本发明属于饲料添加剂领域，具体涉及一种微生物组合发酵浒苔的方法。
背景技术：
目前全世界海藻粉产量达5万吨，许多国家建有海藻饲料加工厂，将海藻粉作为饲料添加剂广泛应用于畜禽饲养。浒苔（Entermorpha prolifera）属于绿藻门石莼目石莼科浒苔属的藻类植物，具有味道鲜美、营养全面、野生资源丰富、极易生长繁殖等特点，是一种极具开发价值的海洋藻类。浒苔自古以来就是一种食材和药材。现代医学研究还发现浒苔有抑制癌症的功效，日本大阪熏英女子短期大学的HIGASHI-OKAI Kiyoka和OKAI Yasuji在1999年发表的一篇文章中指出，给小鼠使用浒苔提取物可以显著抑制其皮肤癌的生长。在畜牧养殖业中的研究表明，饲喂浒苔粉可以显著降低肉兔血液低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯的含量，提高生长猪日增重和料肉比，提高肉鸡胃肠道消化酶活性和饲料利用率。
浒苔富含浒苔多糖、蛋白质、粗纤维、氨基酸、脂肪酸、维生素和多种矿物质, 其中铁含量在中国食物营养成分表上记载为我国食物之最，同时还含有脂肪和维生素。在浒苔蛋白质中，氨基酸种类齐全，必需氨基酸含量较高。浒苔的脂肪酸组成中，多不饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸的含量为分别为50.5%、12.7%和36.8%。因此浒苔是高蛋白、高膳食纤维、低脂肪、低能量，且富含矿物质和维生素的天然理想营养食品的原料。
利用植物细胞和微生物等生物体的代谢功能，将有机物进行分解的生化反应过程被称为发酵。在微生物发酵过程中，微生物在植物供养下进行分裂、生长、繁殖和代谢，同时分泌出可使细胞破裂的酶，从而减小了细胞间质和细胞壁的阻力，增加了细胞间隙，使植物类药材有效成分提取率大大提高。浒苔粉富含浒苔多糖和各种无机盐，营养丰富，具备发酵所需的基础营养。
技术实现要素：
本发明的目的旨在提供一种微生物组合发酵浒苔的方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种微生物组合发酵浒苔的方法，包括如下步骤：
S1、发酵菌液的制备：
S1.1、以重量份计，准备下述物料：红糖1份、水5~10份以及酵母菌、地衣芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌，备用；其中，每g总物料中：酵母菌的活菌数≥1×109CFU/g、地衣芽孢杆菌的活菌数≥1×109CFU/g、嗜酸乳杆菌的活菌数≥1×1010CFU/g；
S1.2、先取部分水，加热，加入红糖至其完全融化；然后把上述红糖水降温至30~40℃时，加入酵母菌、地衣芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌；
S1.3、S1.2所得体系中加入剩余的水，密封，室温下发酵3~5天，获得发酵菌液；
S2、发酵浒苔：
S2.1、浒苔清洗，阴凉干燥处风干，粉碎成粉；
S2.2、重量份以kg计、体积份以L计，称取浒苔粉25~30重量份、玉米粉0~10重量份、红糖0~10重量份、尿素0~10重量份、酵母浸粉0~10重量份、发酵菌液4~6体积份、水9-11体积份，并且玉米粉、红糖、尿素、酵母浸粉四种中至少有一种，混匀后，密封，室温下发酵3~5天即可。
较好地，步骤S2.1中，粉碎成30~40目的浒苔粉。
较好地，步骤S2.2中：先将浒苔粉和玉米粉、红糖、尿素、酵母浸粉置于混合机中混匀，再将发酵菌液用水稀释，随着混合机的工作均匀地喷洒在混合物表面，喷完后再混合均匀，密封，室温下发酵。
有益效果：
1、本发明通过能够大量分泌各种消化酶的酵母菌，产生生长因子的地衣芽孢杆菌菌以及产酸性好、能够很好定植于肠道的嗜酸乳杆菌，可以有效地提高浒苔粉中有效成分如浒苔多糖等的利用率，并且改善其口感，使其可以应用在畜禽养殖业；
2、本发明发酵后的浒苔在畜禽养殖中可以显著提升畜禽的生长性能，而且味道酸香，口感好，无毒副作用。
附图说明
图1：发酵前后浒苔的薄层色谱图，其中A为实施例1发酵浒苔样品，B为实施例2发酵浒苔样品，C为实施例3发酵浒苔样品，1、2、3为未经发酵处理的原料浒苔粉的三个重复。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细说明，但本发明的保护范围并不局限于此。
实施例1
一种微生物组合发酵浒苔的方法，包括如下步骤：
S1、发酵菌液的制备：
S1.1、准备1kg红糖、10kg无菌水以及酵母菌、地衣芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌（涉及的三种菌均为市购菌粉），备用；其中，每g总物料中：酵母菌的活菌数为1×109CFU/g、地衣芽孢杆菌的活菌数为1×109CFU/g、嗜酸乳杆菌的活菌数为1×1010CFU/g；
S1.2、先烧开1kg的无菌水，加1kg的红糖，把红糖融化开，把红糖里面的有害菌消除；然后把上述融化后的红糖水降温至35℃时，加入酵母菌、地衣芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌；
S1.3、S1.2所得体系中加入剩余9kg的无菌水，整体装进一个大塑料壶或者其他的容器中，装填系数70%(不要装的太满，在发酵过程中会产生气体，装满容易涨破塑料壶)，28℃发酵5天，打开瓶口，有气体产生，取样检测，发酵样品中酵母菌≥1×109 CFU/mL、地衣芽孢杆菌≥1×109 CFU/mL、嗜酸乳杆菌≥1×1010 CFU/mL，说明发酵液制备成功，获得发酵菌液；
S2、发酵浒苔：
S2.1、清洗浒苔，阴凉干燥处风干，粉碎成40目的浒苔粉；
S2.2、取浒苔粉30kg、玉米粉5kg、发酵菌液5L、井水10L；先将浒苔粉和玉米粉置于槽型混合机中混匀，将发酵菌液5L用井水10L稀释，随着混合机的工作均匀地喷洒在浒苔粉和玉米粉混合物表面，喷完后再混合30min，分装至5kg规格的呼吸膜发酵袋，每袋5kg，封口，放置在28℃恒温室内；5天后开口，气味酸香，取样检测，发酵样品中酵母菌达到2.4×109CFU/g、地衣芽孢杆菌达到3.2×109 CFU/g、嗜酸乳杆菌达到5×1010 CFU/g。
实施例2
一种微生物组合发酵浒苔的方法，包括如下步骤：
S1、发酵菌液的制备：同实施例1；
S2、发酵浒苔：
S2.1、清洗浒苔，阴凉干燥处风干，粉碎成30目的浒苔粉；
S2.2、取浒苔粉25kg、尿素5kg、酵母浸粉5kg、发酵菌液5L、井水10L；先将浒苔粉和尿素、酵母浸粉置于槽型混合机中混匀，将发酵菌液5L用井水10L稀释，随着混合机的工作均匀地喷洒在混合物表面，喷完后再混合30min，分装至5kg规格的呼吸膜发酵袋，每袋5kg，封口，放置在28℃恒温室内；4天后开口，气味酸香，取样检测，发酵样品中酵母菌达到4.1×109 CFU/g，地衣芽孢杆菌达到5.3×109 CFU/g，嗜酸乳杆菌达到5.8×1010 CFU/g。
实施例3
一种微生物组合发酵浒苔的方法，包括如下步骤：
S1、发酵菌液的制备：同实施例1；
S2、发酵浒苔：
S2.1、清洗姜科植物浒苔的干燥根茎，阴凉干燥处风干，粉碎成30目的浒苔粉；
S2.2、取浒苔粉25kg、玉米粉2kg，红糖粉3kg、酵母浸粉5kg、发酵菌液5L、井水10L；先将浒苔粉和玉米粉、红糖粉、酵母浸粉置于槽型混合机中混匀，将发酵菌液5L用井水10L稀释，随着混合机的工作均匀地喷洒在混合物表面，喷完后再混合30min，分装至5kg规格的呼吸膜发酵袋，每袋5kg，封口，放置在28℃恒温室内；4天后开口，气味酸香，取样检测，发酵样品中酵母菌达到6.1×109CFU/g、地衣芽孢杆菌达到6.4×109 CFU/g、嗜酸乳杆菌达到8.9×1010 CFU/g。
以上实施例中，按照《GB/T 22547-2008 饲料添加剂 饲用活性干酵母（酿酒酵母）》、《NY/T 1461-2007 饲料微生物添加剂 地衣芽孢杆菌》和《DB44/T 1136-2013 饲料中乳酸菌活菌的检验方法》，分别检测发酵样品中酵母菌、地衣芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌的含量。
检测例1--发酵前后浒苔多糖的含量
取相当于1g浒苔粉原料的实施例1、2、3发酵样品（“相当于1g浒苔粉原料的发酵样品”是指1g浒苔粉原料制备的发酵样品，即取1/30000实施例1发酵样品，1/25000实施例2发酵样品，1/25000实施例3发酵样品）和1g浒苔粉原料，分别溶于10mL水中，以发酵样品溶液作为供试品溶液，浒苔粉溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液和对照品溶液各10 µL，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-水-乙酸-氨水（10：5：5：1，体积比）为展开剂，置展开缸中25℃条件下展开，取出，晾干，喷以0.5%（g/mL）茚三酮溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。其中，所述氨水是指国家标准GB-T631-1989规定的试剂级氨水。
结果见图1，由图1可以看出：发酵后浒苔多糖变成了若干单糖或者寡糖，说明发酵过程利用了浒苔多糖，并将其分解为小分子物质，易于机体的吸收利用。
临床验证
1、试验药物：
A：实施例1制成规格为5kg/袋的发酵浒苔；
B：实施例2制成规格为5kg/袋的发酵浒苔；
C：实施例3制成规格为5kg/袋的发酵浒苔；
a：浒苔粉30kg、玉米粉5kg的混合物；
b：浒苔粉25kg、尿素5kg、酵母浸粉5kg的混合物；
c：浒苔粉25kg、玉米粉2kg，红糖粉3kg、酵母浸粉5kg的混合物。
2、试验分组
本试验选用1日龄的健康罗斯308肉鸡630羽，平均体重为(42.59±0.13)g，随机分成7组，每组3个重复，每个重复30羽(公、母各占1/2)。试验分：空白对照组，饲喂不添加抗生素的基础饲粮，基础饲粮为参照美国NRC(1994)肉鸡营养需要配制的粉状配合饲料；A、B、C组，分别在基础饲粮中添加A、B、C，添加比例5g/kg（即每kg基础饲粮添加5g A/B/C）；a、b、c组，分别在基础饲粮中添加a、b、c，添加比例5g/kg（即每kg基础饲粮添加5g a/b/c）。试验周期35d。采用网上平养，自由采食和饮水，按鸡场常规管理程序进行管理和免疫接种。
3.测定指标及方法
3.1生长性能
分别于鸡群1日龄和35日龄分组测量体重，并逐日记录每组鸡的采食量。计算每组鸡群的平均日增重和料肉比。
平均日增重=［35日龄平均体重（g）-1日龄平均体重（g）］/35d。
料重比=试验期间总耗料量（g）/［35日龄平均体重（g）-1日龄平均体重（g）］。
3.2免疫器官指数
于鸡群21日龄和35日龄，每个重复各随机抽取3只，逐只称重、解剖，分别采集其胸腺、法氏囊和脾脏器官称重。
免疫器官指数=免疫器官重（g）/鸡体重量（kg）。
4、试验结果
4.1生长性能
发酵浒苔粉和未发酵浒苔粉对仔鸡生产性能的影响见表1。由表1可知：与空白对照组相比，饲粮中添加A、B、C可以显著提高肉鸡生长各阶段的体重和平均日增重(P<0.05)，其中又以C组效果为最明显，a、b、c组和对照组组间无显著差异(P>0.05)。料肉比方面，A、B、C组均比空白对照组显著降低。由此表明，饲粮中添加发酵浒苔粉能够显著提高肉鸡的生长性能，增加饲料营养的吸收利用，并且该功能与发酵浒苔粉中的益生菌及其代谢产物具有剂量依赖性的增加。
4.2 对肉仔鸡免疫器官指数的影响
发酵浒苔粉和未发酵浒苔粉对仔鸡免疫器官指数的影响见表2。由表2可知：与对照组相比，饲粮中添加A、B、C、a、b、c均可显著提高21日龄和35日龄的肉鸡免疫器官指数(P<0.05)，其中C组免疫器官指数均高于其他组，35日龄胸腺指数、法氏囊指数和脾脏指数比对照分别提高了53%、73%和72%，浒苔不发酵组（a、b、c）中35日龄最高胸腺指数、法氏囊指数和脾脏指数比对照分别提高了29%、37%和39%。说明浒苔粉发酵或者不发酵对肉鸡的免疫器官指数均有增强作用，发酵后其免疫提升作用得到增强。由此表明，饲粮中添加发酵浒苔粉可以提高肉鸡免疫功能。
从检测结果可以看出，本发明提供的发酵浒苔粉能显著改善浒苔粉中浒苔多糖的吸收利用。在畜禽养殖中可以显著增强畜禽的生长性能和免疫功能，增加养殖效益，而且与未经发酵的相同处理比较效果显著加强，说明本发明所述的制备方法增强了所述的浒苔粉在畜禽养殖中的临床效果。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，也属于本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。