，其中N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸经消旋后再次用于酶柱拆分。N-乙酰-L-2-氨基脂肪酸的摩尔转化率达96％以上，L-2-氨基脂肪酸收率高于85％。本发明生产工艺简单、微生物细胞利用率高、适合工业化生产。
文档编号C12P13/00GK101603063SQ20091018176
公开日2009年12月16日 申请日期2009年7月23日 优先权日2009年7月23日 公开号200910181762.发明者茜 刘, 刘均忠, 焦庆才, 凯 董, 赵根海, 陈争依 申请人:南京大学