麦长管蚜特异性ss-coi引物对、试剂盒及其检测方法

麦长管蚜特异性ss-coi引物对、试剂盒及其检测方法
【专利摘要】本发明属于分子生物学【技术领域】，提供了一种麦长管蚜特异性SS-COI引物对、试剂盒及其检测方法。麦长管蚜特异性SS-COI引物对如SEQ?ID?No.1和2所示，所述检测方法包括使用所述引物对进行PCR扩增的步骤，如出现258bp扩增条带，如SEQ?ID?NO.3所示，则判定为麦长管蚜的样本。该检测方法操作简单、快速、高效，一般可在5个小时内完成检测，克服了传统的研究捕食性天敌对害虫捕食效应的观察法和生化手段研究捕食者与猎物关系的复杂性、费用高、缺乏对靶标的特异性等问题，适于基层推广应用。
【专利说明】麦长管蚜特异性SS-COI引物对、试剂盒及其检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于分子生物学【技术领域】，具体地说，涉及一种麦长管蚜特异性ss-coi引物对、试剂盒及其检测方法。
【背景技术】
[0002]麦长管姆Macrosiphum avenae (Fabricius),属同翅目，Φ牙科。分布在中国各产麦区。寄主于小麦、大麦、燕麦，南方偶害水稻、玉米、甘蔗、获草等。前期集中在叶正面或背面，后期集中在穗上刺吸汁液，致受害株生长缓慢，分蘖减少，千粒重下降，是麦类作物重要害虫。也是麦蚜中的优势种。麦长管蚜在田间有多种捕食性天敌(如瓢虫、草蛉、蜘蛛等)，天敌的保护和利用是麦长管蚜防治的重要措施。如何对田间不同种类天敌的控制作用进行合理评估，进而选择出繁殖力高、捕食能力和寻找寄主能力强、控害作用明显的天敌资源，是进行天敌保护合理保护与利用的基础与核心。
[0003]Species-Specific-COI PCR检测技术是在mtDNA COI技术基础上发展起来的特异序列扩增区域标记，是利用特异性的引物，根据预期DNA条带的有无来判断检测结果，无需测序和序列比对，具有灵敏度高、特异性强、快速、简便且重现性和稳定性强等优点，为准确评价天敌对猎物的捕食作用开辟了新途径。

【发明内容】

[0004]本发明的第一个目的是提供一对能特异性鉴别麦长管蚜的PCR引物，包括正向引物:5 ' -TTGGATCAT CACTTAGAATTC-3 '(如 SEQ ID N0.1 所示)和反向引物:5' -TATTATTAATGATGGTGGTAATAG-3'(如 SEQ ID N0.2 所示)。
[0005]本发明的第二个目的是提供一种用于检测麦长管蚜的试剂盒，其特征在于，包括PCR反应试剂和上述引物对，优选的试剂盒，还包括标准阳性模板。
[0006]本发明的第三个目的是提供一种麦长管蚜的特异性检测方法，包括使用上述引物对进行PCR扩增的步骤，如出现258bp扩增条带，如SEQ ID N0.3所示，则判定为麦长管蚜的样本。
[0007]优选的，所述PCR扩增的步骤中PCR反应体系以20 μ I计为:
[0008]
【权利要求】
1.一种麦长管蚜特异性SS-COI引物对，其特征在于，包括正向引物:5' -TTGGATCATCACTTAGAATTC-3'和反向引物:5' -TATTATTAATGATGGTGGTAATAG-3'。
2.一种用于检测麦长管蚜的试剂盒，其特征在于，包括PCR反应试剂和权利要求1所述的引物对。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括标准阳性模板。
4.一种麦长管蚜的特异性检测方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要求1所述引物对进行PCR扩增的步骤，如出现258bp扩增条带，如SEQ ID N0.3所示，则判定为麦长管蚜的样本。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增的步骤中PCR反应体系以20 μ I计为:模板 DNAΙ.ΟμΙ2.5mM dNTPs0.4μ1 ΙΟμΜ正向引物0.4μ1ΙΟμΜ反向引物0.4μ1SU/μΙ Easy Taq DNA聚合酶0.2μΙIOxEasy 缓冲液2.0μΙddH20补足。
6.根据权利要求4或5所述的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增的步骤中，PCR反应条件为:94°C 4分钟；94°C 30秒，56°C 30秒，72°C 30秒，共45个循环；72°C I秒。
7.根据权利要求2或3所述试剂盒在检测麦长管蚜中的应用。
【文档编号】C12Q1/68GK103740841SQ201410033243
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2014年1月23日 优先权日:2014年1月23日
【发明者】王倩, 杨帆, 陆宴辉, 杨益众 申请人:中国农业科学院植物保护研究所