专利名称：一种apoA5基因突变检测特异性引物和液相芯片的制作方法
技术领域：
本发明屈于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种apoA5基因检测特异性引物和液相芯片。
背景技术：
载脂蛋白A5(ap0lip0pr0tein A5 gene，apoA5)，是载脂蛋白家族成员，该基因定位于11号染色体长臂q23区(llq23)，与apoAl/C3/A4基因簇相距约301Λ，基因全长1889bp，这个基因有4个外显子、2个内含子和4个沉默子，编码1种363个氨基酸组成的蛋白质，对血浆甘油三脂(triglyceride，TG)水平有重要的影响。血浆TG代谢与心血管疾病的关系十分密切，目前NCBI已收录20多个SNP位点，本发明目标检测的apoA5基因突变位点，如表所示
权利要求
1.一种apoA5基因突变检测液相芯片，其特征在于，主要包括有(A).针对每种突变分别设计的野生型和突变型的ASPE引物每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变的特异性引物组成，所述野生型和突变型的特异性引物分别为针对Ai;34G突变的SEQ ID NO. 13及SEQ ID NO. 14、针对T63C突变的SEQ IDNO. 15 及 SEQID NO. 16、针对 C41G 突变的 SEQ ID NO. 17 及 SEQ ID NO. 18、针对 G54T 突变的SEQ IDN0. 19 及 SEQ ID NO. 20、针对 A81G 突变的 SEQ ID N021 及 SEQ ID NO. 22、和 / 或针对 G194A 突变的 SEQ ID NO. 23 及 SEQ ID NO. 24 ；所述 tag 序列选自 SEQ ID NO. 1-12 ；(B).有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO. 25 SEQ ID NO. 36中的序列，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；(C).用于扩增出需要检测的、具有突变位点的目标序列的引物。
2.根据权利要求1所述的apoA5基因突变检测液相芯片，其特征在于，所述扩增引物为针对 A134G 突变的 SEQ ID NO. 37 及 SEQ ID NO. 38、针对 T63C 突变的 SEQ ID NO. 39 及SEQ IDN0. 40、针对 C41G 突变的 SEQ ID NO. 41 及 SEQ ID NO. 42、针对 G54T 突变的 SEQ IDNO. 43及SEQ ID NO. 44、针对A8IG突变的 SEQ ID NO. 45及SEQ ID NO. 46、和 /或针对G194A突变的 SEQ ID NO. 47 及 SEQ ID NO. 48。
3.根据权利要求1所述的apoA5基因突变检测液相芯片，其特征在于，所述ASPE引物为由SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 13组成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 14组成的序列、由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 15组成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 16组成的序列、由SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 17组成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ IDNO. 18组成的序列、由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 19组成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQID NO. 20组成的序列、由SEQ ID N0. 9和SEQ ID N0. 21组成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQ ID N0. 22组成的序列、和/或由SEQ ID NO. 11和SEQ ID N0. 23组成的序列及由SEQID N0. 12和SEQ ID N0. 24组成的序列。
4.根据权利要求1所述的apoA5基因突变检测液相芯片，其特征在于，(A).所述ASPE引物为由SEQID NO. 1和SEQ ID N0. 13组成的序列及由SEQ ID N0. 2和SEQ ID N0. 14组成的序列、由SEQ ID N0. 3和SEQ ID N0. 15组成的序列及由SEQ IDN0. 4和SEQ ID N0. 16组成的序列、由SEQ ID N0. 5和SEQ ID N0. 17组成的序列及由SEQID N0. 6和SEQ ID N0. 18组成的序列、由SEQ ID N0. 7和SEQ ID N0. 19组成的序列及由SEQ ID N0. 8和SEQ ID N0. 20组成的序列、由SEQ ID N0. 9和SEQ ID N0. 21组成的序列及由 SEQ ID NO. 10 和 SEQ ID N0. 22 组成的序列、和由 SEQ ID NO. 11 和 SEQ ID N0. 23 组成的序列及由SEQ IDN0. 12和SEQ ID N0. 24组成的序列；(B).有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID N0. 25 SEQ ID N0. 36中的序列，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；(C).所述扩增引物为针对A134G突变的SEQID N0. 37及SEQ ID N0. 38、针对T63C突变的 SEQ ID N0. 39 及 SEQ ID N0. 40、针对 C41G 突变的 SEQ ID N0. 41 及 SEQ ID N0. 42、针对 G54T 突变的 SEQ ID N0. 43 及 SEQ ID N0. 44、针对 A81G 突变的 SEQ ID N0. 45 及 SEQIDN0. 46、和针对 G194A 突变的 SEQ ID N0. 47 及 SEQ ID N0. 48。
5.根据权利要求1-4任一项所述的apoA5基因突变检测液相芯片，其特征是，所述间隔臂为5-10个T。
6.一种用于apoA5基因突变检测的特异性引物，其特征在于，包括有针对A134G突变的 SEQ ID NO. 13 及 SEQ ID NO. 14、针对 T63C 突变的 SEQ ID NO. 15 及 SEQ ID NO. 16、针对 C41G 突变的 SEQ ID NO. 17 及 SEQ ID NO. 18、针对 G54T 突变的 SEQ ID NO. 19 及 SEQ IDNO. 20、针对 A81G 突变的 SEQ ID NO. 21 及 SEQ ID NO. 22、和 / 或针对 G194A 突变的 SEQ IDNO. 23 及 SEQID NO. 24。
全文摘要
本发明公开了一种apoA5基因突变检测特异性引物和液相芯片，所述液相芯片主要包括有由5’端的tag序列和3’端的特异性引物组成的ASPE引物，所述特异性引物为针对A134G突变的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14、针对T63C突变的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16、针对C41G突变的SEQ ID NO.17及SEQ ID NO.18、针对G54T突变的SEQ ID NO.19及SEQ IDNO.20、针对A81G突变的SEQ ID NO21及SEQ ID NO.22、和/或针对G194A突变的SEQ IDNO.23及SEQ ID NO.24；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本发明所提供的apoA5基因突变检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，并可实现多个多态性位点的并行检测。
文档编号C12Q1/68GK102559850SQ201010590688
公开日2012年7月11日 申请日期2010年12月16日 优先权日2010年12月16日
发明者朱泽尧, 秦会娟, 许嘉森, 郭婧 申请人:广州益善生物技术有限公司