含有β－帕拉酮或其衍生物、类似物的药用组合物及其使用方法

专利名称：含有β－帕拉酮或其衍生物、类似物的药用组合物及其使用方法
技术领域：
本发明涉及药用组合物和配方，以及将这些药用组合物和配方用药的方法，其中含有与增溶载体分子混合的β-帕拉酮(β-lapachone)或其衍生物、类似物，用以增强β-帕拉酮在不同溶剂系统中的溶解度。
背景技术：
仅在2001年美国就诊断出超过122万新癌症病例。随着每年死亡人数超过563,000，癌症已经成为排在心脏病后第二大致死因(UBS Warburg“Disease DynamicsThe Cancer Market”，Nov.8，2000)。如果癌症发现得早，手术与放射疗法都可能会起到治疗作用，但是针对转移性癌症，现有的药物疗法通常只能减轻症状，很少获得长期治愈。即使是新进入市场的化学疗法，对病体的生存期的延长也只能以月计算，而不能以年计算，因此，依旧需要有效的新型药剂，与现存的药剂结合使用，作为一线疗法，在治疗耐久性肿瘤中作为二线和三线疗法。
过去，最成功的药物治疗方式是将两种或多种药剂结合使用，其中每种药剂具有不同的作用机理，并且单独使用时都具有抗肿瘤活性。尽管它们的作用机理不同，当前用于癌症化学疗法的大部分试剂都具有严重损害DNA的相同特性，因此被命名为“DNA损害剂”，其中包括烷化剂、铂类似物、anthracycline、喜树碱类的拓扑异构酶抑制剂。放射疗法具有相似的作用。大部分DNA损害剂以及微管靶剂(例如，paclitaxel)造成了细胞在细胞周期G2/M转化期时的停止，G2/M转化期是一个重要的细胞周期检测点，在此期间细胞进行DNA修补，如果DNA损伤不可修补，就会启动细胞死亡程序。最近，人们更加重视鉴别深入开发细胞检查点功能的新型治疗剂。
β-帕拉酮(3，4-二氢-2，2-二甲基-2H-萘[1，2-b]吡喃-5，6-二酮)是一种醌，由拉帕醇(一种萘醌)制得，拉帕醇可以从lapacho树(Tabebuia avellanedae)中分离出来，lapacho树属于梓属植物科(Bignoniaceae)。拉帕醇和β-帕拉酮(带有编号)具有下列化学结构 Lapachol拉帕醇 β-帕拉酮β-帕拉酮以及其中间体、衍生物、类似物参见Li，C.J.et al.，J.Biol.Chem，1993。尽管机理不同，与喜树碱、topotecan相同，β-帕拉酮抑制了DNA拓扑异构酶(Li，C.J.et al.，J.Biol.Chem，1993)。
业内已经公开了大量的β-帕拉酮类似物，例如参见PCT国际专利申请PCT/US93/07878(WO94/04145)，其全部内容通过在此引述合并于本文，和美国专利6,245,807，其全部内容通过在此引述合并于本文，其中各种取代基可以附着在β-帕拉酮化合物的3-、4-位。PCT国际专利申请PCT/US00/10169(WO00/61142)的全部内容通过在此引述合并于本文，其中公开了β-帕拉酮在3-位带有多种取代基，而且取代基还替代了2-位的甲基。美国专利5,763,625与5,824,700和5,969,163公开了在2-、3-、4-位带有多种取代基的类似物与衍生物，上述专利所有内容通过在此引述合并于本文。此外，大量杂志报道了在下列一个或多个位上带有取代基的β-帕拉酮类似物与衍生物2-、3-、8-和/或9-位(参见Sabba et al.，J.Med.Chem.27990-994，1984)(取代基在2-、8-和9-位)；(Molina Portela and Stoppani，Biochem Pharm51275-283，1996)(取代基在2-和9-位)；Goncalves et al.，Molecular and Biochemical Parasitology 1167-176(1998)(取代基在2-、3-位)。
经证实，作为单一试剂，浓度范围通常在1-10μM(IC50)的β-帕拉酮具有有效的抗肿瘤活性，抑制人癌细胞系。经证实，来源于早幼粒细胞性白血病病体(Planchon et al.，Cancer Res.，55(1996)3706)、前列腺病体(Li，C.J.et al.，Cancer Res.，55(1995)3712)、恶性神经胶质瘤病体(Weller，M.et al.，Int.J.Cancer，73(1997)707)、肝癌病体(Lai，C.C.et al.，Histol Histopathol，13(1998)8)、结肠病体(Huang，L.，et al.，Mol Med，5(1999)711)、乳腺病体(Wuertzberger，SM et al Cancer Res.，58(1998)1876)、卵巢病体(Li C J et al，Proc Natl Acad.Sci USA，96(23)(1999)13369-74)、胰腺病体(Li，Y.，et al.，Mol Med，6(2000)1008；Li，Y.Z.，Mol Med，5(1999)232)的变性细胞系和多发性骨髓瘤细胞系(其中包括抗药系(Li，Y.，Mol Med，6(2000)1008))具有细胞毒性。在正常新生或分裂繁殖的人PBMC中未发现细胞毒性作用(Li，Y.，Mol Med，6(2000)1008)。
经证实，β-帕拉酮是DNA修补抑制剂，使细胞对DNA损害剂敏感，其中包括放射作用(Boothman，D.A.et al.，Cancer Res.，47(1987)5361；Boorstein，R.J.，et al.，Biochem.Biophys.Commun.，117(1983)30)。尽管细胞致死的确切细胞内靶与机理仍不得而知，但是也已经证实β-帕拉酮以新作用机理在生命体外有效地抑制人DNA拓扑异构酶I(Li，C.J.et al.，J.Biol.Chem.，268(1993)22463)和人DNA拓扑异构酶II(Frydman，B.et al.，Cancer Res.，57(1997)620)。拓扑异构酶“抑制剂”(例如喜树碱、etoposide、阿酶素)使共价拓扑异构酶-DNA复合体稳定，并导致拓扑异构酶为介质的DNA断裂，与拓扑异构酶“抑制剂”不同，β-帕拉酮与酶直接作用抑制其催化能力，并阻止可断裂的复合体生成(Li，C.J.，et al.，J.Biol.Chem.，268(1993)22463)，或直接作用于复合体本身，造成断裂的DNA重新连接，并从DNA上分离酶(Krishnan，P.et al.，Biochem.Pharm.，60(2000)1367)。β-帕拉酮及其衍生物也被合成出来，作为抗病毒剂和抗寄生物剂进行检测(Goncalves，A.M.，et al.，Mol.Biochem.Parasitology，1(1980)167-176；Schaffner-Sabba，K.，et al.，J.Med.Chem.，27(1984)990-994)。
更具体地讲，β-帕拉酮表现出作用是，针对各种人类癌细胞系，在不损害DNA和未丧失独立的p53状态下，其断裂了DNA的重新连接，造成了细胞周期在G1和/或S期的延迟，从而既导致了细胞程序死亡，又导致了坏死细胞死亡(Li，Y.Z.et al(1999)；Huang，L.et al.))。拓扑异构酶I是解开构成染色体DNA的酶。为了让细胞使用遗传信息合成蛋白质，必须将染色体解开；而β-帕拉酮保持染色体紧密盘绕，以至细胞不能产生蛋白质。结果，细胞停止生长。因为癌细胞不断复制，并阻止正常细胞中一些限制复制的机理起作用，所以癌细胞比正常细胞更易受到拓扑异构体酶的抑制。
肿瘤细胞中β-帕拉酮另一可能的细胞内靶是酶NAP(P)H醌氧化还原酶(NQO1)。生化研究表明，由NQO1还原β-帕拉酮，造成了醌与氢醌状态之间的“无益循环”，伴随着还原性NADH或NAD(P)H的丧失(Pink，J.J.et al.，J.Biol.Chem.，275(2000)5416)。这些还原性酶辅助因子的枯竭可能是β-帕拉酮治疗后激活细胞程序死亡路径的关键因素。
作为这些发现的结果，人们正在积极地开发用于治疗癌症和肿瘤的β-帕拉酮。例如，专利WO00/61142中公开了一种治疗癌症的方法和组合物，该方法包括将有效用量的第一化合物、G1或S期药剂、(例如β-帕拉酮)与G2/M期药剂(例如taxane衍生物)结合使用。此外，美国专利6,245,807公开了在其它β-帕拉酮衍生物中使用β-帕拉酮，用于治疗人前列腺病。
然而，在开发适合非肠道与局部用药的含有β-帕拉酮药用配方中存在一个障碍，那就是β-帕拉酮在药用溶剂中溶解度很低。β-帕拉酮的水溶解度很低，并且在用于局部和非肠道用药的普通溶剂系统中仅有有限的溶解度，特别是静脉和通过皮肤输送药物。因此，依旧需要用于非肠道和局部用药的β-帕拉酮改进配方，使两种用药形式对于施用的病体都安全可靠，并具有快速的生物可用性。
发明概述本发明涉及治疗哺乳动物癌症、含有β-帕拉酮的药用组合物，其克服了现有业内组合物的缺点与障碍。更具体地讲，本发明涉及药用组合物，其含有β-帕拉酮、或其衍生物、类似物和药用增溶载体分子，用于治疗哺乳动物癌症，包括肺癌、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、多发性骨髓瘤、恶性黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌，以及增生症和皮肤病、例如牛皮癣。药用组合物可以与药用增溶载体分子混合，形成单一的组合物、或包含物复合体。优选的药用增溶载体分子是水增溶载体分子、或油基增溶载体分子。
本发明提供了β-帕拉酮或其衍生物、类似物和药用增溶载体分子的药用组合物，该组合物增强了β-帕拉酮的溶解度，使其在哺乳动物体内具有生物可用性，适用于非肠道和局部用药。溶液中β-帕拉酮浓度优选的是至少1毫克/毫升，更优选的是至少3毫克/毫升，更甚优选的是至少5毫克/毫升。对于浓缩药用组合物，β-帕拉酮浓度设计为10毫克/毫升或更高。
本发明还提供了治疗哺乳动物癌症、与taxane衍生物或其它抗癌剂结合使用的药用组合物，该药用组合物含有β-帕拉酮和药用增溶载体分子。
本发明还提供了与药用增溶载体分子混合的β-帕拉酮或其衍生物、类似物的配方，其中该混合物冷冻干燥后，在水溶液中重新构成，具有了有效的溶解度。
本发明还提供了治疗哺乳动物癌症的方法，将本发明的药用组合物和配方给药于病体。
本发明还提供了治疗癌症和皮肤病的方法，将β-帕拉酮的衍生物或类似物给药于病体，例如4-乙酸基-β-帕拉酮或4-乙酸基-3-溴-β-帕拉酮。
本发明还提供了包括一个或多个药用组合物瓶剂的药用试剂盒，该药用组合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物。如果需要，该试剂盒可以包括一个或多个不同的常规药用试剂盒的瓶剂，例如含有一种或多种药用载体的瓶剂、补充瓶剂等。印刷说明也可以放入试剂盒中，既可以作为插入物也可以作为标签，指示各瓶剂用药量、用药准则和各瓶剂的混合准则。
为了理解本发明下文的详细描述，为了可以更好地理解本发明对业内的贡献，上述描述概括地阐明了本发明的重要特点。结合附图参考下文的详细描述，本发明的其它目的与特点将会更加明了。然而，可以理解，设计附图的目的仅在于说明本发明，而不是作为对本发明范围的限定，本发明范围应当参照所附的权利要求。
附图简述参照附图可以更好地理解本发明

图1是说明不同增溶剂水溶液中β-帕拉酮相对溶解度的条形图。
图2是说明羟丙基-β-环糊精浓度(HPBCD)作用下β-帕拉酮溶解度的条形图。
图3是20％羟丙基-β-环糊精浓度下5毫克/毫升β-帕拉酮溶液的HPLC色谱图。
图4是说明β-帕拉酮和Taxol_抑制癌细胞存活的图表。
图5是由MTT测定、说明β-帕拉酮与Taxol_结合使用抑制卵巢肿瘤细胞系生长的图表。
图6是说明OVCAR-3卵巢肿瘤细胞系中β-帕拉酮和Taxol_药物与药物协同作用的测异辐射热仪记录。
图7说明MDAH-2774卵巢肿瘤细胞系中β-帕拉酮和Taxol_药物与药物协同作用的测异辐射热仪记录。
图8是说明β-帕拉酮对顺氯氨铂敏感(A2780s)和顺氯氨铂耐受(A2780s)卵巢癌系细胞毒性作用的图表。
图9是说明人卵巢癌鼠模型中β-帕拉酮和Taxol_药物与药物协同作用的图表。
图10是说明应用于人卵巢癌鼠模型、配制在HPBCD溶液中β-帕拉酮具有等效性的条形图。
图11说明了β-帕拉酮和Taxol_在人乳腺癌异种移植模型中的抗肿瘤活性。
图12说明根据本发明优选的β-帕拉酮类似物与衍生物。
图13说明在Bg-Nu-Xid鼠中注射RPMI8226MM细胞并引起肿瘤生成的方案。
图14是说明研究过程中平均重量特征的图形。
图15是说明β-帕拉酮/羟丙基-β-环糊精对肿瘤体积影响的图形。
图16是说明β-帕拉酮/羟丙基-β-环糊精对两组鼠成活率影响的图形。
图17是说明β-帕拉酮/羟丙基-β-环糊精对肿瘤以及肝、脾、肺、心、脑和肾影响的代表性显微照片。
本发明详述β-帕拉酮及其衍生物、类似物(本文中也称为“活性化合物”)参见Li，C.J.et al.，J.Biol.Chem.，1993。这些活性化合物可以加入适合非肠道用药的药用组合物。通常，该组合物含有活性化合物和药用载体、赋形剂、稀释剂或辅剂。然而，大多数药用溶剂中β-帕拉酮的低溶解度已经成为开发适合非肠道和局部用药配方的障碍，特别是静脉内用药和皮肤用药。表1说明了静脉用药常规溶剂系统中β-帕拉酮的有限溶解度。临床前药用动力学数据表明，理想的血浆峰值浓度范围是10微克/毫升。为了达到该峰值血浆浓度，静脉内用药配方必须含有接近10毫克/毫升浓度的β-帕拉酮，并能够由无菌液体(例如盐溶液或D5W)稀释5-10倍。
表1
*在0.9％盐溶液中稀释表1所列溶剂中β-帕拉酮最大溶解度是大约12毫克/毫升。基于稀释，在所有系统中溶解度的降低超过了稀释因子。尽管各种临床前研究已经使用了各种常见的溶剂系统、例如磺油、花生油、Cremophor/乙醇或聚乙二醇400，但是对于腹膜内用药和静脉内用药，这些溶剂都已证实不具有开发静脉内临床配方的适用性。将药用水增溶载体分子与β-帕拉酮或其衍生物、类似物混合，增加了β-帕拉酮的水溶性，如表2所示，在50％HPBCD溶液中β-帕拉酮浓度高达20毫克/毫升，优选的药用水增溶载体分子是羟丙基-β-环糊精(HPBCD)。
表2
这些β-帕拉酮/HPBCD溶液在室温下长期稳定，为了静脉用药可用无菌液多倍稀释(例如无菌盐溶液，D5W)，并且在未出现β-帕拉酮沉淀的情况下，至少保持24小时。β-帕拉酮/HPBCD溶液也可以经过无菌过滤、冻干处理后，在水中快速重新构成。实验证明，20％HPBCD和5毫克/毫升β-帕拉酮提供了易于冻干、相对快速重新构成的高浓度β-帕拉酮。然而，本发明不只限于此方面，制备出并测定如1毫克/毫升低浓度的β-帕拉酮，其具有稳定性，可以经冻干处理后重新构成。与β-帕拉酮与乙醇溶液复合相比，β-帕拉酮与HPBCD的混合或复合表现出，β-帕拉酮光致还原稳定性得到了改善。
对HPBCD水溶液中β-帕拉酮的深入研究表明，随着HPBCD浓度增长，β-帕拉酮溶解度呈线性增长。基于10-100倍的稀释，所有HPBCD系统中β-帕拉酮浓度的降低与稀释倍数成比例。
环糊精是来源于淀粉、α-D-吡喃葡糖的结晶体、不吸水的环状低聚物。由于连接吡喃葡糖单元的键不能旋转，因此环糊精的形状不呈圆柱状，而是环状。因为此旋转受限，环糊精具有带有中心穴的刚性结构，根据分子中吡喃葡糖单元的数量，穴的尺寸各不相同。最常见的三种环糊精是α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精，它们分别由6个、7个、8个吡喃葡糖单元构成。由于环糊精分子内羟基基团的排列和分子形状，穴的内表面具有疏水性，而外表面具有亲水性。第一羟基基团位于环形分子的窄边(里侧)，而第二羟基基团位于环形分子的宽边(外侧)。通过形成包含物复合体，此排列允许环糊精在疏水穴中容纳各种疏水小分子。
HPBCD具有七个吡喃葡糖单元，并且在环形结构外表面的每个吡喃葡糖单元上附着羟丙基基团。经证实，HPBCD在水中的溶解度远高于β-环糊精的溶解度。将羟丙基基团导入β-环糊精中，通过断裂环糊精穴羟基部分之间的分子内氢键，致使其具有更高的溶解度。因此，与β-环糊精形成的包含物复合体相比，由HPBCD形成的包含物复合体也会具有更高的溶解度。取代的程度决定了溶解度和复合模式。取代程度越低，在结合度与溶解度方面，与未取代的环糊精越相似。取代程度越高，致使环糊精水中的溶解度越高，结合度越低。环糊精的取代程度很容易受到控制。
当按照本发明将水增溶载体分子与β-帕拉酮或其衍生物、类似物混合时，混合的溶液通常形成单一的组合物，或者在水增溶载体分子是HPBCD的情况下，形成包含物复合体，其中不溶的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物位于环糊精的穴中。然而，本发明不仅限于生成复合体。
虽然HPBCD是优选的增溶剂，但本发明不仅限于此方面，也可以设计与β-帕拉酮、或其衍生物、类似物混合的其它水增溶剂，例如Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol。此外，本发明不仅限于水增溶剂，也可以使用油基增溶剂，例如磺油和花生油。
表面活性剂也可以作为本发明的一部分，用于增溶β-帕拉酮、或其衍生物、类似物。然而，当β-帕拉酮、或其衍生物、类似物在水中稀释时，所用表面活性剂必须具有足够的浓度，从而保证有足量的表面活性剂，维持溶液中的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物。但是，表面活性剂不能过多，否则会产生无法忍受的副作用。
本发明也设计并生成了β-帕拉酮、或其衍生物、类似物的乳浊液。可以制备含有有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物的乳浊液，其包裹在一种或多种的乳化剂中，或包裹在产生非肠道用药水包油型乳浊液的乳化剂中。适合的乳化剂可以包括任何药用乳化剂，但不限于此，优选的是从蛋黄或大豆提取的磷脂、合成的磷脂酰胆碱、或从蔬菜源提纯的磷脂酰胆碱。也可以使用氢化衍生物，例如氢化磷脂酰胆碱(蛋)、氢化磷脂酰胆碱(大豆)。乳化剂也可以是非离子表面活性剂，例如poloxamer(poloxamer188和407)、poloxamine、聚氧乙烯硬脂酸脂、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、或山梨聚糖脂肪酸酯。也可以使用离子表面活性剂，例如胆酸、脱氧胆酸或表面活性衍生物或其盐。乳化剂也可以是上述一种或多种成分的混合物。乳化剂还含有其它成分，例如缓冲剂、稳定剂、和其它脂类。
Intralipid_是一种用于注射的脂肪乳浊液。脂肪乳浊液可以含有蛋黄、豆油、和红花油。在美国，Intralipid_以商标为Liposyn II_和Liposyn III_(Abbot Laboratories，Abbott Park，Illinois)销售，可以作为卡路里和脂肪酸来源，以维持或增加用药病体的体重，也可以作为不能直接注射水溶性差、亲油性药物的载体。Intralipid_和LiposynII_都以10％和20％的浓度在市场上出售。根据本发明，可以制备非肠道用药的乳浊液，其中含有β-帕拉酮、或其衍生物、类似物和Intralipid_或其它任何药用脂肪乳浊液。
最近，生命体内与生命体外的研究表明，与其它化学治疗剂和抗癌剂结合使用，β-帕拉酮具有有效的协同作用，特别是顺式-铂和taxane衍生物，例如Taxol_(paclitaxel)(Bristol-MyersSquibb Co.，New York，N.Y.)。例如，WO00/61142公开了治疗癌症的方法和组合物，其中包括将有效用量的第一化合物、G或S期药剂(例如β-帕拉酮)与G2/M期药剂(例如taxane衍生物)结合用药。由于其具有两个主要的功能特性—与其它化学治疗剂协同作用和抑制耐药性细胞的活性，β-帕拉酮或其衍生物、类似物的应用可以明显增加癌症病状得到长期缓解的比率，其中包括卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、恶性骨髓瘤、恶性黑素瘤和非黑素瘤的皮肤癌。β-帕拉酮或、其衍生物、类似物也可以用于治疗增生症和皮肤病，例如牛皮癣。
如上所述，本发明的药用组合物和配方涉及非肠道用药，优选的是静脉内用药。然而，本发明不限于此方面，根据本发明可以制备口服用药的液体药用组合物与配方。
优选的是，非肠道用药的药用组合物含有与HPBCD混合的、所需用量的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物。常规的β-环糊精不适用于非肠道用药配方，但是可以用于制备口服用药的配方。如上所述，实验已经证实，随着HPBCD浓度的增长，β-帕拉酮、或其衍生物、类似物的溶解度线性增长。
尽管β-帕拉酮是本发明的优选化合物，但是本发明不限于此方面，β-帕拉酮衍生物、类似物(例如拉帕醇)和其药用组合物与配方都是本发明的一部分。该β-帕拉酮类似物包括PCT国际申请PCT/US93/07878(WO94/04145)公开的化合物，该专利的全部内容通过在此引述合并于本文，所公开化合物的结构式如下 其中R和R1彼此独立地选取氢、取代和非取代的芳基、取代和非取代的烯基、取代或非取代的烷基、取代或非取代的烷氧基。烷基基团优选地带有大约1-15个碳原子，更优选地带有大约1-10个碳原子，更甚优选地带有大约1-6个碳原子。除非另有所述，名词烷基指的是，既包括环基团也包括非环基团，当然环基团的环上至少含有3个碳原子。直链或带支链的非环烷基基团通常优于环基团。直链烷基基团通常优于带支链的烷基基团。烯基基团优选地带有大约2-15碳原子，更优选地带有大约2-10个碳原子，更甚优选地带有大约2-6个碳原子。更优选的烯基基团带有3个碳原子(例如，1-丙基或2-丙基)，并且特别优选是烯丙基基团。苯基和萘基通常是优选的芳基。烷氧基基团包括含有一个或多个氧连接的烷氧基基团，优选地含有1-15个碳原子，更优选地含有大约1-6个碳原子。取代的R和R1基团可以在一个或多个可用的位上被一个或多个适合的基团取代，诸如烷基基团、例如含有1-10或1-6个碳原子的烷基基团，烯基基团、例如含有2-10或2-6个碳原子的烯基基团，含有6-10个碳原子的芳基基团，卤素、例如氟、氯、溴，以及氮、氧和硫，其中包括杂烷基、例如含有一个或多个杂原子连接(因此包括烷氧基、氨烷基和硫代烷基)、1-10或1-6个碳原子的杂烷基。
根据本发明所包括的其它β-帕拉酮类似物包括美国专利6,245,807公开的化合物，该专利的全部内容通过在此引述合并于本文，并公开了具有此结构式的β-帕拉酮类似物和衍生物 其中R和R1可以彼此独立地选取氢、羟基、巯基、卤素、取代烷基、非取代烷基、取代烯基、非取代烯基、取代芳基、非取代芳基、取代烷氧基、非取代烷氧基、及其盐，其中碳环原子之间的虚线双键代表任意的环双键。
PCT国际申请PCT/US00/10169(WO00/61142)公开了其它β-帕拉酮类似物和衍生物，其全部内容通过在此引述合并于本文，并公开了此结构的化合物
其中R5和R6彼此独立地选取羟基、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧羰基、-(CH2)n-苯基；并且R7可以选取氢、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧羰基、-(CH2)n-氨基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-杂芳基、-(CH2)n-杂环、或-(CH2)n-苯基，其中n是0-10的整数。
其它β-帕拉酮类似物和衍生物参见美国专利5,763,625、5,824,700和5,969,163，以及科学刊物上发表的文章，例如Sabba et al.，J.Med.Chem.27990-994(1984)，其公开了在一个或多个下述位上带有取代基的β-帕拉酮2-、8-和/或9-位。参见Portela et al.，Biochem Pharm 51275-283(1996)(取代基在2-和9-位)；Maruyama et al.，Chem Lett 847-850(1977)；Sun et al.，Tetrahedron Lett 398221-8224(1998)；Goncalves et al.，Molecularand Biochemical Parasitology 1167-176(1998)(取代基在2-和3-位)；Gupta et al.，Indian Journal of Chemistry 16B35-37(1978)；Gupta et al.，Curr Sci 46337(1977)(取代基在3-和4-位)；DiChennaet al.，J Med Chem 442486-2489(2001)(单芳氨基衍生物)。上述参考的全部内容通过在此引述合并于本文。
更优选的是，本发明设计的类似物和衍生物包括通式I和II表示的化合物 通式I通式II其中环上碳原子之间的虚线双键代表任意的环双键，其中R和R1可以彼此独立地选取氢、羟基、巯基、卤素、取代烷基、非取代烷基、取代的烯基、非取代的烯基、取代芳基、非取代芳基、取代的烷氧基、非取代的烷氧基、及其盐。优选的烷基基团带有大约1-15个碳原子，更优选地带有大约1-10个碳原子，更甚优选地带有大约1-6个碳原子。名词烷基指的是，既包括环基团，也包括非环基团。直链或带支链的非环烷基基团通常优于环基团。直链烷基基团通常优于带支链的烷基基团。烯基基团优选地带有大约2-15碳原子，更优选地带有大约2-10个碳原子，更甚优选地带有大约2-6个碳原子。更优选的烯基基团带有3个碳原子(例如，1-丙基或2-丙基)，并且特别优选的是烯丙基基团。苯基和萘基通常是优选的芳基。烷氧基团包括含有一个或多个氧连接的烷氧基团，优选地含有1-15个碳原子，更优选地含有大约1-6个碳原子。取代的R和R1基团可以在一个或多个可用的位上被一个或多个适合的基团取代，例如含有1-10或1-6个碳原子的烷基基团，含有2-10或2-6个碳原子的烯基基团，含有6-10个碳原子的芳基基团，卤素、例如氟、氯、溴，以及氮、氧和硫，其中包括杂烷基、例如含有一个或多个杂原子连接(因此包括烷氧基、氨烷基和硫代烷基)、1-10或1-6个碳原子的杂烷基；其中R5和R6可以独立地选取氢、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧羰基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-杂芳基、-(CH2)n-杂环或-(CH2)n-苯基；R7可选取氢、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧羰基、-(CH2)n-氨基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-杂芳基、-(CH2)n-杂环、或-(CH2)n-苯基，其中n是从0-10的整数。
本发明设计的优选类似物与衍生物包括通式III表示的化合物 通式III其中R1是(CH2)n-R2，其中n是0-10的整数，R2可选自氢、烷基、芳基、杂芳基、杂环、脂族基、烷氧基、烯丙氧基、羟基、胺基、硫醇、酰胺、或卤素。
本发明设计的类似物和衍生物包括4-乙酸基-β-帕拉酮、4-乙酸基-3-溴-β-帕拉酮、4-酮-β-帕拉酮、7-羟基-β-帕拉酮、7-甲氧基-β-帕拉酮、8-羟基-β-帕拉酮、8-甲氧基-β-帕拉酮、8-氯-β-帕拉酮、9-氯-β-帕拉酮、8-甲基-β-帕拉酮和8，9-二甲氧基-β-帕拉酮。
本发明设计的优选类似物和衍生物包括通式IV代表的化合物 通式IV其中R1-R4彼此独立地选取氢、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧羰基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-杂芳基、-(CH2)n-杂环或-(CH2)n-苯基；或者在---是双键的情况下，R1和R2综合在一起只选取上述的单一取代基，并且R3和R4综合在一起只选取上述的单一取代基。
本发明设计的优选类似物与衍生物包括董尼酮和2-乙基-6-羟萘[2，3-b]-呋喃-4，5-二酮。
本发明设计的优选类似物与衍生物还包括通式V代表的化合物
通式V其中R1选取氢、CH3、OCH3和NO2。
在图12中，图解说明了上式代表的优选化合物。
β-帕拉酮及其类似物在40％(重量/体积)HPBCD溶液中溶解度与水中溶解度的比较参见表3和4。为了测定溶解度，测定化合物首先溶解在乙醇中，制备浓度范围在2.5-10毫克/毫升标准溶液，然后用水稀释到10微克/毫升。紫外线扫描获得10微克/毫升标准溶液，并且测定最大吸收波长和最大吸收波长下的吸收度。对于每种测定化合物，将50微升等分试样的水和40％HPBCD加入到含有大约1毫克化合物的单个Eppendorf试管中。将此试管在30℃水浴中加热、旋转，再以15,000转/分钟离心5分钟。重复上述步骤，然后将试管冷却至室温1小时后，再次离心处理。用水将每个试管的上清液稀释到适当的吸收度范围，在化合物最大吸收波长下，测定紫外光的吸收度。然后，通过与10微克/毫升乙醇标准溶液的比率，计算这些饱和溶液的浓度。如表3和表4所示，在40％HPBCD溶液中，测定化合物的水溶解度增长了7-323倍。
表3β-帕拉酮及其类似物在40％(重量/体积)羟丙基-β-环糊精(HPBCD)溶液的吸收度值化合物 最大吸10微克/水溶液 HPBCD溶液收波长 毫升标准(纳米) 溶液的吸 稀释因子 吸收度 稀释 吸收度收度 因子β-帕拉酮 2581.041 10 0.452 2000 0.73(B1)3-溴-βL2560.788 10 0.286 1000 0.5453，4-二氢-β-L 2620.71 10 0.171 1000 0.41董尼酮 2620.944 1000.449 5000 0.3224-乙酸基-βL2540.89 50 0.506 5000.3734-羟基-βL 2540.973 50 0.742 5000.5964-酮-βL2801.216 50 1.224 5001.073-羟基-βL 2560.995 2000.687 2000 0.7273-(3-甲基-2-丁 2580.697 20 0.233 1000 0.284烯基)-βL
表4β-帕拉酮及其类似物在水溶液和40％(重量/体积)羟丙基-β-环糊精(HPBCD)溶液的溶解度化合物 水溶解度 HPBCD溶液中的溶 溶解度增(微克/毫升) 解度(毫克/毫升) 强的倍数β-帕拉酮 4314.0 323(βL)3-溴-βL 366.91913，4-二氢-βL 245.8240董尼酮 476 17.0 364-乙酸基-βL 284 2.17.44-羟基-βL 381 3.18.04-酮-βL 503 4.48.73-羟基-βL 1381 14.6 10.63-(3-甲基-2- 674.161丁烯基)-βL本发明的其它特殊配方将在下文与实例部分加以阐明。总之，可以按照有机合成业内公知的多种方法，制备β-帕拉酮及其衍生物、类似物。可以按照下文概述的方法，以及合成有机化学业内公知的合成方法，或者为业内技术人员理解、基于此方法的改进方法，合成β-帕拉酮及其衍生物、类似物。优选的方法包括下文所述的合成与配制方法，但不限于此。
合成β-帕拉酮和/或其衍生物、类似物的多种方法为业内所公知。第一种方法参见Schaffner-Sabba，K et al.，β-帕拉酮衍生物的合成和肿瘤模型中的活性，J.Med.Chem.，27，(1984)990-994，并被称为钾盐法。第二种方法参见Sun，J.S.et al.，拉帕醇和相关萘醌的初步合成，Tetrahedron Letters，39(1998)8221-8224，并被称为锂盐法。这两种方法最初都生成了拉帕醇，一种合成β-帕拉酮的中间体。这两种方法都需要生成金属盐。此外，在β-帕拉酮总合成，J.Heterocyclic Chem.，29(1992)1457-1460中，Amaral等人公开了八步合成β-帕拉酮α-萘酚的方法，获得只有23％的总得率。在美国专利5,763,625中，拉帕醇首先转化为3-溴帕拉酮，然后用两个步骤将3-溴帕拉酮转化为3-羟基-β-帕拉酮。此外，与公开的方法不同，如待审的美国专利系列申请09/975,776所述，在原位上加入氢化锂，或单独将氢氧化钾加入醌溶液，制备2-羟基-1，4-萘醌的金属盐(锂或钾)作为第一步，然后用溴化物与金属盐反应生成拉帕醇；如待审的美国专利系列申请09/975,776公开的方法取消了第一步，在碘化钠和弱碱条件下，开始直接用2-羟基-1，4-萘醌与1-溴-3-甲基-2-丁烯反应，生成帕拉醇，然后，由拉帕醇合成β-帕拉酮，其中弱碱包括三乙胺、吡啶、三甲胺、N，N-二异丙基乙胺、2，6-二甲基吡啶。
如上所述，作为单一试剂，IC50值在低微摩尔范围(1-10)的β-帕拉酮对于广泛的癌细胞系表现出有效的细胞毒性。生命体外的研究已经证实，微摩尔浓度的β-帕拉酮与IC50水平的Taxol_结合应用到肿瘤细胞培养中，完全消除了菌落的生成。这些研究更证明，β-帕拉酮与Taxol_起到了协同作用，有效地增加了两个单独试剂的效力，且未增加附带的毒性(Li，C.J.et al.，Proc Natl Acad Sci U.S.A.96(1999)13369)，其中Taxol_含有活性化合物paclitaxel。
在人卵巢癌异种移植的裸鼠模型中，已经证实了β-帕拉酮与Taxol_生命体内有效地抑制了肿瘤的生长。在接受人乳腺癌异种移植的雌裸鼠中，已经证实了有效的抗肿瘤活性(在下文的实例中详细讨论)。
增溶的β-帕拉酮、及其衍生物和类似物也可以与其它taxane衍生物和抗癌剂结合使用。结合使用中，增溶的β-帕拉酮、及其衍生物和类似物可以与抗癌剂或taxane衍生物混合，并装入单一的小瓶中，或分别装入不同的小瓶中。当增溶的β-帕拉酮、及其衍生物和类似物、与抗癌剂或taxane衍生物装入不同的小瓶，所有瓶剂可以同时用药或次序用药。
在另一实施方案中，增溶的β-帕拉酮、及其衍生物和类似物用药可以与放射治疗结合使用。优选的是，按照临床医师治疗病体的要求，在β-帕拉酮用药之前或之后规定的数小时内，病体接受放射治疗。
β-帕拉酮、及其衍生物和类似物的类型与用量、HPBCD或所用的其它载体变化很大，并取决于暖血动物或人的种类、体重、所治疗的肿瘤类型。同样地，用药剂量也具有多样性，并取决于多种公知因素，例如特殊药剂的药效、用药方式和线路、受体的年龄、健康状况和体重；症状的种类与程度；共同治疗的种类；治疗的频率；和希望的效果。
用药剂量具有多样性，并取决于多种公知因素，例如特殊活性成分的药效、用药方式和线路；受体的年龄、性别、健康状况、代谢率、吸收率和/或体重；症状的种类与程度；共同治疗的种类、治疗的频率；和希望达到的效果。在优选的实施方案中，用药剂量大约在0.1-10毫克/千克，用药频率在每周2次到每4周一次。
文中所用，名词“有效用量”指的是，研究者或临床医师要求的、在动物或人体组织、系统内引起生物或医学反应的药剂用量。
为了易于用药和统一剂量，更优选的是，以单位剂量形式配制口服或非肠道组合物。单位剂量可以含有单一化合物，例如β-帕拉酮、及其衍生物和类似物，或其与其它化合物、或其它抑制癌症化合物、或抑制肿瘤生长的化合物、或抗病毒化合物的混合物。适合非肠道用药的组合物优选地含有无菌注射水溶液，而且也可以含有非水溶液，其中包括抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使配方与受体血液等压的溶质；以及无菌的水性悬液和非水性悬液，其中可以含有助悬剂和增稠剂。配方可以是单位剂量的瓶剂、也可以是多组用药的瓶剂，例如封装在细颈瓶和小瓶中，如文中所述，也可以冻干状态储存，在使用前只需加入无菌液体载体，例如加入水用于注射。文中所用单位剂量形式指的是，对于接受治疗的病体，适合作为单一剂量的物理分离单元；每个单元含有经计算产生所需治疗效果、规定用量的活性化合物、和与之结合所需的药用载体。可以从业内公知所需的无菌粉末、颗粒和片剂，制备临时注射溶液和悬液。活性化合物的独特性质和所要达到的特殊治疗效果、为了治疗病体混合此化合物所固有的局限性，规定并直接决定了本发明单位用药形式的规格。
应该理解的式，除了本发明特效组合物与配方特别提到的成分外，本发明组合物和配方可以含有与用药形式相关的其它常规试剂，例如适合口服用药的组合物可以含有调味剂和着色剂。
除了本发明的β-帕拉酮及其衍生物、类似物与HPBCD的复合体外，适合非肠道用药、注射或注入的药用组合物还可以含有无菌水溶液(水溶性)、或分散相和无菌粉末，用于临时制备无菌注射溶液或分散系。对于静脉用药，适合的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸缓冲盐溶液(PBS)。载体可以是溶剂或分散介质，例如包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇等)、油及其适当的混合物。在所有情况下，该组合物必须无菌，其流动性应该达到易于注射的程度。在生产和储存条件下，该组合物必须稳定且不受微生物污染作用的侵害，例如细菌和真菌。例如，通过使用包衣、例如磷脂酰胆碱，在分散系情况下维持所需颗粒尺寸，并且使用表面活性剂，保持组合物的适当流动性。通过使用各种抗细菌剂和抗真菌剂，可以抑制微生物的作用，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等。在一些情况下，优选的组合物含有等压剂，例如糖，多元醇、例如甘露醇、山梨醇、氯化钠。组合物含有吸收延迟剂、例如一硬脂酸铝和明胶，也可以实现注射组合物的延迟吸收。非肠道和静脉组合物还可以含有无机物以及有利于所用注射类型或输送系统适应性的其它材料。此外，非肠道用药溶液可以含有活性化合物的水溶性盐、适合的稳定剂，如果需要，还可以含有缓冲物质。抗氧化剂、例如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、或抗坏血酸，单独使用或组合使用，都是适合的稳定剂。也可以使用柠檬酸及其盐、和EDTA的钠盐。此外，非肠道用药的溶液可以含有防腐剂、例如氯苯甲烃铵、甲基-或丙基-对苯、和氯丁醇。
按照需要，通过将所需用量的活性化合物与一种或多种上述成分的组合加入适当的溶剂中，再过滤灭菌，制成无菌注射溶液。通常，通过将活性化合物加入无菌赋形剂，制备分散系，其中无菌赋形剂含有基础分散介质和上述所需的其它成分。就拿制备无菌注射溶液的无菌粉末来说，制备方法有真空干燥和冷冻干燥，从上文所述的无菌过滤溶液生成活性成分和其它任何所需成分的粉末。文中所述的β-帕拉酮及其衍生物、类似物可以经冷冻干燥后，在水溶液中重新构成，并具有相当的溶解性(参见下文的实例5)。
为了以液体药剂形式口服用药，口服药剂成分优选地与β-环糊精结合，更优选地与羟丙基-β-环糊精结合，然而，本发明不限于此方面，口服药剂成分可以与任何口服、无毒的药用惰性载体结合，例如乙醇、甘油、水、油等。此外，如果希望或需要时，也可以将适当的粘合剂、润滑剂、蹦散剂、着色剂加入混合物。适当的粘合剂包括淀粉，明胶，天然糖类、例如葡萄糖或β-乳糖，玉米甜味剂，天然和合成的树胶、例如阿拉伯树胶、黄蓍胶，或藻酸钠，羧甲基纤维素，聚乙二醇，石蜡等。这些药剂形式中所用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。蹦散剂包括淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等，且不限于此。口服用药的液体药剂形式也可以含有增加病体容忍度的着色剂和调味剂。
适合液体药剂形式的其它实例可以包括水溶液、或水悬液、药用脂肪和油、乙醇或其它有机溶剂，其中包括酯类、乳浊液、糖浆或酏剂、悬液、由非泡腾颗粒剂重新构成的溶液和/或悬液、由泡腾颗粒重新构成的泡腾配方。该液体药剂形式还可以含有其它溶剂，如防腐剂、乳化剂、悬浮剂、稀释剂、甜味剂、增稠剂和融解剂。
活性化合物也可以与作为靶向药剂载体的可溶性聚合物结合。该聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚、或由棕榈酰基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸。此外，本发明的化合物可以与控制药物释放的生物降解聚合物结合，例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸与聚乙醇酸的共聚体、聚ε羟基己酸内酯、多羟丁酸、聚原酸酯、聚乙缩醛、聚二氢吡喃、聚氰酰化物、交联的或亲水与疏水两性的水凝胶成块共聚物。
本发明的活性化合物可作为药物使用，可以任何方式将此活性化合物输送到试剂作用的身体部位，治疗癌症、抑制肿瘤。如上所述，β-帕拉酮及其衍生物、类似物、活性成分的优选用药方式是通过非肠道用药，优选的是静脉内用药(bolus和注入)。然而，本发明不限于此，本发明的活性成分能够以任何结合药剂的常规方式用药，既可以作为单独药剂，也可以与抑制肿瘤的其它药剂结合使用。例如，活性化合物还可以腹膜内用药、皮下用药、或肌肉内用药。活性化合物还可以局部用药，治疗皮肤癌，例如基细胞癌、鳞状细胞癌、卡波济氏肉瘤和黑素瘤。活性化合物可以单独用药，但是通常与用药路线和标准用药惯例选择的药用载体共同用药。
本发明还包括将本发明的组合物和配方给药于病体的癌症治疗方法。在优选实施方案中，该方法包括将组合物与配方非肠道用药于病体，优选的是通过如上文所述的静脉注射或注入。在另一实施方案中，该方法包括将本发明的组合物与配方局部用药。“局部用药”和“局部施用”可以互换使用，指的是将本发明的一种或多种组合物施用或涂抹到受体皮肤表面的过程。局部用药配方可以由水包油膏状乳浊液组成，且是不限于此。本发明的局部用药配方可以含有能够缓慢释放β-帕拉酮衍生物和类似物的释放延迟组合物。
局部用药配方任选地含有各种附加成分，以改进配方的整体需要、外观、物理特性、和/或人体感觉，但条件是，该任选添加剂要与文中所述的核心成分物理、化学相容，并且不能过度损害配方的稳定性、安全性或药效。任选的添加剂可以分散、溶解到本组合物的载体中。任选添加剂包括可能的美化剂(例如吸收剂，包括化妆膏形式的油性吸收剂和聚合吸收剂)、研磨剂、抗结块剂、去沫剂、其它抗菌剂、结合剂、缓冲剂、膨胀剂、美容杀菌剂、其它变性剂和渗透剂(前述)、美容收敛剂、药物收敛剂、外用镇痛剂、成膜剂、遮光剂、芳香剂、颜料、着色剂、皮肤缓解剂、pH调节剂、螯合剂、紫外光吸收剂、增塑剂、防腐剂、防腐增强剂、去毛剂、脱落剂、胶原蛋白及其分解产物、成膜剂等。这些物质的代表实例参见Harry的美容学，7thEd.，Harry &Wilkinson(Hill Publishers，London 1982)；药剂形式—分散系统，Lieberman，Rieger & Banker，Vols.1(1988) & 2(1989)，MarcelDecker，Inc.；化妆品化学和制造，2nd.Ed.，deNavarre(VanNostrand 1962-1965)；化妆科学与技术手册，1stEd.Knowlton &Pearce(Elsevier 1993)。
在其它实施方案中，本发明方法使用的组合物还包括含有亲水和疏水相的组合物。适合的非天然疏水相成分的非限定实例有(1)从石油获得的液体碳氢化合物的无毒非致癌混合物(64，65)；(2)非直链固体碳氢化合物和高沸点液体碳氢化合物的无毒非致癌胶体系统，其中大部分的液体碳氢化合物呈胶束态(64，66，67)；(3)无毒非致癌的、直链和带支链的大约C7-40碳氢化合物，例如十二烷、异十二烷、角鲨烷、胆固醇、氢化聚异丁烯、甘二烷(既C22碳氢化合物)、十六烷、异十六烷(Permethyl.RTM101A，Presperse，South Plainfield，N.J.)等；(4)无毒非致癌的C1-30醇的C1-30羧酸酯和C2-30二羧酸酯，其中包括直链和带支链的物质以及芳香衍生物，例如癸二酸二异丙酯、己二酸二异丙酯、十四酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、棕榈酸甲酯、丙酸十四烷酯、棕榈酸2-乙基己酯、新戊酸异癸酯、马来酸二-2-乙基己酯、棕榈酸鲸蜡酯、十四酸十四烷基酯、硬脂酸十八烷酰酯、硬脂酸异丙酯、硬脂酸甲酯、硬脂酸鲸蜡酯、山嵛酸二十二烷基酯、马来酸二辛酯、癸二酸二辛酯、己二酸二异丙酯、辛酸鲸蜡酯、二亚油酸二异丙酯；(5)无毒非致癌的C1-30羧酸的一、二和三甘油酯，例如辛酸三甘油酯、PEG-6辛酸三甘油酯、PEG-8辛酸三甘油酯；(6)无毒非致癌的C1-30羧酸烷撑二醇酯，例如C1-30羧酸的乙二醇单酯和双酯、和C1-30羧酸的丙二醇单酯和双酯、例如二硬脂酸乙二醇酯；(7)无毒非致癌的、前述物质的丙氧基化和乙氧基化衍生物；(8)C1-30无毒非致癌的、单糖和低聚糖的单酯和多酯。疏水相中起作用的液态酯实例有葡萄糖四油酸酯、大豆油脂肪酸的葡萄糖四酯(未饱和)、混合大豆油脂肪酸的甘露糖四酯、油酸的半乳糖四酯、亚油酸的阿拉伯糖四酯、木糖的四亚油酸酯、半乳糖的五油酸酯、山梨醇的五油酸酯、未饱和的大豆油脂肪酸山梨醇六酯、木糖醇的五油酸酯、山梨醇的四油酸酯、山梨醇的五油酸酯、山梨醇的六油酸酯、山梨醇的七油酸酯、山梨醇的八油酸酯，及其混合物。
在其它实施方案中，按照本发明适合局部用药的组合物包括含有替换载体的组合物。替换载体的实例有含有一个或多个单体的交联聚合化合物，这些单体来自丙烯酸、取代的丙烯酸、丙烯酸盐和丙烯酸酯，其中交联剂含有2个或多个碳-碳双键，并来源于(1)丙烯酸均匀聚合的多羟醇，例如丙烯酸单体或其衍生物的交联均聚物(例如-CN、或-COOH取代的C1-4烷基)，其中丙烯酸在2碳和3碳位置具有取代基(例如丙烯酸、甲基丙烯酸、乙基丙烯酸、和其混合物)；或(2)含有丙烯酸单体(或其衍生物)和C1-4醇的丙烯酸酯单体(或其衍生物)的交联丙烯酸共聚体，并且第二单体是长链醇(例如C8-40)的丙烯酸酯单体(或其衍生物)，例如丙烯酸、甲基丙烯酸、乙基丙烯酸、及其混合物。按照本发明治疗方法，后两种类型聚合物的组合也被证实在特定组合物中起作用。
除了治疗如皮肤癌的病症外，本发明配方也可用于治疗各种皮肤病。皮肤病可以是与皮肤有关的任何症状。皮肤病未限定地包括，皮炎症，例如接触性皮炎、特应性皮炎、脂溢性皮炎、钱串状皮炎(Nummular Dermatitis)、手和脚的慢性皮炎、全身脱落性皮炎、郁滞性皮炎、局部搔痒性皮炎；皮肤的细菌感染，例如皮肤的葡萄球菌病、葡萄球菌头癣皮肤综合症、丹毒、毛囊炎、疵疮、痈、化脓性汗腺炎、甲沟炎感染和红癣；表面真菌感染，例如皮肤癣菌感染、酵母菌感染、念珠菌病、花斑病；皮肤寄生虫感染，例如疥疮、虱病、匐行疹；毛囊和皮脂腺症，例如粉刺、红斑痤疮、口周皮炎、多毛症、脱发、假毛囊炎胡须(Pseudofolliculitis Barbae)、角质蛋白囊肿(Keratinous Cyst)；排列丘疹症(scaling papular)，例如牛皮癣、玫瑰糠疹、扁平苔癣、褥疮、良性肿瘤和恶性肿瘤。
有关制备构成本发明组合物和配方的组合物、配方和成分的其它信息参见本领域的标准参考文献，例如“雷明顿的药用科学”，Mack Publishing Co.，Ester，PA，15thEd.(1975)。
本发明也涉及包括一种或多种瓶剂的药用试剂盒，该瓶剂含有由有效用量活性化合物组成的药用组合物。如果需要，该试剂盒还包括一种或多种不同常规药用试剂盒的瓶剂，例如含有一种或多种药用载体的瓶剂、以及其它瓶剂，这些对业内技术人员显而易见。在优选实施方案中，试剂盒用于治疗哺乳动物的癌症，其中包括至少一个含有β-帕拉酮或其衍生物、类似物的瓶剂。在另一优选实施方案中，试剂盒用于治疗哺乳动物的肿瘤，其中包括一个或多个瓶剂，其中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物和药用水增溶载体分子的复合体，并在相同或不同的瓶剂中，还含有抗癌剂，特别是taxane衍生物。
印刷说明也可以放入试剂盒中，作为插入物或标签，指示各成分的用药量、用药准则、和/或各成分的混合规则。应当理解，在本专利公开中，对于实施本发明，特定的材料和条件是重要的，但是未限定的材料和条件并未被排除在外，只要它们未对实现本发明益处造成障碍。
下列实例会对本发明进行详细说明，而不是限定本发明的范围。业内技术人员显而易见，在不超出本发明目的和权益的情况下，材料与方法上的一些改变会是可行的。
实施例1.评价增加疏水药用物质溶解度、可接受的公知溶剂系a.制备β-帕拉酮与羟丙基-β-环糊精(HPBCD)溶液用β-帕拉酮，评价增加疏水药用物质溶解度、各种可接受的公知药用溶剂系。如下表5所示，在评价的多种溶液中，溶液都达到靶向的最低浓度(10毫克/毫升)。然而，在溶液中不出现β-帕拉酮明显沉淀的情况下，这些溶剂系都不能被无菌盐水稀释5倍。此外，大部分的助溶剂和表面活性剂具有其自身毒性和承受度的问题，需要在高剂量用药过程中加以解决。
表5溶剂系 未被稀释 5倍稀释*(毫克/毫升)(毫克/毫升)Poloxamer(20％)2.03500.0331Povidone K17(20％) 1.82500.0312Povidone K12(20％) 1.86000.0313聚山梨醇酯80 11.1700 1.6550乙醇(76％) 10.6600 0.1025PEG400 11.6800 0.1400丙二醇 8.78000.0950Trappsol(20％) 1.46500.0300*在0.9％盐溶液中稀释按照上文所述，两种不同方案用于增强β-帕拉酮在水溶液中的溶解度。第一方案中，β-帕拉酮经金属螯合剂(例如钙、镁)处理，生成可溶性复合物；第二种方案中，β-帕拉酮经增溶剂β-环糊精和γ-环糊精处理，生成可溶性的包涵物复合体。为了评价这四种试剂，向这些试剂的水溶液中(或向作为对照的PBS缓冲液中)，加入含有14C-标记β-帕拉酮的微量乙醇，然后，根据离心后上清液的剩余放射性，测定每种溶液中β-帕拉酮的相对溶解度。
具体地讲，向每个含有900微升PBS缓冲液的1.5毫升Eppendorf试管中加入下列物质含有8毫摩尔CaCl2的PBS缓冲液，含有8毫摩尔MgCl2的PBS缓冲液，含有8毫摩尔β-环糊精的PBS缓冲液，含有8毫摩尔γ-环糊精的PBS缓冲液。然后，将含有10微升C14标记β-帕拉酮(40,000CPM，0.55微克)的75％乙醇加入到每个试管中。经过旋转和以13,000转/分钟离心10分钟后，使用贝克闪烁计数仪，测定100微升上清液的放射性。向剩余混合物中，加入含有0.5微克(10毫克/毫升溶液50微升)或600微克β-帕拉酮的75％乙醇。经过旋转和以13,000转/分钟离心10分钟后，再次测定100微升上清液的放射性。
当加入0.5微克β-帕拉酮时，所有5种水溶液中几乎100％的β-帕拉酮出现在上清液中。然而，当加入600微克β-帕拉酮时，只有β-环糊精溶液的上清液中保持了大于50％的β-帕拉酮。使用闪烁计数仪，测定出上清液中标记β-帕拉酮的百分比。图1说明了各种增溶剂水溶液中β-帕拉酮的相对溶解度。图1中，溶液1由PBS缓冲液构成，溶液2由含有8毫摩尔氯化钙的PBS缓冲液构成，溶液3由含有8毫摩尔氯化镁的PBS缓冲液构成，溶液4由含有8毫摩尔β-环糊精的PBS缓冲液构成，溶液5由含有8毫摩尔γ-环糊精的PBS缓冲液构成。
b.羟丙基-β-环糊精(HPBCD)浓度对β-帕拉酮溶解度的影响由于β-环糊精适合口服用药，而不适合非肠道或局部用药，选择其类似物HPBCD做深入研究。为了测定HPBCD浓度对β-帕拉酮溶解度的影响，将含有β-帕拉酮的微量乙醇加入到8种不同HPBCD浓度(0-16毫摩或0-25％(重量/重量))的水溶液中，经过离心后，测定上清液中剩余放射性的百分比，确定相对溶解度。为了去除乙醇可能的影响，并确定冻干处理后是否能够维持增长的溶解度，该混合物冻干处理后，再次溶解到相同体积水中。测定再次溶解混合物上清液中β-帕拉酮的百分比，确保再次实现冻干物质增长的溶解度。
具体地讲，向每个1.5毫升Eppendorf试管中，分别加入足量的水、50毫摩尔HPBCD溶液、含有14C标记β-帕拉酮溶液的75％乙醇、含有10毫克/毫升β-帕拉酮溶液的乙醇、0.9％氯化钠溶液，以制备如表6所列成分和浓度的1毫升溶液。
表6
经过旋转和以13,000转/分钟离心10分钟后，使用贝克闪烁计数仪，测定每个试管100微升上清液的放射性。冻干处理剩余混合物(每样900微升)，然后再溶解到900微升水中。经过旋转和以13,000转/分钟离心10分钟后，再次测定每个试管100微升上清液的放射性。
图2说明，随着HPBCD浓度的增长，β-帕拉酮溶解度相应地增长，同时也说明，β-帕拉酮经过冻干处理后，增长的溶解度全部再次实现。
c.加热制备β-帕拉酮和羟丙基-β-环糊精(HPBCD)溶液没有用乙醇溶液增溶β-帕拉酮的情况下，制备β-帕拉酮和HPBCD溶液。先将β-帕拉酮与不同浓度的HPBCD水溶液混合，然后加热至70℃，再冷却至室温。过滤冷却的溶液(0.22μ)，再用HPLC分析，测定β-帕拉酮的增溶含量。各种HPBCD水溶液中β-帕拉酮的溶解度列于表7。
表7
在50％HPBCD溶液中(检测的最高浓度)，实现了β-帕拉酮的最高浓度19.7毫克/毫升。添加盐溶液或乙醇没有明显增加β-帕拉酮在HPBCD中的溶解度。
d.HPLC分析和UV测定75％乙醇中的β-帕拉酮溶液和β-帕拉酮与HPBCD复合体的水溶液用水稀释200微克/毫升乙醇溶液、或5毫克/毫升HPBCD溶液，制备5微克/毫升β-帕拉酮溶液，用于HPLC和UV分析。以2％乙醇或200微克/毫升HPBCD作为参考溶液，按照常规步骤，完成258纳米的UV测定。HPLC分析中，将所得的5微克/毫升β-帕拉酮溶液100微升注入C18反相分析柱，以1毫升/分钟的流速在10分钟内将B缓冲液浓度梯度从25％线性提升至75％。通过258纳米的紫外线吸收量，检测出吸收峰，并根据峰面积与外部标准的比率定量峰值。
在紫外光谱的258纳米处观察到β-帕拉酮的λmax。对于单独的β-帕拉酮和β-帕拉酮-HPBCD复合体，β-帕拉酮溶液在258纳米处的紫外线测定说明，共同作用的吸收度是26620M-1cm-1。
图3说明了20％HPBCD中5毫克/毫升β-帕拉酮溶液的典型HPLC色谱图，为了HPLC分析用水将该β-帕拉酮溶液稀释至5微克/毫升。β-帕拉酮洗提出现在大约5.4分钟。在β-帕拉酮单独的5微克/毫升水溶液与可比的5微克/毫升β-帕拉酮-HPBCD复合体之间，色谱图未显示出保存时间与整体峰面积上的差别。这些结果证明，β-帕拉酮在低浓度时(即5微克/毫升)未与HPBCD结合。当将增加含量的HPBCD加入5微克/毫升β-帕拉酮-HPBCD溶液时，HPLC分析说明，柱空体积的峰洗提(保存时间大约是1.2分钟)推测是β-帕拉酮与HPBCD的复合体，随着对应β-帕拉酮峰值的减小，该峰尺寸增大。然而，在显示β-帕拉酮含量的分析条件下，需要将检测溶液稀释到5微克/毫升，大约5.4分钟的整体峰面积规定了溶液中β-帕拉酮的总含量。
e.β-帕拉酮的稳定性通过HPLC分析，监测75％乙醇中或β-帕拉酮与HPBCD水性复合体形式的β-帕拉酮溶液稳定性。在室温的黑暗中储存时，β-帕拉酮-HPBCD溶液表现出明显优于乙醇溶液的稳定性。经过5天储存，HPBCD溶液未表现出可测的分解产物峰，经过21天储存，在保存时间3.28分钟出现了浓度大约为0.1％的单一降解产物峰。比较起来，经过5天储存，黑暗中储存的乙醇溶液表现出β-帕拉酮的峰值明显损失。当室温下两者暴露于正常房间亮度的光线时，与75％乙醇溶液中的β-帕拉酮相比，在β-帕拉酮-HPBCD溶液中观察到了明显增强的稳定性。然而，暴露在光线下，β-帕拉酮-HPBCD溶液还是会发生轻微的降解，暴露21天后降解产物占到峰总面积的3.4％。
乙醇溶液中β-帕拉酮降解的机理已经得到了证实，涉及相对稳定半还原态醌基的光致还原(Ci，Xiohong，et al.，J.Am.Chem.Soc.1989111，1337-1343)。在上述研究中，通过与硼氢化钠还原β-帕拉酮所得产物保存时间相比较，乙醇溶液中主要的降解产物鉴定为还原(氢化醌)态的β-帕拉酮。这种物质的洗提出现在大约6.9分钟，并尚未在β-帕拉酮的HPBCD溶液中发现，似乎说明两者具有不同的降解路径。
2.冻干β-帕拉酮与HPBCD复合体溶液按照实例1a和1c的过程，制备β-帕拉酮与HPBCD复合体的溶液样品。将这些样品移入冻干容器，预先冷却至-40℃，持续2小时。真空处理此容器，并持续12-20小时，处理时间取决于样品(样品的数量、尺寸、组合物和其它性质与特征)，从而获得冷冻干燥的产物。搅拌下用5.9毫升去离子水，使冻干样品重新构成，得到10毫克/毫升的β-帕拉酮。检测样品的结果列于表8中。
表8检测的β-帕拉酮与HPBCD系统(所有的都是80毫克/瓶剂)
基于上述结果，40％HPBCD与10毫克/毫升的β-帕拉酮需要稀释10-100倍，达到溶解度要求。如果储存条件下溶液稳定，它可以作为不需要冻干处理的、适合的非肠道溶液。如果优选采用冻干处理，经证实，20％HPBCD与5毫克/毫升的β-帕拉酮是快速冻干、且相对快速重新构成的良好选择。
3.结合Taxol的β-帕拉酮的生命体外研究已经证实，微摩尔浓度的β-帕拉酮与IC50水平的Taxol_结合应用到肿瘤细胞培养中，完全消除了菌落的生成。在这些研究中，将指数增长细胞以每孔1,000个细胞种植在6孔平板中，并允许其附着48小时。将DMSO中增加溶解度的β-帕拉酮和/或Taxol_加入孔中。用等体积的DMSO处理对照孔。4小时后清洗细胞并加入新鲜的介质。每天观察培养，并持续10-20天，再固定染色。将多于30个细胞的菌群作为存活记录。如图4所示，在人类不同组织类型范围广泛的癌细胞中，观察到对癌细胞生存的协同抑制，其中组织类型包括卵巢、乳腺、前列腺、黑素瘤、肺、胰腺细胞系。在减少癌细胞群落生成方面，单独的β-帕拉酮或Taxol_都缺乏有效性。MTT和tryptan blue排除分析证明，细胞存活的降低是由于细胞死亡造成的。形成梯形DNA与膜联蛋白的染色说明，细胞死亡归因于细胞程序性死亡。
在两个卵巢肿瘤细胞系OVCAR-3和MDAH-2774中，参照测异辐射热仪的记录分析，深入评价β-帕拉酮与Taxol_药物与药物之间的相互作用。确定每种药物单独的IC50值，然后将2种药物按其IC50浓度的固定比率混合并施用于细胞。连续暴露4天后，用MTT分析测定细胞生活力。如图5、6、7所示，在这些细胞系中2种药物的混合证明了协同抑制细胞的特性。
图5中，当注释成组合曲线时，每个测试组合与2个端点(100％β-帕拉酮与100％Taxol_)构成统计对照。统计上的有效观测需要在组合(β-帕拉酮与Taxol_)吸收值与端点值(单独的β-帕拉酮或Taxol_)之间存在差别。如果大部分值(5个数值中要大于等于3)统计上(p＜0.05)都低于端点连线，那么就反映出了协同作用。图6中，与2种单独的药物相比，5种评价的药物组合中有3种表现出有效的差别(p＜0.05)。图7中，与2种单独的药物相比，5种评价的药物组合全部表现出更强的细胞毒性(p＜0.05)。
β-帕拉酮同样表现出具有抑制顺式-铂耐药性细胞系的活性。卵巢系A2780DDP具有抗顺式-铂(顺氯氨铂)的强耐药性，其顺氯氨铂的IC50浓度通常大于100微摩尔。如图8所示，对于强耐药系及其来源的亲本系(A2780s)，β-帕拉酮作为单独药剂，具有同等的细胞毒性。在检测β-帕拉酮抑制顺氯氨铂耐药性细胞系中，细胞暴露在β-帕拉酮溶液中4小时。然后，清洗细胞，再加入新鲜介质。每天观察细胞培养，持续10-20天后，再固定染色。将大于30个细胞的菌群作为存活记录。
4.与Taxol_结合的β-帕拉酮的生命体内研究通过腹膜内注射，将人卵巢癌细胞(36M2，最初从恶性腹水中离析的)接种到24小时前接受照射的无胸腺雌裸鼠。在此模型中，接种后大约1周形成转移性病灶，在4-5周出现腹膜的肿瘤结核和恶性腹水。肿瘤接种(10×106个细胞)后10天，开始治疗控制。对照组只用载体处理。在每个典型的处理循环中，仅用β-帕拉酮的组接受含有25-50毫克/公斤β-帕拉酮的磺油溶液腹膜内注射，仅用Taxol_的组接受1毫克/千克(在磺油中稀释的Taxol配方)腹膜内注射，两组在24小时后接受载体腹膜内注射。在组合用药的组中，裸鼠先接受25-50毫克/千克β-帕拉酮的注射，24小时后再接受1毫克/千克Taxol_的注射。所有组都接受10个循环的疗程，每个循环之间间隔1天。在最后治疗循环的2周后(第50天)杀死鼠，测定抗肿瘤活性。通过总体外观和体重评价宿主的毒性。
图9说明了三组独立治疗实验之一的代表性结果，其中每组有6只鼠。与对照相比，单独使用β-帕拉酮治疗的鼠明显表现出肿瘤数量降低(大约75％)。单独使用Taxol_治疗的鼠表现出稍微欠缺的效果(大约60％)，并且两组在肿瘤结核和腹水数量上都表现出相当的减少。用β-帕拉酮和Taxol_治疗的动物中，剖腹手术中未发现恶性腹水，而且除了每只鼠有0-3个微小的病灶外，腹膜都很干净。尽管这些病灶呈现为纤维化疤，但是将它们记录为肿瘤结核。用组合方式治疗的鼠表现健康，在整个治疗周期中，体重没有损失，并且在尸体解剖中没有发现内部器官的整体异常。
在人卵巢异种移植模型中完成相似研究，比较含有β-帕拉酮的HPBCD溶液与含有β-帕拉酮的磺油溶液。与上述研究相同，向无胸腺的雌性裸鼠、腹膜内接种10×106个36M2人卵巢癌细胞，10天后开始治疗，其中每组有8只鼠(肿瘤接种前未经照射)。对照组只用载体处理。在每个典型的处理循环中，仅用β-帕拉酮的组接受含有25或10毫克/公斤β-帕拉酮的HPBCD溶液腹膜内注射，仅用Taxol_的组接受1毫克/千克(磺油中稀释的Taxol_配方)腹膜内治疗，两组在24小时后接受腹膜内载体注射。在2个组合用药的组中，鼠先接受含有25或10毫克/千克β-帕拉酮的HPBCD的治疗，24小时后再接受1毫克/千克Taxol_的治疗。组合用药的第3组接受了含有25毫克/千克β-帕拉酮的磺油的治疗，24小时后接受1毫克/千克Taxol_的治疗。所有组都经过6次循环的疗程，每个循环之间间隔1天。在大约第50天(大约最后治疗的第4周)杀死鼠，测定抗肿瘤活性。
图10说明了此研究结果。与使用含有β-帕拉酮可比含量的磺油溶液治疗的鼠相比，使用含有β-帕拉酮的HPBCD溶液治疗的鼠表现出，肿瘤结核数量同样减少。
接受人乳腺癌异种移植(MCF-7细胞系)的雌性裸鼠中，有效的抗肿瘤活性同样得到了证实。皮下肿瘤结核的直径达到了大约0.5厘米时，开始治疗鼠。如图11所示，与对照相比，接受了β-帕拉酮与Taxol_的6次循环治疗的鼠表现出，肿瘤体积惊人地减少。此外，随着实验的继续，经治疗的鼠肿瘤体积没有增加。图11中，皮下肿瘤异种移植的体积如图A所示，终止治疗后6周测定的鼠体重如图B所示。
5.Intralipid_中β-帕拉酮配方的研究制备β-帕拉酮浓度为10毫克/毫升的乙醇溶液。将其浓度稀释5倍，得到100-500微升的总体积。伴随着旋转，向Intralipid_逐滴加入乙醇溶液，制备β-帕拉酮浓度为2毫克/毫升的10％Intralipid_溶液。没有观察到沉淀与破乳的直接迹象。
重复上述过程，其中将浓度稀释10倍，制备含有1毫克/毫升β-帕拉酮的10％Intralipid_。旋转下将乙醇溶液逐滴加入Intralipid_。没有观察到沉淀与破乳的直接迹象。3天后，2毫克/毫升制备物发生结晶，而1毫克/毫升制备物没有变化。6天后，1毫克/毫升制备物依旧没有变化。
6.单独试剂的β-帕拉酮类似物的抑制作用在6种人癌细胞系中A2780和A2780/CP(卵巢)、MCF-7(乳腺)、HT-29(结肠)、BxPC-3(胰腺)、和A549(肺)，与β-帕拉酮(CO-501)相比，评价本发明一些β-帕拉酮类似物和衍生物、以及董尼酮、4-已酰氧-1，2-萘醌(如上文所述，参见图12)的抑制生长活性。将人肿瘤细胞系(购自ATCC，Rockville，MD)培养在37℃(5％CO2)的RPMI介质中(RPMI；Nova Tech，Grand Island，N.Y.)，其中含有10％牛胎儿血清(FBS，Nova Tech)。以104个细胞/孔的最终浓度，将等分细胞种植到96孔微滴定度平板的每个孔中，暴露在检测化合物之前培养24小时。经过4小时处理后，再用无药剂介质培养24小时后，通过MTS分析测定每种化合物DMSO溶液的抑制生长活性。MTS分析是一种比色分析法，其基于生活细胞将MTS转化为着色甲_产物的能力，其中MTS是一种新型四唑化合物和电子偶合剂，并且着色的甲_产物可溶于细胞培养介质。然后，通过用490纳米波长测定甲_产物的吸收度，确定细胞浓度。对比用载体处理的对照细胞，计算用IC50表达的抑制生长活性。3次独立分析的结果列于表9，其中每次分析包括每个药剂含量的3个平行测定。
如人们所期望的，在所有6种肿瘤细胞系中，都观察到β-帕拉酮(CO-501)的剂量依赖性抑制作用。如文献所述，董尼酮类似物(CO-506)表现出与CO-501相似的抑制活性。在3种β-帕拉酮的类似物与衍生物中，CO-504(4-乙酸基β-帕拉酮)也具有与CO-501相似的抑制活性；在所有细胞中，CO-503(4-羟基β-帕拉酮)明显缺乏抑制活性；而CO-505不具有抑制活性(在浓度高达20微摩/升下没有观察到生长抑制作用)。CO-507是一种萘醌衍生物，也不具有抑制活性。
表9β-帕拉酮(CO-501)和5种类似物与衍生物的抑制生长活性
*在20微摩尔/升浓度下没有抑制生长的作用7.在Bg-Nu-Xid鼠生命体内测定β-帕拉酮化学药品合成β-帕拉酮，将其以10毫克/毫升浓度溶解于40％羟丙基-β-环糊精中，放入黑色容器室温下保存。将羟丙基-β-环糊精溶解在蒸馏水中浓度达到10毫克/毫升，室温下保存。MATRIGEL_、一种基膜基质，从Becton Dickinson Labware(BDBiosciences，Two Oak Park Drive，Bedford，MA)购得，溶解在含有50微克/毫升庆大酶素的Dulbecoo改进的Eagle培养基中，并在-20℃下保持冷冻。MATRIGEL_是从Engelbreth-Holm-Swarm鼠肿瘤提取出来的，此肿瘤富含于细胞外基质蛋白中。主要的基质成分是层粘连蛋白、胶原蛋白IV、巢蛋白和类肝素硫酸蛋白多糖(基底膜蛋白聚糖)；此基质还含有生长因子、基质金属蛋白酶(MMPs[胶原酶])和纤溶酶原活化剂，不含任何金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)。MATRIGEL_基质4℃下呈液态，室温下形成胶体，产生重新构成的三维基质。此模型系统精密地模仿了生命体内基膜的结构、构成、物理特性和功能特性，为研究细胞形态学、生化功能、迁移或侵入、基因表达，提供了相应的生理环境。
细胞培养Dr William Dalton(Lee Moffit Cancer Center，Tampa，FL)提供了RPMI8226细胞(人多发性骨髓瘤细胞系)。这种细胞的保存是通过在RPMI1640(Collgro_，Mediatech Inc.，Herndon，VA)中频繁传代，其中RPMI1640含有10％牛胎儿血清(FBS)(GibcoBRL，Life Technologies，Grend Island，N.Y.)，并在162立方厘米细胞培养瓶(Costar_，Corning Incorporated，NY)中，添加了2×10-3摩L-谷氨酰胺、100单位/毫升青霉素(Pen)、100微克/毫升链霉素(Cellgro_，Mediatech Inc.，Herndon，VA)。指数生长的细胞系有CD138+、CD38+/CD45RA、负性EBV和不含病原体。
鼠从FCRCC、Frederick、Bethesda、MD获得40只6周大Bg-Nu-Xid鼠(T、B和NK细胞存在缺陷)，饲养在DFCI的Redstone动物装置中。这些鼠带有3个独立的变异—与损害巨噬细胞化学趋向性与活动性、以及NK细胞缺陷相关的Beige(Bg)常染色体隐性变异；与胸腺发育不全造成的T细胞缺陷有关的nude(nu)常染色体隐性变异；和造成B淋巴细胞功能缺陷的X连接免疫缺陷(xid)。将动物饲养在带有障碍结构的笼子中，此笼子由锯末衬底，带有分层空间，其温度保持在19-22℃。随意供应啮齿动物的食物和无菌食用水。鼠全部被检疫，排除了任何患病的可能。1只鼠死于运输途中，由于脱水(n＝2)、可能的感染(n＝2)和外伤造成的失血过多(n＝1)，另外损失了5只鼠。1周后，在所有鼠的饮用水中，加入enrofloxacin(一种喹诺酮抗生素)。涉及动物的所有步骤都获得the Dana Farber CancerInstitute(DFCI)学会的动物保护与使用委员会准则的认可，并按照该准则执行。
组织分析按照DFCI动物标准委员会的原则，当肿瘤最大直径达到20毫米或动物垂死时，杀死鼠。使用异氟烷麻醉鼠，再采集逆流(retroorbital)血液。采用颈错位的方式杀死鼠。解剖软组织(筋膜、肌肉、皮肤等)，取出肿瘤，固定在10％中性的福尔马林中。取出每组鼠的肝、脾、肾、肺、心脏、和脑，固定在福尔马林中。将组织脱水，嵌入石蜡块中。并切成5微米厚的切片，再用苏木精和曙红(HE)染色，使用光学显微镜检查细胞程序死亡的痕迹。
统计分析利用student’s“t”检测法进行统计分析，比较使用β-帕拉酮组与对照组之间细胞程序死亡程度与肿瘤体积的差别。
设计有34只鼠应用到本研究中。将RPMI8226(3×107)多发性骨髓瘤细胞清洗3次，再次悬浮在100微升RPMI1640中，使用皮下注射器27G针头和1毫升针管，将含有RPMI8226的100微升RPMI1640连同100微升MATRIGEL基质一起皮下注射入所有鼠的右肋腹部。每天观察鼠的健康状况和肿瘤发展状况，并且每周给鼠称重。
注射RPMI8226细胞后平均7天，所有鼠(n＝34)都出现局部明显的肿瘤。一旦肿瘤明显，每隔一天使用手持游标卡尺测量其正交直径。将31只鼠随机分配到β-帕拉酮组(n＝16)和对照组(n＝15)。对照组的鼠每隔一天在左下腹部位接受皮下注射50毫克/千克体重的40％羟丙基-β-环糊精溶液。β-帕拉酮组的鼠每隔一天接受皮下注射50毫克/千克体重的含有β-帕拉酮的40％羟丙基-β-环糊精(图13)。每次注射的常规体积是125微升。记录肿瘤直径，使用圆柱体标准公式0.523×(小直径)2×大直径，计算其体积。当肿瘤最大直径大于等于20毫米时、或鼠垂死时，杀死鼠。
由于它容易建立，并允许体外测定监视皮下肿瘤的生长，而且可用于研究不同化学治疗剂的效果，因此此异种移植鼠模型具有吸引力。迅速生长的肿瘤会出现细胞程序死亡与细胞坏死的部位，但是本实验中它并不是评价不同新型有效治疗剂细胞毒性的主要障碍。以前已经报道了相似模型，使用抗-gp130刺激物单克隆抗体(B1+I2)，研究多发性骨髓瘤患者细胞(Reme et al.Br JHacematol 114406，2001)的生长与永生化；使用抗人IL-6R抗体PM1和抗人IL-6抗体MH116，抑制IL-6依赖细胞系(S6B45)(Suzuki et al.，Eur J Immunol 221989，1992)的生长。以前已经报道了检测多发性骨髓瘤治疗剂的各种动物模型(Gado et al.，Haematologica 86227，2001；Dallas et al.Blood 931697，1999；Manning et al.Immunol Cell Biol 73326，1995；Takura et al.CancerRes 262564，1996；Potter et al. J Exp Med 161996，1985；Yaccobyet al.Blood 922908，1998；Urashima et al.Blood 90754，1997)。
β-帕拉酮与环糊精毒性的测定对于β-帕拉酮与羟丙基-β-环糊精，两组鼠都有很好的耐药性。两组中没有鼠死亡，而且所有鼠的体重都有增长(图14)。两组中，β-帕拉酮与羟丙基-β-环糊精不具有明显的毒性。在注射溶解36小时的β-帕拉酮后，1只鼠医原性内腹膜出血。在β-帕拉酮组与对照组中，还都发现了肾脏轻微管状空泡化现象。由于此作用出现在两组中，因此暗示，羟丙基-β-环糊精与以前对环糊精的报道相似(Frank et al.Am J Pathol83367，1976)，然而这种肾中毒变化可以随着治疗的停止发生逆转(Donaubauer et al.Regul Toxicol Pharmacol 27189，1998)。
β-帕拉酮对肿瘤体积的影响对照组的鼠最多接受6次的羟丙基-β-环糊精用药，然而，β-帕拉酮组的鼠可以最多接受8次此种用药。在第11天与对照组相比(图15)，β-帕拉酮组(p＝0.007)的鼠肿瘤体积出现明显的统计性下降。重要的是，在第5、7、9、11、13、15和17天，β-帕拉酮组的存活率高于对照组(图16)，暗示着，在β-帕拉酮组中肿瘤生长缓慢。
组织染色组织病理学检查显示，肿瘤没有得到密封，并局部侵入软组织中，其中包括肌肉，但没有任何远距离迁移。肿瘤被鼠来源的血管脉管化，并且肿瘤核具有主要细胞死亡的最小变化度(0-10％)。确定细胞程序死亡的组织病理学依据有(1)靠近核膜染色质的凝缩与聚集、与卷积的核膜；(2)增大并异常的颗粒状核仁；(3)细胞的皱缩和变圆；(4)细胞膜的起泡；(5)内质网与线粒体的较小扩张。由两位独立观察员使用光学显微镜(图17A)确定，与对照组相比(平均值±标准偏差＝20.0％±10.4)，在β-帕拉酮组(平均值±标准偏差＝41.1％±12.7)的肿瘤中，MM细胞程序死亡的比例统计性地明显升高。
显微证据证明，在β-帕拉酮组或对照组中，对于鼠的肝、心脏、肺、脑、脾，β-帕拉酮、或羟丙基-β-环糊精不带有任何毒性(图17B、C、D、E、F)。来自两组的肾脏都表现出轻微的管状空泡化，说明羟丙基-β-环糊精具有成管状毒性(图17G、H)。基于将羟丙基-β-环糊精配制在HPBCD溶液中，此毒性不期望在预期的人治疗剂中出现。这些结论说明，配制在HPBCD中的β-帕拉酮具有安全性，并可以有效抑制肿瘤细胞的生长，与宿主生命体存活期的延长有关。因此，可以得出结论，β-帕拉酮具有明显的抗肿瘤活性，只带有最低的毒性，可用于在生命体内治疗多发性骨髓瘤。
等价方案尽管本发明已经详细公开了特殊具体的实施方案，但是这样做的目的只是通过实例加以说明本发明，并没有对所附权利要求的范围加以限制。特别是，本发明认为，在不超出权利要求所定的发明范围，可以对本发明进行各种替换、改造与修改。所附权利要求是所公开的本发明的代表。此外，没有以权利要求书寻求保护的本发明也已经被考虑到了。可以理解，附图没有必要按比例，实际上它们只是概念性地说明。申请人保留在后续权利要求中寻求对本发明进行保护的权利。
权利要求
1.一种药用组合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子。
2.根据权利要求1的药用组合物，其中药用组合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子的混合物或溶液。
3.根据权利要求1或2的药用组合物，其中该组合物是水溶液或油溶液。
4.根据权利要求1的药用组合物，其中药用增溶载体分子是下列水增溶载体分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-环糊精或其类似物、β-环糊精或其类似物、γ-环糊精或其类似物。
5.根据权利要求4的药用组合物，其中水增溶载体分子是β-环糊精。
6.根据权利要求5的药用组合物，其中β-环糊精是羟丙基-β-环糊精。
7.根据权利要求1的药用组合物，其中药用增溶载体分子是油基增溶载体分子。
8.根据权利要求7的药用组合物，其中油基增溶载体分子是磺油分子。
9.根据权利要求3的药用组合物，其中溶液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
10.根据权利要求1的药用组合物，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子以乳浊液状态存在。
11.一种药用组合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子，在非肠道给药时用水溶液稀释后，在水溶液中仍保持有效的溶解度。
12.根据权利要求11的药用组合物，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物与药用水增溶载体混合。
13.根据权利要求11的药用组合物，其中药用增溶载体分子是下列水增溶载体分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-环糊精或其类似物、β-环糊精或其类似物、γ-环糊精或其类似物。
14.根据权利要求13的药用组合物，其中水增溶载体分子是β-环糊精。
15.根据权利要求14的药用组合物，其中β-环糊精是羟丙基-β-环糊精。
16.根据权利要求11的药用组合物，其中药用增溶载体分子是油基增溶载体分子。
17.根据权利要求16的药用组合物，其中油基增溶载体分子是磺油分子。
18.根据权利要求11的药用组合物，其中溶液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
19.根据权利要求12的药用组合物，其中该混合物含有范围在0.1-10毫克/千克的单位给药量，用药频率是从每周两次到每4周一次。
20.根据权利要求11的药用组合物，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子以乳浊液状态存在。
21.一种β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子的配方，该配方冷冻干燥后，在水溶液中重新构成，具有了有效的溶解度。
22.根据权利要求21的配方，其中β-帕拉酮或其衍生物、类似物与药用增溶载体分子混合。
23.根据权利要求21的配方，其中药用增溶载体分子是下列水增溶载体分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-环糊精或其类似物、β-环糊精或其类似物、γ-环糊精或其类似物。
24.根据权利要求23的配方，其中水增溶载体分子是β-环糊精。
25.根据权利要求24的配方，其中β-环糊精是羟丙基-β-环糊精。
26.根据权利要求21的配方，其中溶液中β-帕拉酮浓度至少是1毫克/毫升。
27.根据权利要求21的配方，其中β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子以乳浊液状态存在。
28.一种治疗哺乳动物癌症的试剂盒，其中至少包括一个含有符合1、11或21任一权利要求的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物的瓶剂。
29.一种药用组合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子，还含有第二抗癌剂和药用载体。
30.根据权利要求29的药用组合物，其中该组合物含有有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子的混合物或溶液，还含有第二抗癌剂和药用载体。
31.根据权利要求29或30的药用组合物，其中第二抗癌剂是taxane衍生物。
32.根据权利要求31的药用组合物，其中taxane衍生物是paclitaxel。
33.根据权利要求29或30的药用组合物，其中该组合物是水溶液或油溶液。
34.根据权利要求29的药用组合物，其中有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子与第二抗癌剂和药用载体相混合，并装入单一的小瓶中。
35.根据权利要求29的药用组合物，其中有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子装入第一个小瓶中，第二抗癌剂和药用载体装入第二个小瓶中。
36.根据权利要求29的药用组合物，其中药用增溶载体分子是下列水增溶载体分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-环糊精或其类似物、β-环糊精或其类似物、γ-环糊精或其类似物。
37.根据权利要求36的药用组合物，其中水增溶载体分子是β-环糊精。
38.根据权利要求37的药用组合物，其中β-环糊精是羟丙基-β-环糊精。
39.根据权利要求29的药用组合物，其中药用增溶载体分子是油基增溶载体分子。
40.根据权利要求39的药用组合物，其中油基增溶载体分子是磺油分子。
41.根据权利要求33的药周组合物，其中溶液中β-帕拉酮浓度至少是1毫克/毫升。
42.根据权利要求29的药用组合物，其中有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物以及药用水增溶载体分子、第二抗癌剂和药用载体以乳浊液状态存在。
43.一种治疗哺乳动物肿瘤的试剂盒，其中包括一个或多个小瓶，该小瓶含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子；在相同或不同的小瓶中，还含有第二抗癌剂。
44.根据权利要求43的试剂盒，其中一个或多个小瓶含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子的混合物，在相同或不同的小瓶中，还含有第二抗癌剂。
45.根据权利要求43或44的试剂盒，其中第二抗癌剂是taxane衍生物。
46.根据权利要求45的试剂盒，其中taxane衍生物是paclitaxel。
47.根据权利要求43或44的试剂盒，其中药用增溶载体分子是下列水增溶载体分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-环糊精或其类似物、β-环糊精或其类似物、γ-环糊精或其类似物。
48.根据权利要求47的试剂盒，其中水增溶载体分子是β-环糊精。
49.根据权利要求48的试剂盒，其中β-环糊精是羟丙基-β-环糊精。
50.根据权利要求43或44的试剂盒，其中增溶载体分子是油基增溶载体分子。
51.根据权利要求50的试剂盒，其中油基增溶载体分子是磺油分子。
52.根据权利要求43或44的试剂盒，其中溶液中β-帕拉酮浓度至少是1毫克/毫升。
53.一种将药用组合物给药于病体的癌症治疗方法，该方法包括向病体给予含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子的药用组合物。
54.根据权利要求53的方法，其中药用组合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子的混合物或溶液。
55.根据权利要求53或54的方法，其中该组合物是水溶液或油溶液。
56.根据权利要求53的方法，其中药用增溶载体分子是下列水增溶载体分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-环糊精或其类似物、β-环糊精或其类似物、γ-环糊精或其类似物。
57.根据权利要求56的方法，其中水增溶载体分子是β-环糊精。
58.根据权利要求57的方法，其中β-环糊精是羟丙基-β-环糊精。
59.根据权利要求53的方法，其中药用增溶载体分子是油基增溶载体分子。
60.根据权利要求59的方法，其中油基增溶载体分子是磺油分子。
61.根据权利要求55的方法，其中溶液中β-帕拉酮浓度至少是1毫克/毫升。
62.根据权利要求53的方法，其中药用组合物以非肠道方式用药。
63.根据权利要求62的方法，其中该药用混合物含有范围在0.1-10毫克/千克的单位给药量，用药频率是从每周两次到每4周一次。
64.根据权利要求53的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子以乳浊液状态存在。
65.一种将药用组合物给药于病体的癌症治疗方法，该方法包括向病体给予药用组合物，其中该药用组合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子，在非肠道给药时用水溶液稀释后，在水溶液中仍保持有效的溶解度。
66.根据权利要求65的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物与药用增溶载体混合。
67.根据权利要求65的方法，其中药用增溶载体分子是下列水增溶载体分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-环糊精或其类似物、β-环糊精或其类似物、γ-环糊精或其类似物。
68.根据权利要求67的方法，其中水增溶载体分子是β-环糊精。
69.根据权利要求68的方法，其中β-环糊精是羟丙基-β-环糊精。
70.根据权利要求65的方法，其中药用增溶载体分子是油基增溶载体分子。
71.根据权利要求70的方法，其中油基增溶载体分子是磺油分子。
72.根据权利要求65的方法，其中溶液中β-帕拉酮浓度至少是1毫克/毫升。
73.根据权利要求65的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用水增溶载体分子以乳浊液状态存在。
74.一种治疗癌症的方法，该方法包括将β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子的配方给药于病体，其中该混合物冷冻干燥后，在水溶液中重新构成，具有了有效的溶解度。
75.根据权利要求74的方法，其中β-帕拉酮或其衍生物、类似物与药用增溶载体混合。
76.根据权利要求74的方法，其中药用增溶载体分子是下列水增溶载体分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-环糊精或其类似物、β-环糊精或其类似物、γ-环糊精或其类似物。
77.根据权利要求76的方法，其中水增溶载体分子是β-环糊精。
78.根据权利要求77的方法，其中β-环糊精是羟丙基-β-环糊精。
79.根据权利要求74的方法，其中溶液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
80.根据权利要求74的方法，其中配方以非肠道方式用药。
81.根据权利要求80的方法，其中该药用组合物含有范围在0.1-10毫克/千克的单位给药量，用药频率是从每周两次到每4周一次。
82.根据权利要求74的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子以乳浊液状态存在。
83.一种癌症治疗方法，该方法包括将药用组合物给药于病体，该药用组合物含有有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子，还含有第二抗癌剂和药用载体。
84.根据权利要求83的方法，其中组合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子的混合物，还含有第二抗癌剂和药用载体。
85.根据权利要求83或84的方法，其中第二抗癌剂是taxane衍生物。
86.根据权利要求85的方法，其中taxane衍生物是paclitaxel。
87.根据权利要求83或84的方法，其中该组合物是水溶液或油溶液。
88.根据权利要求83的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子与第二抗癌剂taxane衍生物和药用载体相混合，并装入单一的小瓶中。
89.根据权利要求83的方法，其中将有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子装入第一小瓶中，将第二抗癌剂和药用载体装入第二小瓶中，第一与第二瓶剂可以同时用药，也可以次序用药。
90.根据权利要求83的方法，其中增溶载体分子是下列水增溶载体分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-环糊精或其类似物、β-环糊精或其类似物、γ-环糊精或其类似物。
91.根据权利要求90的方法，其中水增溶载体分子是β-环糊精。
92.根据权利要求91的方法，其中β-环糊精是羟丙基-β-环糊精。
93.根据权利要求83的方法，其中增溶载体分子是油基增溶载体分子。
94.根据权利要求93的方法，其中油基增溶载体分子是磺油分子。
95.根据权利要求87的方法，其中溶液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
96.根据权利要求83的方法，其中药用组合物以非肠道方式用药。
97.根据权利要求83的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用水增溶载体分子、抗癌剂和药用载体以乳浊液状态存在。
98.一种癌症治疗方法，该方法包括将药用组合物给药于病体，所述的药用组合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子，非肠道给药时用水溶液稀释后，在水溶液中仍保持有效的溶解度，还含有第二抗癌剂和药用载体。
99.根据权利要求88的方法，其中药用组合物中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物与药用增溶载体分子混合，非肠道给药时用水溶液稀释后，在水溶液中仍保持有效的溶解度。
100.根据权利要求98的方法，其中第二抗癌剂是taxane衍生物。
101.根据权利要求100的方法，其中taxane衍生物是paclitaxel。
102.根据权利要求98的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子与第二抗癌剂和药用载体相混合，并装入单一的小瓶中。
103.根据权利要求98的方法，其中将有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子装入第一小瓶中，将第二抗癌剂和药用载体装入第二小瓶中，第一与第二瓶剂可以同时用药，也可以次序用药。
104.根据权利要求98的方法，其中药用增溶载体分子是下列水增溶载体分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-环糊精或其类似物、β-环糊精或其类似物、γ-环糊精或其类似物。
105.根据权利要求104的方法，其中水增溶载体分子是β-环糊精。
106.根据权利要求105的方法，其中β-环糊精是羟丙基-β-环糊精。
107.根据权利要求98的方法，其中增溶载体分子是油基增溶载体分子。
108.根据权利要求107的方法，其中油基增溶载体分子是磺油分子。
109.根据权利要求98的方法，其中溶液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
110.根据权利要求98的方法，其中药用组合物含有范围在0.1-10毫克/千克的单位给药量，用药频率是从每周两次到每4周一次。
111.根据权利要求98的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子、第二抗癌剂和药用载体以乳浊液状态存在。
112.一种治疗癌症的方法，其中将β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子的配方给药于病体，该配方冷冻干燥后，在水溶液中重新构成，具有了有效的溶解度，配方还含有第二抗癌剂和药用载体。
113.根据权利要求112的方法，其中配方中的β-帕拉酮或其衍生物、类似物与药用增溶载体相混合。
114.根据权利要求112的方法，其中有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子与第二抗癌剂和药用载体相混合，并装入单一的小瓶中。
115.根据权利要求112的方法，其中将有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子装入第一小瓶中，将第二抗癌剂和药用载体装入第二小瓶中，第一与第二瓶剂可以同时用药，也可以次序用药。
116.根据权利要求112的方法，其中药用增溶载体分子是下列水增溶载体分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-环糊精或其类似物、β-环糊精或其类似物、γ-环糊精或其类似物。
117.根据权利要求116的方法，其中水增溶载体分子是β-环糊精。
118.根据权利要求117的方法，其中β-环糊精是羟丙基-β-环糊精。
119.根据权利要求112的方法，其中溶液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
120.根据权利要求112的方法，其中抗癌剂是taxane衍生物。
121.根据权利要求120的方法，其中taxane衍生物是paclitaxel。
122.根据权利要求112的方法，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子、第二抗癌剂和药用载体以乳浊液状态存在。
123.一种治疗癌症的方法，先将药用组合物给药病体，再让病体接受放射治疗，该药用组合物含有有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物以及增溶载体分子。
124.根据权利要求123的方法，其中药用增溶载体分子是下列水增溶载体分子，Poloxamer、聚烯吡酮K17、聚烯吡酮K12、聚山梨醇酯80、乙醇、Cremophor/乙醇、聚乙二醇(PEG)400、丙二醇、Trappsol、α-环糊精或其类似物、β-环糊精或其类似物、γ-环糊精或其类似物。
125.根据权利要求124的方法，其中水增溶载体分子是β-环糊精。
126.根据权利要求125的方法，其中β-环糊精是羟丙基-β-环糊精。
127.根据权利要求123的方法，其中增溶载体分子是油基增溶载体分子。
128.根据权利要求127的方法，其中油基增溶载体分子是磺油分子。
129.根据权利要求123的方法，其中溶液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
130.根据权利要求123的方法，其中该药用组合物含有范围在0.1-10毫克/千克的单位给药量，用药频率是从每周两次到每4周一次。
131.根据权利要求123的方法，其中有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子以乳浊液状态存在。
132.一种药用组合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮、或其衍生物、类似物，并以药用脂肪乳浊液赋形剂配制成适合非肠道用药的乳浊液。
133.根据权利要求132的药用组合物，其中药用脂肪乳浊液赋形剂是Intralipid_。
134.根据权利要求132的药用组合物，其中乳浊液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
135.根据权利要求132的药用组合物，其中该乳浊液含有范围在0.1-10毫克/千克的单位给药量，用药频率是从每周两次到每4周一次。
136.一种β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用脂肪乳浊液赋形剂的配方，其中配方冷冻干燥后，在水溶液中重新构成，具有了有效的溶解度。
137.根据权利要求136的配方，其中药用脂肪乳浊液赋形剂是Intralipid_。
138.根据权利要求136的配方，其中配方中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
139.一种药用组合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物，并以药用脂肪乳浊液赋形剂配制成适合非肠道用药的乳浊液，还含有第二抗癌剂和药用载体。
140.根据权利要求139的药用组合物，其中药用脂肪乳浊液赋形剂是Intralipid_。
141.根据权利要求139的药用组合物，其中第二抗癌剂是taxane衍生物。
142.根据权利要求141的药用组合物，其中taxane衍生物是paclitaxel。
143.根据权利要求139的药用组合物，其中乳浊液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
144.根据权利要求139的药用组合物，其中该乳浊液含有范围在0.1-10毫克/千克的单位给药量，用药频率是从每周两次到每4周一次。
145.根据权利要求139的药用组合物，其中乳浊液含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用脂肪乳浊液赋形剂，并与第二抗癌剂和药用载体相混合，装入单一的小瓶中。
146.根据权利要求139的药用组合物，其中乳浊液含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用脂肪乳浊液赋形剂，并装入第一小瓶中，第二抗癌剂和药用载体装入第二小瓶中。
147.一种治疗哺乳动物癌症的试剂盒，其中至少包括一个含有符合132、136或139任一权利要求的β-帕拉酮或其衍生物、类似物的瓶剂。
148.一种治疗哺乳动物肿瘤的试剂盒，其中包括一个或多个小瓶，该小瓶中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用脂肪乳浊液赋形剂的乳浊液，在相同或不同的小瓶中，还含有第二抗癌剂。
149.根据权利要求148的试剂盒，其中药用脂肪乳浊液赋形剂是Intralipid_。
150.根据权利要求148的试剂盒，其中第二抗癌剂是taxane衍生物。
151.根据权利要求150的试剂盒，其中taxane衍生物是paclitaxel。
152.根据权利要求148的试剂盒，其中乳浊液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
153.一种癌症治疗方法，该方法包括将药用组合物用药于病体，其中该药用组合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及非肠道方式用药的药用脂肪乳浊液赋形剂。
154.根据权利要求153的方法，其中药用脂肪乳浊液赋形剂是Intralipid_。
155.根据权利要求153的方法，其中乳浊液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
156.根据权利要求153的方法，其中该乳浊液含有范围在0.1-10毫克/千克的单位给药量，用药频率是从每周两次到每4周一次。
157.一种癌症治疗方法，该方法包括将乳浊液用药于病体，所述的乳浊液含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物，并配制在适用于非肠道用药的药用脂肪乳浊液赋形剂中，而且还含有第二抗癌剂和药用载体。
158.根据权利要求157的方法，其中药用脂肪乳浊液赋形剂是Intralipid_。
159.根据权利要求157的方法，其中第二抗癌剂是taxane衍生物。
160.根据权利要求159的方法，其中taxane衍生物是paclitaxel。
161.根据权利要求157的方法，其中乳浊液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
162.根据权利要求157的方法，其中乳浊液含有范围在0.1-10毫克/千克的单位给药量，用药频率是从每周两次到每4周一次。
163.一种治疗癌症的方法，先将乳浊液给药于病体，再让病体接受放射治疗，该乳浊液含有配制在药用脂肪乳浊液赋形剂中的有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物。
164.根据权利要求163的方法，其中药用脂肪乳浊液赋形剂是Intralipid_。
165.根据权利要求163的方法，其中乳浊液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
166.根据权利要求163的方法，其中乳浊液含有范围在0.1-10毫克/千克的单位给药量，用药频率是从每周两次到每4周一次。
167.一种根据权利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一项的方法，其中癌症是以一处或多处固体肿瘤为特征的。
168.一种根据权利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一项的方法，其中癌症是前列腺癌。
169.一种根据权利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一项的方法，其中癌症是多发性骨髓瘤。
170.一种根据权利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一项的方法，其中癌症是血液瘤。
171.一种根据权利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一项的方法，其中癌症是淋巴瘤。
172.一种根据权利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一项的方法，其中癌症是卵巢癌。
173.一种根据权利要求53、65、74、83、98、112、123、153、157、或163中任何一项的方法，其中癌症是乳腺癌。
174.一种可静脉用药的无菌注射药用组合物，其中该药用组合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物和药用水增溶载体分子的混合物。
175.根据权利要求174的无菌注射药用组合物，其中该组合物在水溶液中。
176.根据权利要求174的无菌注射药用组合物，其中药用水增溶载体分子是羟丙基-β-环糊精。
177.根据权利要求174的无菌注射药用组合物，还含有第二抗癌剂和药用载体。
178.根据权利要求177的无菌注射药用组合物，其中第二抗癌剂是taxane衍生物。
179.根据权利要求178的无菌注射药用组合物，其中taxane衍生物是paclitaxel。
180.根据权利要求174的无菌注射药用组合物，其中溶液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
181.根据权利要求174的无菌注射药用组合物，其中该药用组合物含有范围在0.1-10毫克/千克的单位给药量，用药频率是从每周两次到每4周一次。
182.根据权利要求174的无菌注射药用组合物，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用水增溶载体分子以乳浊液状态存在。
183.一种静脉用药的无菌注射药用组合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物和药用油基增溶载体分子的混合物。
184.根据权利要求183的无菌注射药用组合物，其中药用油基增溶载体分子是磺油分子。
185.根据权利要求183的无菌注射药用组合物，还含有第二抗癌剂和药用载体。
186.根据权利要求185的无菌注射药用组合物，其中第二抗癌剂是taxane衍生物。
187.根据权利要求186的无菌注射药用组合物，其中taxane衍生物是paclitaxel。
188.根据权利要求183的无菌注射药用组合物，其中溶液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
189.根据权利要求183的无菌注射药用组合物，其中该药用组合物含有范围在0.1-10毫克/千克的单位给药量，用药频率是从每周两次到每4周一次。
190.根据权利要求183的无菌注射药用组合物，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用水增溶载体分子以乳浊液状态存在。
191.一种静脉用药的无菌注射药用组合物，该药用组合物在药用脂肪乳浊液赋形剂中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物。
192.根据权利要求191的无菌注射药用组合物，其中脂肪乳浊液是Intralipid_。
193.根据权利要求191的无菌注射药用组合物，还含有抗癌剂和药用载体。
194.根据权利要求191的无菌注射药用组合物，其中抗癌剂是taxane衍生物。
195.根据权利要求194的无菌注射药用组合物，其中taxane衍生物是paclitaxel。
196.根据权利要求191的无菌注射药用组合物，其中乳浊液中β-帕拉酮的浓度至少是1毫克/毫升。
197.根据权利要求191的无菌注射药用组合物，其中该药用组合物含有范围在0.1-10毫克/千克的单位给药量，用药频率是从每周两次到每4周一次。
198.一种治疗病体皮肤病的局部用药组合物，该组合物含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子，其中该组合物局部施用于病体，治疗皮肤病。
199.根据权利要求198的局部用药组合物，其中该组合物是水溶液或油溶液。
200.根据权利要求198的局部用药组合物，其中药用增溶载体分子是水增溶载体分子。
201.根据权利要求198的局部用药组合物，其中药用增溶载体分子是油基增溶载体分子。
202.根据权利要求198的局部用药组合物，其中有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子以乳浊液状态存在。
203.根据权利要求198的局部用药组合物，其中皮肤病包括基细胞癌、扁平细胞癌、卡波济氏肉瘤和黑素瘤。
204.根据权利要求198的局部用药组合物，其中皮肤病是牛皮癣。
205.一种治疗皮肤癌的方法，其中包括使用有效用量的符合权利要求198的药用组合物给药于病体。
206.根据权利要求205的方法，其中药用组合物是局部用药。
207.一种治疗皮肤病的方法，其中包括使用有效用量的符合权利要求198的药用组合物给药于病体。
208.根据权利要求207的方法，其中皮肤病是牛皮癣。
209.根据权利要求207的方法，其中药用组合物是局部用药。
210.一种药用组合物，其中含有有效用量的β-帕拉酮或其衍生物、类似物，并且与适合局部用药的脂肪乳浊液赋形剂共同配方。
211.一种治疗皮肤癌的方法，其中包括使用有效用量的符合权利要求210的药用组合物给药于病体。
212.一种治疗皮肤病的方法，其中包括使用有效用量的符合权利要求210的药用组合物给药于病体。
213.根据权利要求212的方法，其中皮肤病是牛皮癣。
214.一种具有如下结构式的化合物
215.一种癌症治疗方法，该方法包括将药用组合物给药于病体，所述的组合物含有有效用量的符合权利要求214的化合物和增溶载体分子。
216.一种皮肤病治疗方法，该方法包括将药用组合物给药于病体，所述的组合物含有有效用量的权利要求214的化合物和增溶载体分子。
217.根据权利要求216的方法，其中皮肤病是牛皮癣。
218.一种癌症治疗方法，该方法包括将药用组合物给药于病体，所述的组合物含有有效用量的4-乙酸基-β-帕拉酮和增溶载体分子。
219.一种癌症治疗方法，该方法包括将药用组合物给药于病体，所述的组合物含有有效用量的4-乙酸基-3-溴-β-帕拉酮和增溶载体分子。
220.一种癌症治疗方法，该方法包括将药用组合物给药于病体，所述的组合物含有有效用量的2-乙基-6-羟基萘[2，3-b]呋喃-4，5-二酮和增溶载体分子。
221.一种皮肤病治疗方法，该方法包括将药用组合物给药于病体，所述的组合物含有有效用量的4-乙酸基-β-帕拉酮和增溶载体分子。
222.根据权利要求221的方法，其中皮肤病是牛皮癣。
223.一种皮肤病治疗方法，该方法包括将药用组合物给药于病体，所述的组合物含有有效用量的4-乙酸基-3-溴-β-帕拉酮和增溶载体分子。
224.根据权利要求223的方法，其中皮肤病是牛皮癣。
225.一种皮肤病治疗方法，该方法包括将药用组合物给药于病体，所述的组合物含有有效用量的2-乙基-6-羟基萘[2，3-b]呋喃-4，5-二酮和增溶载体分子。
226.根据权利要求225的方法，其中皮肤病是牛皮癣。
全文摘要
经证实，β－帕拉酮具有有效的抗肿瘤活性，抑制人类的癌症系，但是在大多数药用溶剂中其溶解性很差。本发明采用新型药用组合物克服这一重要缺陷，该新型药用组合物含有有效用量的β－帕拉酮或其衍生物、类似物以及药用增溶载体分子，此增溶载体分子可以是水增溶载体分子、例如羟丙基－β－环糊精，也可以是油基增溶载体分子，以增强β－帕拉酮水性溶液中的溶解度。有效用量的β－帕拉酮或其衍生物、类似物可以在水溶液中与药用增溶载体分子混合。新型药用组合物可以与第二抗癌剂共同用药，或与放射疗法结合使用。本发明还公开了一个配方，将药用增溶载体分子与β－帕拉酮或其衍生物、类似物混合，该混合物冷冻干燥后，在水溶液中重新构成，具有了有效的溶解度。本发明还提供药用脂肪乳浊液赋形剂中的β－帕拉酮乳浊液。本发明还公开了将新型药用组合物和配方给药病体治疗癌症的方法。本发明还提供了药品试剂盒。
文档编号A61K47/40GK1561209SQ02819029
公开日2005年1月5日 申请日期2002年7月31日 优先权日2001年7月31日
发明者江志伟, 达谢瑞瑟·G·瑞蒂 申请人:阿奎利公司