一种灵芝多糖高产工程菌株Rmust-UDP及其构建方法
【专利摘要】本发明公开一种灵芝多糖高产工程菌株Rmust-UDP及其构建方法，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNO.9324，本发明提供的灵芝工程菌，是通过选用灵芝强启动子P- gpd 过表达编码UDP-葡萄糖焦磷酸化酶（UDP）基因，得到高产灵芝多糖灵芝工程菌Rmust-UDP；通过摇瓶发酵实验表明，该菌在其细胞生长不受影响的情况下，UDP转化子菌株产灵芝胞内多糖的含量为23.47mg/100mg比野生型菌株（WT菌株）的含量（15.28mg/100mg）提高了53.6%，UDP转化子菌株产灵芝胞外多糖的含量为1.66g/L比野生型菌株（WT菌株）的含量（1.22g/L）提高了36.1%。因此，本高产菌株可以作为生产灵芝多糖的工程菌株，具有广泛的应用前景。CGMCC NO932420140623
【专利说明】一种灵芝多糖高产工程菌株Rmust-UDP及其构建方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于基因工程和代谢工程领域的，具体涉及一种通过基因工程对灵芝代谢 途径中有关灵芝多糖合成的UDP-葡萄糖焦磷酸化酶（UDP)基因过表达的方法，构建了一个 灵芝多糖的高产工程菌株。
【背景技术】
[0002] 灵芝（fefloofe/ma )是担子菌纲，多孔菌科，灵芝属真菌。灵芝真菌在我 国有20多种，包括赤芝，黄芝，紫芝，黑芝，薄盖灵芝，树舌等。我国应用灵芝作为药物已有 两千多年的历史。灵芝对于增强人体免疫力，调节血糖，控制血压，辅助肿瘤放化疗，保肝护 肝，促进睡眠等方面均具有显著疗效。由于其特殊的药用价值，灵芝的有效成分分析和药理 学研究已经引起了国际上的广泛关注，尤其在日本，美国，韩国等国家。目前，灵芝的研究已 经深入到了分子水平，一些专著相继出版，从不同的角度介绍了灵芝的生物学特性、栽培技 术、药理学作用及临床应用等情况。
[0003] 灵芝多糖是从灵芝中提取的一种新内源活性物质，其所含的化学成分能够显著提 高吞噬细胞的吞噬能力，增强体液免疫和细胞免疫功能，还能提高红细胞中超氧化物歧化 酶活性，对人体具有多种功能。
[0004] UDP-葡萄糖焦磷酸化酶（UDP)基因是灵芝多糖合成途径中的一个较为重要的基 因。在细胞中，糖原分解会产生大量游离的葡萄糖-1-磷酸，UDP-葡萄糖焦磷酸化酶主要催 化葡萄糖-1-磷酸变为UDP-葡萄糖，而UDP-葡萄糖是糖原生物合成中糖基的供体。这是糖 原合成的第一步反应。糖原合成后再经过一系列的反应就产生了各种多糖。因此UDP-葡 萄糖焦磷酸化酶基因对糖原的合成具有重要的作用。灵芝多糖的合成途径如下所示：
【权利要求】
1. 一种灵芝多糖高产工程菌株Rmust-UDP，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心的保藏编号为CGMCC NO. 9324。
2. 权利要求1所述灵芝多糖高产工程菌株Rmust-UDP的构建方法，其特征在于：将目 的片段与表达载体相连得到重组表达质粒PJW-EXP-UDP，然后将重组表达质粒通过PEG介 导的原生质体融合的方法将重组表达质粒传化进灵芝中，从而得到高产灵芝多糖的工程菌 株； 其中所述的目的片段为UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO :1所 不，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO :2所不。
【文档编号】C12N15/80GK104403955SQ201410595875
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年10月30日 优先权日:2014年10月30日
【发明者】徐军伟, 李焕军, 任梦飞, 纪森林, 张德怀 申请人:昆明理工大学