对亚型禽流感病毒进行检测过程中rna样品的收集的制作方法
【专利摘要】本发明公开了对亚型禽流感病毒进行检测过程中RNA样品的收集，首先对样品进行酶切鉴定，即在适宜的温水中进行消化，至少5小时，然后用百分之二点三的琼脂糖凝胶电泳进行测试，检验其结果；第二步是对其进行序列测定，即对于回收的阳性产物，以此作为模版继续拧PCR扩增，然后连接、转化，得到阳性克隆物，对其进行测序；去除PCR反应中的反应物，加入适量的酶混合物，二者重量比例为5：1；充分混合后烤箱中烘干；温浴；悬浮沉淀物；吸取沉淀物即可；在进行悬浮之前，可以进行低速离心，最多三分钟；所述酶切鉴定和序列鉴定两个步骤之间，时间间隔不能超过12小时。本发明的有益效果是，实验的特异性和灵敏性比较高，能够配合阐述核酸序列结构，操作相对简单，对条件要求不高。
【专利说明】对亚型禽流感病毒进行检测过程中RNA样品的收集
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种实验方法，具体来说是指对亚型禽流感病毒进行检测过程中RNA样品的收集。
【背景技术】
[0002]禽流感病毒(AIV)属甲型流感病毒。流感病毒属于RNA病毒的正黏病毒科，分甲、乙、丙3个型。其中甲型流感病毒多发于禽类，一些亚型也可感染猪、马、海豹和鲸等各种哺乳动物及人类；乙型和丙型流感病毒则分别见于海豹和猪的感染。一般来说，禽流感病毒与人流感病毒存在受体特异性差异，禽流感病毒是不容易感染给人的。个别造成人感染发病的禽流感病毒可能是发生了变异的病毒。变异的可能性一是两种以上的病毒进入同一细胞进行重组，如猪既可感染人流感病毒，又可能感染禽流感病毒，每种病毒都具有8个基因片段，从理论上讲，可以形成256个新的重组病毒；二是病毒基因位点由于某种因素的影响，1983年4月，美国宾夕法尼亚州曾暴发H5N2型病毒引起的鸡和火鸡低致病性禽流感，由于没有及时得到有效控制，到同年10月份，同样的H5N2型毒株突然由低致病性变成高致病性，造成禽类大量死亡。因此对于禽流感病毒的研究刻不容缓。
【发明内容】
[0003]为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案:
对亚型禽流感病毒进行检测过程中RNA样品的收集，首先对样品进行酶切鉴定，即在适宜的温水中进行消化，至少5小时，然后用百分之二点三的琼脂糖凝胶电泳进行测试，检验其结果；第二步是对其进行序列测定，即对于回收的阳性产物，以此作为模版继续拧PCR扩增，然后连接、转化，得到阳性克隆物，对其进行测序；去除PCR反应中的反应物，加入适量的酶混合物，二者重量比例为5:1 ;充分混合后烤箱中烘干；温浴；悬浮沉淀物；吸取沉淀物即可。`
[0004]本发明中，在进行悬浮之前，可以进行低速离心，最多三分钟。
[0005]本发明中，所述酶切鉴定和序列鉴定两个步骤之间，时间间隔不能超过12小时。 本发明的有益效果是，可以有效避免蛋白氨基酸丢失，且稳定性好，表达量高，具有成
本低，操作简单的优点。
【具体实施方式】
[0006]对亚型禽流感病毒进行检测过程中RNA样品的收集，首先对样品进行酶切鉴定，即在适宜的温水中进行消化，至少5小时，然后用百分之二点三的琼脂糖凝胶电泳进行测试，检验其结果；第二步是对其进行序列测定，即对于回收的阳性产物，以此作为模版继续拧PCR扩增，然后连接、转化，得到阳性克隆物，对其进行测序；去除PCR反应中的反应物，加入适量的酶混合物，二者重量比例为5:1 ;充分混合后烤箱中烘干；温浴；悬浮沉淀物；吸取沉淀物即可；在进行悬浮之前，可以进行低速离心，三分钟；所述酶切鉴定和序列鉴定两个步骤之间，时间间隔12小时。
以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.对亚型禽流感病毒进行检测过程中RNA样品的收集，其特征在于，首先对样品进行酶切鉴定，即在适宜的温水中进行消化，至少5小时，然后用百分之二点三的琼脂糖凝胶电泳进行测试，检验其结果；第二步是对其进行序列测定，即对于回收的阳性产物，以此作为模版继续拧PCR扩增，然后连接、转化，得到阳性克隆物，对其进行测序；去除PCR反应中的反应物，加入适量的酶混合物，二者重量比例为5:1 ;充分混合后烤箱中烘干；温浴；悬浮沉淀物；吸取沉淀物即可。
2.如权利要求1所述的对亚型禽流感病毒进行检测过程中RNA样品的收集，其特征在于，在进行悬浮之前，可以进行低速离心，最多三分钟。
3.如权利要求1所述的对亚型禽流感病毒进行检测过程中RNA样品的收集，其特征在于，所述酶切鉴定和序列鉴定两个`步骤之间，时间间隔不能超过12小时。
【文档编号】C12Q1/68GK103614492SQ201310544096
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年11月6日 优先权日:2013年11月6日
【发明者】李刚 申请人:李刚