专利名称：高效支原体培养基及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种高效支原体培养基及其制备方法，特别是一种能使解脲支原体快速生长、分离的的高敏感性和高特异性的培养基及其制备方法。
非淋菌性尿道炎是世界上发病人数最多的性病，仅次于淋病。解脲支原体和人型支原体是引起非淋菌性尿道炎的病原体之一。在性病的预防和治疗工作中，对患者作支原体检测是十分重要的。而对支原体的各种实验室诊断方法中，分离培养仍被作为最可靠的“金标准”。现有技术中的支原体培养基有多种，例如U9B尿素酶颜色试验培养基基础肉汤胰酶消化肉汤(粉剂) 0.75g氯化钠 0.50g磷酸二氢钾 0.02g去离子水 100ml用IN HCL调pH值到5.5。经121℃高压灭菌15分钟，分离备用。
完全培养基(pH6.0)灭菌的基础肉汤(pH 5.5) 95ml灭菌的未加热马血清5ml灭菌的10％尿素贮存液0.5ml灭菌的2％L-半胱氨酸(盐酸盐) 0.1ml灭菌的1％酚红溶液 0.1ml青霉素G钾盐10万u/ml 1.0ml再如新鲜牛肉浸液100mlNaCl 0.5gK2HPO40.15g蛋白胨 1.0g尿素0.05g
酚红 0.02g临用前加青霉素 1000u/ml无菌的胎牛血清 10ml调整pH至6.0±0.1固体培养基加1.4％琼脂另外还有“A7B鉴别琼脂”等多种不同配方，均可以在科研或临床上用于支原体的分离培养。但现有技术的共同缺点是，支原体在培养基中的生长速度较慢，同时其检出阳性率也不够理想。
针对现有技术的缺点，本发明的任务是提供一种新的培养基配方，它应具有使支原体生长速度快、分离的敏感性和特异性高的特点。同时，本发明还提供出该培养基的制备方法。
高效支原体培养基的配方如下首先用下列成分制成基础培养基1、蛋白胨 9.0-11.0g2、新鲜牛肉提取纯粉 9.0-11.0g3、氯化钠4.0-6.0g4、磷酸二氢钾0.4-0.6g5、蒸馏水 1000ml使用前加入下列成分，制成液体培养基6、新生牛血清90-110ml7、新鲜酵母浸液 90-110ml8、10％尿素溶液或10％精氨酸溶液5-15ml9、0.4％酚红溶液4-6ml10、青霉素 500-2000u/ml在固体培养基中还有11、琼脂1.2-1.4％。
上述培养基的制备方法为
一、制备基础培养基取上述1-4的成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，过滤，高压灭菌后即为基础培养基，备用。
二、制备液体培养基使用前加入上述6-10的成份，用HCL调pH为6.0，分装备用。
三、制备固体培养基取上述基础培养基，加入琼脂 1.2-1.4％高压灭菌后，冷却至50℃左右，以无菌手续逐一加入6-10的成份，摇匀，倒入灭菌平皿中，备用。
本发明所提供的培养基同现有技术中的几种培养基的比较结果表明，在同样实验条件下，本高效支原体培养基具有生长速度快、检出率高的特点。比较结果见表1、表2表1 解尿支原体培养基比较培养基 检查例数 阳性数 生 长 速 度(％)≤24hr(％) ＞24hr(％) ≥48hr(％)本发明 91 29(31.9) 25(86.2)4(13.8) 0(0)现技术A 91 18(19.8) 4(22.2) 8(44.4) 6(33.4)本发明 54 18(33.3) 17(94.4)1(5.6) 0(0)现技术B 54 3(5.6)0(0)0(0)3(94.4)本发明 144 53(36.8) 42(79.2)11(20.8)0(0)现技术C 144 38(26.4) 14(36.9)17(44.7)7(18.4)
表2 两种人型支原体培养基比较培养基 检查例数 阳性数 生 长 速 度(％)≤24hr(％) ＞24hr(％) ≥48hr(％)本发明52 4(7.7)0(0)4(7.7) 0(0)现技术B 52 0(0) 0(0)0(0)0(0)本发明144 21(14.6) 1(4.8) 12(57.1)8(38.1)现技术C 144 19(13.2) 0(0)8(42.1) 11(57.9)现结合实施例作进一步说明。实施例1高效支原体培养基的配方及制备方法如下一、首先用下列成分制成基础培养基1、蛋白胨 10.0g2、新鲜牛肉提取纯粉10.0g3、氯化钠 5.0g4、磷酸二氢钾 0.5g5、蒸馏水 1000ml取上述成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，用滤纸过滤，置高压灭菌器内，经15磅20分钟灭菌后备用。二、制备液体培养基使用前，取基础培养基加入下列无菌制剂6、新生牛血清 100ml7、新鲜酵母浸液 100ml8、10％尿素溶液(检测解脲支原体)5-15ml或10％精氨酸溶液(检测人型支原体)5-15ml
9、0.4％酚红溶液 5ml10、青霉素500-2000u/ml用HCL调pH为6.0，灭菌试管分装备用。三、制备固体培养基在液体基础培养基内加入11、琼脂 1.2-1.4％高压灭菌后，冷却至50℃左右，以无菌手续逐一加入6-10的成份，调pH值到6.0，摇匀，倒入灭菌平皿中，凝固后置冰箱中备用。实施例2配制方法与上例基本相同，但配方比例如下一、首先用下列成分制成基础培养基1、蛋白胨9.0g2、新鲜牛肉提取纯粉 9.0g3、氯化钠4.0g4、磷酸二氢钾0.4g5、蒸馏水 1000ml取1-4成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，用滤纸过滤，置高压灭菌内，经15磅20分钟灭菌后备用。二、液体培养基使用前，取基础培养基加入下列无菌制剂6、新生牛血清 90ml7、新鲜酵母浸液 90ml8、10％尿素溶液(检测解脲支原体) 5-15ml或10％精氨酸溶液 5-15ml9、0.4％酚红溶液 4ml10、青霉素500-2000u/ml用HCL调pH为6.0，灭菌试管分装备用。三、制备固体培养基在液体基础培养基内加入11、琼脂 1.2-1.4％高压灭菌后，冷却至50℃左右，以无菌手续逐一加入6-10的成份，调pH值到6.0，摇匀，倒入灭菌平皿中，凝固后置冰箱中备用。实施例3、与上两例基本相同，但配方比例如下一、首先用下列成分制成基础培养基1、蛋白胨11.0g2、新鲜牛肉提取纯粉 11.0g3、氯化钠 6.0g4、磷酸二氢钾 0.6g5、蒸馏水 1000ml取上述1-4成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，用滤纸过滤，置高压灭菌内，经15磅20分钟灭均后备用。二、制备液体培养基使用前，取基础培养基加入下列无菌制剂6、新生牛血清 110ml7、新鲜酵母浸液 110ml8、10％尿素溶液(检测解脲支原体) 5-15ml或10％精氨酸溶液(检测人型支原体) 5-15ml9、0.4％酚红溶液6ml10、青霉素 500-2000u/ml用HCL调pH为6.0，灭菌试管分装备用。三、制备固体培养基在液体基础培养基内加入11、琼脂 1.2-1.4％高压灭菌后，冷却至50℃左右，以无菌手续逐一加入6-10的成份，调pH值到6.0，摇匀，倒入灭菌平皿中，凝固后置冰箱中备用。
权利要求
1.一种高效支原体培养基，其特征是配方如下基础培养基1、蛋白胨9.0-11.0g2、新鲜牛肉提取纯粉 9.0-11.0g3、氯化钠 4.0-6.0g4、磷酸二氢钾 0.4-0.6g5、蒸馏水 1000ml液体培养基内还加有6、新生牛血清 90-110ml7、新鲜酵母浸液 90-110ml8、10％尿素溶液或10％精氨酸溶液 5-15ml9、0.4％酚红溶液 4-6ml10、青霉素500-2000u/ml固体培养基内还加有11、琼脂 1.2-1.4％。
2.按照权利要求1所述的高效支原体培养基，其特征是最优配方为1、蛋白胨10.0g2、新鲜牛肉提取纯粉 10.0g3、氯化钠 5.0g4、磷酸二氢钾 0.5g5、蒸馏水 1000ml6、新生牛血清100ml7、新鲜酵母浸液 100ml8、10％尿素溶液(检测解脲支原体) 5-15ml或10％精氨酸溶液(检测人型支原体) 5-15ml9、0.4％酚红溶液 5ml10、青霉素500-2000u/ml在固体培养基中还有11、琼脂1.2-1.4％。
3.一种高效支原体培养基的制备方法，其特征是首先用下列成分制成基础培养基1、蛋白胨 9.0-11.0g2、新鲜牛肉提取纯粉 9.0-11.0g3、氯化钠4.0-6.0g4、磷酸二氢钾0.4-0.5g5、蒸馏水 1000ml取上述1-4成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，过滤，灭菌后备用，制备液体培养基使用前，取上述基础培养基加入下列无菌制剂；6、新生牛血清 90-110ml7、新鲜酵母浸液 90-110ml8、10％尿素溶液(检测解脲支原体)5-15ml或10％精氨酸溶液 5-15ml9、0.4％酚红溶液 4-6ml10、青霉素 500-2000u/ml调pH为6.0，灭菌试管分装备用，制备固体培养基在基础培养基内加入11、琼脂 1.2-1.4％高压灭菌后，冷却至50℃左右，以无菌手续逐一加入6-10的成份，调pH值到6.0，凝固后备用。
全文摘要
本发明提供一种高效支原体培养基及其制备方法。其配方为:蛋白胨、新鲜牛肉提取纯粉、氯化钠、磷酸二氢钾和蒸馏水组成基础培养基。使用前加入:新生牛血清、新鲜酵母浸液、10%尿素溶液或10%精氨酸溶液、0.4%酚红溶液及青霉素。在固体培养基中还加有琼脂。在同样实验条件下,本高效支原体培养基具有生长速度快、检出率高的特点。
文档编号C12N1/20GK1184155SQ9611720
公开日1998年6月10日 申请日期1996年12月5日 优先权日1996年12月5日
发明者王荷英 申请人:中国医学科学院皮肤病研究所