包含糖基化抗体的组合物及其用途
【专利摘要】本发明提供了具有不同糖基化结构的抗体例如人抗体的组合物，其用于获得所需的血清清除率。本发明还提供用于调节抗体如人抗体及包含这种抗体的治疗组合物的药代动力学的方法。这些方法依赖于改变抗体如人抗体的糖基化结构以获得所需的血清清除率。
【专利说明】包含糖基化抗体的组合物及其用途
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2011年I月28日提交的美国临时专利申请序列号61/437107的优先权，其全部内容在此通过引用并入。
[0003]发明背景
[0004]抗体治疗是普遍的。市场上存在着大约二十多种治疗性抗体。使用重组技术产生的抗体可以是糖基化的并因此作为众多的糖形存在，其可以通过影响例如抗体的效应子功能(如抗体依赖性细胞毒性和补体依赖性毒性)而影响治疗效力(Jefferis，R.(2009)，Trends in Pharmacological Sciences30(7):356-362)。
[0005]几项临床前研究已经注意到糖基化和糖形丰度对重组抗体药代动力学的一些影响，然而在临床研究中没有确认糖基化和糖形丰度对重组抗体药代动力学的影响(参见，例如 Chen 等，(2007) Glycobiology, 19 (3):240-249 ; Jones 等，(2007) Glycobiology,17 (5) 529-540 ；Kanda 等，(2006) Glycobiology 17 (I): 104-118 ;Keck 等，(2008)Biologicals36:49-60 ；Millward 等，(2008)Biologicals36:41-47 ；Newkirk 等，(1996)Clin Exp Tmmunol 106:259-264 ；ffawrzynczak 等，(1992)Molecular Immunology29(2):213-220 ；ffright 等，(1994)J Exp Medl80:1087-1096 ；Zhou (2008)Biotechnology andBioengineering99(3):652-665 ;Chen 等，(2007)Glycobiology,19(3):240-249)。
[0006]因此，需要更好地表征抗体的糖形及对糖基化抗体的药代动力学的相关效应。
【发明内容】
[0007]本发明至少部分地 基于人抗体的糖形的水平和类型与抗体的血清清除率之间的关系的发现。更具体地，在ABT-874的组合物注射到人类受试者中后在该组合物中鉴别到人抗IL-12/IL-23p40抗体(ABT-874)的八种糖形。这八种糖形的结构分析允许将该糖形分成两组，寡聚甘露糖型结构和岩藻糖基化双触角(bianntenary)寡糖型结构,这进一步得到8个糖形的药代动力学分析的支持。
[0008]两个组的群体药代动力学模型表明，虽然ABT-874的寡聚甘露糖型结构具有比ABT-874的岩藻糖基化双触角寡糖型结构高大约40%的清除率，但ABT-874的总体清除率不受影响，因为ABT-874组合物中寡聚甘露糖型结构的百分比为约10%，与之形成对比的是岩藻糖基化双触角寡糖型结构的百分比为90%。
[0009]两个组的群体药代动力学模型进一步表明，提高ABT-874组合物中寡聚甘露糖型结构的水平至寡糖结构总水平的大约30%对于抗体或其抗原结合片段的药代动力学或血
清清除率没有影响。
[0010]因此，在一个方面，本发明提供了包含人抗体或其抗原结合部分的组合物。该组合物包括第一水平的抗体或其抗原结合部分，其在Fe区的N-连接糖基化位点处以寡聚甘露糖型结构糖基化；和第二水平的抗体或其抗原结合部分，其在Fe区的N-连接糖基化位点处以岩藻糖基化双触角寡糖型结构糖基化；其中所述组合物表现出所需的血清清除率。
[0011]在一个实施方式中，所述N-连接糖基化位点是抗体Fe区上的天冬酰胺残基，如Asn2970
[0012]在一个实施方式中，所述寡聚甘露糖型结构独立地选自M5、M6M7、M8和M9。
[0013]在一个实施方式中，所述岩藻糖基化双触角寡糖型结构独立地选自NGA2F、NA1F、NA2F、NGA2F-GlcNAc 和 NAlF-GlcNAc。
[0014]在一个实施方式中，所述第一水平为约0-100%。在另一个实施方式中，所述第一水平为约10-30%。在再另一个实施方式中，所述第一水平选自约0%、1%、2%、3%、4%、5%,6%,7%,8%,9%Λ0%Λ1%Λ2%Λ3%Λ4:%Λ5%Λ6%Λ7%Λ8%Λ9%,20%,21 22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 32%,33%,34%,35%,36%,37%,38%,39%,40%,41 %,42%,43%,44%,45%,46%,47%,48%,49%,50%,51 52%,53%,54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61 62%,63%,64%,65%,66%,67%,68%,69%,70%,71 %,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 92%,93%,94%,95%,96%、97%、98%、99% 和约 100%。
[0015]在一个实施方式中，所述第二水平为约0-100%。在另一个实施方式中，所述第二水平为约70-90%。在再另一个实施方式中，所述第二水平选自约0%、1%、2%、3%、4%、5%,6%,7%,8%,9%Λ0%Λ1%Λ2%Λ3%Λ4:%Λ5%Λ6%Λ7%Λ8%Λ9%,20%,21 22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 32%,33%,34%,35%,36%,37%,38%,39%,40%,41 %,42%,43%,44%,45%,46%,47%,48%,49%,50%,51 52%,53%,54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61 62%,63%,64%,65%,66%,67%,68%,69%,70%,71 %,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 92%,93%,94%,95%,96%、97%、98%、99% 和 100%。
[0016]所需的血清清除率可以是快速血清清除率。在一个实施方式中，所述第一水平大于约50%。在另一个实施方式中，所述第一水平大于约30%。在一个实施方式中，所述第一水平为约51-100%。在另一个实施方式中，所述第一水平为约31-100%。
[0017]所需的血清清除率可以是慢速血清清除率。在一个实施方式中，所述第一水平为约0-50%。在另一个实施方式中，所述第一水平为约10-30%。
[0018]所述抗体或其抗原结合部分可以包含λ轻链。
[0019]所述抗体或其抗原结合部分可以包含选自IgGl、IgG2、IgG3和IgG4恒定区的重链恒定区。在一个实施方式中，所述重链恒定区是IgGl重链。在另一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分包含IgGl重链恒定区和λ轻链。
[0020]所述抗体或其抗原结合部分可以在哺乳动物细胞、CHO细胞或骨髓瘤细胞系中产生。
[0021]所述抗体或其抗原结合部分可以是抗IL-12抗体、抗IL-23抗体或者ΑΒΤ-874或其片段。
[0022]在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID Ν0:25的氨基酸序列的重链⑶R3和含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链⑶R3。在一个实施方式中，所述人抗体或其抗原结合部分进一步包含含有SEQ ID Ν0:27的氨基酸序列的重链CDR2和含有SEQ ID Ν0:28的氨基酸序列的轻链CDR2。在另一个实施方式中，所述人抗体或其抗原结合部分进一步包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链⑶Rl和含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链CDRl。[0023]在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链可变区。
[0024]在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分是选自CNT01275、托西莫单抗、WR1-170、WOl、TNF-H9G1、THY-32、THY-29、TEL16、TEL14、Tel 13、SMl、Sl-U RSP4、RH-14、RF-TS7、RF-SJ2、RF-SJU RF-AN、PR-TS2、PR-TSl、PR-SJ2、PR-SJl、PH0X15、PAG-U 0G-31、N0.13、NM3E2SCFV、MUC1-1、MN215、MC116、MAD-2、MAB67、MAB63、MAB60、MAB59、MAB57、MAB56、MAB111、MAB107、L3055-BL、K6H6、K6F5、K5G5、K5C7、K5B8、K4B8、JAC-10、HUC、HMST-1、HIH2、HIH10、HBW4-1、HBP2、HA1、H6-3C4、H210、GP44、GG48、GG3、GAD-2, FOM-A, FOM-1、FOG 1-A3、FOG-B, DPC, DPA、DOBl、DOl、CLLOOl、CLL-249, CD4-74、CB-201, C304RF、BSA3、B03、BOl、BEN-27、B-33、B-24, ANT1-TEST、ANT1-EST, ANT1-DIGB, ANT1-DIGA, AIG、9604、448.9G.F1、33.Hll、32.B9、24A5、1B9/F2、13E10、123AV16-1、11-50 和 1.32 的抗体或其片段。
[0025]本发明的组合物可以进一步包含选自缓冲剂、多元醇和表面活性剂的另外的试齐?。在一个实施方式中，所述缓冲剂选自L-组氨酸、琥珀酸钠、柠檬酸钠、磷酸钠和磷酸钾。在一个实施方式中，所述多元醇选自甘露糖醇和山梨糖醇。在一个实施方式中，所述表面活性剂选自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和BRIJ表面活性剂。在一个实施方式中，本发明的组合物进一步包含甲硫氨酸。
[0026]所述组合物中抗体或其抗原结合部分的浓度可以是约0.l_250mg/ml。
[0027]本发明的组合物可以适合于肠胃外施用、适合于静脉内注射或静脉内输注或者适合于皮下注射或肌肉内注射。
[0028]本发明的组合物可以进一步包含另外的治疗剂。在一个实施方式中，所述另外的治疗剂选自布地奈德，表皮生长因子，皮质类固醇，环孢菌素，柳氮磺胺吡啶，氨基水杨酸盐，6-巯基嘌呤，硫唑嘌呤，甲硝哒唑，脂氧合酶抑制剂，美沙拉嗪，奥沙拉嗪，巴柳氮，抗氧化剂，血栓烷抑制剂，IL-1受体拮抗剂，抗IL-1 β单克隆抗体，抗IL-6单克隆抗体，生长因子，弹性蛋白酶抑制剂，吡啶基-咪唑化合物，TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、11-7、11-8、11-15、11-16、IL-18、EMAP-1I, GM-CSF, FGF 和 PDGF 的抗体或激动剂，CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、⑶28、⑶30、⑶40、⑶45、⑶69、⑶90的抗体或它们的配体，甲氨蝶呤，环孢菌素，FK506，雷帕霉素，麦考酚酸莫酯，来氟米特，NTHEs,布洛芬，皮质类固醇，强的松龙，磷酸二酯酶抑制剂，腺苷激动剂，抗血栓形成剂，补体抑制剂，肾上腺素能剂，IRAK, NIK, IKK, p38，MAP激酶抑制剂，IL-1 β转化酶抑制剂，TNFa转化酶抑制剂，T-细胞信号传导抑制剂，金属蛋白酶抑制剂，柳氮磺胺吡啶，硫唑嘌呤，6-巯基嘌呤类，血管紧张素转化酶抑制剂，可溶性细胞因子受体，可溶性P55TNF受体，可溶性p75TNF受体，sIL-lRI，sIL-lRII，sIL_6R，抗炎性细胞因子，IL-4，IL-10, IL-11，IL-13和TGFB。在另一个实施方式中，所述另外的治疗剂选自抗-TNF抗体及其抗体片段、TNFR-1g构建体、TACE抑制剂、PDE4抑制剂、皮质类固醇、布地奈德、地塞米松、柳氮磺胺吡啶、5-氨基水杨酸、奥沙拉嗪、IL-1B转化酶抑制剂、IL-lra、酪氨酸激酶抑制剂、6-巯基嘌呤类和IL-11。在再另一个实施方式中，所述另外的治疗剂选自皮质类固醇，强的松龙，甲基强的松龙，硫唑嘌呤，环磷酰胺，环孢霉素，甲氨蝶呤，4-氨基吡唳，替扎尼定，干扰素_β la,干扰素-β lb, Copolymerl,高压氧,静脉内免疫球蛋白，克拉利平(clabribine)，TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-16, IL-18,EMAP-1I,GM-CSF、FGF、PDGF 的抗体或激动剂，CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、CD90的抗体或它们的配体，甲氨蝶呤，环孢霉素，FK506，雷帕霉素，麦考酚酸莫酯，来氟米特，NTHEs，布洛芬，皮质类固醇，强的松龙，磷酸二酯酶抑制剂，腺苷激动剂，抗血栓形成剂，补体抑制剂，肾上腺素能剂，IRAK, NIK, IKK, p38或MAP激酶抑制剂，IL-1 β转化酶抑制剂，TACE抑制剂，T-细胞信号传导抑制剂，激酶抑制剂，金属蛋白酶抑制剂，柳氮磺胺吡啶，硫唑嘌呤，6-巯基嘌呤类，血管紧张素转化酶抑制剂，可溶性细胞因子受体，可溶性P55TNF 受体，可溶性 p75TNF 受体，sIL-lRI, sIL-lRII，sIL_6R，sIL_13R，抗 _P7s，p_ 选择蛋白糖蛋白配体(PSGL)，抗炎性细胞因子，IL-4，IL-10, IL-13和TGFβ。
[0029]在另一个方面，本发明提供了包含人抗体或其抗原结合部分的组合物。该组合物包括约0-100%的抗体或其抗原结合部分，其在Fe区的N-连接糖基化位点处以寡聚甘露糖型结构糖基化；和约0-100%的抗体或其抗原结合部分，其在Fe区的N-连接糖基化位点处以岩藻糖基化双触角寡糖型结构糖基化，其中所述组合物表现出所需的血清清除率。
[0030]在再另一个方面，本发明提供了包含人抗体或其抗原结合部分的组合物。该组合物包括约10-30%的抗体或其抗原结合部分，其在Fe区的N-连接糖基化位点处以寡聚甘露糖型结构糖基化；和约70-90%的抗体或其抗原结合部分，其在Fe区的N-连接糖基化位点处以岩藻糖基化双触角寡糖型结构糖基化，其中所述组合物表现出所需的血清清除率。
[0031]在一个方面，本发明提供了包含ΑΒΤ-874或其抗原结合部分的组合物。该组合物包括约0-100%的在Asn297处以独立地选自M5、M6、M7、M8和M9的寡聚甘露糖结构糖基化的 ABT-874 ;和约 0-100% 的在 Asn297 处以独立地选自 NGA2F、NAIF、NA2F、NGA2F_GlcNAc和NAlF-GlcNAc的岩藻糖基化双触角寡糖结构糖基化的ABT-874。
[0032]在另一个方面，本发明提供了包含ABT-874或其抗原结合部分的组合物。该组合物包括约10-30%的在Asn297处以独立地选自M5、M6、M7、M8和M9的寡聚甘露糖结构糖基化的 ABT-874 ;和约 70-90% 的在 Asn297 处以独立地选自 NGA2F、NAlF、NA2F、NGA2F_GlcNAc和NAlF-GlcNAc的岩藻糖基化双触角寡糖结构糖基化的ABT-874。
[0033]在一个方面，本发明提供了调节包含人抗体或其抗原结合部分的组合物的药代动力学的方法。该方法包括调节在Fe区的N-连接糖基化位点处以寡聚甘露糖型结构糖基化的抗体的第一水平；和调节在Fe区的N-连接糖基化位点处以岩藻糖基化双触角寡糖型结构糖基化的抗体的第二水平，其中所述第一和第二水平的调节导致所需的血清清除率，从而调节包含人抗体或其抗原结合部分的组合物的药代动力学。
[0034]所述N-连接糖基化位点可以是抗体Fe区上的天冬酰胺残基，如Asn297。
[0035]在一个实施方式中，所述寡聚甘露糖型结构独立地选自M5、M6、M7、M8和M9。
[0036]在一个实施方式中，所述岩藻糖基化双触角寡糖型结构独立地选自NGA2F、NA1F、NA2F、NGA2F-GlcNAc 和 NAlF-GlcNAc。
[0037]在一个实施方式中，所述第一水平为约0-100%。在另一个实施方式中，第一水平为约10-30%。在一个实施方式中，所述第一水平选自约0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%,8%,9% ,10% ,11% >12% ,13% ,14% ,15% ,16% ,17% ,18% ,19%,20%,21%,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 %,32%,33%,34%,35%,36%,37%,38%,39%A0%A1%A2%A3%A4:%A5%A6%A7%A8%A9%,50%,51%,52%,53%,54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61 %,62%,63%,64%,65%,66%,67%,68%,69%,70%,71 %,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%、99% 和约 100%。
[0038]在一个实施方式中，所述第二水平为约0-100%。在另一个实施方式中，所述第二水平为约70-90%。在再另一个实施方式中，所述第二水平选自约0%、1%、2%、3%、4%、5%,6%,7%,8%,9%Λ0%Λ1%Λ2%Λ3%Λ4:%Λ5%Λ6%Λ7%Λ8%Λ9%,20%,21 22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 32%,33%,34%,35%,36%,37%,38%,39%,40%,41 %,42%,43%,44%,45%,46%,47%,48%,49%,50%,51 52%,53%,54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61 62%,63%,64%,65%,66%,67%,68%,69%,70%,71 %,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 92%,93%,94%,95%,96%、97%、98%、99% 和约 100%。
[0039]在一个实施方式中，所需的血清清除率是快速血清清除率。在一个实施方式中，所述第一水平大于约50%。在另一个实施方式中，所述第一水平大于约30%。在一个实施方式中，所述第一水平为约51-100%。在另一个实施方式中，所述第一水平为约31-100%。
[0040]在一个实施方式中，所需的血清清除率是慢速血清清除率。在一个实施方式中，所述第一水平为约0-100%。在一个实施方式中，所述第二水平为约10-30%。
[0041]所述抗体或其抗原结合部`分可以包含λ轻链。
[0042]所述抗体或其抗原结合部分可以包含选自IgGl、IgG2、IgG3和IgG4恒定区的重链恒定区。在一个实施方式中，所述重链恒定区是IgGl。在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分包含IgGl重链恒定区和λ轻链。
[0043]所述抗体或其抗原结合部分可以在哺乳动物细胞、CHO细胞或骨髓瘤细胞系中产生。
[0044]所述抗体或其抗原结合部分可以是抗IL-12抗体、抗IL-23抗体或者ΑΒΤ-874或其片段。
[0045]在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID Ν0:25的氨基酸序列的重链⑶R3和含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链⑶R3。在一个实施方式中，所述人抗体或其抗原结合部分进一步包含含有SEQ ID Ν0:27的氨基酸序列的重链CDR2和含有SEQ ID Ν0:28的氨基酸序列的轻链CDR2。在另一个实施方式中，所述人抗体或其抗原结合部分进一步包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链⑶Rl和含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链CDRl。在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分包含含有SEQID NO:31的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链可变区。
[0046]在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合部分是选自CNT01275、托西莫单抗、WR1-170、WOl、TNF-H9G1、ΤΗΥ-32、ΤΗΥ-29、TEL16、TEL14、Tel 13、SMl、Sl-U RSP4、RH-14、RF-TS7、RF-SJ2、RF-SJU RF-AN、PR-TS2、PR-TS1、PR-SJ2、PR-SJl、PHOXl5, PAG-U 0G-31、N0.13、NM3E2SCFV、MUC1-1、MN215、MC116、MAD-2、MAB67、MAB63、MAB60、MAB59、MAB57、MAB56、MAB111、MAB107、L3055-BL、K6H6、K6F5、K5G5、K5C7、K5B8、K4B8、JAC-10、HUC、HMST-1、HIH2、HIH10、HBW4-1、HBP2、HA1、H6-3C4、H210、GP44、GG48、GG3、GAD-2, FOM-A, FOM-1、FOG 1-A3、FOG-B, DPC, DPA、DOBl、DOl、CLLOOl、CLL-249, CD4-74、CB-201, C304RF、BSA3、B03、BOl、BEN-27、B-33、B-24, ANT1-TEST、ANT1-EST, ANT1-DIGB, ANT1-DIGA, AIG、9604、448.9G.F1、
33.Hll、32.B9、24A5、1B9/F2、13E10、123AV16-1、11-50 和 1.32 的抗体或其片段。
[0047]在一个方面，本发明提供了调节包含ABT-874或其抗原结合部分的组合物的药代动力学的方法。该方法包括调节在Fe区的N-连接糖基化位点处以独立地选自M5、M6、M7、M8和M9的寡聚甘露糖型结构糖基化的ABT-874或其抗原结合片段的第一水平；和调节在Fe区的N-连接糖基化位点处以独立地选自NGA2F、NAlF、NA2F、NGA2F-GlcNAc和NAlF-GlcNAc的岩藻糖基化双触角寡糖型结构糖基化的ABT-874或其抗原结合片段的第二水平，其中所述第一和第二水平的调节导致所需的血清清除率，从而调节包含ABT-874或其抗原结合部分的组合物的药代动力学。
[0048]本发明的其它特征和优势从下面的详细说明和权利要求书将变得很清楚。
[0049]附图简要说明
[0050]本专利或申请文件包含至少一张彩图。本专利或专利申请公开的带有彩图的拷贝在提出要求并付出必需费用后由专利局提供。
[0051]图1A和IB显示了在向健康受试者单次IV输注700mg ABT-874后单个ABT-874寡聚甘露糖型结构(FBO) (IA)和岩藻糖基化双触角寡糖型结构(IB)糖形随时间变化的平均值土 SD (log-线性标度)。
[0052]图2A和2B显示在单次IV输注700mg ABT-874后糖形组I (FBO)和组2 (寡聚甘露糖)在线性(2A)和log-线性(2B)标度上的血清浓度平均值土SD-时间分布。
[0053]图3显示了单个预测ABT-874浓度相对于观测的浓度及权重残差相对于时间的拟合优度曲线。
[0054]左上图显示ABT-874组I (FBO)的个体预测浓度(IPRE)与观测浓度，和右上图显示ABT-874组2 (寡聚甘露糖)的个体预测浓度(IPRE)与观测的浓度。
[0055]对于相对于群体预测浓度(PRED)的浓度分析，左中图显示ABT-874组I (FBO)的条件权重残差(CWRES)，和右中图显示ABT-874组2(寡聚甘露糖)的条件权重残差(CffRES)。
[0056]对于相对于时间的浓度分析，左下图显示ABT-874组I (FBO)的条件权重残差(CffRES)，和右下图显示ABT-874组2 (寡聚甘露糖)的条件权重残差(CWRES)。
[0057]图4显示ABT-874组2(寡聚甘露糖，左图)和组1(FB0，右图)的可视化预测检验。实线:中值预测浓度；虚线:预测浓度的5和95分位；空心圆圈:观测浓度。
[0058]图5显示纯FBO (淡灰)和寡聚甘露糖(中灰)ABT-874糖形的模拟药代动力学分布(90%预测区间)。
[0059]图6显示与参比产物(90/10FB0/寡聚甘露糖)一起绘图的具有70/30FB0/寡聚甘露糖(左图)和60/40 (右图)的测试ABT-874产物的模拟药代动力学分布。
[0060]图7显示来自不同糖形组合物的各1000个重复生物等效性研究的测试组合物-参比(90/10)组合物AUC0_28d比率的模拟90%置信区间。
[0061]图8显示来自不同糖形组合物的各1000个重复生物等效性研究的测试组合物-参比(90/10)组合物Cmax比率的模拟90%置信区间。
[0062]图9显示不符合使用90/10组合物作为参比的生物等效性标准(0.80-1.25)的重复研究的百分比。左上图显示不符合AUC标准的研究。右上图显示不符合Cmax标准的研究。下图显示不符合AUC或Cmax标准的研究。
[0063]本发明的详细说明
[0064]本发明至少部分地基于人抗体的糖形水平和类型与抗体的血清清除率之间的关系的发现。更具体地，在人抗IL-12/IL-23p40抗体(ABT-874)的组合物施用于人类受试者后在该组合物中确认了 ABT-874的八个糖形。八个糖形的结构分析允许将该糖形分成两组，寡聚甘露糖型结构和岩藻糖基化双触角寡糖型结构，其进一步得到8个糖形的药代动力学分析的支持。
[0065]两个组的群体药代动力学模型表明，虽然ABT-874的寡聚甘露糖型结构具有比ABT-874的岩藻糖基化双触角寡糖型结构高大约40%的清除率，但ABT-874的总体清除率不受影响，因为ABT-874组合物中寡聚甘露糖型结构的百分比为约10%，与之形成对比的是岩藻糖基化双触角寡糖型结构的百分比为90%。
[0066]两个组的群体药代动力学模型进一步表明，提高ABT-874组合物中寡聚甘露糖型结构的水平至寡糖结构总水平的大约30%对于抗体或其抗原结合片段的药代动力学或血
清清除率没有影响。
[0067]因此，本发明提供了抗体及其抗原结合片段的组合物，其包含不同水平的糖形以获得所需的血清清除率。另外，本发明提供了用于调节人抗体和涉及人抗体的治疗组合物的药代动力学以获得所需的血清清除率的方法。
[0068]1.定义
[0069]冠词“一”和“一个”本文中用于指一个或多于一个的(即指至少一个)该冠词的语法宾语。举例来说，“一元件”意思是一个元件或多于一个元件。
[0070]大部分天然存在的肽(或蛋白质)包含通过选定数目的氨基酸上的特定连接沿初级肽链的长度连接到肽上的碳水化合物或糖部分。因此，许多天然存在的肽称为“糖肽”或“糖蛋白”或者称为“糖基化的”蛋白质或肽。
[0071]术语“糖形”指仅所连接的聚糖的数量和/或类型不同的蛋白质(例如抗体)的异形体。糖蛋白通常由多种不同的糖形组成。
[0072]蛋白质上发现的主要的糖是葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、N-乙酰半乳糖胺(“GalNAc”)、N-乙酰葡糖胺(“GlcNAc”)和唾液酸(例如，N-乙酰神经氨酸(“NANA”或“NeuAc”，其中“Neu”是神经氨酸)和“Ac”指“乙酰基”)。糖基的加工在ER的内腔与翻译同时地发生且在高尔基器中继续而获得N-连接的糖蛋白。
[0073]连接到肽链上的寡糖结构称为“聚糖”分子。在天然发生的糖肽中发现的聚糖结构通常分成两类，“N-连接的聚糖”或“N-连接的寡糖”和“O-连接的聚糖”或“O-连接的寡糖”。
[0074]包含“O-连接的聚糖”的肽具有连接到初级蛋白质中的丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、羟赖氨酸和/或羟脯氨酸残基的羟基氧上的糖。
[0075]在真核细胞中表达的肽通常包含N-聚糖。“N-聚糖”通过N-乙酰葡糖胺残基在蛋白质中天冬酰胺或精氨酸残基的酰胺氮处N-糖基化。这些“N-连接糖基化位点”存在于包含例如氨基酸序列天冬酰胺-X-丝氨酸/苏氨酸的肽初级结构中，其中X是除脯氨酸和天冬氨酸外的任何氨基酸残基。[0076]用于测定聚糖初级结构的技术是本领域中公知的且详细描述在例如Montreuil，Polysaccharides in Medicinal Applications 中的〃 Structure and Biosynthesis ofGlycopeptides " , pp.273-327,1996,编者 Severian Damitriu, Marcel Dekker,NY 中。因此对于本领域技术人员来说，分离由细胞产生的肽群体并测定与其连接的聚糖的结构是常规的事务。例如，可获得用于(i)通过化学切割(如水解、醋酸水解、肼解)或通过亚硝脱氨(nitixnis deamination)分裂糖苷键；(ii)完全甲基化后进行水解或甲醇醇解及部分甲基化的单糖的气-液色谱和质谱；和Qii)使用外切糖苷酶定义单糖之间端基连接(其也通过顺序降解提供对于初级聚糖结构的深入了解)的方法。荧光标记和随后的高效液相(HPLC)如正相HPLC、质谱和核磁共振(NMR)谱如高磁场NMR也可用于测定聚糖初级结构。
[0077] 用于糖分析的试剂盒和设备也是可商购得到的。荧光辅助糖电泳(FACE)可从Glyko, Inc.(Novato, Calif.)获得。在FACE分析中，糖偶联物(对于N-连接的聚糖)通过内切H或N-聚糖酶(PNGase F)或(对于Ser/Thr连接的聚糖)通过肼从肽释放。聚糖然后以非结构区分方式在还原性末端用荧光团标记。荧光团标记的聚糖然后在聚丙烯酰胺凝胶中基于糖的电荷/质量比以及流体动力学体积分离。在UV光下获取凝胶的图像，且聚糖的组成通过与标准品相比的迁移距离来确定。寡糖可以通过由分析通过外切糖苷酶消化顺序移除糖所导致的迁移偏移而以这种方式测序。
[0078]所有N-连接的寡糖具有共同的Man3GlcNAc2“五糖核心”。(“Man”指甘露糖；“Glc”指葡萄糖；“NAc”指N-乙酰基和“GlcNAc”指N-乙酰葡糖胺)。五糖核心也称为“三甘露糖核心”或“少甘露糖(paucimannose)核心”。
[0079]N-聚糖在包含添加到Man3GlcNAc2核心结构上的外周糖(如N-乙酰葡糖胺、半乳糖、N-乙酰半乳糖胺、N-乙酰神经氨酸、岩藻糖和唾液酸)的分支(也称为“链(antennae)”的有无和/或数目方面不同。任选地，这一结构也可以包含核心岩藻糖分子和/或木糖分子。对于标准糖生物学命名法的综述参见Essentials of Glycobiology Varki等编辑，1999，CSHL Press，其内容通过引用引入。
[0080]N-聚糖按照其分支成分进行分类(例如，寡聚甘露糖型、复合的或杂合的)。“寡聚甘露糖型”或“高甘露糖型”N-聚糖具有五个或更多的甘露糖残基。
[0081]“复合型” N-聚糖通常具有连接到五糖核心的1，3甘露糖臂上的至少一个GlcNAc和连接到五糖核心的1，6甘露糖臂上的至少一个GlcNAc。复合型N-聚糖也可以具有半乳糖(“Gal”)或N-乙酰半乳糖胺残基，其任选地被唾液酸或衍生物如N-乙酰神经氨酸修饰。复合型N-聚糖也可以具有包含“分叉”GlcNAc的链间取代及核心岩藻糖(“Fuc”)。复合型N-聚糖也可以在五糖核心上具有多个链，并因此也被称为“多链型聚糖”。
[0082]“杂合型”N-聚糖包含在五糖核心的1，3甘露糖臂的末端上的至少一个GlcNAc和在三甘露糖核心的1，6甘露糖臂上的零个或多个甘露糖。
[0083]在一个实施方式中，在本发明的组合物中存在的和/或适合用于所述的方法中的人抗体或其抗原结合片段包含寡聚甘露糖型结构。在另一个实施方式中，在本发明的组合物中存在的和/或适合用于所述的方法中的人抗体或其抗原结合片段包含多链型结构。在另一个实施方式中，在本发明的组合物中存在的和/或适合用于所述的方法中的人抗体或其抗原结合片段包含杂合型结构。在再另一个实施方式中，在本发明的组合物中存在的和/或适合用于所述的方法中的人抗体或其抗原结合片段包含独立地选自寡聚甘露糖型结构、多链型结构和杂合型结构的N-聚糖结构。
[0084]可以存在于本发明的组合物中和/或可以用于本发明的方法中的寡聚甘露糖型结构在本文中称为“M5 ”、“M6 ”、“M7 ”、“M8 ”和“M9 ”。
[0085]在一个实施方式中，M5寡聚甘露糖型结构具有结构(I):
[0086]
【权利要求】
1.一种包含人抗体或其抗原结合部分的组合物，该组合物包含 (a)第一水平的抗体或其抗原结合部分，其在Fe区的N-连接糖基化位点处以寡聚甘露糖型结构糖基化；和 (b)第二水平的抗体或其抗原结合部分，其在Fe区的N-连接糖基化位点处以岩藻糖基化双触角寡糖型结构糖基化； 其中所述组合物表现出所需的血清清除率。
2.权利要求1的组合物，其中所述N-连接糖基化位点是抗体Fe区上的天冬酰胺残基。
3.权利要求2的组合物，其中所述天冬酰胺残基是Asn297。
4.权利要求1的组合物，其中所述寡聚甘露糖型结构独立地选自M5、M6、M7、M8和M9。
5.权利要求1的组合物，其中所述岩藻糖基化双触角寡糖型结构独立地选自NGA2F、NAIF、NA2F、NGA2F_GlcNAc 和 NAlF-GlcNAc。
6.权利要求1的组合物,其中所述第一水平为约0-100%。
7.权利要求1的组合物,其中所述第一水平为约10-30%。
8.权利要求6的组合物，其中所述第一水平选自约0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 %,32%,33%,34%,35%,36%,37%,38%,39%A0%A1%A2%A3%A4:%A5%A6%A7%A8%A9%,50%,51%,52%,53%,54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61 %,62%,63%,64%,65%,66%,67%,68%,69%,70%,71 %,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%、99% 和约 100%。
9.权利要求1的组合物,其中所述第二水平为约0-100%。
10.权利要求1的组合物，其中所述第二水平为约70-90%。
11.权利要求9的组合物，其中所述第二水平选自约0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%,8%,9% ,10% ,11% >12% ,13% ,14% ,15% ,16% ,17% ,18% ,19%,20%,21%,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 %,32%,33%,34%,35%,36%,37%,38%,39%A0%A1%A2%A3%A4:%A5%A6%A7%A8%A9%,50%,51%,52%,53%,54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61 %,62%,63%,64%,65%,66%,67%,68%,69%,70%,71 %,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%、99% 和约 100%。
12.权利要求1的组合物,其中所需的血清清除率是快速血清清除率。
13.权利要求12的组合物，其中所述第一水平大于约50%。
14.权利要求12的组合物，其中所述第一水平大于约30%。
15.权利要求13的组合物，其中所述第一水平为约51-100%。
16.权利要求14的组合物，其中所述第一水平为约31-100%。
17.权利要求1的组合物,其中所需的血清清除率是慢速血清清除率。
18.权利要求17的组合物，其中所述第一水平为约0-50%。
19.权利要求17的组合物，其中所述第一水平为约10-30%。
20.权利要求1的组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分包含λ轻链。
21.权利要求1的组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分包含选自IgGl、IgG2、IgG3和IgG4恒定区的重链恒定区。
22.权利要求21的组合物，其中所述重链恒定区是IgGl重链。
23.权利要求1的组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分包含IgGl重链恒定区和λ轻链。
24.权利要求1的组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分在哺乳动物细胞中产生。
25.权利要求24的组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分在CHO细胞中产生。
26.权利要求1的组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分在骨髓瘤细胞系中产生。
27.权利要求1的组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分是抗IL-12抗体。
28.权利要求1的组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分是抗IL-23抗体。
29.权利要求1的组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分是ΑΒΤ-874或其片段。
30.权利要求1的组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分包含含有SEQID NO:25的氨基酸序列的重链⑶R3和含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链⑶R3。
31.权利要求30的组合物，其中所述人抗体或其抗原结合部分进一步包含含有SEQIDNO:27的氨基酸序列的重链⑶R2和含有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链⑶R2。
32.权利要求31的组合`物，其中所述人抗体或其抗原结合部分进一步包含含有SEQIDNO:29的氨基酸序列的重链⑶Rl和含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链⑶R1。
33.权利要求1的组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分包含含有SEQID NO:31的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链可变区。
34.权利要求1的组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分是选自CNT01275、托西莫单抗、WR1-170、W01、TNF-H9Gl、THY-32、THY-29、TEL16、TEL14、Tell3、SMl、Sl-l、RSP4、RH-14、RF-TS7、RF-SJ2、RF-SJU RF-AN、PR-TS2、PR-TS1、PR-SJ2、PR-SJl、PHOXl5, PAG-U 0G-31、N0.13、NM3E2SCFV、MUC1-1、MN215、MC116、MAD-2、MAB67、MAB63、MAB60、MAB59、MAB57、MAB56、MAB111、MAB107、L3055-BL、K6H6、K6F5、K5G5、K5C7、K5B8、K4B8、JAC-10、HUC、HMST-1、HIH2、HIH10、HBW4-1、HBP2、HA1、H6-3C4、H210、GP44、GG48、GG3、GAD-2, FOM-A, FOM-1、FOG 1-A3、FOG-B、DPC、DPA、DOBU DOU CLLOO1、CLL-249、CD4-74、CB-201、C304RF、BSA3、B03、BOl、BEN-27、B-33、B-24、ANT1-TEST、ANT1-EST, ANT1-DIGB、ANT1-DIGA、AIG、9604、448.9G.F1、33.Hll、32.B9、24A5、1B9/F2、13E10、123AV16-1、11-50 和 1.32 的抗体或其片段。
35.权利要求1的组合物，其中所述组合物进一步包含选自缓冲剂、多元醇和表面活性剂的另外的试剂。
36.权利要求35的组合物，其中所述缓冲剂选自L-组氨酸、琥珀酸钠、柠檬酸钠、磷酸钠和磷酸钾。
37.权利要求35的组合物，其中所述多元醇选自甘露糖醇和山梨糖醇。
38.权利要求35的组合物，其中所述表面活性剂选自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和BRIJ表面活性剂。
39.权利要求35的组合物，其中所述组合物进一步包含甲硫氨酸。
40.权利要求1的组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分的浓度为约0.l-250mg/ml。
41.权利要求1的组合物，其中所述组合物适合于肠胃外施用。
42.权利要求1的组合物，其中所述组合物适合于静脉内注射或静脉内输注。
43.权利要求1的组合物，其中所述组合物适合于皮下注射或肌肉内注射。
44.权利要求1的组合物，进一步包含另外的治疗剂。
45.权利要求44的组合物，其中所述另外的治疗剂选自布地奈德，表皮生长因子，皮质类固醇，环孢菌素，柳氮磺胺吡啶，氨基水杨酸盐，6-巯基嘌呤，硫唑嘌呤，甲硝哒唑，脂氧合酶抑制剂，美沙拉嗪，奥沙拉嗪，巴柳氮，抗氧化剂，血栓烷抑制剂，IL-1受体拮抗剂，抗IL-1 β单克隆抗体，抗IL-6单克隆抗体，生长因子，弹性蛋白酶抑制剂，吡啶基-咪唑化合物，TNF、LT、IL-U IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-11, GM-CSF, FGF 和PDGF的抗体或激动剂，⑶2、⑶3、⑶4、⑶8、⑶25、⑶28、⑶30、⑶40、⑶45、⑶69、⑶90的抗体或它们的配体，甲氨蝶呤，环孢菌素，FK506，雷帕霉素，麦考酚酸莫酯，来氟米特，NTHEs，布洛芬，皮质类固醇，强的松龙，磷酸二酯酶抑制剂，腺苷激动剂，抗血栓形成剂，补体抑制剂，肾上腺素能剂，IRAK, NIK, IKK, p38，MAP激酶抑制剂，IL-1 β转化酶抑制剂，TNFa转化酶抑制剂，T-细胞信号传导抑制剂，金属蛋白酶抑制剂，柳氮磺胺吡啶，硫唑嘌呤，6-巯基嘌呤类，血管紧张素转化酶抑制剂，可溶性细胞因子受体，可溶性P55TNF受体，可溶性p75TNF受体，sIL-lRI, sIL-lRII, sIL_6R，抗炎性细胞因子，IL-4，IL-10，IL-11，IL-13 和 TGFβ。
46.权利要求44的组合物，其中所述另外的治疗剂选自抗TNF抗体及其抗体片段、TNFR-1g构建体、TACE抑制剂、PDE4抑制剂、皮质类固醇、布地奈德、地塞米松、柳氮磺胺吡啶、5-氨基水杨酸、奥沙拉嗪、IL-1 β转化酶抑制剂、IL-lra、酪氨酸激酶抑制剂、6-巯基嘌呤类和IL-1I。
47.权利要求44的组合物，其中所述另外的治疗剂选自皮质类固醇，强的松龙，甲基强的松龙，硫唑嘌呤，环磷酰胺，环孢霉素，甲氨蝶呤，4-氨基吡啶，替扎尼定，干扰素β la，干扰素β lb, Copolymer 1，高压氧，静脉内免疫球蛋白，克拉利平，TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16, IL-18, EMAP-11, GM-CSF, FGF、PDGF 的抗体或激动剂，CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、CD90 的抗体或它们的配体，甲氨蝶呤，环孢霉素，FK506,雷帕霉素，麦考酚酸莫酯，来氟米特，NTHEs，布洛芬，皮质类固醇，强的松龙，磷酸二酯酶抑制剂，腺苷激动剂，抗血栓形成剂，补体抑制剂，肾上腺素能剂，IRAK,NIK, IKK, p38或MAP激酶抑制剂，IL-1 β转化酶抑制剂，TACE抑制剂，T-细胞信号传导抑制剂，激酶抑制剂，金属蛋白酶抑制剂，柳氮磺胺吡啶，硫唑嘌呤，6-巯基嘌呤类，血管紧张素转化酶抑制剂，可溶性细胞因子受体，可溶性P55TNF受体，可溶性p75TNF受体，sIL-lRI，sIL-lRII, sIL-6R, sIL_13R，抗_P7s，p_选择蛋白糖蛋白配体(PSGL)，抗炎性细胞因子，IL-4, IL-10, IL-13 和 TGF β。
48.一种包含人抗体或其抗原结合部分的组合物，其中该组合物包含 (a)约0-100%的抗体或其抗原结合部分，其在Fe区的N-连接糖基化位点处以寡聚甘露糖型结构糖基化；和 (b)约0-100%的抗体或其抗原结合部分，其在Fe区的N-连接糖基化位点处以岩藻糖基化双触角寡糖型结构糖基化，其中所述组合物表现出所需的血清清除率。
49.一种包含人抗体或其抗原结合部分的组合物，其中该组合物包含 (a)约10-30%的抗体或其抗原结合部分，其在Fe区的N-连接糖基化位点处以寡聚甘露糖型结构糖基化；和(b)约70-90%的抗体或其抗原结合部分，其在Fe区的N-连接糖基化位点处以岩藻糖基化双触角寡糖型结构糖基化，其中所述组合物表现出所需的血清清除率。
50.一种包含ABT-874或其抗原结合部分的组合物，其中 (a)约0-100%的ABT-874在Asn297处以独立地选自M5、M6、M7、M8和M9的寡聚甘露糖结构糖基化；和
(b)约0-100 % 的 ABT-874 在 Asn297 处以独立地选自 NGA2F、NAlF、NA2F、NGA2F_GlcNAc和NAlF-GlcNAc的岩藻糖基化双触角寡糖结构糖基化。
51.一种包含ABT-874或其抗原结合部分的组合物，其中 (a)约10-30%的ABT-874在Asn297处以独立地选自M5、M6、M7、M8和M9的寡聚甘露糖结构糖基化；和
(b)约70-90 % 的 ABT-874 在 Asn297 处以独立地选自 NGA2F、NAlF、NA2F、NGA2F_GlcNAc和NAlF-GlcNAc的岩藻糖基化双触角寡糖结构糖基化。
52.一种调节包含人抗体或其抗原结合部分的组合物的药代动力学的方法，该方法包括 (a)调节在Fe区的N-连接糖基化位点处以寡聚甘露糖型结构糖基化的抗体的第一水平；和 (b)调节在Fe区的N-连接糖 基化位点处以岩藻糖基化双触角寡糖型结构糖基化的抗体的第二水平； 其中所述第一和第二水平的调节导致所需的血清清除率，从而调节包含人抗体或其抗原结合部分的组合物的药代动力学。
53.权利要求52的方法，其中所述N-连接糖基化位点是抗体Fe区上的天冬酰胺残基。
54.权利要求53的方法，其中所述天冬酰胺残基是Asn297。
55.权利要求52的方法，其中所述寡聚甘露糖型结构独立地选自M5、M6、M7、M8和M9。
56.权利要求52的方法，其中所述岩藻糖基化双触角寡糖型结构独立地选自NGA2F、NAIF、NA2F、NGA2F_GlcNAc 和 NAlF-GlcNAc。
57.权利要求52的方法，其中所述第一水平为约0-100%。
58.权利要求52的方法，其中所述第一水平为约10-30%。
59.权利要求57的方法，其中所述第一水平选自约0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%,8%,9% ,10% ,11% >12% ,13% ,14% ,15% ,16% ,17% ,18% ,19%,20%,21%,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 %,32%,33%,34%,35%,36%,37%,38%,39%A0%A1%A2%A3%A4:%A5%A6%A7%A8%A9%,50%,51%,52%,53%,54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61 %,62%,63%,64%,65%,66%,67%,68%,69%,70%,71 %,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%、99% 和约 100%。
60.权利要求52的方法，其中所述第二水平为约0-100%。
61.权利要求52的方法，其中所述第二水平为约10-30%。
62.权利要求60的方法，其中所述第二水平选自约0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%,8%,9%,10%,11%>12%,13%,14%,15%,16% ,17%,18%,19%,20%,21%,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 %,32%,33%,34%,35%,36%,37%,38%,39%A0%A1%A2%A3%A4:%A5%A6%A7%A8%A9%,50%,51%,52%,53%,54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61 %,62%,63%,64%,65%,66%,67%,68%,69%,70%,71 %,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%、99% 和约 100%。
63.权利要求52的方法，其中所需的血清清除率是快速血清清除率。
64.权利要求63的方法，其中所述第一水平大于约50%。
65.权利要求63的方法，其中所述第一水平大于约30%。
66.权利要求64的方法，其中所述第一水平为约51-100%。
67.权利要求65的方法，其中所述第一水平为约31-100%。
68.权利要求52的方法，其中所需的血清清除率是慢速血清清除率。
69.权利要求68的方法，其中所述第一水平为约0-100%。`
70.权利要求68的方法，其中所述第二水平为约70-90%。
71.权利要求52的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分包含λ轻链。
72.权利要求52的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分包含选自IgGl、IgG2、IgG3和IgG4恒定区的重链恒定区。
73.权利要求72的方法，其中所述重链恒定区是IgGl。
74.权利要求52的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分包含IgGl重链恒定区和λ轻链。
75.权利要求52的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分在哺乳动物细胞中产生。
76.权利要求75的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分在CHO细胞中产生。
77.权利要求52的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分在骨髓瘤细胞系中产生。
78.权利要求52的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分是抗IL-12抗体。
79.权利要求52的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分是抗IL-23抗体。
80.权利要求52的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分是ΑΒΤ-874或其片段。
81.权利要求52的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分包含含有SEQID NO:25的氨基酸序列的重链⑶R3和含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链⑶R3。
82.权利要求81的方法，其中所述人抗体或其抗原结合部分进一步包含含有SEQIDNO:27的氨基酸序列的重链⑶R2和含有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链⑶R2。
83.权利要求82的方法，其中所述人抗体或其抗原结合部分进一步包含含有SEQIDNO:29的氨基酸序列的重链⑶Rl和含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链⑶R1。
84.权利要求52的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分包含含有SEQID NO:31的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链可变区。
85.权利要求52的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分是选自CNT01275、托西莫单抗、WR1-170、W01、TNF-H9Gl、THY-32、THY-29、TEL16、TEL14、Tell3、SMl、Sl-l、RSP4、RH-14、RF-TS7、RF-SJ2、RF-SJU RF-AN, PR-TS2、PR-TSl、PR-SJ2、PR-SJl、PHOXl5、PAG-U 0G-31、N0.13、NM3E2SCFV、MUC1-1、MN215、MC116、MAD-2、MAB67、MAB63、MAB60、MAB59、MAB57、MAB56、MABl11、MAB107、L3055-BL、K6H6、K6F5、K5G5、K5C7、K5B8、K4B8、JAC-10,HUC,HMST-1、HIH2、HIH10、HBW4-1、HBP2、HA1、H6-3C4、H210、GP44、GG48、GG3、GAD-2, FOM-A, FOM-1、FOG 1-A3、FOG-B, DPC, DPA、DOBl、DOl、CLLOOl、CLL-249, CD4-74、CB-201, C304RF、BSA3、B03、BOl、BEN-27、B-33、B-24, ANT1-TEST、ANT1-EST, ANT1-DIGB, ANT1-DIGA, AIG、9604、448.9G.F1、。33.Hll、32.B9、24A5、1B9/F2、13E10、123AV16-1、11-50 和 1.32 的抗体或其片段。
86.—种调节包含ABT-874或其抗原结合部分的组合物的药代动力学的方法，该方法包括 (a)调节在Fe区的N-连接糖基化位点处以独立地选自M5、M6、M7、M8和M9的寡聚甘露糖型结构糖基化的ABT-874或其抗原结合片段的第一水平；和 (b)调节在Fe区的N-连接糖基化位点处以独立地选自NGA2F、NAIF、NA2F、NGA2F-GlcNAc和NAlF-GlcNAc的岩藻糖基化双触角寡糖型结构糖基化的ABT-874或其抗原结合片段的第二水平； 其中所述第一和第二水平的调节导致所需的血清清除率，从而调节包含ABT-874或其抗原结合部分的组合物的药代动力学。
【文档编号】C12P21/08GK103492584SQ201280006790
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2012年1月26日 优先权日:2011年1月28日
【发明者】I·R·S·科雷亚, 藤森田路, M·W·鲁斯卡, S·K·保尔森 申请人:阿布维公司