专利名称：用作jnk抑制剂的吡唑并蒽酮及其衍生物和它们的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及吡唑并蒽酮及其衍生物，它们具有广泛的适应征，包括用作Jun N-末端激活酶抑制剂，以及相关的组合物和方法。
JNK类通过在Thr-183和Tyr-185上双重磷酸化而被激活。JNKK1(也被称作MKK4)和JNKK2(MKK7)，这两种MAPKK等级的酶可以调节细胞内JNK的激活作用(Lin A.，Minden A.，Martinetto H.，Claret F.-Z.，Lange-Carter C.，Mercurlo F.，Johnson G.L.，和Karin M.Science，科学，268286-289，1995；Tournier C.，Whitmarsh A.J.，Cavanagh J.，Barrett T.，和Davis R.J.Proc.Nat.Acad Sci.USA 947337-7342，1997).JNKK2专一性地将JNK磷酸化，而JNKK1也可以磷酸化并激活p38。JNKK1和JNKK2两者均广泛地表达在哺乳动物的组织中。JNKK1和JNKK2被MAPKKK酶——MEKK1和2所激活(Lange-Carter C.A.，Pleiman C.M.，Gardner A.M.，Blumer K.J.，和Johnson G.L.Science，科学，260315-319，1993；Yan M.，Dai J.C.，Deak J.C.，Kyriakis J.M.，Zon L.I.，Woodgett J.R.，和Templeton D.J.Nature 372798-781，1994)。MEKK1和MEKK2两者均广泛地表达在哺乳动物的组织中。
在许多疾病背景下JNK途径的激活已得以引证，提供了旨在将该途径用于药物的发现的基本原理。另外，分子遗传学方法已经确认这种途径对几种疾病的致病作用。例如，自身免疫性疾病和炎症疾病是由于免疫系统的过分激活而引起的，被激活的免疫细胞表达出许多基因编码炎性分子，包括细胞因子、生长因子、细胞表面受体、细胞粘着分子和降解酶。许多这样的基因是通过JNK途径进行控制的，即通过转录因子AP-1和ATF-2，包括TNFa、IL-2、E-选择蛋白和间质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases)如胶原酶-1(Manning A.M.和Mercurio F.Exp Opin Invest Drugs 6555-567，1997)。单核细胞、组织巨噬细胞和组织肥大细胞是TNFa生产的主要源头，在细菌脂多糖刺激的巨噬细胞和FceRII受体刺激的肥大细胞中，JNK途径控制TNFa的生产(Swantek J.L.，Cobb M.H.，Geppert T.D.Mol.Cell.Biol.176274-6282，1997；Ishizuka，T.，Tereda N.，Gerwins，P..Hamelmann E.，Oshiba A.，Fanger G.R.，JohnsonG.L.，和Gelfland E.W.Proc.Nat.Acad.Sci.USA 946358-6363，1997)。抑制JNK的激活能有效地控制TNFa在这些细胞中的分泌，因此JNK途径能控制这一主要促炎细胞因子的产生。间质金属蛋白酶(MMPs)在类风湿关节炎中促进软骨和骨头的腐蚀，并在其它自身免疫性疾病中使组织破坏。MMPs的诱导型表达，包括MMP-3和MMP-9，II和IV型胶原酶，通过JNK途径和AP-1的激活而进行调节(Gum，R.，Wang.H..Lengyel，E..Juarez.J.，和Boyd，D.Oncogene141481-1493，1997)。在TNFa、IL-1或Fas配体活化的人类风湿滑膜细胞(synoviocyte)中，JNK途径是被激活的(Han Z.，BoyleD.L..Aupperle K.R..Bennett B.，Manning A.M.，Firestein G.S.J Pharm.Exp.Therap.2911-7，1999；Okamoto K.，Fujisawa K.，Hasunuma T.，Kobata T.，Sumida T.，和Nishioka K.Arth & Rheum40919-92615，1997)，抑制JNK的激活会降低AP-1的活化和胶原酶-1的表达(Han等，同上)。因此JNK途径能够控制类风湿关节炎细胞中的MMP表达。
T淋巴细胞不适当的激活会引发和维持许多自身免疫性疾病，包括哮喘、肠炎疾病和多发性硬化症。JNK途径在T细胞中由于抗原的刺激和CD28受体的共同刺激(co-stimulation)而被活化，并且控制生长因子IL-2的生产和细胞的增生(Su B.，Jacinto E..Hibi M.Kallunki T.，Karin M.，Ben-Neriah Y.Cell 77727-736，1994；Faris M.，Kokot N.，Lee L.，和Nel A.E.J Biol.Chem.27127366-27373，1996)。取自JNKK1有遗传性缺陷的鼠的外围T细胞表明，在CD28共同刺激和PMA/Ca2+实电解质活化之后，增生和IL-2的生产减少，这就提供了在这些细胞中JNK途径的作用的重要证据。(Nishina H.，Bachmann M.，Oliveria-dos-Santos A.J.，等JExp.Med 186941-953，1997)。已经知道，在没有辅助细胞衍生的共同刺激信号存在的情况下，由抗原受体激活的T细胞就失去了合成IL-2的能力，一种称为无克隆能力(clonal anergy)的状态。这是一种重要方法，通过该方法在外周循环中除去自反应(auto-reactive)T细胞群。很明显，无变应性的T细胞在应答CD3-和CD28-受体的共同刺激时，不能激活JNK途径，即使JNK酶的表达没有变化(LiW.，Whaley C.D.，Mondino A.，和Mueller D.L.Science，科学，2711272-1276，1996)。最近，对JNK-有缺陷的鼠所进行的测验表明，JNK途径在T细胞活化和分化为1型和2型T辅助细胞过程中，具有关键作用。JNK1或JNK2打破了鼠的正常发育，而外表上并不显著。这些鼠的被激活的原初CD4+T细胞不能生产IL-2，并且不能很好地增殖(Sabapathy，K，Hu，Y，Kallunki，T，Schreiber，M，David，J-P.Jochum，W，Wagner，E，Karin，M.Curr Biol 9116-125，1999)。取自这些鼠的T细胞中，能够诱导T细胞的分化，生成Th1细胞(IFN-g和TNFβ的发生器)和Th2效应细胞(IL-4，IL-5，IL-6，IL-10和IL-13的发生器)[22，23]。JNK1或JNK2任一个在鼠体内的缺失会导致Th1效应细胞表达IFNg能力选择性的缺损，这就提示JNK1和JNK2在T细胞中没有多余的功能，它们在控制细胞的生长、分化和死亡方面起着不同的作用。因此JNK途径是调节T细胞应答抗原的重要所在。
心血管疾病(CVD)在世界范围内占年死亡总数的近四分之一。血管疾病如动脉粥样硬化和再狭窄(restenosis)是由于管壁的不规则生长，限制了通向生命器官的血流。JNK途径被动脉粥样化的促进因素所激活，并控制局部细胞因子和生长因子在血管细胞内的生成(Yang，DD，Conze，D，Whitmarsh，AJ，等，Immunity，9575，1998)。另外，血流、血液动力和血流量的变化导致JNK在血管内皮的激活，引起AP-1的活化和促动脉粥样硬化基因(pro-atherosclerotic gene)的表达(Aspenstrom P.，Lindberg U.，和Hall A Curr.Biol670-77，1996)。心脏、肾和脑的局部缺血以及与再灌流(reperfusion)相关的局部缺血会导致细胞的死亡和瘢痕的形成，这会最终导致充血性心力衰竭、肾衰和脑机能障碍。在器官移植术中，先前缺血的供体器官的再灌流会导致急性白细胞介导的组织损伤，并推迟移植物的功能。JNK途径受到局部缺血和再灌流而激活(Li Y.，Shyy J.，Li S.，Lee J.，Su B.，Karin M..Chien S Mol.Cell.Biol.165947-5954，1996)，会导致JNK-应答基因的激活和白细胞介导的组织损伤。在许多不同的背景下，JNK的活化可以是促-编程性细胞死亡的或抗-编程性细胞死亡的(pro-or anti-apoptotic)，局部缺血和再灌流后的心脏组织中，JNK活化与编程性细胞死亡的增加相关(Pombo CM.Bonventre JV，Avruch J，Woodgett JR，Kyriakis J.M，Force T.J.Biol Chem.26926546-26551，1994)。
癌症的特点在于细胞不受控制的生长、增殖和迁移。癌症是第二大死亡原因，1996年美国的死亡人数为500,000，并且估计有130万新病人。信号的转导变异途径对细胞的转形变异和癌起作用的观念一般被接受。导致AP-1的JNK途径似乎在癌症中起决定性作用。c-jun的表达在早期肺癌发生改变并可能间介非小细胞肺癌中的生长因子信号(Yin T.，Sandhu G.，Wolfgang C.D.，Burrier A.，Webb R.L..Rigel D.F.Hai T.，和Whelan J.J BioL Chem.27219943-19950，1997)。事实上，c-jun在细胞中的过分表达(over-expression)导致转形变异，而阻断c-jun活性会抑制MCF-7集落的形成(Szabo E.，Riffe M.，Steinberg SM.，Birrer M.J.，Linnoila R.I.Cancer Res.癌的研究，56305-315.1996)。DNA的破坏性试剂、离子化辐射和肿瘤坏死因子均能激活JNK途径。除了控制c-jun的生成和活化以外，JNK的激活可以控制p53的磷酸化，因此可以调整细胞的循环级数(cycle progression)(Chen T.K.，Smith L.M.，Gebhardt D.K..Birrer M.J.，Brown P.H.Mol.Carcinogenesis 15215-226，1996)。致癌基因BCR-Ab1，与慢性骨髓性白血病的t(9，22)Philadelphia染色体易位相关，能够激活JNK并导致造血细胞的转形变异(Milne D.M.，Campbell L.E.，Campbell D.G.，Meek D.W.J BioLChem.2705511-5518，1995)。天然存在的JNK抑制蛋白，称之为JIP-1，对JNK活化的选择性抑制能阻断BCR-Ab1表达所引起的细胞转形变异(Raitano A.B.，Halpern J.R.，Hambuch T.M.，Sawyers C.L.Proc.Nat.Acad.Sci USA 9211746-11750，1995)。因此JNK抑制剂可以阻断转形变异和肿瘤细胞的生长。
因此，本领域需要JNK选择性抑制剂，以及它们的制备方法、含有这些抑制剂的药物组合物，和抑制JNK的方法和处于JNK抑制应答的哺乳动物疾病的治疗方法。本发明满足了这些需要，并进一步提供了相关的便利。
本发明还涉及治疗多种疾病的方法，将有效量的JNK抑制剂给予需要的动物和受治疗者(在此称为“患者”)，一般是温血动物(包括人)。给药前，优选将本发明化合物配制为药物组合物，它含有有效剂量的一种或多种JNK抑制剂，并与一种(或多种)可药用载体相混合。用本发明化合物或含有本发明化合物的药物组合物，可进行治疗的疾病包括可以通过JNK抑制剂给药而获益的任何疾病，特别适用于预防和/或治疗的各种疾病包括(但不限于)类风湿关节炎、类风湿脊椎炎、骨关节炎、痛风、哮喘、支气管炎、囊性纤维变性、炎性肠疾病、过敏性肠综合征、粘液性结肠炎、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、胃炎、食管炎、肝炎、多发性硬化症、动脉粥样硬化、血管成形术后的再狭窄、左心室肥大、心肌梗死、中风，局部缺血引起的心脏、肾脏、肝脏或脑损伤，移植性排异、内毒素休克、银屑病、湿疹、皮炎、癫痫、Alzheimer氏病、Huntington氏舞蹈病、肌萎缩性侧索硬化、外周神经病、脊索损伤、Parkinson氏病和癌症。
参照下面的详细说明，上述这些内容以及本发明的其它方面将更加清楚，为此，本文引用了一些专利和其它文献，更具体地阐明本发明的各个方面，因此，这些文件按引用全部结合至本文。
附图2举例说明本发明的代表性化合物在内毒素休克鼠模型中抑制TNF-a的能力。
附图3举例说明本发明的代表性化合物在肺炎鼠模型中抑制白细胞募集反应的能力。
附图4举例说明本发明的代表性化合物在佐剂关节炎(adjuvantarthrisis)鼠模型中抑制爪肿胀(附图4A)、关节损坏(附图4B)、转录因子AP-1的活化(附图4C)和MMP-13的表达(附图4D)的能力。
附图5举例说明本发明的代表性化合物降低红藻氨酸(kainicacid)诱导的癫痫发作反应的能力。
发明详述如上所述，本发明涉及对JNK具有作为选择性抑制剂活性的化合物以及与该化合物相关的组合物和方法，本发明化合物具有下面的结构(I) 和它们的可药用盐，其中R1和R2是任选的相同或不同的取代基，并且独立地表示烷基、卤素、硝基、三氟甲基、磺酰基、羧基、烷氧羰基、烷氧基、芳基、芳氧基、芳基烷氧基、芳烷基、环烷基烷氧基、环烷基氧基、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基、氨基烷氧基、一-或二-烷基氨基烷氧基，或者由式(a)、(b)、(c)或(d)表示的基团 R3和R4一起表示亚烷基或含有杂原子的亚烷基，或者R3和R4相同或不同并各自独立地表示氢、烷基、环烷基、芳基、芳烷基、环烷基烷基、芳氧基烷基、烷氧基烷基、烷氧基氨基或烷氧基(一-或二-烷基氨基)；以及R5表示氢、烷基、环烷基、芳基、芳烷基、环烷基烷基、烷氧基、氨基、一-或二-烷基氨基、芳基氨基、芳烷基氨基、环烷基氨基或环烷基烷基氨基。
上面使用的术语，在本文中具有如下的含义，“烷基”是指直链或支链的、饱和或不饱和的具有1-8个碳原子的烷基链，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、丙烯基、1-丁烯基、丙炔基等等。
“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
“三氟甲基”是指-CF3。
“磺酰基”是指-SO3H。
“羧基”是指-COOH。
“烷氧基”是指-O-(烷基)，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基等等。
“烷氧基烷氧基”是指-O-(烷基)-O-(烷基)，如-OCH2CH2OCH3等等。
“烷氧羰基”是指-C(＝O)O(烷基)，如-C(＝O)OCH3、-C(＝O)OCH2CH3等等。
“烷氧基烷基”是指-(烷基)-O-(烷基)，如-CH2OCH3、-CH2OCH2CH3等等。
“芳基”是指含有5-10个环原子的碳环或杂环芳香基。碳环芳香基的环原子全部是碳原子，包括苯基和萘基；杂环芳香基的环原子至少含有一个选自氮、氧和硫的杂原子，包括吡啶基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、吡唑基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、四唑基和吲哚基。
“芳氧基”是指-O-(芳基)，如-O-苯基、-O-吡啶基等等。
“芳烷基”是指-(烷基)-(芳基)，如苄基(即，-CH2苯基)、-CH2-吡啶基等等。
“芳基烷氧基”是指-O-(烷基)-(芳基)，例如-O-苄基，-O-CH2-吡啶基等等。
“环烷基”是指具有3-7个碳原子的环状烷基，如环丙基、环戊基、环己基等等。
“环烷氧基”是指-O-(环烷基)，如-O-环己基等等。
“环烷基烷氧基”是指-O-(烷基)-(环烷基)，如-O-CH2-环己基等等。
“亚烷基”是指二价基团-CnH2n-，其中n是1-8的整数，如-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-等等。
“含有杂原子的亚烷基”是指一个亚烷基，其中至少一个碳原子被选自氮、氧和硫的杂原子所替换，如-CH2CH2OCH2CH2-等等。
“氨基烷氧基”是指-O-(烷基)-NH2，如-OCH2NH2、-OCH2CH2NH2等等。
“一-或二-烷基氨基”分别是指-NH(烷基)或-N(烷基)(烷基)，如-NHCH3、-N(CH3)2等等。
“一-或二-烷基氨基烷氧基”分别是指-O-(烷基)-NH(烷基)或-O-(烷基)-N(烷基)(烷基)，如-OCH2NHCH3、-OCH2CH2N(CH3)2等等。
“芳基氨基”是指-NH(芳基)，如-NH-苯基、-NH-吡啶基等等。
“芳烷基氨基”是指NH-(烷基)-(芳基)，如-NH-苄基、-NHCH2-吡啶基等等。
“烷基氨基”是指-NH(烷基)，如-NHCH3、-NHCH2CH3等等。
“环烷基氨基″”是指-NH-(环烷基)，如-NH-环己基等等。
“环烷基烷基氨基”是指-NH-(烷基)-(环烷基)，如-NHCH2环己基等等。
在R1和R2不存在的实施方案中，本发明化合物具有下述结构(II)(本文也称为“化合物1”) 该化合物可以从Pfaltz-Bauer(Conn.，U.S.)购得。
在R1和R2只有一个存在的实施方案中，本发明化合物具有下述结构(III)或(IV)之一 在R1和R2两个都存在的实施方案中，本发明化合物具有下述结构(V)、(VI)或(VII)之一 结构式(I)化合物的可药用盐也在本发明的范围之内，为此，化合物通常可以以游离碱的形式使用，另外，化合物也可以以酸加成盐的形式应用。本发明的游离碱氨基化合物的酸加成盐可以按本领域已知的方法制备，并且可以由有机酸或无机酸生成。适当的有机酸包括马来酸、富马酸、苯甲酸、抗坏血酸、琥珀酸、甲磺酸、乙酸、草酸、丙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、葡萄糖酸、乳酸、扁桃酸、肉桂酸、天门冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、羟基乙酸、谷氨酸和苯磺酸；适当的无机酸包括氢氯酸、氢溴酸、硫酸、磷酸和硝酸。因此，术语结构式(I)化合物的“可药用盐”包括任何和所有可接受的盐的形式。
本发明化合物通常可以按照本领域技术人员已知的有机合成方法制备，也可以按照下面的一般方法或实施例所述的方法制备。因此，本发明化合物可以按照下面的反应线路1-7制备。反应线路1 在反应线路1，将适当的蒽醌与肼在合适的溶剂(如吡啶、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、氯仿或二氧六环)中进行缩合，可制备本发明的吡唑并蒽酮，所述蒽醌在1-位上具有离去基团(如氟、氯、溴、碘、硝基、甲磺酰氧基、甲苯磺酰氧基或苯氧基)。反应在0℃-200℃温度范围进行1-16小时。适当的蒽醌起始物可以从不同的来源市购，在蒽醌环上不同的位置具有R1和/或R2基团。出于说明的目的，有以下的反应线路仅描述5-和/或7-取代的吡唑并蒽酮的合成，本领域技术人员会认识到，在其它位置取代的吡唑并蒽酮也可以按照类似的方法，从适当取代的蒽醌起始物来制备。反应线路2 在反应线路2，将5-氯吡唑并蒽酮与一-或二-取代的胺在0-250℃，在没有或有溶剂存在的情况下，进行缩合反应1-16小时，可制备具有5-氨基取代基的吡唑并蒽酮。在过量的胺存在下，或者在酸猝灭剂如三乙胺、二异丙基乙胺、碳酸氢钠、碳酸钾或氢氧化钠的存在下，常用的溶剂是吡啶、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯乙烷、氯仿、四氢呋喃、二氧六环、二甘醇二甲醚或三甘醇二甲醚。反应线路3 在反应线路3，将7-氯吡唑并蒽酮与一-或二-取代的胺在0-250℃，在没有或有溶剂存在的情况下，进行缩合反应1-16小时，可以制备具有7-氨基取代基的吡唑并蒽酮。在过量的胺存在下，或者在酸猝灭剂如三乙胺、二异丙基乙胺、碳酸氢钠、碳酸钾或氢氧化钠的存在下，常用的溶剂是吡啶、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯乙烷、氯仿、四氢呋喃、二氧六环、二甘醇二甲醚或三甘醇二甲醚。反应线路4
在反应线路4，将5-氨基-2-(2-甲氧基乙氧基甲基)吡唑并蒽酮与酰氯或磺酰氯进行缩合，然后进行脱保护，可制备具有5-酰基-或磺酰基氨基取代基的吡唑并蒽酮。5-氨基-2-(2-甲氧基乙氧基甲基)吡唑并蒽酮与适当的酰氯R6COCl或磺酰氯R6SO2Cl缩合反应，是在酸猝灭剂如三乙胺、二异丙基乙胺、碳酸氢钠、碳酸钾或氢氧化钠的存在下，在溶剂中于-20℃-50℃进行0.5-16小时，溶剂为例如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二氧六环、二甲基甲酰胺和乙酸乙酯。实施脱保护步骤，可以将上述产物用酸如三氟乙酸、含水氢氯酸、含水氢溴酸或含水硫酸进行处理。
起始物可以从两个步骤制备，5-硝基吡唑并蒽酮的2-位可以在碱的协助下，用保护基进行保护，保护基如甲氧基甲基(MOM)、甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(SEM)或4-甲氧基苄基(PMB)，所用的碱如三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、六甲基二硅烷基氮化钠(sodium hexamethyldisilazide)、六甲基二硅烷基氮化钾或二异丙基氨化锂；使用叔胺作为碱时，可以用4-(N，N-二甲基氨基)吡啶(DMAP)作为催化剂。反应一般在-40-60℃在溶剂中进行1-16小时，所用溶剂如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二氧六环或二甲氧基乙烷。作为氮保护基，MEM基团是优选的。
然后，将N-保护的5-硝基吡唑并蒽酮用各种还原剂如Sn或Fe金属在酸性介质(如乙酸或含水氢氯酸)下还原为它的5-氨基衍生物。反应一般在20-160℃进行1-16小时。通过氢化反应也可以实现同样的转化，反应在过渡金属催化剂存在下，例如，有或没有载体(如炭)的钯、铂、铑或铱，在溶剂中，例如乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环或二甲氧基乙烷，在1-20大气压氢，于20-60℃进行1-16小时。使用钯/炭作催化剂的氢化反应的方法是优选的。反应线路5 在反应线路5，将7-氨基-2-(2-甲氧基乙氧基甲基)吡唑并蒽酮与酰氯或磺酰氯进行缩合，然后进行脱保护，可制备具有7-酰基-或磺酰基氨基取代基的吡唑并蒽酮。7-氨基-2-(2-甲氧基乙氧基甲基)吡唑并蒽酮与适当的酰氯R6COCl或磺酰氯R6SO2Cl缩合反应，是在酸猝灭剂如三乙胺、二异丙基乙胺、碳酸氢钠、碳酸钾或氢氧化钠的存在下，在溶剂中于-20℃-50℃进行0.5-16小时，溶剂为例如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二氧六环、二甲基甲酰胺或乙酸乙酯。实施脱保护步骤，可以将上述产物用酸如三氟乙酸、含水氢氯酸、含水氢溴酸或含水硫酸进行处理。
起始物可以从两个步骤制备，将7-硝基吡唑并蒽酮的2-位在碱的协助下，用保护基进行保护，保护基如甲氧基甲基(MOM)、甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(SEM)或4-甲氧基苄基(PMB)，所用的碱如三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、六甲基二硅烷基氮化钠、六甲基二硅烷基氮化钾或二异丙基氨化锂；使用叔胺作为碱时，可以用4-(N，N-二甲基氨基)吡啶(DMAP)作为催化剂。反应一般在-40-60℃在溶剂中进行1-16小时，所用溶剂如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二氧六环或二甲氧基乙烷。作为氮保护基，MEM基团是优选的。
然后，将N-保护的7-硝基吡唑并蒽酮用各种还原剂如Sn或Fe金属在酸性介质(如乙酸或含水氢氯酸)下还原为它的7-氨基衍生物。反应一般在20-160℃进行1-16小时。通过氢化反应也可以实现同样的转化，反应在过渡金属催化剂存在下，例如，有或没有载体(如炭)的钯、铂、铑或铱，在溶剂中，例如乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环或二甲氧基乙烷，在1-20大气压氢，于20-60℃进行1-16小时。使用钯/炭作催化剂的氢化反应的方法是优选的。反应线路6 在反应线路6，将5-羟基-2-(2-甲氧基乙氧基甲基)吡唑并蒽酮与烷基卤或磺酸酯R7-X进行缩合，然后进行脱保护，可制备具有5-烷氧基取代基的吡唑并蒽酮，X作为离去基团，可以使用氯化物、溴化物、碘化物、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、苯磺酸酯或三氟甲磺酸酯。5-羟基-2-(2-甲氧基乙氧基甲基)吡唑并蒽酮与适当的烷基卤或磺酸酯的缩合反应，是在酸猝灭剂如三乙胺、二异丙基乙胺、碳酸氢钠、碳酸钾或氢氧化钠的存在下，于-20℃-50℃在溶剂中进行0.5-16小时，溶剂为例如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二氧六环、二甲基甲酰胺或乙酸乙酯。实施脱保护步骤，是将上述产物用酸如三氟乙酸、含水氢氯酸、含水氢溴酸或含水硫酸进行处理。
起始物可以从两个步骤制备，将5-苄氧基吡唑并蒽酮的2-位在碱的协助下，用保护基进行保护，保护基如甲氧基甲基(MOM)、甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(SEM)或4-甲氧基苄基(PMB)，所用的碱如三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、六甲基二硅烷基氮化钠、六甲基二硅烷基氮化钾或二异丙基氨化锂；使用叔胺作为碱时，可以用4-(N，N-二甲基氨基)吡啶(DMAP)作为催化剂。反应一般在-40-60℃在溶剂中进行1-16小时，所用溶剂如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二氧六环或二甲氧基乙烷。作为氮保护基，MEM基团是优选的。
然后，通过氢化反应将N-保护的5-苄氧基吡唑并蒽酮还原为它的5-羟基衍生物，反应在过渡金属催化剂例如，有或没有载体(如炭)的钯、铂、铑或铱存在下，在溶剂中，例如乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环或二甲氧基乙烷，在1-20大气压的氢，于20-60℃进行1-16小时。使用钯/炭作催化剂的氢化反应的方法是优选的。反应线路7 在反应线路7，将7-羟基-2-(2-甲氧基乙氧基甲基)吡唑并蒽酮与烷基卤或磺酸酯R7-X进行缩合，然后进行脱保护，可制备具有5-烷氧基取代基的吡唑并蒽酮，X作为离去基团，可以使用氯化物、溴化物、碘化物、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、苯磺酸酯或三氟甲磺酸酯。7-羟基-2-(2-甲氧基乙氧基甲基)吡唑并蒽酮与适当的烷基卤或磺酸酯的缩合反应，是在酸猝灭剂如三乙胺、二异丙基乙胺、碳酸氢钠、碳酸钾或氢氧化钠的存在下，于-20℃-50℃在溶剂中进行0.5-16小时，溶剂为例如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二氧六环、二甲基甲酰胺或乙酸乙酯。实施脱保护步骤，是将上述产物用酸如三氟乙酸、含水氢氯酸、含水氢溴酸或含水硫酸进行处理。
起始物可以从两个步骤制备，将7-苄氧基吡唑并蒽酮的2-位在碱的协助下，用保护基进行保护，保护基如甲氧基甲基(MOM)、甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(SEM)或4-甲氧基苄基(PMB)，所用的碱如三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、六甲基二硅烷基氮化钠、六甲基二硅烷基氮化钾或二异丙基氨化锂；使用叔胺作为碱时，可以用4-(N，N-二甲基氨基)吡啶(DMAP)作为催化剂。反应一般在-40-60℃在溶剂中进行1-16小时，所用溶剂如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二氧六环或二甲氧基乙烷。作为氮保护基，MEM基团是优选的。
然后，通过氢化反应将N-保护的7-苄氧基吡唑并蒽酮还原为它的7-羟基衍生物，反应在过渡金属催化剂例如，有或没有载体(如炭)的钯、铂、铑或铱存在下，在溶剂中，例如乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环或二甲氧基乙烷，在1-20大气压的氢，于20-60℃进行1-16小时。使用钯/炭作催化剂的氢化反应的方法是优选的。
结构式(V)、(VI)和(VII)的化合物可以按照上述相同的方法制备，所使用的起始物在所需产物的相应位置具有多个反应部位。
在本发明的另一个实施方案中，公开了含有一种或多种本发明化合物的药物组合物。出于给药的目的，优选将结构式(I)化合物制剂成为药物组合物。本发明的药物组合物含有本发明化合物和可药用载体，其中化合物在组合物中的存在量是治疗相关疾病的有效量。根据给药途径的不同，本发明的药物组合物每单位剂量优选包含0.1mg-250mg的结构式(I)化合物，更优选1mg-60mg。本领域技术人员能够很容易地确定出合适的浓度和剂量。
可药用载体是本领域技术人员所熟悉的，对于液体溶液制剂组合物，可应用的载体包括生理盐水和无菌水，并且可任选地包含有抗氧剂、缓冲剂、制菌剂和其它常规添加剂。组合物还可以制成丸剂、胶囊剂、颗粒剂或片剂，除了本发明化合物以外，它们还含有稀释剂、分散剂和表面活性剂、粘结剂和润滑剂。本领域技术人员可以进一步将本发明化合物以适当的方式进行制剂，以及根据一般惯例制剂，如在Remington’s Pharmaceutical Sciences，[Gennaro，Ed.，MackPublishing Co.，Easton，PA 1990]中所公开的方法。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗各种疾病的方法，对需要的患者给以有效量的JNK抑制剂。使用本发明化合物或含有该化合物的药物组合物，可以进行治疗的疾病包括任何对JNK抑制反应应答因而能由使用JNK抑制剂受益的疾病。这方面有代表性的疾病包括(但不限于)类风湿关节炎、类风湿脊椎炎、骨关节炎、痛风、哮喘、支气管炎、囊性纤维变性、炎性肠疾病、过敏性肠综合征、粘液性结肠炎、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、胃炎、食管炎、肝炎、多发性硬化症、动脉粥样硬化、血管成形术后的再狭窄、左心室肥大、心肌梗死、中风，局部缺血引起的心脏、肾脏、肝脏或脑损伤，移植性排异(如肾、肝、心、肺等等)、内毒素休克、银屑病、湿疹、皮炎、癫痫、Alzheimer氏病、Huntington氏舞蹈病、肌萎缩性侧索硬化、外周神经病、脊索损伤、Parkinson氏病和癌症。
本发明方法包括本发明化合物的全身给药(systemicadministration)，优选以药物组合物的形式给药。在此所述的全身给药，包括口服和非肠道给药两种方法。对口服给药而言，适当的药物组合物包括粉剂、丸剂、颗粒剂、片剂和胶囊剂，以及液体、糖浆、悬浮液和乳状液，这些组合物还可以包括矫味剂、防腐剂、悬浮剂、增稠剂和乳化剂，以及其它可药用添加剂。对非肠道给药而言，本发明化合物可以制成水性注射液，它可以含有缓冲剂、抗氧化剂、制菌剂以及这类溶液中常用的添加剂。
以下给出实施例的目的在于举例说明，而不是限定。
实施例实施例1有代表性的化合物的合成 A.蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮(“化合物1”) 将水合肼加入到2-氯蒽醌(Aldrich)在10mL吡啶的溶液中，混合物在100℃加热16小时。将混合物冷却，真空蒸发溶剂，将残留物移至热的6N HCI中，过滤收集固体。粗产物在硅胶上进行急骤色谱分离，得到黄色固体状蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮(“化合物1”)。
由于化合物1的溶解度有限，其纯化可如下进行首先将化合物1衍生为更易溶解的中间产物，如相应的乙酸盐，将中间产物重结晶，然后将中间产物转化，以良好的产率得到纯净的化合物1。更具体地讲，向吡唑并蒽酮(9.67g，43.9mmol)的乙酸(700mL)溶液中加入乙酸酐(12.4mL.132mmol)，溶液加热至80℃5小时，然后冷却至室温，16小时后将反应混合物冷却至0℃2小时。然后过滤得到中间产物N-乙酰基吡唑并蒽酮，该中间产物在乙酸中重结晶，得到纯净的中间产物(5.96g，52％)。1H NMR(CDCL3)δ10.6(br s，1H)，8.46(d，1H)，8.33(d，1H)，8.26(d，1H)，8.08(d，1H)，7.96-7.87(m，2H)，7.78(t，1H)，2.83(s，3H)；ES-MS(m/z)263[M+1]+。往纯净中间产物(5.96g，23mmol)的甲醇(600mL)溶液中加入氢氧化铵(60mL)，宝温搅拌反应16小时，然后过滤，于真空箱中干燥，回收第二茬晶体，得到总量为4.8g、纯度大于98％的化合物1，ES-MS(m/z)221[M+1]+。B.5-氯蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，从1，4-二氯蒽醌(市售产品)制备。C.7-氯蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，从1，5-二氯蒽醌(市售产品)制备。D.5-硝基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以从1，4-二硝基蒽醌制备(Krapcho，A.P.；Avery，K.L.，Jr.J.Org.Chem.有机化学杂志，55，5562-4，1990)。E.7-硝基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，从1，5-二氯蒽醌(市售产品)制备。F.5-苄氧基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，从1-硝基-4-苄氧基蒽醌制备。起始物可以如下制备，将苄溴加入到1-硝基-4-羟基蒽醌(Aldrich)和碳酸钾于二甲基甲酰胺的混合物中，混合物搅拌16小时，加入水，混合物用乙酸乙酯萃取(×2)，合并的有机层依次用碳酸氢钠溶液、水、1N盐酸和盐水洗涤，干燥并蒸发，残留物用硅胶层析，得到1-硝基-4-苄氧基蒽醌。G.7-苄氧基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，从1-硝基-5-苄氧基蒽醌制备。其起始物可以按照Reubke、Hohmann和Bien的德国专利DE 2254199所公开的方法制备。H.5-(乙酰氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮
该化合物可以按照相同的方法，从4-乙酰氨基-1-氯蒽醌制备。起始物可以如下制备，将4-氨基-1-氯蒽醌加入到吡啶中，并用乙酸酐处理。混合物搅拌1小时，倒入到水中，过滤收集固体，用水洗涤，真空干燥得到无色固体状4-乙酰氨基-1-氯蒽醌。
实施例2有代表性的化合物的合成 A.5-(二甲基氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 将5-氯蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮(实施例1-B)和二甲胺在吡啶中的混合物，于100℃加热16小时。将混合物冷却并蒸发，将残留物在硅胶上层析，得到黄色固体状的所需化合物。B.5-(1-哌啶基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用哌啶作为胺进行制备。C.5-(1-吗啉基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用吗啉作为胺进行制备。D.5-(苄氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用苄胺作为胺进行制备。E.5-{(4-吡啶基甲基)氨基}蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用4-吡啶基甲胺作为胺进行制备。F.5-{2-(1-哌啶基)乙基氨基}蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用2-(1-哌啶基)乙基胺作为胺进行制备。
实施例3有代表性的化合物的合成 A.7-(二甲基氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 将7-氯蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮(实施例1-C)和二甲胺在吡啶中的混合物，于100℃加热16小时。将混合物冷却并蒸发，将残留物在硅胶上层析，得到黄色固体状的所需化合物。B.7-(1-哌啶基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用哌啶作为胺进行制备。C.7-(1-吗啉基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用吗啉作为胺进行制备。D.7-(苄氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用苄胺作为胺进行制备。E.7-{(4-吡啶基甲基)氨基}蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用4-吡啶基甲胺作为胺进行制备。F.7-{2-(1-哌啶基)乙基氨基}蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用2-(1-哌啶基)乙基胺作为胺进行制备。
实施例4有代表性的化合物的合成 A.5-(苯甲酰氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 在0℃，将苯甲酰氯加入到2-(甲氧基乙氧基甲基)-5-氨基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮和三乙胺的二氯甲烷溶液中，混合物搅拌16小时，用水熄灭反应，并用乙酸乙酯(×2)萃取。合并的有机层用碳酸氢钠和盐水洗涤，干燥并蒸发。然后将粗反应混合物移入6N的盐酸中，于80℃加热4小时，冷却后，混合物用乙酸乙酯(×2)萃取，用盐水洗涤，干燥并蒸发，残留物在硅胶上层析，得到黄色固体状的所需酰胺。
起始物如下制备，将六甲基二硅烷基氮化钠加入到冷却的(0℃)5-硝基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮(实施例1-D)的四氢呋喃溶液，并将混合物在0℃下搅拌30分钟，加入MEM-氯，混合物在室温下搅拌16小时，加入水并用乙酸乙酯萃取(×2)，将合并的有机层用碳酸氢钠水溶液、水、1N盐酸和盐水洗涤，干燥并蒸发，残留物在硅胶上层析，得到油状的2-MEM-5-硝基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮。
将钯(10％)/炭和2-MEM-5-硝基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮的乙醇液置于1大气压的氢下，混合物搅拌6小时。用硅藻土(celite)滤去催化剂，滤液蒸发至干，得到2-(甲氧基乙氧基甲基)-5-氨基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮，该化合物使用时无需进一步纯化。B.5-(异烟酰氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用异烟酰氯作为酰氯进行制备。C.5-(烟酰氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用烟酰氯作为酰氯进行制备。D.5-(2-噻吩甲酰基氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用2-噻吩甲酸作为酰氯进行制备。E.5-(3-甲基丁酰基氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用异戊酰氯作为酰氯进行制备。F.5-(甲磺酰基氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用甲磺酰氯作为磺酰氯进行制备。G.5-(苯磺酰基氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用苯磺酰氯作为磺酰氯进行制备。
实施例5有代表性的化合物的合成 A.7-(苯甲酰氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 在0℃，将苯甲酰氯加入到2-(甲氧基乙氧基甲基)-7-氨基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮和三乙胺的二氯甲烷溶液中，混合物搅拌16小时，用水熄灭反应，并用乙酸乙酯(×2)萃取。合并的有机层用碳酸氢钠和盐水洗涤，干燥并蒸发。然后将粗反应混合物移入6N的盐酸中，于80℃加热4小时，冷却后，混合物用乙酸乙酯(×2)萃取，用盐水洗涤，干燥并蒸发，残留物在硅胶上层析，得到黄色固体状的所需酰胺。
起始物如下制备，将六甲基二硅烷基氮化钠加入到冷却的(0℃)7-硝基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮(实施例1-E)的四氢呋喃溶液，并将混合物在0℃下搅拌30分钟，加入MEM-氯，混合物在室温下搅拌16小时，加入水并将混合物用乙酸乙酯萃取(×2)，将合并的有机层用碳酸氢钠水溶液、水、1N盐酸和盐水洗涤，干燥并蒸发，残留物在硅胶上层析，得到油状的2-MEM-7-氨基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮。
将钯(10％)/炭和2-MEM-7-硝基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮的乙醇液置于1大气压的氢下，混合物搅拌6小时。用硅藻土(celite)滤去催化剂，滤液蒸发至干，得到2-(甲氧基乙氧基甲基)-7-氨基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮，该化合物使用时无需进一步纯化。B.7-(异烟酰氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用异烟酰氯作为酰氯进行制备。C.7-(烟酰氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用烟酰氯作为酰氯进行制备。D.7-(2-噻吩甲酰基氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用2-噻吩甲酰氯作为酰氯进行制备。E.7-(3-甲基丁酰基氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用异戊酰氯作为酰氯进行制备。F.7-(甲磺酰基氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用甲磺酰氯作为磺酰氯进行制备。G.7-(苯磺酰基氨基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用苯磺酰氯作为磺酰氯进行制备。
实施例6有代表性的化合物的合成 A.5-(3-甲基丁氧基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 在室温下，将异戊基溴加入到2-(甲氧基乙氧基甲基)-5-羟基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮和碳酸钾在二甲基甲酰胺中的混合物中，混合物搅拌16小时后，加入水，混合物用乙酸乙酯(×2)萃取。合并的有机层用碳酸氢钠水溶液、水、1N盐酸和盐水洗涤，干燥并蒸发。然后将残留物移入6N的盐酸中，于80℃加热4小时，冷却后，混合物用乙酸乙酯(×2)萃取，合并的有机层用盐水洗涤，干燥并蒸发，残留物经柱层析纯化，得到黄色固体状的标题化合物。
起始物如下制备，将六甲基二硅烷基氮化钠加入到冷却的(0℃)5-苄氧基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮(实施例1-F)的四氢呋喃溶液，并将混合物在0℃下搅拌30分钟，加入MEM-氯，混合物在室温下搅拌16小时，加入水并用乙酸乙酯萃取(×2)，将合并的有机层用碳酸氢钠水溶液、水、1N盐酸和盐水洗涤，干燥并蒸发，残留物在硅胶上层析，得到油状的2-MEM-5-苄氧基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮。
将钯(10％)/炭和2-MEM-5-苄氧基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮的乙醇液置于1大气压的氢下，混合物搅拌6小时。用硅藻土(celite)滤去催化剂，滤液蒸发至干，得到2-(2-甲氧基乙氧基甲基)-5-羟基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮，该化合物使用时无需进一步纯化。B.5-(4-吡啶基甲氧基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用氯甲基-4-吡啶作为烷基卤进行制备。C.5-(3-吡啶基甲氧基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用氯甲基-3-吡啶作为烷基卤进行制备。D.5-(2-甲氧基乙氧基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用2-甲氧基乙基溴作为烷基卤进行制备。E.5-(2-二甲基氨基乙氧基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用2-二甲基氨基乙基氯作为烷基卤进行制备。
实施例7有代表性的化合物的合成 A.7-(3-甲基丁氧基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 在室温下，将异戊基溴加入到2-(甲氧基乙氧基甲基)-7-羟基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮和碳酸钾在二甲基甲酰胺中的混合物中，混合物搅拌16小时后，加入水，混合物用乙酸乙酯(×2)萃取。合并的有机层用碳酸氢钠水溶液、水、1N盐酸和盐水洗涤，干燥并蒸发。然后将残留物移入6N的盐酸中，于80℃加热4小时，冷却后，混合物用乙酸乙酯(×2)萃取，合并的有机层用盐水洗涤，干燥并蒸发，残留物经柱层析纯化，得到黄色固体状的标题化合物。
起始物如下制备，将六甲基二硅烷基氮化钠加入到冷却的(0℃)7-苄氧基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮(实施例1-F)的四氢呋喃溶液，并将混合物在0℃下搅拌30分钟，加入MEM-氯，混合物在室温下搅拌16小时，加入水并用乙酸乙酯萃取(×2)，将合并的有机层用碳酸氢钠水溶液、水、1N盐酸和盐水洗涤，干燥并蒸发，残留物在硅胶上层析，得到油状的2-MEM-7-苄氧基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮。
将钯(10％)/炭和2-MEM-7-苄氧基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮的乙醇液置于1大气压的氢下，混合物搅拌6小时。用硅藻土(celite)滤去催化剂，滤液蒸发至干，得到2-(2-甲氧基乙氧基甲基)-7-羟基蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮，该化合物使用时无需进一步纯化。B.7-(4-吡啶基甲氧基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用氯甲基-4-吡啶作为烷基卤进行制备。C.7-(3-吡啶基甲氧基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用氯甲基-3-吡啶作为烷基卤进行制备。D.7-(2-甲氧基乙氧基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用2-甲氧基乙基溴作为烷基卤进行制备。E.7-(2-二甲基氨基乙氧基)蒽并[1，9cd]吡唑-6(2H)-酮 该化合物可以按照相同的方法，用2-二甲基氨基乙基氯作为烷基卤进行制备。
实施例8代表性化合物的活性按照下述方法对本发明化合物的活性进行测定JNK测定向10μL测试化合物在20％DMSO/80％稀释缓冲液(其组成为20mMHEPES(pH7.6)、0.1mM EDTA、2.5mM氯化镁、0.004％ Triton×100、2μg/mL亮抑酶肽、20mM甘油磷酸酯、0.1mM钒酸钠和2mM DTT水溶液)中的液体中，加入30μL的50-300ng His6-JNK1、JNK2或JNK3在相同稀释缓冲液中的液体。所得混合物在室温下预孵化30分钟，加入60微升的10μg GST-c-Jun(1-79)在测试缓冲液(其组成为20mM HEPES(pH7.6)、50mM氯化钠、0.1mM EDTA、24mM氯化镁、1mM DTT、25mM PNPP、0.05％ Triton×100、11μM ATP和0.5μCiγ-32P ATP水溶液)中的液体，让反应在室温下进行1小时。加入150μL的12.5％三氯乙酸，终止c-Jun磷酸化作用。30分钟后，将沉淀物收集到滤盘上，用50μL闪烁液稀释，进行计数测量。计算出IC50值，作为c-Jun磷酸化作用降低到对照值的50％时测试化合物的浓度。在该项测试中，本发明优选的化合物IC50值范围是0.01-10μM。因此，本发明优选的化合物是化合物1，按照该项测试，其IC50对JNK1和JNK2为0.11μM，而对JNK3是0.15μM。对JNK的选择性按照本领域技术人员已知的方法(例如，见ProteinPhosphorylation.Sefton & Hunter，Eds.，Academic Press.pp.97-367，1998)，还测定了化合物1对以下蛋白激活酶的抑制活性酶 IC50p38-2 ＞30,000nMERK1 ＞30,000nMMEKK1 ＞30,000nMIKK1 ＞30,000nMIKK2 ＞30,000nMPKA＞30,000nMPKC＞10,000nMEGF-TK ＞10,000nMJurkat T-细胞IL-2产生测定从American Tissue Culture Collection(美国组织培养收藏中心)购买Jurkat T细胞(克隆E6-1)，并保存于生长培养液(其组成为含有2mM L-谷氨酰胺(Mediatech)的RPMI 1640培养液、与10％的胎牛血清(Hyclone)和青霉素/链霉素)，所有细胞在37℃和95％空气和5％CO2中培养。以每个加样孔0.2×106细胞的密度，将细胞用200μL培养液涂板。将化合物储存液(20mM)用生长培养液稀释，相当于25μL体积的浓溶液10倍稀释，加入到每个加样孔、混合并进行细胞预孵化30分钟。在所有样品中，化合物赋形剂(二甲亚砜)保持0.5％的最终浓度。30分钟后，将细胞用PMA(佛波醇十四烷酸乙酸酯，最终浓度为50ng/mL)和PHA(植物凝集素，最终浓度2μg/mL)进行活化。加入PMA和PHA，相当于浓溶液在生长培养液中形成10倍稀释液，每个加样孔加入25μL的体积。将细胞平板培养10小时，离心分离使细胞成粒，移取培养液并保存在-20℃，培养液的等分试样通过夹心ELISA法按照制造厂商的说明书(Endogen)分析IL-2的存在。计算出IC50值，作为IL-2产生降低到对照值的50％时测试化合物的浓度。在该项测试中，本发明优选的化合物IC50值范围是0.1-30μM。附
图1表示按照该方法，化合物1对Jarkat T-细胞中IL-2的抑制作用与剂量的依赖关系，其IC50为5μM。鼠体内LPS-诱导的TNF-α产生的测定将不禁食的鼠至少适应7天。注射0.5mg/kg Bacto LPS(自E.coli 055B5(Difco Labs))之前，各组4-6只雌性BALB/c或CD-1鼠(8-10周龄，由Charles River laboratories提供)预先用测试化合物进行处理，采用静脉注射或口管饲15-180分钟。LPS激发后90分钟，从其腹腔静脉进行定期取血，室温下令血液在微量血清分离试管(Microtainer serum separator tube)中聚集30分钟，离心分离后，将血清在-80℃冷冻储存。用鼠TNF-α试剂盒(BiosourceInternational)对解冻的稀释样品(1∶10-1∶20)进行ELIZA分析，计算出ED50值，作为TNF-α产生降低到对照值的50％时测试化合物的剂量。在该项测试中，本发明优选的化合物ED50值范围是1-30mg/kg。附图2说明了使用化合物1，以15和30mg/kg静脉注射(I.V.)给药，以及以7.5、15和30mg/kg口服(P.O.)给药本实验所得的结果。单独的赋形剂(PEG-400、丙二醇、cremophor EL和乙醇的标准生理盐水溶液、“PPCES”)和地塞米松-21乙酸盐(′DEX″)(1mg/kgP.O.)用作对照样(n＝6，*＝p0.01)。在LPS激发前15分钟进行化合物1给药，LPS后90分钟开始取血。发炎的鼠肺中白细胞募集反应的抑制作用事先经卵白蛋白(OA)注射敏化的Brown Norway鼠，进行卵白蛋白(ovalbumun)气雾剂给药会导致变应性气管炎，表现在肺部产生富嗜曙红细胞和富T-淋巴细胞性的白细胞浸润(见Richards等人，Am.J.Physiol、2712Pt1，L267-76，1996)。将化合物1以30mg/kg，b.i.d.的剂量进行皮下注射，给药3天，然后通过气雾剂卵白蛋白激发。从支气管肺泡灌洗样品得到细胞计数，其结果如附图3所示(V＝PPCES赋形剂)。鼠体内佐剂关节炎从0天起，使用弗氏完全佐剂，令雄性Lewis鼠产生免疫，以诱导出侵蚀性关节炎，具有关节损坏和爪肿胀特征。从第8天到第20天，将化合物1进行每天一次的皮下给药。通过水置换器官充满度测量法(water displacement plethysmometry)，测定爪肿胀(见附图4A；*＝p＜0.01)。取得右后爪的放射照片，用半定量评分体系评价骨头的变化失矿质程度(0-2+)、跟骨侵蚀(0-1+)以及异位骨的形成(0-1+)，最高得分＝6(见附图4B)。采用电泳迁移率变动分析方法(EMSA)，通过DNA结合活性来测定AP-1的活化(见附图4C)(Ausubel等人，Short Protocols in Molecular Biology，第二版，John Wiley& Sons Publisher，New York.1992)。间质金属蛋白酶-13的表达(见附图4D)，通过MMP-13 mRNA的印迹杂交(nothern blot)分析进行测量(Ausebel等人，同上)(另见Winter等人，Arthritisand Rheumatism 9(3)394-404，1966；Weichman等人，Pharmacological Methods in the Control of Inflammation，Chang and Lewis Eds.，Alan R.Liss，Inc.，PubI.，New York，1989).红藻氨酸-诱导的癫痫发作反应通过一个尾静脉导管以10mg/kg的剂量，将化合物1对雄性CD鼠进行静脉注射给药，此后立即以30mg/kg的剂量进行皮下注射。赋形剂对照组仅接受相同注射体积的PPCES赋形剂。30分钟后，以1-mg/kg i.p.的剂量给动物注射红藻氨酸标准生理盐水溶液。先前已经报道，该剂量的红藻氨酸能够诱导鼠的癫痫发作综合征(Maj等人，Eur.J.Pharm.35927-32，1992)。注射红藻氨酸后，对癫痫发作行为监测4小时。如附图5所示，行为的评价以下面的累积评分体系为基础1点＝停止运动；2点＝头和颈发生肌阵挛反射(中等)；3点＝单侧的或两侧的前肢阵挛性活动；4点＝全身性阵挛；5点＝阵挛性-强直性的癫痫发作；6点＝癫痫发作状态(另见Mathis和Ungerer，Exp.Brain Res.88277-282，1992；Rong等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 969897-9902，1999；Yang等人，Nature389865-870，1997)。
应当理解，出于举例说明的目的，尽管本文仅描述了本发明的具体的实施方案，但在不背离本发明的精神和范围的情况下，可以进行各种改进。因此，本发明不仅限于权利要求所限定的内容。
权利要求
1.具有以下结构的化合物或其可药用盐 其中R1和R2是任选的相同或不同的取代基，并且独立地表示烷基、卤素、硝基、三氟甲基、磺酰基、羧基、烷氧羰基、烷氧基、芳基、芳氧基、芳基烷氧基、芳烷基、环烷基烷氧基、环烷基氧基、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基、氨基烷氧基、一-或二-烷基氨基烷氧基，或者由式(a)、(b)、(c)或(d)表示的基团 R3和R4一起表示亚烷基或含有杂原子的亚烷基，或者R3和R4相同或不同并各自独立地表示氢、烷基、环烷基、芳基、芳烷基、环烷基烷基、芳氧基烷基、烷氧基烷基、烷氧基氨基或烷氧基(一-或二-烷基氨基)；以及R5表示氢、烷基、环烷基、芳基、芳烷基、环烷基烷基、烷氧基、氨基、一-或二-烷基氨基、芳基氨基、芳烷基氨基、环烷基氨基或环烷基烷基氨基；其前提条件是至少R1或R2是存在的。
2.权利要求1的化合物，其中R1或R2是存在的，并且具有下述结构之一
3.权利要求1的化合物，其中R1和R2两者都存在，并且具有下述结构之一
4.权利要求2的化合物，其中R1和R2是
5.权利要求2的化合物，其中R1和R2是
6.权利要求2的化合物，其中R1和R2是
7.权利要求2的化合物，其中R1和R2是
8.一种含有权利要求1化合物和可药用载体的组合物。
9.一种治疗JNK抑制作用应答性疾病的方法，包括给需要治疗的患者以有效量的下述结构的化合物或其可药用盐 其中R1和R2是任选的相同或不同的取代基，并且独立地表示烷基、卤素、硝基、三氟甲基、磺酰基、羧基、烷氧羰基、烷氧基、芳基、芳氧基、芳基烷氧基、芳烷基、环烷基烷氧基、环烷基氧基、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基、氨基烷氧基、一-或二-烷基氨基烷氧基，或者由式(a)、(b)、(c)或(d)表示的基团 R3和R4一起表示亚烷基或含有杂原子的亚烷基，或者R3和R4相同或不同并各自独立地表示氢、烷基、环烷基、芳基、芳烷基、环烷基烷基、芳氧基烷基、烷氧基烷基、烷氧基氨基或烷氧基(一-或二-烷基氨基)；以及R5表示氢、烷基、环烷基、芳基、芳烷基、环烷基烷基、烷氧基、氨基、一-或二-烷基氨基、芳基氨基、芳烷基氨基、环烷基氨基或环烷基烷基氨基。
10.权利要求9的方法，其中的疾病是癌症。
11.权利要求9的方法，其中的疾病是类风湿关节炎、类风湿脊椎炎、骨关节炎、痛风、哮喘、支气管炎、囊性纤维变性、炎性肠疾病、过敏性肠综合征、粘液性结肠炎、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、胃炎、食管炎、肝炎、多发性硬化症、内毒素休克、银屑病、湿疹或皮炎。
12.权利要求9的方法，其中的疾病是动脉粥样硬化、血管成形术后的再狭窄、左心室肥大或心肌梗死。
13.权利要求9的方法，其中的疾病是中风，或者心脏、肾脏、肝脏或脑的局部缺血性损伤。
14.权利要求9的方法，其中的疾病是移植性排异。
15.权利要求9的方法，其中的疾病是中枢神经或外周神经退化性疾病。
16.权利要求15的方法，其中所述中枢神经或外周神经退化性疾病是癫痫、Alzheimer氏病、Parkinson氏病、Huntington氏舞蹈病、肌萎缩性侧索硬化、外周神经病或脊索损伤。
17.权利要求9的方法，其中R1和R2不存在，并且具有下述结构
18.权利要求9的方法，其中R1或R2是存在的，并且具有下述结构之一
19.权利要求9的方法，其中R1和R2两者都存在，并且具有下述结构之一
20.权利要求18的方法，其中R1和R2是
21.权利要求18的方法，其中R1和R2是
22.权利要求18的方法，其中R1和R2是
23.权利要求18的方法，其中R1和R2是
24.一种组合物，含有具有下述结构的化合物 或其可药用盐，以及可药用载体。
全文摘要
本发明公开了具有JNK选择性抑制剂活性的化合物,本发明化合物为具有结构式(I)的吡唑并蒽酮及其衍生物,其中R
文档编号A61P17/00GK1379763SQ00814387
公开日2002年11月13日 申请日期2000年8月19日 优先权日1999年8月19日
发明者B·L·本尼特, S·S·巴瓦特, A·M·曼宁, B·W·墨雷, E·C·奥莱里, Y·萨托 申请人:信号药品公司