专利名称：可耐受als抑制剂除草剂的甜菜突变体的制作方法
技术领域：
本发明涉及可耐受ALS抑制剂除草剂的甜菜(Beta vulgaris)植物及其部分，以及用于它们制备的方法。
背景技术：
栽培类型的甜菜(如Ford-Lloyd (2005) Sources of genetic variation, GenusBeta.1n:Biancardi E, Campbell LG,Skaracis GN,De Biaggi M(eds)Genetics andBreeding of Sugar Beet.Science Publishers, Enfield (NH)，USA, pp25_33 中所定义的)是温带和亚热带地区的重要农作物。例如，约20%的全世界糖类生产是基于糖甜菜(sugarbeet)。因为甜菜幼苗和新生植物在其生命的最初6-8周期间易受到由快速生长的杂草导致的强力竞争，所述杂草可竞争超过幼小的作物植物，所以在这些作物区域中可靠的杂草防治措施是必要的。40多年以来，除草剂是用于在栽培的甜菜中防治杂草的优选工具。用于此目的的产品，例如苯敌草(phenmedipham)、异苯敌草(desmediphan)和苯嚷草丽(metamitron),可抑制甜菜田地中的杂草生长而不损害所述作物。然而在不利环境条件下，这些产品的效力还有提高的空间，尤其是当有害杂草，例如藜(Chenopodium album)、反枝觅(AmaranthusretrofIexus)和/或三肋果(Tripleurospermum inodorata),在一段较长的时间内萌发时。非常需要创新的除草剂活性成分以改善甜菜中的杂草控制选择。这种化合物应该对广泛的杂草谱(优选从杂草萌发直到所述杂草植物的全面发育)起作用而不影响甜菜作物(不论其处于哪个发育阶段)。通过经典的除草剂筛选途径，在过去的几十年中没有发现可用于甜菜的可以农艺学上优先的方式满足全部这些严格性质的选择性除草剂活性成分。某些化学药品 可抑制所述酶“乙酰羟酸合酶”(AHAS)，该酶还被称为“乙酰乳酸合酶”(ALS[EC4.1.3.18])。ALS是属于ALS抑制剂除草剂类的五种结构上不同的除草剂家族的作用位点，所述除草剂家族例如(a)磺酰脲除草剂(sulfonylureaherbicide) (Beyer Ε.M et al.(1988), Sulfonylureas in Herbicides:Chemistry, Degradation, and Mode of Action;Marcel Dekker,New York, 1988, 117-189),
(b)横酸氨基擬基三唑啉酮除草剂(sulfonylaminocarbonyltriazolinone herbicide) (Pontzen, R., Pflanz.-Nachrichten Bayer, 2002, 55, 37-52),(c)咪唑啉酮除草剂(Shaner, D.L., et al., Plant Physiol., 1984, 76, 545-546;Shaner,D.L., and 0' Connor, S.L.(Eds.) The Imidazolinone Herbicides, CRC Press, BocaRaton, FL, 1991)，(d)三唑并卩密唳除草剂(triazolopyrimidine herbicide) (Kleschick, ff.A.et al., Agric.Food Chem.，1992，40，1083-1085)，和(e)嘧啶基(硫)苯甲酸盐(酉旨)除草 剂(pyrimidinyl(thio)benzoate herbicide) (Shimizu, T.J., Pestic.Sc1., 1997, 22, 245-256;Shimizu,Τ.et al., Acetolactate Syntehase Inhibitors inHerbicide Classes in Development, Boger, P., ffakabayashi, K., Hirai, K., (Eds.), Springer Verlag, Berlin, 2002, 1-41)。ALS参与两个丙酮酸分子到一个乙酰乳酸分子和二氧化碳的转变。所述反应使用焦磷酸硫胺素以连接所述两个丙酮酸分子。该反应产生的产物乙酰乳酸最终转变为缴氨酸、亮氨酸和异亮氨酸(Singh (1999) "Biosynthesis of valine, leucine andisoleucine〃，in Plant Amino Acids, Singh, B.K., ed., Marcel Dekker Inc.New York, NewYork, pp.227-247)。ALS的抑制剂可阻断植物中缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成。结果是所述各个氨基酸库被迅速耗尽，引起蛋白生物合成的停止，这导致植物生长停止并最终导致所述植物死亡或至少被损害。ALS抑制剂除草剂由于其在适度施用率下的有效性及在动物中的相对无毒性而广泛地用于现代农业。通过抑制ALS活性，这些除草剂家族可防止包括很多杂草种类在内的易感植物的进一步生长和发育。为了提供具有对实现充分杂草防治所需要的甚至高浓度的ALS抑制剂除草剂的高耐受度的植物，需要额外的可抗ALS抑制型除草剂的作物植物的育种品系和品种，以及用于产生和使用可抗ALS抑制型除草剂的育种品系和品种的方法和组合物。多种多样的ALS抑制剂除草剂 使得农民可控制许多杂草种类(无论其处于何种生长阶段)，但这些高度有效的除草剂不能用于甜菜，因为常规的甜菜植物/商业化甜菜品种对这些ALS抑制剂除草剂是高度敏感的。然而，这些ALS抑制剂除草剂对阔叶和禾本科杂草种类显示出优秀的除草剂活性。早在30年以前，具有抑制ALS的作用方式的第一批除草剂已被开发用于农业。现在，这类除草剂的活性成分展示出强力的杂草控制，并被广泛用于玉米和谷类以及双子叶作物，甜菜除外。当今已知的用于甜菜出苗后施用方案的唯一 ALS抑制剂除草剂是Debut 。这种除草剂(含有氟胺磺隆(triflusulfuron-methyl)作为活性成分加上特定的制剂化合物)可在其抑制甜菜内源性ALS酶之前被甜菜分解，但是其在甜菜生长区域的杂草控制中有严重的不足(gap)。自从ALS抑制剂除草剂被引进到农业中以来，观察到敏感的植物种类(包括天然存在的杂草)偶尔显现出对这类除草剂的自发耐受性。在ALS基因的特定位点处的单碱基对取代通常导致或多或少的抗性ALS酶变体，所述变体显示出不同水平地被ALS抑制剂除草剂的抑制。因此，具有突变的ALS等位基因的植物显示出对ALS抑制剂除草剂的不同水平的耐受性，这依赖于所述ALS抑制剂除草剂的化学结构和ALS基因的点突变位点。例如，Hattoriet al.(1995)，Mol.Gen.Genet.246:419-425 记载了甘蓝型油菜(Brassica napus)细胞系中Trp557密码子中的单突变(根据用于文献中以比较全部ALS/AHAS突变体的拟南芥序列的编号，所述位置是指位置"574")，所述位置等同于甜菜ALS序列的位置569。这些作者观察到了对ALS抑制剂除草剂亚类的几个成员(例如磺酰脲、咪唑啉酮和三唑并嘧啶)的抗性。描述了在Alal22密码子中具有点突变的甜菜突变体，所述点突变导致对ALS抑制剂除草剂咪唑啉酮亚类的某种耐受性(W098/02526)，但这对于农业施用方案中的杂草控制来说是不足够的。使用这种突变体时，没有记载对其他ALS抑制剂除草剂类别的交叉耐受性。此外，在Prol97密码子中具有第二点突变的甜菜植物显示出对属于磺酰脲除草剂亚类成员的ALS抑制剂除草剂的中度耐受性。还描述了具有这两种突变的双重突变体(W098/02527)。但是，这些突变体都没有被用于甜菜品种的市场引入，因为在这些突变体中对ALS抑制剂除草剂的除草剂耐受性水平未高至足以被开发用在农艺学上。Stougaard et al.(1990), J.Cell Biochem.，Suppl.14E, 310 描述了在四倍体糖甜菜细胞培养物中ALS突变体的分离。两种不同的ALS基因(ALS I和ALS II)被分离，其仅在氨基酸位置37处不同。突变体I在其ALS I基因中含有2处突变，突变体2在其ALSII基因中含有3处突变。在所述突变被分离以分辨哪个突变会赋予对ALS抑制剂的抗性后，发现如果在重组大肠杆菌中合成的ALS的Trp574密码子处(根据用于文献中以比较全部ALS/AHAS突变体的拟南芥序列的编号，其等同于甜菜ALS序列的位置569)含有点突变(其导致氨基酸"Trp"被氨基酸"Leu"替换),则所述ALS具有除草剂抗性。Stougaard等人没有证明在糖甜菜中任何糖甜菜ALS基因在位置569的突变均可足以获得对ALS抑制剂除草剂的可接受水平的耐受性。此外，Stougaard等人没有再生或处理包含突变(包括糖甜菜ALS位置569处的Trp->Leu突变)的糖甜菜植物。知晓这点后，Stougaard等人构建了用于植物转化的含有不同ALS基因的植物转化载体。但是，从那以后20多年以来，到目前为止，这些或其他作者没有公开在基因工程或突变体植株中的进一步的数据——尤其没有涉及将ALS抑制剂除草剂施用到在甜菜植物包括该突变的植物和/或农业区域的效果的数据。W099/57965广义上描述了磺酰脲抗性的糖甜菜植物和通过EMS (甲基磺酸乙酯)诱变来获得它们的方法。但是，除了获得这种突变体所需的研究之外，该出版物既没有提供这种植物，也没有描述在ALS基因中可能与获得ALS抑制剂除草剂耐受性突变体相关的任何具体位置，也没有公开其任何相关的农艺学用途。此外，有很大可能性是，通过使用这类强的诱变化合物(例如EMS)可在基因组中别处产生多种另外的突变，这可能导致这样获得的植物有缺陷以致无生育力和/或生长迟缓。另外，由于其与DNA的化学相互作用，EMS的施用可能具有诱导特定突变(例如将三联体TGG转变为TTG)的不足，因为EMS总是将鸟苷转变为腺苷。在某些杂草种类例如觅属(Amaranthus)中,可在重复暴露于ALS抑制剂除草剂的植物种群中检测到Trp574Leu突变。这些Trp574Leu突变体显示出对几种化学类别的ALS抑制剂除草剂(例如选自磺酰脲和磺酰氨基羰基三唑啉酮的那些)的高水平耐受性。W02008/124495公开了 ALS的双重和三重突变体。根据W02009/046334，提供了ALS基因中的具体突变。但是，到目前为止还没有获得含有W02009/046334的这类突变的农艺学上可用的可耐受除草剂的甜菜突变体。另外，考虑到例如糖甜菜占世界糖生产的约20%的事实，还非常需要获得相对于强生命力的杂草具有生长优势的糖甜菜植物。因此，相对于ALS基因，非常需要获得可耐受ALS抑制剂除草剂的非转基因甜菜植物(包括糖甜菜植物)。因此，需要这种非转基因的甜菜植物，尤其是可耐受在农艺学上开用的ALS抑制剂除草剂水平的ALS抑制剂除草剂的糖甜菜植物。因此，所述技术 问题是为了满足这种需要。
发明内容
本发明解决了这种需要，并因此作为所述技术问题的一个解决方案，提供了包含内源性乙酰乳酸合酶(ALS)基因的突变的可耐受ALS抑制剂除草剂的甜菜植物及其部分，其中所述ALS基因编码的ALS多肽在其位置569处含有不同于色氨酸的氨基酸。本发明的种子已经在2010年3月12日以保藏号NCMB41705保藏在英国阿伯丁的食品工业与海洋细菌菌种保藏中心(NCMB，Aberdeen, UK)。
具体实施例方式通过应用多种育种方法，随后可利用最初获得的突变体植物开发在所有特定市场具有高度竞争力的附带有强ALS抑制剂除草剂耐受性的高产商业品种。必须要注意，除非上下文另有明确指示，否则本文所用的单数形式〃 一 〃、〃 一个〃和"所述"包括复数的指代对象。因此，例如，提及“试剂”时包括一种或多种这样的不同试剂，提及“所述方法”时包括提及本领域普通技术人员已知的可被修改或取代以用于本文所述方法的等价的步骤和方法。本公开内容中引用的所有出版物和专利以引用的方式全文纳入本文。如果以引用方式纳入本文的内容与本说明书矛盾或不一致，则本说明书将代替任何这样的内容。除非另有说明，用在一系列要素之前的术语“至少”应理解为是指该系列中每个要素。仅仅使用常规的实验，本领域技术人员就会认识到或能够确定本文所述的本发明具体实施方案的许多等价方案。本发明意欲包括这样的等价方案。除非上下文另有需要，否则在本说明书和其后的权利要求中，术语“包括(comprise)”和变化形式例如“包含(comprises)”和“含有(comprising)”应被理解为是指包含所陈述的整体或步骤或者整体组或步骤组，而不排除任何其他的整体或步骤或者整体组或步骤组。一 方面，术语“包括(comprise)”及其变化形式以及另一方面“含有(contain)”及其类似变化形式可被互换使用，而不优先选择其中任何一个。本发明中，获得了甜菜植物，其包括改变的内源ALS基因(也称为“AHAS”基因)，在Trp569密码子处(相对于SEQ ID NO: 2中示出的甜菜ALS氨基酸参照序列；这等同于SEQID NO:6中示出的参照拟南芥序列的位置574)带有点突变，所述点突变是通过对于特异性选择的ALS抑制剂除草剂的几轮选择而获得的。由于本发明的甜菜植物是通过分离自发的突变体植物细胞而获得的，所述自发的突变体植物细胞可直接再生为完全能育的具有本文中详细描述的点突变的甜菜植物。就所涉及的ALS基因而言,这些植株是非转基因的。另外，本发明的植物本身及其子代是能育的，因此可用于育种目的，而无需可能导致胁迫诱导的对遗传背景的其他改变的任何其他操作。根据本文应用的所述选择步骤而获得的植物可被直接使用，以产生具有农艺学上可用水平的ALS抑制剂除草剂耐受性的甜菜品种和/或杂种，因此允许在甜菜生长区域中新的杂草防治措施。当用于本文时，术语“转基因”意指通过适当的生物载体(例如根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens))或通过任何其他的物理方式(例如原生质体转化或离子轰击)将基因(可以是相同或不同的种类)引入到植物中，并且所述基因能够在新的宿主环境(即遗传修饰的生物(GMO))中表达。根据前述定义，术语“非转基因”的意义正好相反，即没有通过适当的生物载体或通过任何其他物理方式引入各个基因。但是，突变的基因可通过授粉(自然地或通过育种方法)被传递，以产生另一种含有该特定基因的非转基因植物。“内源”基因意指植物中不是通过基因工程技术引入到所述植物中的基因。当用于本文时，根据使用术语“序列”的上下文，术语“序列”涉及核苷酸序列、多核苷酸、核酸序列、核酸、核酸分子、肽、多肽和蛋白质。术语“核苷酸序列”、“多核苷酸”、“核酸序列”、“核酸”、“核酸分子”在本文中可互换使用，其是指任意长度的聚合无支链形式的核苷酸，核糖核苷酸或者脱氧核糖核苷酸或其二者组合。核酸序列包括DNA、cDNA、基因组DNA、RNA,包括合成形式以及混合的聚合物，包括正义链和反义链，或可以含有非天然的或衍生的核苷酸碱基，本领域技术人员可容易地理解这点。当用于本文时，术语“多肽”或“蛋白质”(本文中这两个术语可互换地使用)意指包含给定长度的氨基酸链的肽、蛋白质或多肽，其中所述氨基酸残基通过共价的肽键连接。但是，本发明也包括所述蛋白质/多肽的肽模拟物(其中氨基酸和/或肽键已经被功能性类似物替换)，以及除了所述20种基因编码的氨基酸之外的氨基酸例如硒代半胱氨酸。肽、寡肽和蛋白质可被称为多肽。所述术语多肽还指(不排除)多肽的修饰，例如糖基化、乙酰化、磷酸化等。这种修饰很好地记载于基础文献中，并更详细地记载于专著以及研究文献中。在本文中优选的多肽(或蛋白质)是指甜菜ALS多肽(或ALS蛋白质)[SEQ ID N0:2]。氨基酸取代包括氨基酸改变，其中氨基酸被不同的天然存在的氨基酸残基代替。这种取代可被分类为“保守的”，其中野生型ALS蛋白质中含有的氨基酸残基被另外的天然存在且特性相似的氨基酸替换，例女I Gly <-^Ala、Val^Ile^Leu、Asp^Glu、Lys^Arg AsnHGln或PheoT rpoTyr本发明中包括的取代还可能是“非保守的”，其中存在于野生型ALS蛋白质中的氨基酸残基被具有不同性质的氨基酸取代，例如来自于不同组的天然存在的氨基酸(例如用丙氨酸取代带电荷的或疏水的氨基酸)。本文使用的“相似的氨基酸”是指具有相似的氨基酸侧链的氨基酸，即具有极性、非极性或接近中性的侧链的氨基酸。本文使用的“不相似氨基酸”是指具有不同氨基酸侧链的氨基酸，例如具有极性侧链的氨基酸与具有非极性侧链的氨基酸是不相似的。极性侧链通常趋向存在于蛋白质的表面，在此它们可以与细胞中存在的水环境相互作用(“亲水性”氨基酸)。另一方面，“非极性”氨基酸趋向于位于蛋白质内的中心，在此它们可以与相似的非极性相邻分子相互作用(“疏水性”氨基酸)。具有极性侧链的氨基酸的实例为精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸和苏氨酸(全部为亲水性氨基酸，除了半胱氨酸为疏水性的)。具有非极性侧链的氨基酸的实例为丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸和色氨酸(全部为疏水性的，除了甘氨酸为中性的)。通常，本领域技术人员根据其通常的常识和使用术语ALS、ALSL、AHAS或AHASL的上下文即可知晓分别是指所述核苷酸序列或核酸，或者是指所述氨基酸序列或多肽。当用于本文时，术语“基因”是指任何长度的核苷酸(核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸)的聚合形式。该术语包括双链和单链的DNA和RNA。其还包括已知类型的修饰，例如甲基化、“加帽”、用类似物取代一个或多个天然存在的核苷酸。优选地，基因包括编码本文所定义的多肽的编码序列。“编码序列”是当被置于或在适当调节序列的控制下可被转录为mRNA和/或被翻译为多肽的核苷酸序列。所述编码序列的界限是由5’末端的翻译起始密码子和3’末端的翻译终止密码子确定的。编码序列可以包括但不限于mRNA、cDNA、重组核酸序列或基因组DNA，但是某些情况下也可能存在内含子。当用于本文时，术语“甜菜(Beta vulgaris) ”可缩写为“甜菜(B.vulgaris) ”。此外，本文中使用了术语“甜菜(beet)”。所述三个术语可互换使用并且应被理解为完全包括栽培形式的甜菜，所述栽培形式的甜菜如Ford-Lloyd(2005) Sources of geneticvariation, Genus Beta.1n:Biancardi E,Campbell LG, Skaracis GN, De Biaggi M(eds)Genetics and Breeding of Sugar Beet.Science Publishers,Enfield(NH)，USA, pp25-33中所定义的。相似地,例如术语“拟南芥(Arabidopsis thaliana) ”可缩写为“拟南芥(A.thaliana) ”。在本文中这两个术语可互换地使用。当用于本发明时，术语“位置”意指氨基酸在本文描述的氨基酸序列中的位置或核苷酸在本文描述的核苷酸序列中的位置。本文使用的术语“对应的”还包括不仅由前述核苷酸/氨基酸的编号所确定的位置。由于在ALS5’非翻译区(UTR)(包括启动子和/或任何其他的调节序列)或基因(包括外显子和内含子)中其他位置处核苷酸的缺失或插入，本发明中可被取代的给定核苷酸的位置可以不同。相似地，由于在ALS多肽中其他位置氨基酸的缺失或插入，本发明中可被替换的给定氨基酸的位置可以不同。因此，本发明中“对应位置”应被理解为在所指示编号处的核苷酸/氨基酸可以不同，但仍然可具有相似的相邻核苷酸/氨基酸。所述可被交换、缺失或插入的核苷酸/氨基酸也被术语“对应位置”所包括。为了确定在给定的ALS核苷酸/氨基酸序列中核苷酸残基或氨基酸残基是否对应于核苷酸序列SEQ ID N0:1或氨基酸序列SEQ ID NO:2中的某些位置，本领域技术人员可使用本领域中 公知的工具和方法，例如人工地或通过使用计算机程序的比对，例如 BLAST(Altschul et al.(1990), Journal of Molecular Biology, 215, 403-410)(其代表基本局部比对搜索工具)或ClustalW(Thompson et al.(1994), Nucleic AcidRes.，22，4673-4680)或任何其他适合于产生序列比对的适合程序。SEQ ID NO:1为编码甜菜野生型ALS的核苷酸序列。SEQ ID N0:2为源于SEQ IDNO:1的甜菜氨基酸序列。因此，核苷酸序列SEQ ID NO:1的位置1705-1707处的密码子编码SEQ ID NO: 2的位置569处的氨基酸，即，三字母编码中的氨基酸〃Trp〃或单字母编码中的"W"。在确定给定的ALS核苷酸/氨基酸序列中核苷酸残基或氨基酸残基是否对应于核苷酸序列SEQ ID NO:1中某些位置的备选方案中，可以使用编码SEQ ID N0:5示出的拟南芥野生型ALS的核苷酸序列。SEQ ID NO:6是源于SEQ ID NO: 5的拟南芥氨基酸序列。因此，核苷酸序列SEQ ID NO:5的位置1720-1722处的密码子编码SEQ ID NO:6的位置574处的氨基酸(即，三字母编码中的氨基酸〃Trp〃或单字母编码中的〃W〃)。如果SEQ ID NO: 5示出的拟南芥野生型ALS核苷酸序列被用作参照序列(因为大多数相关文献是这么做的，所以使用该序列以使得与这类已知序列的比较更容易)，那么编码不同于色氨酸的氨基酸的密码子是在对应于SEQ ID N0:5示出的拟南芥ALS基因核苷酸序列的位置1720-1722的位置。但是，在所有随后的公开内容中SEQ ID NO:1优选作为参照核苷酸序列，SEQ IDN0:2优选作为参照氨基酸序列。下表提供了对本文使用的参照序列的概述，这时核苷酸序列中点突变的位置或氨基酸序列中取代的位置已被确定:
权利要求
1.一种可耐受ALS抑制剂除草剂的甜菜植物及其部分，其包含内源性乙酰乳酸合酶(ALS)基因的突变，其中所述ALS基因编码在其位置569处含有不同于色氨酸的氨基酸的ALS多肽。
2.根据权利要求1的甜菜植物及其部分，其中所述ALS多肽在位置569处用氨基酸丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸或精氨酸替代了天然编码的氨基酸色氨酸。
3.根据权利要求1的甜菜植物及其部分，其中所述ALS基因编码ALS多肽，所述ALS多肽在如SEQ ID NO: 2所示的ALS多肽序列的位置569处含有不同于色氨酸的氨基酸。
4.根据权利要求1的甜菜植物及其部分，其中所述氨基酸为亮氨酸，并且其中所述内源ALS基因与SEQ ID N0:3所确定的核苷酸序列是相同的。
5.根据权利要求1的甜菜植物及其部分，其可耐受一种或多种ALS抑制剂除草剂，所述ALS抑制剂除草剂选自磺酰脲除草剂、磺酰氨基羰基三唑啉酮除草剂、咪唑啉酮除草剂、三唑并嘧啶除草剂和嘧啶基(硫)苯甲酸盐(酯)除草剂。
6.根据权利要求1的甜菜植物及其部分，其就所述内源性乙酰乳酸合酶(ALS)基因的突变而言是纯合的。
7.根据权利要求1的甜菜植物的部分，其中所述部分为植物的器官、组织和细胞，并且优选种子。
8.制备权利要求1的甜菜植物及其部分的方法，包括如下步骤: (a)将来自甜 菜的愈伤组织暴露于约10_7M-10_9M的ALS抑制剂除草剂，优选甲酰胺磺隆; (b)选择可在最高达3X10_6M的ALS抑制剂除草剂存在的情况下生长的细胞克隆，所述ALS抑制剂除草剂优选甲酰胺磺隆，； (c)在ALS抑制剂除草剂存在的情况下再生茎尖，所述ALS抑制剂除草剂优选甲酰胺磺隆; (d)用ALS抑制剂除草剂选择再生的小植株，其中所述ALS抑制剂除草剂优选甲酰胺磺隆、碘甲磺隆钠盐和/或这两者的混合物，并且其中甲酰胺磺隆的剂量优选地等价于7-70ga.1./ha,并且碘甲磺隆钠盐的剂量优选地等价于l_10g a.1./ha,。
全文摘要
本发明涉及一种可耐受ALS抑制剂除草剂的甜菜植物及其部分，其包含内源性乙酰乳酸合酶(ALS)基因的突变，其中所述ALS基因编码在其位置569处含有不同于色氨酸的氨基酸的ALS多肽。
文档编号C12N15/82GK103200812SQ201180049766
公开日2013年7月10日 申请日期2011年10月13日 优先权日2010年10月15日
发明者R·海恩, J·本特宁, G·唐, N·尼特尔-奥特里本, B·霍尔兹卓特, A·路克, C·施普林曼, R·詹森 申请人:拜耳知识产权有限责任公司, Kws种子股份有限公司