菜籽粕微生物发酵饲料及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物发酵技术领域，尤其涉及一种菜籽柏微生物发酵饲料及其制备 方法和应用。
【背景技术】
[0002] 随着生活水平的提高，膳食结构改变巨大，人们对肉蛋奶的消费逐年增加。中国作 为全世界禽畜养殖大国，人工养殖比例逐年提高，对饲料的需求不断增加。而全球范围内资 源的衰减，以及现代畜牧业和饲料工业的快速发展等各方面的综合作用，导致世界性的鱼 粉、豆柏等主要的蛋白质饲料资源紧缺和价格上涨，给饲料工业带来了严峻的挑战。大力开 发新型高效环保绿色饲料具有重要的社会意义和经济效益。
[0003] 菜籽柏营养价值高，富含蛋白质和氨基酸，是一种来源广且稳定相对廉价的蛋白 质饲料资源，利用菜籽柏开发新型的微生物发酵饲料，使其不仅能够降低抗营养因子而作 为饲料满足动物的生存需求，而且能够成为一种低成本、维护动物的机体健康且提高动物 生长性能的具有保健功效的添加剂，可以极大地提高菜籽柏的利用价值和经济效益，对动 物营养保健方面展现出了广阔的发展前景。但是如果将菜籽柏直接应用在饲料中会一定程 度上存在着氨基酸不平衡、含有有毒物质和抗营养因子危害禽畜健康、降低饲料适口性等 问题，影响禽畜对其消化吸收利用，降低养殖的生产效益。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种营养保健，改善禽畜 生长性能，提高饲料适口性的的菜籽柏微生物发酵饲料，还提供了该菜籽柏微生物发酵饲 料的制备方法和在提高动物生长性能方面的应用，该制备方法非常适合应用于现代化饲料 产业中。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
[0006] -种菜籽柏微生物发酵饲料，所述菜籽柏微生物发酵饲料以菜籽柏为发酵原料， 通过纳豆芽孢杆菌和鼠李糖乳杆菌发酵制备得到。
[0007] 上述的菜籽柏微生物发酵饲料，优选的，所述纳豆芽孢杆菌为纳豆芽孢杆菌 (Baci1lusnatto)L08，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号 为：CGMCCNo. 5769〇
[0008] 上述的菜籽柏微生物发酵饲料，优选的，所述鼠李糖乳杆菌为鼠李糖乳杆菌 (Lactobacillusrhamnosus)Lr.M8,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心，保藏编号为：CGMCCNo. 3002。
[0009] 作为一个总的技术构思，本发明还提供了一种上述菜籽柏微生物发酵饲料的制备 方法，包括以下步骤：
[0010] S1、将纳豆芽孢杆菌培养成纳豆芽孢杆菌菌液；
[0011]S2、将鼠李糖乳杆菌培养成鼠李糖乳杆菌菌液；
[0012] S3、将菜籽柏与水混合制成发酵原料，在所述发酵原料中接入步骤S1制备得到的 纳豆芽孢杆菌菌液进行发酵48小时；然后接入步骤S2制备得到的鼠李糖乳杆菌菌液继续 发酵至96小时。
[0013] 上述的制备方法，优选的，所述步骤S1具体为：将纳豆芽孢杆菌以0. 5g/100mL~ lg/100mL的接种量接种于芽孢杆菌富集液体培养基中，以36°C~38°C振荡培养16小时，震 荡速度为 120r/min~180r/min。
[0014] 上述的制备方法，优选的，所述步骤S2具体为：将纳豆芽孢杆菌以0. 5g/100mL~ 1. 2g/100mL的接种量接种于MRS液体培养基中，以32°C~38°C培养18小时。
[0015] 上述的制备方法，优选的，所述步骤S3中，所述纳豆芽孢杆菌菌液的接种量为 lwt%~1. 5wt%;所述鼠李糖乳杆菌菌液的接种量为lwt%~1. 5wt%。
[0016] 作为一个总的技术构思，本发明还提供了一种上述菜籽柏微生物发酵饲料或上述 制备方法制备得到的微生物发酵饲料做为动物饲料中的应用。
[0017]与现有技术相比，本发明的优点在于：
[0018] (1)本发明提供了一种菜籽柏微生物发酵饲料，利用混合微生物发酵法，先接种纳 豆芽孢杆菌，再接入鼠李糖乳杆菌，能够充分利用菌种的优势使得菜籽柏的营养物质产量 得到最大化，营养保健功效多样且成本低廉，能够提高动物的生长特性；同时采用原料为菜 籽柏，资源丰富且成本低廉，非常适合现代化饲料产业。
[0019] (2)目前，对菜籽柏的微生物发酵主要集中在以脱毒或者单纯提高蛋白含量为主； 使其在作为饲料应用方面功效较单一；本发明的菜籽柏微生物发酵饲料不仅具有脱毒、提 高蛋白质的含量的功效，还能够使其具有溶血栓，抗氧化等保健功效，对动物的生长发育极 具优势。
[0020] (3)本发明提供了一种菜籽柏微生物发酵饲料的制备方法，采用吸水性良好的菜 籽柏为原料，含有多种氨基酸等营养物质，可以得到富含高益生菌活菌含量的菜籽柏微生 物发酵饲料，丰富的活菌能够在动物的肠道发挥益生功效，达到对动物的保健效果。
[0021] 纳豆芽孢杆菌（Bacillusnatto)L08,于2012年2月17日保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学 院微生物研究所，保藏编号为：CGMCCNo.5769。
[0022] 鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus) Lr. M8,于2009年4月7日保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区大屯路中国科学 院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.3002。
【附图说明】
[0023] 为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例 中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。
[0024] 图1为菜籽柏发酵前后蛋白质种类和含量变化的SDS-PAGE电泳检测图。
[0025]图2为不同的接种方法对发酵菜籽柏中纳豆激酶活力的影响的结果图。
【具体实施方式】
[0026] 以下结合说明书附图和具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而 限制本发明的保护范围。
[0027] 实施例
[0028] 以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。
[0029] 实施例1:
[0030] 本发明的一种菜籽柏微生物发酵饲料，其制备方法具体包括以下步骤：
[0031]S1、将纳豆芽孢杆菌培养成纳豆芽孢杆菌菌液：将纳豆芽孢杆菌以lg/100mL的接 种量接种于芽孢杆菌富集液体培养基中（芽孢杆菌富集液体培养基的成分：蛋白胨l〇g、牛 肉粉3g、氯化钠5g，pH7. 3)，以37°C振荡培养16个小时，震荡速度为120r/min。在步骤S1 中，纳豆芽孢杆菌为纳豆芽孢杆菌（Bacillusnatto)L08,保藏于中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCCNo. 5769。
[0032] 纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto)L08属于革兰氏阳性，大小为0. 7 y m~ 0. 8ymX2.0ym~3.0ym，芽孢椭圆形或柱状，中生或偏中生，有鞭毛，能运动；在营养琼 芝培养基上生长2天后，菌落为圆形，直径约为3_左右，边缘不整齐，突起；生长温度最高 为45°C~55°C，最低为5°C~20°C。
[0033]S2、将鼠李糖乳杆菌培养成鼠李糖乳杆菌菌液：将纳豆芽孢杆菌以1. 0g/100mL 的接种量接种于MRS液体培养基（MRS液体培养基的成分：酪蛋白胨10. 0克、牛肉浸取物 10. 0克、酵母提取液5. 0克、葡萄糖5. 0克、乙酸钠5. 0克、柠檬酸二胺2. 0克、吐温801. 0 克、磷酸氢二钾2. 0克、七水硫酸镁0. 2克、七水硫酸锰0. 05克、碳酸钙20. 0克、蒸馏水 1. 0升，pH6. 8)中，以37°C培养18个小时。在步骤S2中，鼠李糖乳杆菌为鼠李糖乳杆菌 (Lactobacillusrhamnosus)Lr.M8,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心，保藏编号为：CGMCCNo. 3002。
[0034]鼠李糖乳杆菌（Lactobacillusrhamnosus)Lr.M8 为G+，大小为 0.7lim~l.lum X2. 0ym~3. 8ym，链状，无鞭毛与纤毛，不会移动，在MRS培养基上，培养3天后可形成2~ 4毫米直径的菌落，菌落呈奶油白色，不透明，边缘整齐，突起，表面湿润。最适生长温度为 30-42°C，最高生长温度为50°C。
[0035]S3、制备微生物发酵饲料：
[0036]S3-1:取30g粉碎过40目筛的菜籽柏，置于500mL的三角瓶中，加入31.5mL蒸馏 水，搅拌均匀密封灭菌15min。待冷却后打散至质地蓬松制成发酵原料。
[0037]S3-2:在发酵原料中接入1. 53wt%的纳豆芽孢杆菌进行发酵48小时；然后接入 1. 53wt%的鼠李糖乳杆菌，搅拌均匀后置于36. 86°C下继续发酵至96小时，完成菜籽柏微 生物发酵饲料的制备。
[0038] 实施例2
[0039] 本发明的一种菜籽柏微生物发酵饲料，其制备方法具体包括以下步骤：
[0040]S1、将纳豆芽孢杆菌培养成纳豆芽孢杆菌菌液：将纳豆芽孢杆菌以lg/100mL的接 种量接种于芽孢杆菌富集液体培养基中，以37°C振荡培养16小时，震荡速度为120r/min。 本实施例步骤S1中的纳豆芽孢杆菌与实施例1相同。
[0041]S2、将鼠李糖乳杆菌培养成鼠李糖乳杆菌菌液：将纳豆芽孢杆菌以1. 2g/100mL的 接种量接种于MRS液体培养基中，以37°C培养18小时。本实施例步骤S2中的鼠李糖乳杆 菌与实施例1相同。
[0042]S3、制备微生物发酵饲料：
[0043]S3-1 :取30g粉碎过40目筛的菜籽柏、0. 6g麸皮置于500mL的三角瓶中，加入32mL 蒸馏水，搅拌均匀密