β淀粉样蛋白生成抑制剂含氟和三氟烷基杂环磺酰胺及其衍生物的制作方法

专利名称：β淀粉样蛋白生成抑制剂含氟和三氟烷基杂环磺酰胺及其衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及含氟和三氟烷基的杂环磺酰胺β淀粉样蛋白(amyloid)生成抑制剂及其衍生物，涉及它们的制备方法、包含它们的组合物和使用它们的治疗方法。特别是这些抑制剂具有治疗阿尔茨海默病的实用性。
背景技术：
阿尔茨海默病(AD)在老年人中为最常见的痴呆(丧失记忆)形式。在脑中发现AD的主要病理性损伤由细胞外斑块形式β淀粉样蛋白沉积、血管病以及细胞内高磷酸化τ蛋白聚集的神经原纤维缠结(tangles)组成。新近证据表明脑内高β淀粉样蛋白水平不仅先于τ病变，且还与认知能力减退有关。还提示β淀粉样蛋白在AD中的病因角色，最近的研究表明在细胞培养基中聚集的β淀粉样蛋白毒害神经元。
β淀粉样蛋白主要由39至42个氨基酸肽组成，由称为淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的较大前体蛋白通过β蛋白酶和γ分泌酶的连续作用产生。尽管罕见，但早期AD发作的情况归因于APP中的遗传突变，该突变导致总β淀粉样蛋白生成过量或其更多的聚集前(aggregation-prone)42氨基酸同种型。此外，患有唐氏(Down’s)综合征的人具有含编码APP的基因的另外染色体，因而具有高β淀粉样蛋白水平并必然在生命后期发生AD。
对可用于抑制β淀粉样蛋白生成和用于治疗与之相关病症作用的组合物有不断的需求。
发明概述这些化合物用于治疗其中β淀粉样蛋白水平增高的病症(例如AD、唐氏综合征)。将这些化合物全身性给予处于这些疾病风险、或患有这些疾病的患者可降低这些患者脑内β淀粉样蛋白水平，并随后减少毒性β淀粉样蛋白聚集。
有益的是，出乎意料之外地发现含三氟烷基和氟的式(I)杂环磺酰胺化合物具有良好的β-淀粉样蛋白抑制活性。与无三氟烷基或氟基的相应化合物相比，式(I)化合物特征在于增加抗氧化稳定性(1期代谢稳定性)。此外，与无三氟烷基或氟基的相应化合物相比，发现本文中的式(I)化合物增加代谢稳定性和循环半衰期，因此提高生物活性。
另外，发现与相应的未氟化化合物相比，式(I)含三氟烷基和氟化合物增加效能。因此与现有技术化合物相比，预计本发明化合物可在减少的剂量下有用。
阅读以下发明详述后，本发明的这些和其它方面对本领域技术人员而言是显而易见的。
发明详述在第一方面，本发明公开式(I)化合物、它们的药用制剂以及它们在患者中调节β淀粉样蛋白生成的用途，所述患者处于由脑内高水平β淀粉样蛋白所致AD或其它疾病风险中或患有这些疾病。因此本发明提供式(I)化合物及其药学上可接受的盐和/或水合物或前体药物 其中
T选自CHO、COR8和C(OH)R1R2；R1和R2独立选自氢、低级烷基、取代低级烷基、CF3、烯基、取代烯基、炔基和取代炔基；R3选自氢、低级烷基和取代低级烷基；R4选自(CF3)n烷基、(CF3)n(取代烷基)、(CF3)n烷基苯基、(CF3)n烷基(取代苯基)和(F)n环烷基；n＝1-3；R5选自氢、卤素、CF3、Y＝C时稠合至Y的二烯和Y＝C时稠合至Y的取代二烯；W、Y和Z独立选自C、CR6和N，条件是W、Y或Z中的至少一个必须为C；R6选自氢、卤素、低级烷基和取代低级烷基；X选自O、S、SO2和NR7；R7选自氢、低级烷基、取代低级烷基、苄基、取代苄基、苯基和取代苯基；和R8选自低级烷基、CF3、苯基和取代苯基。
在这些化合物中，优选的化合物成员为那些其中R4为(CF3)n烷基的化合物，例如CF3、CF3CH2、CH(CH3)CH2CF3、CH(CH2CF3)2或CH(CF3)2。其它优选的成员包括其中R4为(F)n环烷基的化合物，优选(F)2环烷基，更优选(F)2环己烷和双环[3.1.0]己烷，以及最优选4，4-二氟-环己烷和4,4-二氟双环[3.1.0]-3-己烷。
在一个实施方案中，T为C(OH)R1R2，R1和R2为氢，R3为氢，R4为(CF3)2CH，优选R4为S-立体化学，R5为卤素，和W＝C，X＝S，Y＝CH，Z＝CH且磺酰胺连接至噻吩环C-2位。
在另一个实施方案中，T为CHO，R1和R2为氢，R3为氢，R4为CH(CH3)CH2CF3，R5为卤素，和W＝C，X＝S，Y＝CH，Z＝CH，且磺酰胺连接至噻吩环C-2位。
在再一个实施方案中，T为C(O)R8，R1和R2为氢，R3为氢，R4为CF3CH2(CH3)CH，R5为卤素，R8为CH3，和W＝C，X＝S，Y＝CH，Z＝CH，且磺酰胺连接至噻吩环C-2位。
在还另一个实施方案中，T为C(OH)R1R2，R1和R2为氢，R3为氢，R4为(CH2CF3)2CH，R5为卤素，和W＝C，X＝S，Y＝CH，Z＝CH，且磺酰胺连接至噻吩环C-2位。
在仍再一个实施方案中，T为C(OH)R1R2，R1和R2为CH3，R3为氢，R4为CF3CH2(CH3)CH，R5为卤素，和W＝C，X＝S，Y＝CH，Z＝CH，且磺酰胺连接至噻吩环C-2位。
在另一个实施方案中，T为C(OH)R1R2，R1为CH3，R2为氢，R3为氢，R4为(CF3)2CH，R5为卤素，和W＝C，X＝S，Y＝CH，Z＝CH，且磺酰胺连接至噻吩环C-2位。
在还再一个实施方案中，T为C(OH)R1R2，R1和R2为氢，R3为氢，R4为(F)2环烷基，R5为卤素，和W＝C，X＝S，Y＝CH，Z＝CH，且磺酰胺连接至噻吩环C-2位。
W-X-Y-Z-C杂环与SO2基团的连接点并非对本发明的限定。但是，在一个优选的实施方案中，该环通过碳原子与SO2基团连接。但是，该环可通过N杂原子连接。
本发明化合物可含有一个或多个不对称碳原子，并且该化合物中的一些可含有一个或多个不对称(手性)中心，因此可产生旋光异构体和非对映体。虽然式(I)中显示没有考虑立体化学，但当式(I)化合物含一个或多个手性中心时，至少β-氨基醇的手性中心为S-立体化学。最优选与N、R3和R4连接的碳原子为S-立体化学。因此，本发明包括这类旋光异构体和非对映体；以及外消旋和拆分对映异构纯的立体异构体；和R和S立体异构体的其它混合物，及其药学上可接受的盐、水合物和前体药物。
本文中使用的术语“烷基”指具有1至10个碳原子的直链和支链饱和脂族烃基，优选1至8个碳原子，且最优选1至6个碳原子；本文中使用的术语“低级烷基”指具有1至6个碳原子的直链和支链饱和脂族烃基；“烯基”将包括具有至少一个碳-碳双键和2至8个碳原子的直链和支链烷基，优选2至6个碳原子；“炔基”将包括具有至少一个碳-碳三键和2至8个碳原子的直链和支链烷基，优选2至6个碳原子。
术语“取代烷基”、“取代烯基”和“取代炔基”指具有1至3个取代基的上述烷基、烯基和炔基，优选该取代基独立选自卤素、CN、OH、NO2、氨基、芳基、杂环、取代芳基、取代杂环、烷氧基、取代烷氧基、芳氧基、取代芳氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基和芳硫基。这些取代基可与烷基、烯基或炔基的任何碳连接，条件是该连接构成稳定的化学部分。
本文中使用的术语“环烷基”描述的是具有3个以上碳原子并形成稳定环的碳-基饱和环。术语环烷基可包括其中两个或多个环烷基稠合形成稳定多环的基团。优选环烷基指具有约4至约9个碳原子的环，且更优选约6个碳原子。
本文中使用的术语“取代环烷基”指具有1至5个取代基的上述环烷基，优选该取代基独立选自氢、卤素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、取代烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基、取代烷基氨基、芳硫基、杂环、取代杂环、氨基烷基和取代氨基烷基。
本文中使用的术语“芳基”指碳环芳族系统，它可以为单环、或多个芳环稠合或连接在一起使该稠合或连接环的至少一部分形成共轭芳族系统。芳基包括但不限于苯基、萘基、联苯基、蒽基、四氢萘基、菲基和茚满。
术语“取代芳基”指具有1至4个取代基的以上定义的芳基，优选该取代基独立选自卤素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、环烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、取代烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基和芳硫基。
术语“二烯”指具有两个双键的不饱和烃或二烯。术语“取代二烯”指被1至2个取代基取代的二烯，优选该取代基独立选自卤素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、取代烷基、环烷基、取代环烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、烷氧基、取代烷氧基、芳氧基、取代芳氧基、烷基氧基、取代烷基氧基、烷基羰基、取代烷基羰基、烷基羧基、取代烷基羧基、烷基氨基、取代烷基氨基、芳硫基或取代芳硫基。
当“二烯”和“取代二烯”用于上下文R5中时，一个实施方案中取代二烯为在R5和Y与噻吩环稠合形成苯并噻吩的3-氯-1，3-丁二烯。其它合适的二烯包括1，3-丁二烯基-和2-三氟甲基-1，3-丁二烯基。但是，其它合适的取代和未取代二烯可容易地在本文定义的化合物中选择。
术语“取代苄基”指在苯环上被1至5个取代基取代的苄基，优选该取代基独立选自卤素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、环烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、取代烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基和芳硫基。
本文中使用的术语“杂环”描述的是饱和、部分不饱和或不饱和的稳定4元至7元单环或稳定多环杂环，该杂环包括碳原子和优选独立选自N、O和S原子的1至4个杂原子。N和S原子可被氧化。杂环还包括其中任何以上定义的杂环与芳环稠合的任何多环。杂环可在任何杂原子或碳原子上连接，条件是所得结构化学稳定。这类杂环基包括例如四氢呋喃、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌啶基、氮杂基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噁唑基、异噁唑基、吗啉基、吲哚基、喹啉基、噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、硫吗啉基、硫吗啉基亚砜、异喹啉基和四氢噻喃。
本文中使用的术语“取代杂环”描述的是以上定义的具有1至4个取代基的杂环，优选该取代基独立选自卤素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、取代烷基、环烷基、取代环烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、烷氧基、取代烷氧基、芳氧基、取代芳氧基、烷基氧基、取代烷基氧基、烷基羰基、取代烷基羰基、烷基羧基、取代烷基羧基、烷基氨基、取代烷基氨基、芳硫基或取代芳硫基。
当叙述术语“取代烷基”或“取代烷基苯基”时，在烷基或在相应的基础化合物上可发生取代。
本文中使用的术语“烷氧基”指OR基团，其中R为烷基或取代烷基。
本文中使用的术语“芳氧基”指OR基团，其中R为芳基或取代芳基。
本文中使用的术语“芳硫基”指SR基团，其中R为芳基或取代芳基。
本文中使用的术语“烷基羰基”指RCO基团，其中R为烷基或取代烷基。
本文中使用的术语“烷基羧基”指COOR基团，其中R为烷基或取代烷基。
术语“氨基烷基”指其中烷基或取代烷基含1至8个碳原子的仲胺和叔胺，该烷基或取代烷基可以相同或不同且连接点在氮原子上。
术语“卤素”指Cl、Br、F或I。
除非环结构的种类另有说明，否则术语“环”结构包括单环结构、桥环结构和稠合环结构。
本发明化合物可以从药学上或生理上可接受的酸或碱衍生的盐形式使用。这些盐包括但不限于与以下有机和无机酸成的盐例如乙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、mallic、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、甲苯磺酸和类似已知可接受的酸及其混合物。其它盐包括二乙醇胺盐、乙二胺盐和与碱金属或碱土金属成的盐，例如钠(例如氢氧化钠)、钾(例如氢氧化钾)、钙(例如氢氧化钙)或镁(例如氢氧化镁)。
这些盐和其它本发明化合物可以为酯、氨基甲酸酯和其它常规“前体药物”形式，当以这类形式给药时，它们在体内转化为活性部分。在一个当前优选的实施方案中，前体药物为酯。见例如B.Testa和J.Caldwell，"Prodmgs RevisitedThe"Ad Hoc"Approach as aComplement to Ligand Design"(回顾前体药物作为对配体设计补充的"Ad Hoc"方法)，Medicinal Research Reviews，16(3)233-24l，JohnWiley & Sons编辑(1996)。
在一个实施方案中，式(I)化合物为噻吩磺酰胺，且更理想地是5-卤噻吩磺酰胺，以及最理想地是在伯醇的侧链具有β-支链的5-卤噻吩磺酰胺。因此，理想地是本发明式(I)化合物具有这样的结构其中R1和R2为氢；R3为氢，R4为S-立体化学的(CF3)2CH，R5为卤素，W＝C，X＝S，Y＝CH，Z＝CH，且磺酰胺连接至噻吩环C-2位。
在另一个实施方案中，式(I)化合物为呋喃磺酰胺。因此本发明式(I)化合物具有这样的结构其中X为O。在一个理想的实施方案中，呋喃磺酰胺的特征在于在伯醇的侧链有β-支链。
在还另一个实施方案中，式(I)化合物为吡唑磺酰胺。因此式(I)化合物具有这样的结构其中X为NR7，W为N，且Z和Y为C或CR6，条件是Y或Z中的至少一个必须为C。
本发明的这些和其它化合物可按下述流程制备。
合成本发明化合物可按有机合成领域技术人员熟知的很多方法制备。本领域技术人员可用下述方法和有机合成领域中的已知合成方法或这些方法的改变方法制备本发明化合物。(一般参见Comprehensive Organic Synthesis，"Selectivity，Strategy & Efficiency inModern Organic Chemistry"(现代有机化学中的选择性、策略和效率)，I.Fleming编辑，Pergamon出版社，New York(1991)；ComprehensiveOrganic Chemistry，"The Synthesis and Reactions of OrganicCompounds"(有机化合物的合成和反应)，J.F.Stoddard编辑，Pergamon出版社，New York(1979))。优选的方法包括但不限于以下所述那些方法。
第一种制备方法由以下步骤组成1，2-氨基醇II与合适的磺酰卤在碱例如三乙胺(TEA)的存在下和在合适的溶剂中反应，得到式III化合物。对于其中R2和R1为氢的化合物，用氯铬酸吡啶鎓(PCC)、Dess Martin过碘烷(periodinane)试剂[D.B.Dess，J.C.Martin，J.Org.Chem.，484155(1983)]或在Swern条件下[Omura等，J.Org.Chem.，41957(1976)]氧化N-磺酰基伯醇，然后得到相应的醛IV，醛IV可与格氏试剂(RMgX，其中R为有机基团，且X为卤素)反应，得到仲醇V非对映体混合物，其可通过高效液相色谱(HPLC)分离(流程1)。
流程1 第二种制备方法涉及α-氨基酸或酯IX与合适的磺酰卤在碱例如三乙胺的存在下和在合适的溶剂中反应，得到式X化合物(流程2)。用标准方法例如氢化铝锂(LiAlH4)、B2H6或氰尿酰氯/NaBH4可将中间体N-磺酰基酸X(Rx＝H)转化为相应的伯醇VIII(R1＝R2＝H)。用标准方法例如LiAlH4也可将中间体N-磺酰基酯X(Rx＝烷基，Bn)还原为相应的伯醇VIII(R1＝R2＝H)。或者，可用DIBAL将中间体N-磺酰基酯X(Rx＝烷基，Bn)转化为醛IV。最后，中间体N-磺酰基酯X(Rx＝烷基，Bn)可与2当量的格氏试剂反应，得到其中R1＝R2的叔醇III。或者，对于其中R1不等于R2的叔醇III，可制备N-磺酰基酸的相应Weinreb酰胺，然后依次与R1MgX和R2MgX反应。
流程2 在制备伯醇的第二种方法的改变方法中，先将α-氨基酸或酯(或其N保护的衍生物)VI转化为相应的1，2-氨基伯醇VII(用前段所述方法)，随后(如果需要)脱去保护后，使该伯醇与合适的磺酰卤反应(流程3)，得到式VIII化合物。
流程3 为制备衍生自氨基酸侧链含β支链的非天然α-氨基酸的化合物，流程4中概括了根据Hruby成果的制备方法(Tet.Lett.385135-5138(1997))。该路线需要通过Horner-Emmons反应顺序由酰溴XI形成Evans手性助剂的α，β-不饱和酰胺XIV，随后共轭加成有机铜酸盐，用N-溴琥珀酰胺(NBS)捕集所得烯醇化阴离子XV，用叠氮化物阴离子(由叠氮化四甲基胍鎓(guanidinium)(TMGA)或叠氮化钠提供置换溴化物XVI，得到XVII，随后还原为1，2-氨基醇，然后进行磺酰化，得到目标化合物XVIII。
流程4 与以上醇中的磺酰胺连接的杂环为噻吩时，用3-氯过苯甲酸(MCPBA)氧化噻吩化合物XIX可得到相应的砜衍生物XX(流程5)。
流程5 另一种制备衍生自非天然1，2-氨基醇的磺酰胺的方法利用Strecker α-氨基酸合成的Bucherer改良法(流程6)。在该路线中，使醛XXI与氰化物阴离子和碳酸铵反应，得到乙内酰脲XXII，将XXII水解为α-氨基酸XXIII。然后将该化合物还原为XXIV，并磺酰化得到需要的式XXV化合物。或者，可将中间体氨基酸XXIII先磺酰化得到XXVI，然后再将它还原为XXV。本领域技术人员可用标准方法将外消旋产物XXIII、XXV或XXVI拆分为需要的S对映体。
流程6 对于从其中R1＝H和R2＝CF3的仲醇系列中1，2-氨基醇衍生的磺酰胺(化合物XXVII)，设计了流程7所示的以醛IV(按流程1制备)为原料的制备方法。
流程7 当与以上醇中的磺酰胺连接的杂环为噻吩时，可通过将5-溴-噻吩衍生物XXVIII(流程1中得到)转化为5-三烷基锡-噻吩中间体XXIX，用碘化钠和氯胺T处理将该中间体转化为5-碘-噻吩(XXXI)、或用SELECTFLUOR试剂(Aldrich Chem Co.)处理转化为5-氟-噻吩类似物(XXX)，得到相应的5-碘和5-氟-噻吩衍生物(流程8)。
流程8 另一种制备由α-氨基酸衍生的手性纯N-磺酰基1，2-氨基醇的方法如流程9所示。该方法开始涉及由溴乙酰溴XI通过Horner-Emmons反应顺序形成Evans手性助剂的α，β-不饱和酰胺XXXIV。共轭加成有机铜酸盐和使得到的烯醇化阴离子质子化，得到XXXV，然后将它转化为相应的烯醇化物，然后用trisyl叠氮化物亲电胺化，得到关键的中间体XXXVI(J.Am.Chem.Soc.1096881-6883(1987))。然后将叠氮化物中间体XXXVI水解为α-叠氮基酸XXXVII，并还原为手性纯α-氨基酸XXXVIII，通过上述方法(例如流程2或3)可将该氨基酸转化为相应的N-磺酰基1，2-氨基醇。
流程9
最后，用流程10(J.Org.Chem.61440-441(1996))和11(J.Org.Chem.541055-1062(1989))中概括的Strecker α-氨基酸合成的不对称改变方法，也可制备手性N-磺酰基2-氨基醇XLIII的一种可能合成前体，即手性纯α-氨基酸XLI。
流程10
流程11 制备手性纯含三氟烷基或氟的式(I)杂环磺酰胺化合物的方法如流程12和13所示。流程12概括了形成合适氨基酯XLVII的文献描述方法[W.H.Vine等，J Med Chem.1981，241043-1047和R.Keese等，Synthesis，1996，695-696]。根据该文献和本文的论述，本领域技术人员将认识到依据需要的氨基酯，在步骤3可容易地选择另一种三氟甲基醛，这取决于R4’和R3’选择的取代基，在步骤4可容易地选择其它手性助剂，或在所示步骤中的任何步骤中使用其它试剂、取代基或其它反应条件。但是，如果R4’不等于R4’，那么在流程12的步骤3得到烯烃异构体混合物，该混合物在进入步骤4前需要分离。
流程12 在流程13中，过滤氨基酯XLVIII；发现在该步骤中无需文献中描述的必需重结晶。用DIBAL-H将中间体氨基酯XLVIII转化为N-苄基氨基醇。使N-苄基氨基醇XLIX在合适的催化剂存在下氢化，得到氨基醇L。过滤除去催化剂，然后浓缩溶液至固体。用BSA/三乙胺/DMAP(或其它合适的试剂，例如TMSCl/胺碱)和所需的杂环磺酰氯将氨基醇L磺酰化。猝灭反应(例如用盐酸/THF)以除去甲硅烷基醚基团，然后过滤(例如用SiO2塞)，用一定比例的乙酸乙酯/己烷使本发明手性纯含三氟甲基的式(I)杂环磺酰胺结晶。
流程13 除了用于制备本发明化合物，流程13方法还可容易地用于制备含三氟烷基包括三氟甲基和氟的化合物。更具体地说，该方法可用于制备其它含三氟烷基、三氟甲基或氟的磺酰胺，由具有至少一个手性中心和至少一个通过烷基与至少一个手性中心连接的三氟烷基或氟基、或至少一个与环烷基连接的氟基的氨基酯非对映体混合物制备。按照本文定义，烷基可直接连接一个或多个三氟烷基与手性中心。或者，三氟烷基可位于取代烷基的取代基上。
也可通过使仲醇V与氯铬酸吡啶鎓(PCC)或Dess Martin过碘烷试剂反应制备本发明化合物[D.B.Dess，J.C.Martin，J.Org.Chem.，484155(1983)]，得到相应的醛LI(流程14)。
流程14 制备三氟甲基化或氟化杂环磺酰胺化合物的另一种方法包括用脱水剂和手性亚磺酰胺处理三氟甲基化或氟化醛，形成三氟甲基化或氟化手性亚磺酰胺。本领域技术人员能够容易地确定用于该方法的合适脱水剂，包括但不限于乙醇钛、硫酸镁或分子筛例如4分子筛。然后用氰化剂处理三氟甲基化或氟化手性亚磺酰胺，分别形成三氟甲基化或氟化非对映体α-氨基腈。选择用于本发明的氰化剂在本领域技术人员的知识范围内，其中可包括乙基异丙氧基氰化铝。然后可分离三氟甲基化或氟化非对映体α-氨基腈，和任选用本领域技术人员已知的技术纯化。或者，可用本领域技术人员已知的技术和试剂将三氟甲基化或氟化非对映体α-氨基腈分别水解为三氟甲基化或氟化α-氨基酸。然后可将三氟甲基化或氟化α-氨基酸分别还原为三氟甲基化或氟化β-氨基醇。可使三氟甲基化或氟化β-氨基醇与杂环磺酰氯反应，形成相应的本发明三氟甲基化或氟化杂环磺酰胺。
在一个实施方案中，本发明涉及一种制备三氟甲基化或氟化杂环磺酰胺化合物的方法，该方法包括以下步骤(a)过滤氨基酯的非对映体混合物，所述氨基酯具有至少一个手性中心和至少一个通过烷基与至少一个手性中心连接的三氟甲基或氟基；(b)用DIBAL-H的甲苯溶液处理所述氨基酯，得到N-苄基氨基醇；(c)用催化剂氢化该N-苄基氨基醇，并得到氨基醇；(d)用杂环磺酰氯使(c)的氨基醇磺酰化；和(e)使(d)的磺酰化产物结晶，得到手性纯三氟甲基化或氟化杂环磺酰胺化合物。
在还再一个实施方案中，本发明涉及一种制备三氟甲基化或氟化杂环磺酰胺化合物的方法，该方法包括以下步骤(a)用脱水剂和手性亚磺酰胺处理三氟甲基化或氟化醛，形成三氟甲基化或氟化手性亚磺酰胺；(b)用氰化剂处理所述三氟甲基化或氟化手性亚磺酰亚胺(sulfinimide)，形成三氟甲基化或氟化非对映体α-氨基腈；(c)将所述三氟甲基化或氟化非对映体α-氨基腈水解为三氟甲基化α-氨基酸；(d)将所述三氟甲基化或氟化α-氨基酸还原为三氟甲基化或氟化β-氨基醇；和(e)使所述三氟甲基化或氟化β-氨基醇与杂环磺酰氯反应，形成所述三氟甲基化或氟化杂环磺酰胺。
使用方法式(I)化合物为β淀粉样蛋白生成抑制剂。在初步的研究中，使用蛋白酶特异性试验，示例性式(I)化合物表明对蛋白酶活性具有特异性抑制作用。因此，本发明化合物可用于治疗和预防其中调节β淀粉样蛋白水平可提供治疗作用的各种病症。其中这类病症包括例如淀粉样蛋白血管病、脑淀粉样蛋白血管病、系统性淀粉样变性、阿尔茨海默病(AD)、伴随Dutch型淀粉样变性的遗传性脑出血、包涵体肌炎、唐氏综合征、轻度认知缺损(MCI)。
另外，式(I)化合物可用于制备诊断与异常β淀粉样蛋白水平有关的病症的试剂。例如可用式(I)化合物制备抗体，其将用于各种诊断试验。制备单克隆、多克隆、重组体和合成抗体或其片断的方法为本领域技术人员所熟知。(见例如E.Mark和Padlin，"Humanization ofMonoclonal Antibodies"(单克隆抗体的人源化)，第4章，The Handbookof Experimental Pharmacology，第113卷，The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies，Springer-Verlag(1994年6月)；Kohler和Milstein及其许多已知的修改；PCT专利申请号PCT/GB85/00392；英国专利申请公布号GB2188638A；Amit等，Science，233747-753(1986)；Queen等，Proc.Nat′l.Acad.Sci.USA，8610029-10033(1989)；国际专利公布号WO 90/07861；和Riechmann等，Nature，332323-327(1988)；Huse等，Science，2461275-1281(1988))。或者，式(I)化合物本身可用于这类诊断试验。除了所选择的试剂(例如抗体或式(I)化合物)外，包括例如放射免疫测定和酶联免疫吸附测定(ELISAs)的合适诊断形式为本领域技术人员所熟知，并且不限于本发明的该实施方案。
用阻抑蛋白(Repressor)释放试验(RRA)测得许多本发明化合物的β淀粉样蛋白抑制活性。见下表5。在RRA中，如果在20μg/mL下，化合物致使萤光素酶活性增加至少1.5倍并且无毒性，那么可认为该化合物有活性。
另外，检测β淀粉样蛋白生成抑制剂的细胞、无细胞和体内筛选方法在本领域中为已知的。其中这类测定可包括放射免疫测定和酶联免疫吸附测定(ELISA)。见例如P.D.Mehta等，Techniques inDiagnostic Patho1ogy，第2卷，Bullock等编辑；Academic出版社，Boston，第99-112页(1991)；国际专利公布号WO 98/22493；欧洲专利号0652009；和美国专利号5,703,129和5,593,846。选择合适的体外或体内筛选试验并非对本发明限定。
药用制剂考虑到所选择的具体病症，本发明化合物可通过任何理想的途径给予患者。患者指任何合适的哺乳动物包括人、家畜(例如犬科和猫科动物)和牲畜，他们被认定患有一种或多种需要调节β淀粉样蛋白水平的病症或具有这些病症的风险。因此，本发明化合物可用于治疗和/或预防多种人和兽病症。本文中使用的“预防”包括预防患者的症状，这类患者确定已处于病症风险，但尚未诊断出该病症和/或患者尚未出现该病症的任何症状。
这些化合物可通过任何合适的释放途径释药或给药，其中例如经口、注射、吸入(包括口、鼻内和气管内)、静脉内、皮下、肌内、舌下、颅内、硬膜外、气管内、直肠、阴道。最理想地是经口、吸入或通过合适的肠胃外途径释放化合物。可将化合物和生理上相容的常规药用载体组合配制。可任选一种或多种本发明化合物与其它活性剂混合。
本领域技术人员可容易地选择合适的生理上相容的载体。例如其中合适的固体载体包括一种或多种物质，这些物质也可作为调味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、填充剂、助流剂、压缩助剂、粘合剂或片剂崩解剂或胶囊材料。在散剂中，载体为固体粉末，该载体与活性成分粉末一起混合。在片剂中，使活性成分与具有需要压缩特性的载体按合适的比例混合，然后压缩成需要的形状和尺寸。优选散剂和片剂含最高可达99％的活性成分。合适的固体载体包括例如磷酸钙或磷酸二钙、硬脂酸镁、滑石粉、淀粉、糖(包括例如乳糖和蔗糖)、纤维素(包括例如微晶纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠)、聚乙烯吡咯烷、低熔点蜡、离子交换树脂及高岭土。
液体载体可用于制备溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂和酏剂。可将本发明活性成分溶于或悬浮于药学上可接受的液体载体例如水、有机溶剂、两者的混合物或药学上可接受的油或脂肪。液体载体可含有其它合适的药用添加剂例如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、悬浮剂、增稠剂、粘度调节剂、稳定剂或渗透调节剂。用于经口和肠胃外给药的液体载体的合适实例包括水(尤其含有以上添加剂例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠溶液)、醇(包括一元醇和多元醇例如二醇)及它们的衍生物和油(例如分馏椰子油、落花生油、玉米油、花生油和芝麻油)。对于肠胃外给药，载体也可以为油酯例如油酸乙酯和豆蔻酸异丙基酯。无菌液体载体用于肠胃外给药的无菌液体形式组合物。
可任选通常在制备药用组合物中使用的添加剂包括在本发明组合物中。这类组分包括例如甜味剂或其它调味剂、着色剂、防腐剂和抗氧化剂例如维生素E、抗坏血酸、BHT和BHA。
为无菌溶液或混悬液的液体药用组合物可通过例如肌内、腹膜内或皮下注射使用。无菌溶液也可静脉内给药。经口给药可以为液体或固体组合物形式。
当制备吸入剂时，用本发明化合物和合适的药用媒介物按流体单位剂量制备药用组合物是合适的，以用于通过雾化喷雾泵、或通过吹入用干粉释放。作气雾剂使用时，将本发明化合物与气体或液化推进剂例如二氯二氟甲烷、二氧化碳、氮气、丙烷等一起配制并用加压气雾剂容器包装，以及通常组分例如助溶剂和湿润剂可能是必需或需要的。例如，本发明提供计量剂量释放用于经口或鼻内一次、两次或多次吸入。剂量适合按一次或两次释放。但是，可容易地确定其它合适的释放方法。
优选药用组合物为单位剂型例如片剂或胶囊剂。在这类剂型中，组合物以含合适量活性成分的单位剂量亚分；这类单位剂型可以为包装的组合物，例如包装的散剂、小瓶、安瓿、预灌装注射器或含液体的小药囊。单位剂型可以为例如胶囊或片剂本身，或其可以为包装形式的合适数量的任何这类组合物。
如本文所述，本发明化合物的治疗或预防有效量为化合物缓解疾病例如AD症状、或防止症状发作、或防止更严重症状发作的量。化合物的有效量可改变，这取决于制剂和释放的途径。例如经口释放的量比化合物配制成注射剂或吸入剂时要高，以便释放生物等效量的药物。本发明化合物的单个剂量(即每单位)为约1μg/kg至约10g/kg为合适。但是，因为与无三氟烷基或氟取代基的本发明类似化合物相比，本发明化合物具有提高的生物活性，可从较低区间合适选择这些剂量，例如约1μg/kg至约200mg/kg，更优选10μg/kg至约10mg/kg，且最优选约100μg/kg至约1mg/kg。理想地是以日为基础提供这些量。但是，用于治疗或预防具体的认知缺陷或其它病症的剂量可由主治医师决定。有关的变量包括具体的认知缺陷及患者的体重、年龄和反应类型。例如根据本发明化合物的活性曲线和效能，起使剂量为约375-500mg/日，然后日剂量逐渐增加至约1000mg/日，可为人提供需要的剂量水平。
或者，可能需要使用缓释装置，以便避免患者必须每天用药。“缓释”定义为延迟释放活性剂即本发明化合物，直至置于释放环境后，在以后的时间里持续释放药物。本领域技术人员知道合适的缓释装置。合适缓释装置的实例包括例如水凝胶(见例如美国专利号5,266,325；4,959,217；和5,292,515)、渗透泵例如其中Alza(美国专利号4,295,987和5,273,752)或Merck(欧洲专利号314,206)描述的渗透泵；疏水膜材料例如亚乙基异丁烯酸酯(ethylenemethacrylate)(EMA)和亚乙基乙烯基乙酸酯(EVA)；生物再吸收聚合物系统(见例如国际专利公布号WO 98/44964，Bioxid和Cellomeda；美国专利号5,756,127和5,854,388)；其它由例如聚酯、聚酐或乳酸/乙醇酸共聚物组成的生物再吸收植入装置已有描述(见例如美国专利号5,817,343(AlkermesInc.))。为用于这类缓释装置，可按本文描述方法配制本发明化合物。
在另一方面，本发明提供一种释放产品的药剂盒。该药剂盒适合含有含配制成用于需要释放途径的化合物的包装或容器。例如，如果该药剂盒设计为用于吸入给药，那么它可包含含有本发明化合物的混悬剂，本发明化合物配制成通过吸入气雾或喷雾释放预定剂量。药剂盒含给药说明和有关活性剂的植入为合适。任选药剂盒还含监测药品循环水平的说明和进行这类测定的材料包括例如试剂、孔板、容器、标志或标签等。这类药剂盒可按适用于治疗目标适应征的方式容易地包装。例如药剂盒也可含使用喷雾泵或其它释放装置的说明。
考虑到目标适应征和释放途径，其它适合这类药剂盒的组分对本领域技术人员而言为显而易见的。在预定的时间范围内或按处方要求，可按日、周或月重复剂量给药。
实施例提供以下实施例来举例说明本发明代表性化合物的制备及活性，并说明它们在筛选试验中的性能。本领域技术人员将认识到尽管在以下的实施例中概述了具体的试剂和条件，但是这些试剂和条件并不是对本发明的限定。
实施例15-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺A.方法11. 2-甲基-4，4，4-三氟丁醛在0℃下，向2-甲基-4，4，4-三氟-1-丁醇(7.5g，53mmol)的二氯甲烷(CH2Cl2)(125mL)溶液中加入Dess-Martin过碘烷(26.5g，63.3mmol)。加热该反应混合物至25℃，并搅拌20min。向混合物中加入乙醚(Et2O-200mL)，随后加入Na2S2O3(29.0g，185mmol的碳酸氢钠(NaHCO3)饱和水溶液(200mL)的溶液和水100mL。搅拌该乳白色混合物直至两相均匀。分离各相，然后有机萃取液用饱和NaHCO3水溶液(25mL)和1N Na2S2O3水溶液(25mL)洗涤，用硫酸镁(MgSO4)干燥。常压下蒸馏除去溶剂，得到2-甲基-4，4，4-三氟丁醛(6.5g，88％)。1H核磁共振(NMR)图谱与文献(J.Fluorine Chem.36163-170(1987)报告相符。
2. 5-(3，3，3-三氟-1-甲基丙基)咪唑烷-2，4-二酮向氰化纳(18.4g，375mmol)和碳酸铵(39.0g，500mmol)的H2O(450mL)溶液中加入2-甲基-4，4，4-三氟丁醛(17.5g，125mmol)的乙醇(450mL)溶液。加热反应混合物至90℃保持17h。冷却至25℃后，真空除去约500mL溶剂。加入浓盐酸酸化该混合物至pH约1至约2，形成沉淀。过滤混合物，然后用1N盐酸洗涤，得到5-(3，3，3-三氟-1-甲基丙基)咪唑烷-2，4-二酮白色固体(15.5g，59％)。
质谱(-ESI)309(M-H)-。
分析C7H9F3N2O2计算值 C，40.01；H，4.32；N，13.33。
实测值 C，39.91；H，4.10；N，13.20。
3. N-[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-5，5，5-三氟异亮氨酸将5-(3，3，3-三氟-1-甲基丙基)咪唑烷-2，4-二酮(15.54g，73.95mmol)溶于氢氧化钠(NaOH-11.83g，295.8mmol)水溶液150mL。在密闭容器中用微波加热该溶液1小时。(微波条件在约100％功率、150℃、50psi下15min，然后0％功率5min，然后在约100％功率、150℃、50psi下15min，然后重复该顺序)真空除去反应混合物中的水和氢氧化铵，得到的粗氨基酸和NaOH混合物用于下一步反应而无需进一步纯化。
将粗氨基酸和NaOH混合物溶于300mL水。将混合物在冰浴中冷却至约0℃。将5-氯噻吩-2-磺酰氯(17.6g，81mmol)溶于100mL四氢呋喃(THF)，然后在0.5h内，滴加入反应混合物中。1h后，使反应混合物逐渐升温至25℃并搅拌16h。真空除去THF，然后用1N盐酸酸化混合物至pH约1。约15min后，沉淀开始从乳白色混合物中析出。1h后，将混合物冷却至0℃保持1h，然后过滤。沉淀用1N盐酸洗涤，得到N-[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-5，5，5-三氟异亮氨酸白色固体(15.2g，56％)。
质谱(-ESI)364(M-H)-。
分析C10H11F3NO4S2计算值C，32.84；H，3.03；N，3.83。
实测值C，32.45；H，2.94；N，3.79。
4. 5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺在0℃下，向N-[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-5，5，5-三氟异亮氨酸(15.2g，41.6mmol)的THF(500mL)溶液中滴加1M硼烷四氢呋喃络合物的THF溶液(208mL，208mmol)。15min后，加热反应混合物至25℃并搅拌18h。然后用10％AcOH的MeOH溶液(100mL)缓慢猝灭。真空除去挥发物。然后将残余物溶于乙酸乙酯(EtOAc)(500mL)，用饱和NaHCO3水溶液(3×100mL)洗涤，用硫酸钠(Na2SO4)干燥，然后浓缩至白色固体(13.3g，91％收率)。非对映体用HPLC(Luna硅胶柱，3∶7 MTBE-己烷，非对映体1在10.9min洗脱出，非对映体2在15.3min洗脱出)分离。非对映体2用制备型手性SFC[chiralpak AD，异丙醇-二氧化碳3∶7，对映体1在4.5min洗脱出，且对映体2在5.6min洗脱出]拆分为纯对映体。
然后对映体1用EtOAc/庚烷1∶4重结晶，得到5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺，mp 136-137℃。D25＝+45.62°(c＝1％溶液，MeOH)。
质谱(-ESI)350(M-H)-。
分析C10H13CIF3NO3S2计算值 C，34.14；H，3.72；N，3.98。
实测值 C，34.12；H，3.45；N，3.88。
B.方法21.(4R)-4-苄基-3-(4，4，4-三氟丁酰基)-1，3-噁唑烷-2-酮在-78℃下，向4，4，4-三氟丁酸(10.00g，70.38mmol)的THF(150mL)溶液中加入三乙胺(10.3mL，73.9mmol)和新戊酰氯(9.1mL，74mmol)。使反应混合物升温至0℃，并搅拌1.5h。在10min内、-78℃下，在另一个烧瓶中将n-BuLi溶液(31mL，2.5M的己烷溶液，77mmol)加入(R)-(+)-4-苄基-2-噁唑烷酮(13.7g，77.4mmol)的THF(150mL)溶液中，然后搅拌该混合物1小时。
将混合酐稠浆状物冷却至-78℃，然后通过加料漏斗倾入锂化噁唑烷酮溶液。使该混合物逐步升温至25℃过夜。然后混合物用EtOAc(500mL)稀释，再用1N盐酸(500mL)、饱和NaHCO3水溶液(500mL)和饱和NaCl水溶液(500mL)洗涤，然后干燥(Na2SO4)，浓缩。快速层析(洗脱液EtOAc-己烷1∶4)得到无色油状(4R)-4-苄基-3-(4，4，4-三氟丁酰基)-1，3-嗯唑烷-2-酮(18.29g，86％)。D25＝-89.10°(c＝1％溶液，DMSO)。
质谱(-ESI)300(M-H)-。
分析C14H14F3NO3计算值 C，55.82；H，4.68；N，4.65。
实测值 C，56.03；H，4.67；N，4.62。
2.(4R)-4-苄基-3-[(2R)-4，4，4-三氟-2-甲基丁酰基]-1，3-噁唑烷-2-酮在-40℃下、15min内，向二(三甲基甲硅烷基)氨基化钠(57mL，1.0M的THF溶液，57mmol)的THF(250mL)溶液中滴加(4R)-4-苄基-3-(4，4，4-三氟丁酰基)-1，3-唿唑烷-2-酮(15.60g，51.78mmol)的THF(250mL)溶液。1h后，加入碘代甲烷(4.2mL，67mmol)。3h后，使反应混合物升温至-20℃保持约20min。混合物用饱和氯化铵(NH4Cl)水溶液(300mL)猝灭，然后用EtOAc(2×300mL)萃取，用Na2SO4干燥，然后浓缩。快速层析(洗脱液EtOAc-己烷1∶9)得到无色油状(4R)-4-苄基-3-[(2R)-4，4，4-三氟-2-甲基丁酰基]-1，3-噁唑烷-2-酮(12.04g，74％)。D25＝-98.68°(c＝1％溶液，DMSO)。
质谱(+EI)315(M+H)+。
分析C15H16F3NO3计算值 C，57.14；H，5.11；N，4.44。
实测值 C，57.18；H，5.24；N，4.38。
3.(2R)-4，4，4-三氟-2-甲基丁-1-醇在0℃下，向(4R)-4-苄基-3-[(2R)-4，4，4-三氟-2-甲基丁酰基]-1，3-噁唑烷-2-酮(12.9g，40.9mmol)和水(810μL，45.0mmol)的乙醚(200mL)溶液中滴加硼氢化锂(23mL，2.0M的THF溶液，45mmol)溶液。使该反应混合物升温至25℃，1h后，冷却至0℃，然后用1N NaOH水溶液(124mL)猝灭。使混合物升温至25℃并搅拌直至两层均匀。分离各层，然后有机萃取液用盐水洗涤，用MgSO4干燥，再浓缩。快速层析(洗脱液乙醚-petether 3∶7)得到无色油状(2R)-4，4，4-三氟-2-甲基丁-1-醇(5.05g，87％)。1H NMR与文献(J.Med Chem.371282-1297(1994))中发现的相同。
4.(S)-N-[(3R)-甲基-4，4，4-三氟-亚丁基]-对-甲苯亚磺酰胺在0℃下，向(2R)-4，4，4-三氟-2-甲基丁-1-醇(2.90g，20.4mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液中加入Dess-Martin过碘烷(10.24g，24.49mmol)。15min后，使反应混合物升温至25℃并搅拌1h。然后该混合物用乙醚(50mL)稀释，再加入到溶于饱和NaHCO3水溶液(100mL)的Na2S2O3(11.29g，71.44mmol)中。搅拌该乳白色混合物直至两层均匀。分离各相，然后干燥(MgSO4)有机萃取液，过滤，得到(2R)-4，4，4-三氟-2-甲基丁醛溶液，该产物用于下一步骤而无需除去溶剂。
向该粗醛溶液中加入乙醇钛(IV)(15mL，20％ Ti，82mmol)，随后加入(S)-㈩-甲苯亚磺酰胺(3.48g，22.4mmol)，加热溶液至回流保持3h。然后将混合物冷却至0℃，加入水(75mL)以沉淀钛盐。通过Celite试剂过滤悬浮液，滤饼用CH2Cl2洗涤。分离滤液层，水层用CH2Cl2萃取。合并的有机萃取液用Na2SO4干燥，然后浓缩。快速层析(洗脱液EtOAc-己烷1∶9)得到黄色油状(S)-N-[(3R)-甲基-4，4，4-三氟-亚丁基]-对-甲苯亚磺酰胺(3.03g，54％)。
质谱(-ESI)276(M-H)-。
5. N-[1S，2R)-1-氰基-4，4，4-三氟-2-甲基丁基]-4-甲基苯亚磺酰胺在0℃下，向氰化二乙基铝(16mL，1.0M的甲苯溶液，16mmol)的THF(40mL)溶液中加入异丙醇(i-PrOH)(840μl，11.0mmol)。15mim后，将该溶液在-78℃下加入(S)-N-[(3R)-甲基-4,4，4-三氟-亚丁基]-对-甲苯亚磺酰胺(3.03g，10.9mmol)的THF(60mL)溶液中。15min后，使反应混合物升温至25℃。1h后，薄层层析(TLC-EtOAc-己烷1∶9)表明原料反应完。使混合物冷却至-78℃，然后加入饱和氯化铵水溶液(100mL)。通过Celite试剂过滤得到的悬浮液，滤垫用EtOAc(100mL)洗涤。分离滤液层，然后水层用EtOAc萃取。合并的有机萃取液用Na2SO4干燥，然后浓缩。根据1H NMR，该粗混合物为非对映体的1∶3混合物，用乙醚/己烷沉淀，然后收集产物。通过对浓缩的滤液重复沉淀过程，又得到两批产物。得到单一非对映体N-[(1S，2R)-1-氰基-4，4，4-三氟-2-甲基丁基]-4-甲基苯亚磺酰胺(2.34g，70％)。D25＝+35.46°(c＝1％溶液，CHCl3)。
质谱(+ESI)305(M+H)+。
分析C13H15F3N2OS计算值 C，51.31；H，4.97；N，9.20。
实测值 C，51.16；H，4.96；N，9.08。
6. 5，5，5-三氟-L-别异亮氨酸盐酸盐将N-[(1S，2R)-1-氰基-4，4，4-三氟-2-甲基丁基]-4-甲基苯亚磺酰胺(2.34g，7.69mmol)的浓盐酸(75mL)悬浮液加热至回流保持18.5h。冷却至25℃后，反应混合物用乙醚洗涤几次。浓缩水层，得到5，5，5-三氟-L-别异亮氨酸、NH4Cl和甲苯磺酸的混合物(2.35g)。该粗氨基酸用于下一步骤而无需进一步纯化。质谱(-ESI)309(M-H)-。
7.(2S，3R)-2-氨基-5，5，5-三氟-3-甲基戊-1-醇在0℃下，向硼氢化锂(7.7mL，2.0N的THF溶液，15mmol)的THF(20mL)溶液中加入氯代三甲基硅烷(3.9mL，31mmol)。使反应混合物升温至25℃，30min后，滴加到0℃下的粗氨基酸盐酸盐(7.7mmol)的THF(60mL)悬浮液中。使混合物升温至25℃，21h后，用甲醇(MeOH)猝灭。真空除去挥发物，得到残余物，将它溶于约50mL1N NaOH水溶液，用氯仿(CHCl3)(4×75mL)萃取，干燥(Na2SO4)，然后浓缩至黄色油状(2S，3R)-2-氨基-5，5，5-三氟-3-甲基戊-1-醇(1.07g，81％)。质谱(+ESI)172(M+H)+。
8. 5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺在0℃下，向(2S，3R)-2-氨基-5，5，5-三氟-3-甲基戊-1-醇(1.07g，6.25mmol)和三乙胺(0.87mL，6.2mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中滴加5-氯噻吩-2-磺酰氯(1.34g，6.25mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液。使反应混合物升温至25℃并搅拌24h。然后用EtOAc(100mL)稀释，用0.1N盐酸(50mL)和盐水(50mL)洗涤。水层用EtOAc(50mL)萃取。合并的有机萃取液用Na2SO4干燥，然后浓缩。快速层析(洗脱液EtOAc-己烷3∶7)得到5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺(1.66g，75％)白色固体。重结晶(EtOAc-庚烷，1∶4)得到白色针状结晶(1.39g，84％回收率)，mp136-137℃。
分析C10H13ClF3NO3S2计算值 C，34.14；H，3.72；N，3.98。
实测值 C，34.24；H，3.97；N，3.87。
C.方法31.(4S)-4-苄基-3-(溴乙酰基)-1，3-噁唑烷-2-酮在-78℃下，向S-(-)-4-苄基-2-嗯唑烷酮(20.0g，112.86mmol)的THF(200mL)溶液中滴加nBuLi(2.5M的己烷溶液，47.4mL，118.51mmol)。在-78℃下搅拌该溶液30min，随后加入溴乙酰溴(25.0g，10.81mL，124.15mmol)。使溶液升温至25℃过夜(19h)。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应完成。用乙酸乙酯(200mL)稀释，然后有机层用饱和NaHCO3水溶液(2×50mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗棕色油(34g)。该粗产物通过快速层析(洗脱液EtOAc-己烷1∶4)纯化，得到无色油状(4S)-4-苄基-3-(溴乙酰基)-1，3-噁唑烷-2-酮(33.2g，98.6％)。
质谱(-ESI)297(M-H)-。
2. 2-[(4S)-4-苄基-2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基]-2-氧代乙基膦酸二甲酯将(4S)-4-苄基-3-(溴乙酰基)-1，3-噁唑烷-2-酮(33.0g，110.68mmol)和亚磷酸三乙酯(39.2mL，33.2mmol)于120℃加热18h。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应完成。冷却反应至25℃，用乙酸乙酯(200mL)稀释，然后有机层用饱和NaHCO3水溶液(2×50mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到黄色油状2-[(4S)-4-苄基-2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基]-2-氧代乙基膦酸二甲酯粗品(36g，99.3％)。质谱(-ESI)326(M-H)-。
3.(4S)-4-苄基-3-[(2E)-5，5，5-三氟戊-2-烯酰基]1，3-噁唑烷-2-酮在-78℃下，向2-[(4S)-4-苄基-2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基]-2-氧代乙基膦酸二甲酯(36g，109.97mmol)的THF(200mL)溶液中加入KHMDS(0.5M，242mL，120.97mmol)。在30min内，使该溶液升温至25℃，然后在-20℃下加入3，3，3-三氟丙醛(13.55g，120.97mmol)。使溶液升温至25℃过夜(19h)。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应完成。加入饱和NaHCO3水溶液(50mL)猝灭反应。水层用乙酸乙酯(3×100mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到浅棕色油(32.1g)。该粗产物通过快速层析纯化，洗脱液EtOAc-己烷1∶6，得到无色油状(4S)-4-苄基-3-[(2E)-5，5，5-三氟戊-2-烯酰基]1，3-嗯唑烷-2-酮(17.7g，55.1％)。
质谱(-ESI)312(M-H)-。
分析C15H14NF3O3计算值 C，57.51；H，4.50；N，4.47。
实测值 C，57.05；H，4.75；N，4.52。
4.(4S)-4-苄基-3-[(3S)-5，5，5-三氟-3-甲基戊酰基]-1，3-噁唑烷-2-酮将在THF(200mL)和甲硫醚(100mL)助溶剂中的溴化铜(I)-甲硫醚络合物(9.45g，45.96mmol)浆状物冷却至-40℃，然后在10min内，滴加甲基溴化镁(30.64mL，91.93mmol)。搅拌该浆状物40min，同时升温至-15℃。将微绿色浆状物冷却至-40℃，然后在-40℃下，滴加(4S)-4-苄基-3-[(2E)-5，5，5-三氟戊-2-烯酰基]1，3-噁唑烷-2-酮(12g，38.30mmol)的THF(15mL)溶液。使反应升温至25℃过夜(18h)。用饱和NH4Cl水溶液(20mL)猝灭反应。沉淀形成。过滤，母液用EtOAc(250mL)稀释，然后有机层用饱和氯化钠水溶液(NaCl-100mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗半固体。该粗半固体不溶于CH2Cl2、MeOH及EtOAc，部分溶于二甲亚砜(DMSO)。该粗产物用1N HCl(100mL)处理，然后水层用EtOAc(2×150mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到黄色油(12.1g)。该粗产物通过快速层析纯化，洗脱液EtOAc-己烷1∶4，得到无色油状(4S)-4-苄基-3-[(3S)-5，5，5-三氟-3-甲基戊酰基]-1，3-噁唑烷-2-酮(8.2g，67.8％)。
质谱(+ESI)330(M+H)+。
分析C16H18NF3O3计算值 C，58.36；H，5.51；N，4.25。
实测值 C，58.36；H，5.70；N，4.19。
5(S)-3-[(2S，3R)-2-叠氮基-5，5，5-三氟-3-甲基戊酰基]-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮将(4S)-4-苄基-3-[(3S)-5，5，5-三氟-3-甲基戊酰基]-1，3-噁唑烷-2-酮(8.2g，24.90mmol)的THF(100mL)溶液冷却至-78℃，然后在10min内滴加KHMDS(六甲基二硅氨基化(hexamethyldisilazane)钾-59.7mL，29.88mmol)。在-78℃下搅拌1h后，在10min内，通过插管加入预冷却(-78℃，50min)的2，4，6-三异丙基苯磺酰基叠氮化物溶液(10.1g，32.37mmol)。再过10min后，在-78℃下通过漏斗一次性加入冰醋酸(6.7mL，112.05mmol)。5min后，在-78℃下加入无水乙酸钾(9.77g，99.6mmol)。放下-78℃浴，然后使反应混合物升温至25℃过夜(19h)。反应混合物用EtOAc(200mL)稀释，有机相用饱和磷酸二氢钾水溶液(2×100mL)和饱和NaCl水溶液(100mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到黄色油(9.5g)。该粗产物通过快速层析纯化，洗脱液EtOAc-己烷1∶4，得到无色油状(S)-3-[(2S，3R)-2-叠氮基-5，5，5-三氟-3-甲基戊醇]-4-苄基-1，3-唿唑烷-2-酮(7.2g，73.7％)。
质谱(-ESI)342(M-N2)-。
6.(2S，3R)-2-叠氮基-5，5，5-三氟-3-甲基戊酸在氮气氛、0℃下，向(S)-3-[(2S，3R)-2-叠氮基-5，5，5-三氟-3-甲基戊醇]-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮(7.2g，19.44mmol)的THF∶H2O(3∶1，120mL)溶液中加入氢氧化锂(LiOH)一氢化物(1.63g，38.88mmol)。通过TLC(EtOAc/Hex 1∶2)监测反应。3h后，加入固体NaHCO3(6.0g)。浆状物用饱和NaHCO3水溶液(20mL)和H2O(40mL)稀释，然后用EtOAc(3×100mL)萃取。有机层用饱和NaHCO3水溶液(20mL)萃取。弃去含手性助剂的EtOAc层。将合并的NaHCO3层酸化至pH小于2。酸化的水层用EtOAc(3×100mL)萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到黄色油状(2S，3R)-2-叠氮基-5，5，5-三氟-3-甲基戊酸(3.2g，98％)。
质谱(-ESI)183(M-N2)-。
7. 5，5，5-三氟-L-别异亮氨酸在氢气氛(40psi)下，将(2S，3R)-2-叠氮基-5，5，5-三氟-3-甲基戊酸(3.2g，17.27mmol)、10％披钯碳(0.79g)、冰醋酸(37mL)和水(90mL)置于Parr氢化器上振摇。20h后，反应混合物通过经H2O(20mL)充分冲洗的Celite试剂垫过滤。减压浓缩滤液，得到白色固体。固体用EtOAc(200mL)研磨，过滤，然后用EtOAc(200mL)再洗涤一次，然后风干，得到5，5，5-三氟-L-别异亮氨酸白色固体(2.7g，96％)。质谱(-ESI)184(M-H)-。
分析C6H10NF3O2+0.12HCl计算值C，38.13；H，5.50；N，6.94。
实测值C，38.03；H，5.38；N，7.39。
8.(2S，3R)-2-氨基-5，5，5-三氟-3-甲基戊-1-醇在0℃下、30min内，向搅拌下的硼氢化锂(14.5mL，2M THF溶液，29mmol)溶液中滴加氯代三甲基硅烷(7.38mL，58mmol)。撤去冰浴，然后在25℃下搅拌得到的浆状物30min。将反应混合物冷却至0℃，然后在15min内分批加入5，5，5-三氟-L-别异亮氨酸(2.7g，16.98mmol)固体。随着冰浴融化，使反应混合物缓慢升温至25℃。在25℃下3天后，将反应混合物冷却至0℃，然后在30min内小心加入甲醇(22mL)。在25℃下，再搅拌溶液40min，然后在60℃水浴中减压浓缩。用20％氢氧化钠(10mL)使得到的浆状物变为碱性。加入水(10mL)，然后全部水层用二氯甲烷(100mL)萃取，经MgSO4干燥。过滤有机相，然后蒸发，得到油状(2S，3R)-2-氨基-5，5，5-三氟-3-甲基戊-1-醇粗品(2.6g，89.6％)。
质谱(-ESI)170(M-H)-。
9. 5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺向搅拌下的冷却至0℃的(2S，3R)-2-氨基-5，5，5-三氟-3-甲基戊-1-醇(2.6g，15.18mmol)、三乙胺(4.2mL，30.38mmol)和二氯甲烷(50mL)溶液中滴加5-氯噻吩-2-磺酰氯(4.8g，18.22mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液。15min后，撤去冰浴，然后使反应达到25℃过夜。将其倾入饱和碳酸氢钠溶液(25mL)和另外的二氯甲烷(150mL)来猝灭反应。分离有机相，然后依次用1N HCl溶液、H2O、盐水洗涤，经MgSO4干燥。过滤有机相，然后蒸发，得到粗油(6.1g)，通过使用乙酸乙酯-己烷，1-6为洗脱液的快速层析纯化。由此得到标题化合物5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺白色无定形固体(5.15g，96.4％)。该产物含有杂质。使该白色无定形固体通过EtOAc-庚烷1∶4重结晶进一步纯化。将溶剂混合物加入5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺中，加热，得到溶液，使其冷却至25℃保持3h，然后在0℃下贮存19小时。过滤白色固体结晶沉淀，然后用冰冻庚烷洗涤，得到白色结晶固体(2.7g，40.9％)。该重结晶物质中仍然含有杂质。使该白色固体(2.7g)通过制备型手性HPLC[SFC；AD，25×0.46cm；流动相，己烷-i-PrOH 8∶2(1mL/min)]进一步纯化，得到5-氯-N-[(1S,2R)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺白色结晶固体，mp132-133℃(0.93g，14.1％，手性纯度100％，分析纯度100％。
质谱(-ESI)350(M-H)-。
分析C10H13ClF3NO3S2计算值 C，34.14；H，3.72；N，3.98。
实测值 C，34.44；H，3.70；N，3.74。
在该实施例化合物与无三氟甲基、C-2中心立体化学不同但其它相同的类似化合物的对比研究中，在I期大鼠肝脏微粒体代谢试验中，该实施例化合物证明代谢稳定性显著较长(～193min对12.7min半衰期)。
在该实施例化合物与相应的无三氟甲基类似物的对比研究中，在大鼠(14min对2min半衰期)、小鼠(10min对2min半衰期)、人(22min对13min半衰期)和狗(31min对4min)的1和2期肝脏微粒体代谢试验中，该实施例化合物证明代谢稳定性显著较长。
因此，本发明化合物停留在循环的时间周期比其相应的无-CF3类似物更长，增加其生物利用度。
实施例25-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺A.方法11.(4S)-4-苄基-3-[(3S)-3-乙基-5，5，5-三氟戊酰基]-1，3-噁唑烷-2-酮将在THF(20mL)和甲硫醚(10mL)助溶剂中的溴化铜(I)-甲硫醚络合物(1.26g，6.13mmol)浆状物冷却至-40℃，然后在10min内，滴加乙基溴化镁(3M的乙醚溶液，4.08mL，12.26mmol)。搅拌该浆状物40min，同时升温至-15℃。将微绿色浆状物冷却至-40℃，然后在-40℃下，滴加(4S)-4-苄基-3-[(2E)-5，5，5-三氟戊-2-烯酰基]1，3-噁唑烷-2-酮(按实施例1方法3，第C部分制备)(1.6g，5.10mmol)的THF(5mL)溶液。使反应物升温至25℃过夜(18h)。用饱和NH4Cl水溶液(20mL)猝灭反应。滤除形成的沉淀，母液用EtOAc(250mL)稀释，然后有机萃取液用饱和NaCl水溶液(100mL)洗涤。有机萃取液经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到半固体粗品。该半固体粗品不溶于CH2Cl2、MeOH或EtOAc，但部分溶于DMSO。该粗产物用1N HCl(100mL)处理，然后水溶液用EtOAc(2×150mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到黄色油(1.41g)。该粗产物通过快速层析纯化，洗脱液EtOAc-己烷1∶4，得到无色油状(4S)-4-苄基-3-[(3S)-3-乙基-5，5，5-三氟戊酰基]-1，3-噁唑烷-2-酮(0.96g，55％)。
质谱(+ESI)344(M+H)+。
分析C17H20NF3O3计算值 C，59.47；H，5.87；N，4.08。
实测值C，59.58；H，5.91；N，4.03。
2.(S)-3-[(2S，3R)-2-叠氮基-3-乙基-5，5，5-三氟戊醇]-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮在10min内，向冷却至-78℃的(4S)-4-苄基-3-[(3S)-3-乙基-5，5，5-三氟戊酰基]-1，3-噁唑烷-2-酮(0.9g，2.62mmol)的THF(10mL)溶液中滴加KHMDS(0.5M的甲苯溶液，6.3mL，3.14mmol)。在-78℃下搅拌1h后，在10min内，通过导管加入预冷却(-78℃，50min)的2，4，6-三异丙基苯磺酰基叠氮化物(1.04g，3.38mmol)的THF(20mL)溶液。在-78℃下，再过10min后，通过漏斗一次性加入冰醋酸(0.7mL，11.79mmol)。5min后，在-78℃下加入无水乙酸钾(1.07g，10.48mmol)。放下-78℃浴，然后使反应混合物升温至25℃过夜(19h)。反应混合物用EtOAc(200mL)稀释，用饱和磷酸二氢钾水溶液(2×100mL)和饱和NaCl水溶液(100mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到黄色油(1.09g)。该粗产物通过快速层析纯化，洗脱液1∶4EtOAc-己烷，得到无色油状(S)-3-[(2S，3R)-2-叠氮基-3-乙基-5，5，5-三氟戊醇]-4-苄基-1，3-唿唑烷-2-酮(0.587g，59％)。
质谱(-ESI)357(M-N2)-。
3.(2S，3R)-2-叠氮基-3-乙基-5，5，5-三氟戊酸在氮气氛、0℃下，向(S)-3-[(2S，3R)-2-叠氮基-3-乙基-5，5，5-三氟戊醇]-4-苄基-1，3-嗯唑烷-2-酮(287mg，0.746mmol)的THF∶H2O(3∶1，4mL)溶液中加入LiOH一水合物(62.66mg，1.49mmol)。通过TLC(EtOAc/Hex 1∶2)监测反应，3h后，加入固体NaHCO3(1.0g)。浆状物用饱和NaHCO3水溶液(2mL)和H2O(4mL)稀释，然后用EtOAc(3×50mL)萃取。有机层用饱和NaHCO3水溶液(10mL)萃取。EtOAc层含手性助剂，弃去。将合并的水萃取液酸化至pH小于2，用EtOAc(3×50mL)萃取，经MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到黄色油状(2S，3R)-2-叠氮基-3-乙基-5，5，5-三氟戊酸(130mg，94％)。
质谱(-ESI)197(M-N2)-。
4.(2S，3R)-2-氨基-3-乙基-5，5，5-三氟戊-1-醇在5min内，0℃下向灰色氢化铝锂(LAH-110.6mg，2.91mmol)的THF(2mL)浆状物中滴加(2S，3R)-2-叠氮基-3-乙基-5，5，5-三氟戊酸(130mg，583mmol)。使得到的浆状物升温至25℃保持19h。0℃下依次加入H2O(0.5mL)、1N NaOH(1.5mL)和H2O(0.5mL)猝灭反应。5h后，滤除形成的白色沉淀，有机溶剂经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到油状(2S，3R)-2-氨基-3-乙基-5，5，5-三氟戊-1-醇粗品(120mg，96％)。质谱(+ESI)186(M+H)+。
5. 5-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺向搅拌下的冷却至0℃的(2S，3R)-2-氨基-3-乙基-5，5，5-三氟戊-1-醇(120mg，0.701mmol)、三乙胺(0.1mL，1.4mmol)和二氯甲烷(50mL)溶液中滴加5-氯噻吩-2-磺酰氯(220mg，0.841mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液。15min后，撤去冰浴，然后使反应达到25℃过夜。再加入二氯甲烷(15mL)，然后将反应混合物倾入饱和碳酸氢钠溶液(25mL)中。分离有机相，然后依次用1N HCl溶液、H2O、盐水洗涤，经MgSO4干燥。过滤有机相，然后蒸发，得到粗油(0.36g)，通过快速层析纯化，使用乙酸乙酯-己烷，1-4的洗脱液。由此得到油状标题化合物5-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺(125mg，53％)。该油(125mg)通过制备型手性HPLC[SFC；AD，25×0.46cm；流动相，己烷-ipa 8∶2(1mL/min)]进一步纯化，得到5-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺白色结晶固体(0.15mg，6.4％，手性纯度100％，分析纯度100％)。
质谱(-ESI)364(M-H)-。
分析C11H15NClF3O3S2+0.24C4H8O2计算值C，37.50；H，4.08；N，3.73。
实测值C，37.12；H，4.41；N，3.62。
B.方法21. 2-乙基-4，4，4-三氟丁酸在氮气、0℃下，搅拌二异丙基胺(17.1g，169mmol)的THF(180mL)溶液。在15min内滴加正丁基锂(n-BuLi-67.6mL，2.5M的己烷溶液)，然后在0℃下搅拌得到的溶液0.5h。然后，将反应冷却至-78℃，在0.5h内，滴加4，4，4-三氟丁酸(10.0g，70.4mmol)的THF(20mL)溶液。在-78℃下，再搅拌得到的溶液0.5h。然后，在15min内滴加碘乙烷(6.19mL，77.4mmol)。在-78℃下，搅拌得到的溶液15min，然后升温至25℃保持24h。然后，通过缓慢加入H2O(～20mL)猝灭反应混合物。浓缩后，用2N盐酸酸化残余物至pH1，然后用Et2O(400mL)萃取。然后有机层用MgSO4干燥。浓缩后，得到的残余物在下一步反应中直接使用，无需进一步纯化。
2. 2-乙基-4，4，4-三氟丁醇在氮气、0℃下，搅拌LAH(2.74g，72.3mmol)的Et2O(230mL)溶液。滴加2-乙基-4，4，4-三氟丁酸(12.3g，72.3mmol)的Et2O(20mL)溶液，然后在0℃下搅拌该溶液15min，然后在25℃下搅拌2h。然后，在有效搅拌下，滴加H2O(2.74mL)、15％NaOH(2.74mL)和H2O(8.22mL)猝灭该溶液。加入固体Na2SO4干燥溶剂，然后搅拌得到的混合物1h。过滤得到的浆状物，滤饼然后用过量Et2O洗涤。浓缩后，粗产物经Biotage FlashTM40色谱仪纯化，洗脱液∶Et2O∶PE 20∶80至30∶70，得到油状2-乙基-4，4，4-三氟丁醇(6.18g，55％两步收率)。
3. 2-乙基-4，4，4-三氟丁醛在氮气、0℃下，搅拌2-乙基-4，4，4-三氟丁醇(6.18g，39.6mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液。一次性加入Dess-Martin过碘烷试剂(20.16g，47.5mmol)，然后在0℃下搅拌该溶液1h。在25℃下再搅拌5h后，通过NMR确认反应完成。溶液用Et2O(100mL)稀释，然后向溶液中加入Na2S2O3(55g)的饱和NaHCO3水溶液(100mL)。搅拌得到的混合物0.5h。分离各液层，有机层再用饱和NaHCO3水溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥。用Vigreux柱蒸馏除去大多数溶剂(在约50℃至约55℃下加热烧瓶，头部温度约等于38℃)。在反应烧瓶中得到的残余物在下一步反应中直接使用，无需进一步纯化(醛的挥发性极强)。
4. 5-(1-乙基-3，3，3-三氟丙基)-咪唑烷-2，4-二酮在0℃下，搅拌粗2-乙基-4，4，4-三氟丁醛(6.10g，39.6mmol)的H2O(100mL)溶液。向该溶液中加入氰化纳(5.82g，119mmol)、碳酸铵(15.2g，158mmol)和EtOH(100mL)。加热该反应混合物至90℃保持3天。冷却至25℃后浓缩，用浓HCl酸化得到的残余物至pH约1至约2。过滤形成的固体，用2N HCl和过量H2O洗涤，然后在真空泵下干燥过夜，得到5-(1-乙基-3，3，3-三氟丙基)-咪唑烷-2，4-二酮(2.74g，31％两步收率)。质谱(+ESI)225(M+H)+和(-ESI)223(M-H)-5. 2-[(5′-氯-2′-噻吩基)磺酰氨基-3-乙基-5，5，5-三氟戊酸在密闭容器中，用微波加热5-(1-乙基-3，3，3-三氟丙基)-咪唑烷-2，4-二-酮(1.76g，7.85mmol)的NaOH(1.26g，31.4mmol)水溶液20mL0.5h(微波条件在约100％功率、150℃、50psi下15min；然后0％功率5min；然后在约100％功率、150℃、50psi下15min)。冷却至25℃后，真空除去反应混合物中的水和氨，然后将得到的粗氨基酸钠盐混合物溶于H2O(15mL)。在0℃下，向该溶液加入THF(25mL)，随后滴加5-氯-噻吩-2-磺酰氯(1.87g，8.64mmol)的THF(5mL)溶液。在25℃下18h后，浓缩反应物，然后用2N盐酸酸化残余物至pH1。水层用Et2O(2×100mL)萃取，得到的有机层然后用盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥。浓缩后，粗残余物用EtOAc:己烷重结晶，除去副产物。浓缩滤液，得到固体产物(1.31g，44％)。质谱(+ESI)380(M+H)+和(-ESI)378(M-H)-6. 5′-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基，4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2′-磺酰胺在氮气、25℃下，搅拌2-[(5′-氯-2′-噻吩基)磺酰氨基]-3-乙基-5，5，5-三氟戊酸(2.19g，5.77mmol)的THF(60mL)溶液。滴加硼烷·THF络合物(23.1mL，1.0M的THF溶液)，然后在25℃下，搅拌得到的溶液18h。然后，通过TLC(MeOH∶CHCl310∶90)确认反应完成。缓慢加入10％乙酸(HOAc)的MeOH(80mL)溶液猝灭反应混合物。浓缩后，使残余物溶于EtOAc(200mL)，然后用饱和NaHCO3水溶液(3×20mL)和盐水(20mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥。浓缩后，通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化粗产物(2.20g)，洗脱液∶20∶80至30∶70 EtOAc∶PE，得到两对外消旋混合物中的一对(0.623g)。然后该化合物用手性HPLC条件(ChiralcelTMAD柱；25×2.2cm，254nm，进样0.5mL；流动相25mL/min 12％ MeCN/己烷；第一个峰为产物，Rf＝6.7，纯度＞99.9％)进一步纯化，得到对映体纯5′-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基，4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2′-磺酰胺白色固体，mp128-129℃(0.238g，相关具体对映体的收率45％)。
质谱(-ESI)364(M-H)-分析C11H15ClF3NO3S2计算值 C，36.12；H，4.13；N，3.83。
实测值 C，36.22；H，4.20；N，3.78。
实施例35′-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基，4，4，4-三氟-1-(1-羟基乙基)丁基]噻吩-2′-磺酰胺A. 5′-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基，4，4，4-三氟-1-(甲酰基)丁基]噻吩-2′-磺酰胺在氮气、0℃下，搅拌5′-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基，4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2′-磺酰胺(按实施例2制备，0.100g，0.273mmol)的CH2Cl2(4mL)溶液。一次性加入Dess-Martin过碘烷试剂(0.151g，0.355mmol)，然后在0℃下，搅拌该溶液1h。在25℃下再搅拌1h后，通过TLC(EtOAc∶PE 30∶70)确认反应完成。溶液用Et2O(50mL)稀释，然后向溶液中加入Na2S2O3(0.363g)的饱和NaHCO3水溶液(10mL)。搅拌得到的混合物0.5h。分离各液层，有机层再用饱和NaHCO3水溶液(5mL)和盐水(5mL)洗涤，然后干燥(Na2SO4)。浓缩后，粗产物通过制备板层析纯化，洗脱液∶EtOAc∶PE 30∶70，得到5′-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基，4，4，4-三氟-1-(甲酰基)丁基]噻吩-2′-磺酰胺固体(0.036g，36％)。
B. 5′-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基，4，4，4-三氟-1-(1-羟乙基)丁基]噻吩-2′-磺酰胺在氮气、0℃下，搅拌5′-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基，4，4，4-三氟-1-(甲酰基)丁基]噻吩-2′-磺酰胺(0.035g，0.0962mmol)的THF(3mL)溶液。滴加入甲基溴化镁(0.206mL，1.4M的甲苯∶THF溶液)，然后在25℃下搅拌得到的溶液1h。然后，通过TLC(EtOAc∶PE 30∶70)确认反应完成。溶液用饱和NH4Cl水溶液(2mL)猝灭，然后用Et2O(20mL)萃取。有机层用盐水(3mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥。浓缩后，粗产物通过制备板层析纯化，洗脱液∶EtOAc∶PE 30∶70，得到5′-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基，4，4，4-三氟-1-(1-羟乙基)丁基]噻吩-2′-磺酰胺灰白色固体(0.027g，73％)。
质谱(-ESI)378(M-H)-。
分析C12H17ClF3NO3S2计算值 C，37.94；H，4.51；N，3.69。
实测值 C，38.35；H，4.32；N，3.29。
实施例45′-氯-N-[3，3,3-三氟-2-(三氟甲基)-1-(羟甲基)丙基]噻吩-2′-磺酰胺A. 3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-(羟甲基)丙胺在氮气、25℃下，搅拌4，4，4，4′，4′，4′-六氟-DL-缬氨酸(0.500g，2.22mmol)的THF(20mL)溶液。滴加入硼烷·THF络合物(6.66mL，1.0M的THF溶液)，在25℃下搅拌得到的溶液4h。然后，通过TLC(EtOAc∶EtOH∶H2O 10∶2∶1)确认反应完成。缓慢加入10％HOAc的MeOH(23mL)溶液猝灭反应混合物。浓缩后，使残余物溶于Et2O(200mL)，然后用饱和NaHCO3水溶液(3×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥。浓缩后，得到的残余物在下一步反应中直接使用，无需进一步纯化。
B. 5′-氯-N-[3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-(羟甲基)丙基]噻吩-2′-磺酰胺在氮气、0℃下，搅拌3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-(羟甲基)丙胺(0.400g，1.89mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液。滴加入三乙胺(Et3N-0.369mL，2.65mmol)，然后一次性加入5-氯-噻吩-2-磺酰氯(0.492g，2.27mmol)，然后在25℃下搅拌得到的溶液18h。然后，通过TLC(EtOAc∶PE 30∶70)确认反应完成。用MeOH猝灭后，浓缩，使残余物溶于Et2O(200mL)，然后用1N盐酸(20mL)、饱和NaHCO3水溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)。浓缩后，粗产物通过BiotageFlashTM40色谱系统纯化，洗脱液10∶90至30∶70 EtOAc∶PE，得到5′-氯-N-[3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-(羟甲基)丙基]噻吩-2′-磺酰胺灰白色固体(0.108g，两步收率14％，外消旋混合物)。
质谱(-ESI)390(M-H)-。
分析C9H8ClF6NO3S2计算值 C，27.59；H，2.06；N，3.58；实测值 C，28.24；H，1.90；N，3.48。
实施例55′-氯-N-[3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-S-(羟甲基)丙基]噻吩-2′-磺酰胺A. 2-氨基-3-(三氟甲基)-4，4，4-三氟丁酸甲酯在氮气、0℃下，搅拌4，4，4，4′，4′，4′-六氟-DL-缬氨酸(2.00g，8.89mmol)的CH2Cl2∶MeOH(4∶1，50mL)溶液。滴加入四甲基硅烷(TMS)重氮甲烷(5.33mL，2.0M的己烷溶液)，然后在25℃下，搅拌得到的溶液3h。然后，通过TLC(10％MeOH∶氯仿)确认反应完成。浓缩后，得到的残余物(1.34g，63％)在下一步反应中直接使用，无需进一步纯化。
B. 2-[(5′-氯-2′-噻吩基)磺酰氨基]-3-三氟甲基-4，4，4-三氟丁酸甲酯在氮气、25℃下，搅拌2-氨基-3-(三氟甲基)-4，4，4-三氟丁酸甲酯(1.34g，5.60mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液。滴加入吡啶(10mL，126mmol)，随后一次性加入5-氯-噻吩-2-磺酰氯(1.82g，8.40mmol)，然后在25℃下，搅拌得到的溶液72h。然后，通过TLC(EtOAc∶PE 20∶80)确认反应完成。用H2O猝灭后，混合物用Et2O(200mL)稀释。有机层用1N盐酸(20mL)、饱和NaHCO3水溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)。浓缩后，通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化粗产物，洗脱液5∶95至25∶75 EtOAc∶PE，得到2-[(5′-氯-2′-噻吩基)磺酰基氨基]-3-三氟甲基-4，4，4-三氟丁酸甲酯固体(1.61g，69％)。质谱(-ESI)418(M-H)-。
C. 5′-氯-N-[3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-S-(羟甲基)丙基]噻吩-2′-磺酰胺在氮气、0℃下，搅拌LAH(0.146g，3.84mmol)的Et2O(17mL)浆状物。向该混合物中滴加2-[(5′-氯-2′-噻吩基)磺酰基氨基]-3-三氟甲基-4，4，4-三氟丁酸甲酯(1.61g，3.84mmol)的Et2O(3mL)溶液。在此温度下搅拌0.25h后，通过TLC(EtOAc∶PE 30∶70)确认反应完成。滴加H2O(0.146mL)、15％NaOH水溶液(0.146mL)和H2O(0.438mL)猝灭该混合物(有效搅拌下)，然后在25℃下，再搅拌2h。干燥(Na2SO4)得到的浆状物，然后过滤。浓缩后，通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化粗产物，洗脱液5∶95至40∶60 EtOAc∶PE，得到5′-氯-N-[3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-(羟甲基)丙基]-噻吩-2′磺酰胺固体(0.590g，39％，外消旋混合物)。然后用手性HPLC[ChiralpakAS柱；2×25cm，254nm，0.5mL进样；流动相15mL/min 8％IPA的己烷溶液/0.1％TFA(预混)；第二峰为产物，Rf＝12.3，98.5％纯度]分离出活性对映体5′-氯-N-[3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-S-(羟甲基)丙基]噻吩-2′-磺酰胺(0.185g)灰白色固体(mp 148-150℃)。
质谱(-ESI)389.9(M-H)-。
分析C9H8ClF6NO3S2计算值C，27.59；H，2.06；N，3.58；实测值 C，27.76；H，1.96；N，3.47。
在该实施例化合物与无三氟甲基但其它相同的类似化合物间的对比研究中，在细胞试验中，证明该实施例化合物具有显著的较高效能(约72至约133倍)，并且具有显著较长的代谢稳定性(在转基因小鼠(Tg2576)肝微粒体代谢试验中，半衰期为46min对10min)。因此与无三氟甲基的相应化合物相比，本发明化合物可以较低剂量使用。
实施例65-氯-N-[(1R，2S)-2-乙基-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺A.(4R)-4-苄基-3-(溴乙酰基)-1，3-噁唑烷-2-酮在-78℃下，向R-(-)-4-苄基-2-噁唑烷酮(15.0g，84.65mmol)的THF(200mL)溶液中滴加nBuLi(2.5M的己烷溶液，34mL，84.65mmol)。在-78℃下，搅拌该溶液30min，然后加入溴乙酰溴(18.65g，7.8mL，124.15mmol)。使溶液升温至25℃过夜(19h)。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应完成。将其用乙酸乙酯(200mL)稀释，然后有机层用饱和NaHCO3水溶液(2×50mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗棕色油(24.6g)。该粗产物通过快速层析纯化，洗脱液EtOAc-己烷1∶4，得到无色油状(4R)-4-苄基-3-(溴乙酰基)-1，3-噁唑烷-2-酮(19.9g，79.6％)。
质谱(+ESI)300，299(M+H)+。
B. 2-[(4R)-4-苄基-2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基]-2-氧代乙基膦酸二乙酯在120℃下，加热(4R)-4-苄基-3-(溴乙酰基)-1，3-噁唑烷-2-酮(19.7g，66.07mmol)和亚磷酸三乙酯(33.99mL，198.2mmol)18h。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应完成。将反应冷却至25℃，用乙酸乙酯(200mL)稀释。有机层用饱和NaHCO3水溶液(2×50mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗黄色油状2-[(4R)-4-苄基-2-氧代-1，3-嗯唑烷-3-基]-2-氧代乙基膦酸二乙酯(14.27g，60.77％)。质谱(-ESI)326(M-H)-。
C.(4R)-4-苄基-3-[(2E)-5，5，5-三氟戊-2-烯酰基]1，3-噁唑烷-2-酮在-78℃下，向2-[(4R)-4-苄基-2-氧代-1，3-唿唑烷-3-基]-2-氧代乙基膦酸二乙酯(14.27g，40.17mmol)的THF(200mL)溶液中加入KHMDS(0.5M，88mL，44.63mmol)。在30min内，使该溶液升温至25℃，然后在-20℃下，加入3，3，3-三氟丙醛(5.0g，44.63mmol)。使溶液升温至25℃过夜(19h)。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应完成。加入饱和NaHCO3水溶液(50mL)猝灭反应。水层用乙酸乙酯(3×100mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到浅棕色油(32.1g)。粗产物通过快速层析纯化，洗脱液EtOAc-己烷1∶6，得到无色油状(4R)-4-苄基-3-[(2E)-5，5，5-三氟戊-2-烯酰基]-1，3-噁唑烷-2-酮(3.7g，29.4％)。
质谱(+ESI)314(M+H)+。
分析C15H14NF3O3+0.25H2O计算值C，56.70；H，4.60；N，4.41，实测值C，56.44；H，4.49；N，4.41。
D.(4R)-4-苄基-3-[(2R，3S)-2-溴-3-乙基-5，5，5-三氟戊酰基]-1，3-噁唑烷-2-酮将在THF(20mL)和甲硫醚助溶剂(10mL)中的溴化铜(I)-甲硫醚络合物(1.57g，7.66mmol)浆状物冷却至-40℃，然后在10min内滴加入乙基溴化镁(5mL，15.3mmol)。搅拌该浆状物40min，同时升温至-15℃。将带绿色的浆状物冷却至-40℃，然后在-40℃下，滴加入(4R)-4-苄基-3-[(2E)-5，5，5-三氟戊-2-烯酰基]1，3-噁唑烷-2-酮(2g，6.38mmol)的THF(5mL)溶液。使反应升温至25℃过夜(20h)。将黑色浆状物冷却至-78℃，然后分批加入N-溴代琥珀酰亚胺(2.3g 12.76mmol)。使其升温至-40℃，然后再搅拌30min。然后，黑色浆状物变为微绿色至蓝色。形成沉淀，然后滤除。母液用EtOAc(150mL)稀释，有机层用饱和NaCl(50mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到(4R)-4-苄基-3-[(2R,3S)-2-溴-3-乙基-5，5，5-三氟戊酰基]-1，3-嗯唑烷-2-酮绿色半固体(1.6g，59.5％)。
质谱(-ESI)421，420(M-H)-。
E.(4R)-3-[(2S，3S)-2-叠氮基-3-乙基-5，5，5-三氟戊酰基]-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮向(4R)-4-苄基-3-[(2R，3S)-2-溴-3-乙基-5，5，5-三氟戊酰基]-1，3-嗯唑烷-2-酮(1.6g，3.79mmol)的DMF(20mL)溶液中加入叠氮化钠(0.468g，7.199mmol)。在25℃下，搅拌该浆状物20h，然后真空除去溶剂。将粗产物溶于EtOAc(100mL)，然后有机相用H2O(3×20mL)和饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到黄色油(1.4g)。粗产物通过快速层析纯化，洗脱液EtOAc-己烷1∶4，得到无色油状(4R)-3-[(2S，3S)-2-叠氮基-3-乙基-5，5，5-三氟戊酰基]-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮(1.21g，83.2％)。
质谱(-ESI)357(M-N2)-，380，381。
F.(2S，3S)-2-氨基-3-乙基-5，5，5-三氟戊-1-醇在-10℃下、5min内，向LAH(100mg，2.65mmol)的THF(3mL)灰色浆状物中滴加(4R)-3-[(2S,3S)-2-叠氮基-3-乙基-5，5，5-三氟戊酰基]-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮(300mg，0.78mmol)的THF(2mL)溶液。使得到的浆状物升温至25℃保持19h。在0℃下，依次加入H2O(0.3mL)、1N NaOH(0.9mL)和H2O(0.3mL)猝灭反应。5h后，滤除形成的沉淀。母液经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到浅黄色油状(2S，3S)-2-氨基-3-乙基-5，5，5-三氟戊-1-醇(145mg，98％)。
质谱(-ESI)184(M-H)-。
G.5-氯-N-[(1S，2S)-2-乙基-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺向搅拌下的冷却至0℃的(2S，3S)-2-氨基-3-乙基-5，5，5-三氟戊-1-醇(145mg，0.78mmol)、三乙胺(0.22mL，1.56mmol)和二氯甲烷(5mL)溶液中滴加5-氯噻吩-2-磺酰氯(225mg，0.861mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液。15min后，撤去冰浴，然后使反应混合物达到25℃过夜。再加入二氯甲烷(15mL)，然后将反应物倾入饱和碳酸氢钠溶液(25mL)猝灭反应。分离有机相，然后依次用1N HCl溶液、H2O、盐水洗涤，经MgSO4干燥。过滤有机相，然后蒸发，得到粗油(0.250g)，通过洗脱液乙酸乙酯-己烷1∶6快速层析纯化。由此得到标题化合物5-氯-N-[(1S，2S)-2-乙基-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺(140mg，53.8％)，为油状物。用EtOAc-庚烷1∶4重结晶进一步纯化该粗油。将混合溶剂系统加入5-氯-N-[(1S，2S)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺中，加热，得到溶液，冷却至25℃保持3h，然后在0℃保存19h。过滤沉淀的结晶白色固体，然后用冰冻庚烷洗涤，得到5-氯-N-[(1R，2S)-2-乙基-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺白色结晶固体(50mg，19.2％，91％手性纯度，100％分析纯度)。
质谱(-ESI)364(M-H)-。
分析C11H15NClF3O3S2+0.10C4H8O2计算值C，36.55；H，4.25；N，3.74。
实测值C，36.94；H，4.15；N，3.57。
实施例75-氯-N-[4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺A. 4，4，4-三氟丁醛在氮气氛、-70℃下，将氢化二异丁基铝(35mL，35.26mmol)加入4，4，4-三氟丁酸乙酯(5g，29.38mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液中。6h后，加入1N HCl(6mL)，然后升温至-60℃，将反应混合物倾入H2O(5mL)中，然后用CH2Cl2(2×50mL)萃取。合并的有机萃取液用H2O(2×10mL)洗涤。有机萃取液经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到无色非粘性油状4，4，4-三氟丁醛(3.7g，100％)。
B. 5-(3，3，3-三氟丙基)咪唑烷-2，4-二酮将氰化纳(4.31g，88.04mmol)和4，4，4-三氟丁醛(3.7g，29.34mmol)加入碳酸铵(9.1g，117.4mmol)的H2O(60mL)溶液中。将该黑色反应混合物加热至90℃。1h后，混合物变均匀，然后在90℃下将其搅拌18h。冷却至25℃后，真空除去约60mL溶剂。加入浓HCl(4mL)酸化混合物至pH约2，形成沉淀。过滤。母液用EtOAc(3×50mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到棕色油状5-(3，3，3-三氟丙基)咪唑烷-2，4-二酮(3.95g，69.7％)。
质谱(-ESI)195(M-H)-。
C. 5，5，5-三氟正缬氨酸将5-(3，3，3-三氟丙基)咪唑烷-2，4-二酮(0.9g，4.59mmol)溶于NaOH(0.734g的10mL H2O溶液，18.35mmol)水溶液10mL。将该溶液分装在2个用于微波技术的特殊容器中。在密闭的容器中，用微波加热溶液1h。微波条件在约100％功率、150℃、50psi下15min，然后停止5min，0％功率。重复该顺序两次或直至反应完成。真空除去反应混合物中的水和氨，然后得到粗5，5，5-三氟正缬氨酸(1.1g，140％)和NaOH混合物，在下一步反应中使用时无需进一步纯化。
质谱(+ESI)172(M+H)+。
D.N-[5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-5，5，5-三氟正缬氨酸在30min内，向粗5，5，5-三氟正缬氨酸(0.785g，4.59mmol)和NaOH混合物溶于THF(10ml)和2N NaOH(10mL)的溶液中滴加5-氯噻吩-2-磺酰氯(1.32g，5.04mmol)的THF(10ml)溶液。60min后，使反应混合物逐步升温至25℃，然后搅拌16h。真空除去THF，然后用1N HCl酸化混合物至pH约2。15min后，沉淀开始从乳白色溶液析出。60min后，冷却混合物至0℃保持45min，然后过滤。沉淀用1N HCl(10mL)洗涤，得到白色固体。取出该粘性白色固体。将其溶于EtOAc(100mL)。水层用EtOAc(3×50mL)洗涤，且有机层用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到深红色油状N-[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-5，5，5-三氟正缬氨酸(1.1g，68.3％)。质谱(-ESI)350(M-H)。
E. 5-氯-N-[4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺在0℃下、30min内，将硼烷-THF(1M，15mL，14.21mmol)滴加入N-[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-5，5，5-三氟正缬氨酸(1.0g，2.84mmol)的THF(10mL)溶液中。使反应升温至25℃保持18h，然后加入10％乙酸的甲醇溶液50mL猝灭。蒸发溶剂后，将粗产物溶于EtOAc，然后用1N HCl、H2O和饱和NaHCO3洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗油(0.83g)，通过洗脱液乙酸乙酯-己烷1∶6快速层析纯化。由此得到标题化合物5-氯-N-[4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺(0.46g，48％)，为无色油状物。
质谱(-ESI)337(M-H)-。
分析∶C11H15NClF3O3S2+0.30C4H8O2计算值C，33.64；H，3.71；N，3.85。
实测值C，34.01；H，3.65；N，3.67。
实施例8和95-氯-N-{(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-[(1S)-1-羟乙基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺酰胺和5-氯-N-{(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-[(1R)-1-羟乙基]-2-甲基丁基)噻吩-2-磺酰胺在0℃下，向5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺(按实施例1制备，290mg，0.824mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中加入Dess-Martin过碘烷(410mg，0.989mmol)。使该反应混合物升温至25℃。10min后，TLC(3∶7 EtOAc-hex.)表明存在原料。再加入Dess Martin过碘烷(410mg，0.989mmol)，15min后，TLC表明原料反应完。加入乙醚(30mL)，随后加入1N Na2S2O3水溶液(25mL)和饱和NaHCO3水溶液(25mL)。剧烈搅拌该乳白色溶液直至两相均匀。分离各层，水相然后用乙醚萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机萃取液，然后浓缩。快速层析(洗脱液EtOAc-己烷3∶7)得到5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(甲酰基-2-甲基丁基)]噻吩-2-磺酰胺(100mg，35％)白色固体。
在0℃下，向5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(甲酰基-2-甲基丁基)]噻吩-2-磺酰胺(100mg，0.286mmol)的THF(3mL)溶液中滴加甲基溴化镁(0.61mL，1.4M的THF/甲苯溶液，0.86mmol)溶液。使反应混合物升温至25℃，然后搅拌3h。然后用饱和氯化铵水溶液猝灭，用EtOAc(2×40mL)萃取，干燥(Na2SO4)，然后浓缩。快速层析(洗脱液EtOAc-己烷3∶7)得到5-氯-N-{(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-[1-羟乙基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺酰胺(75mg，74％)的3∶1非对映体混合物。通过HPLC(Zorbax硅胶柱，25×5cm，洗脱液∶甲基叔丁基醚(MTBE)-己烷3∶2，非对映体1在11.4min洗脱出，非对映体2在14.1min洗脱出)分离非对映体。
非对映体1质谱(-ESI)364(M-H)-。
非对映体2质谱(-ESI)364(M-H)-。
实施例105-氯-N-[(1S，2S)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺A.5，5，5-三氟-L-异亮氨酸盐酸盐向(S)-(-)-α-甲基苄胺盐酸盐(0.340g，2.16mmol)的MeOH/H2O(1∶1)溶液20mL中加入氰化钾(0.139g，2.13mmol)和(2S)-4，4，4-三氟-2-甲基丁醛(0.300g，2.14mmol，按实施例1方法2中报告的方法制备，但使用(S)-(-)-4-苄基-2-噁唑烷酮手性助剂)，然后搅拌反应混合物17h。真空除去甲醇，然后产物用EtOAc萃取。有机萃取液用0.1N盐酸洗涤，干燥(Na2SO4)，然后浓缩。快速层析(洗脱液EtOAc-己烷1∶9)得到黄色油状α-氨基腈(0.224g，39％)。1H-NMR表明该产物为3∶1的非对映体混合物。
将硫酸(3mL)加入非对映体混合物(0.224g，0.829mmol)，然后搅拌该溶液22h。然后将反应混合物倾入碎冰块(～10g)上。加入浓氨水来中和酸。混合物用EtOAc萃取，干燥(Na2SO4)，过滤，然后浓缩，得到酰胺(0.224g，94％)，其在下一步使用时无需纯化。
在3个大气压氢(H2)下，在Parr装置中振摇该酰胺(0.224g，0.777mmol)和5％钯/C(Pd/C-40mg)混合物2天。通过Celite试剂塞过滤混合物，真空除去溶剂，得到白色固体胺(128mg，90％)，其在下一步反应中使用时无需进一步纯化。
加热回流该胺(128mg，0.695mmol)的浓盐酸(3mL)溶液24h。将反应混合物冷却至室温，然后浓缩，得到氨基酸盐酸盐(非对映体比例3∶1)和1当量氯化铵混合物白色固体(183mg，95％)。
质谱(+ESI)186(M+H)+。
B.(2S，3S)-2-氨基-5，5，5-三氟-3-甲基戊-1-醇在0℃下，向硼氢化锂(1.0mL，2.0N的THF溶液，2.0mmol)的THF(5mL)溶液中加入氯代三甲基硅烷(0.51mL，4.01mmol)。使反应混合物升温至25℃，30min后，滴加至0℃下的粗氨基酸盐酸盐(184mg，0.669mmol)的THF(5mL)悬浮液中。使混合物升温至25℃，21h后，用MeOH猝灭。真空除去挥发物，然后将得到的残余物溶于1NNaOH水溶液，用CHCl3(4×20mL)萃取，干燥(Na2SO4)，然后浓缩，得到黄色油状氨基醇(92mg，81％)，根据其1H NMR图谱，它为3∶1的非对映体混合物。质谱(+ESI)172(M+H)+。
C. 5-氯-N-[(1S，2S)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲丁基]噻吩-2-磺酰胺向该氨基醇(168mg，0.981mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中加入三乙胺(170μL，1.20mmol)和5-氯噻吩-2-磺酰氯(256mg，1.18mmol)。在25℃下，搅拌该反应混合物21h。用EtOAc(50mL)稀释溶液，用0.1N HCl洗涤两次，干燥，然后浓缩。通过快速层析(洗脱液EtOAc-己烷3∶7)小心除去杂质和次要的非对映体，得到5-氯-N-[(1S，2S)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺白色固体(97mg，28％)，mp 99-100℃。HPLC(Zorbax硅胶柱，洗脱液MTBE-己烷3∶2)表明为97∶3的非对映体混合物。手性HPLC(AD柱，洗脱液异丙醇-己烷1∶9)表明对映体纯度＞99％。D25＝+8.95°(c＝1％溶液，MeOH)。
质谱(-ESI)350(M-H)-。
分析C10H13ClF3NO3S2计算值 C，34.14；H，3.72；N，3.98。
实测值 C，34.43；H，3.70；N，3.91。
实施例11(2S，3S)-2-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-磺酰基)-酰氨基-5，5，5-三氟-3-乙基-戊-1-醇A.(R)-4-苄基-3-(2-R-溴-3-S-乙基-5，5，5-三氟-戊酰基)-噁唑烷-2-酮向冷却至-40℃的溴化铜(I)·甲硫醚络合物(328mg，1.56mmol)的THF/DMS(2∶1，60mL)溶液中加入乙基溴化镁(1.06mL，3M的THF溶液，3.2mmol)。搅拌该溶液10min，同时升温至-15℃。再将混合物冷却至-40℃，然后加入(R)-4-苄基-3-(5，5，5-三氟-戊-2-烯酰基)-嗯唑烷-2-酮(按实施例6第C部分制备，416mg，1.3mmol)的THF(15mL)溶液。在25℃下，搅拌溶液16h。再将溶液冷却至-78℃，然后加入N-溴琥珀酰亚胺(473mg，2.6mmol)的THF(10mL)溶液。使溶液升温至0℃，然后在0℃下振摇3h。用饱和碳酸铵和0.5N硫酸氢钾1∶1溶液(15mL)猝灭反应。倾出有机相，然后浓缩，经液相色谱质谱(LCMS)鉴别，得到(R)-4-苄基-3-(2-R-溴-3-S-乙基-5，5，5-三氟-戊酰基)-噁唑烷-2-酮。
B.3-(2-S-叠氮基-3-S-乙基-5，5，5-三氟-戊酰基)-4R-苄基-噁唑烷-2-酮向溶于二甲基甲酰胺(DMF-10mL)的(R)-4-苄基-3-(2R-溴-3S-乙基-5，5，5-三氟-戊酰基)-噁唑烷-2-酮溶液中加入叠氮化钠(172mg，2.6mmol)。搅拌该溶液72h，用水(20mL)稀释，萃取至乙酸乙酯(2×20mL)，然后浓缩，经LCMS鉴别，得到3-(2-S-叠氮基-3-S-乙基-5，5，5-三氟-戊酰基)-4R-苄基-噁唑烷-2-酮。
C.(2S，3S)-2-叠氮基-3-乙基-5，5，5-三氟-戊酸在0℃下，使3-(2-S-叠氮基-3-S-乙基-5，5，5-三氟-戊酰基)-4-苄基-噁唑烷-2-酮溶于THF和水2∶1的混合物(20mL)中，然后加入氢氧化锂一水合物(1.4mmol，60mg)。在0℃下，振摇该溶液1h，然后加入饱和碳酸钠(20mL)。用乙酸乙酯(20mL)萃取混合物。用2N盐酸酸化水相，然后用乙酸乙酯(20mL)萃取，经LCMS鉴别，得到(2S，3S)-2-叠氮基-3-乙基-5，5，5-三氟-戊酸。
D.(2S，3S)-2-氨基-3-乙基-5，5，5-三氟-戊-1-醇在0℃下，使(2S，3S)-2-叠氮基-3-乙基-5，5，5-三氟-戊酸溶于THF(5mL)，然后加入氢化铝锂(1M的THF溶液)(1mL，1mmol)。在40℃下，搅拌得到的溶液2h。依次加入水(60μL)、15％氢氧化钠水溶液(60μL)和水(150μL)猝灭反应，在每次加入间隔剧烈搅拌。然后过滤混合物，浓缩，得到(2S，3S)-2-氨基-3-乙基-5，5，5-三氟-戊-1-醇。
E.(2S，3S)-2-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-磺酰基)-酰氨基-5，5，5-三氟-3-乙基-戊-1-醇向(2S，3S)-2-氨基-3-乙基-5，5，5-三氟-戊-1-醇(0.1mmol)的THF(2mL)溶液中加入三乙胺(83.7μL，0.6mmol)和5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-磺酰氯(28mg，0.1mmol)。搅拌该溶液16h，然后浓缩。除去溶剂，将残余物溶于MeOH(1.5mL)，然后使用以下条件的半制备反相(RP)-HPLC纯化。
半制备RP-HPLC条件柱Phenomenex C18 Luna 21.6mm×60mm柱，5μM溶剂A水(0.02％TFA缓冲液)溶剂B乙腈(0.02％TFA缓冲液)溶剂梯度时间010％B；2.5min10％B；14min90％B。
流速22.5mL/min根据UV吸收峰，收集产物，然后浓缩，得到标题化合物1.7mg，HPLC保留时间2.97min，观测离子428(M-H)。
实施例12(2S，3R)-2-(5-氯-1，3-二甲基-1H-吡唑-4-磺酰基)-酰氨基-5，5，5-三氟-3-苯基-戊-1-醇基本上按照实施例11的相同方法，但使用苯基溴化镁和5-氯-1，3-二甲基吡唑-4-磺酰氯，制备(2S，3R)-2-(5-氯-1，3-二甲基-1H-吡唑-4-磺酰基)-酰氨基-5，5，5-三氟-3-苯基-戊-1-醇7.1mg，HPLC保留时间2.25min，观测离子424(M-H)。
实施例13合成含三氟甲基杂环磺酰胺在一个实施方案中，用以下示例性试剂和条件按流程13所示方法进行。但是，本领域技术人员将容易理解某些反应条件例如时间、温度、催化剂和某些试剂可以改变。
按照流程13，使氨基酯XLVIII(250g，0.64mol)悬浮于甲苯(4L)中，然后用0.4N NaOH(1.6L)中和至pH 7-8。分离各层，有机相用水(1.6L)洗涤，随后用Na2SO4(250g)干燥。将甲苯溶液冷却至-68℃至-62℃，然后用25％氢化二异丁基铝(DIBAL-H)的甲苯溶液(1278mL，1.9mol，3当量)处理，保持温度低于-60℃。使混合物升温至室温，然后搅拌1小时。依次用10％NaOH水溶液(128mL)、柠檬酸钠二水合物(500g)和无水硫酸钠(385g)猝灭反应。搅拌1小时后，通过过滤除去固体，将溶液浓缩至油。将该油溶于乙醚(2.6L)，冷却至5℃，然后用1N HCl/乙醚溶液(750mL)处理。搅拌30分钟后，过滤收集固体，用乙醚洗涤，真空干燥，得到189g(85％)苄胺白色固体。在40g 10％Pd/C催化剂的存在下、在40psi下，氢化该苄胺(150g，0.43mol)的甲醇(150mL)溶液。1.5小时后，过滤除去催化剂，然后将溶液浓缩至固体。该固体用乙醚/己烷研磨，过滤收集，然后干燥，得到94.8g(90％)氨基醇固体。
该氨基醇(100.2g，0.41mol)的CH2Cl2(1150mL)溶液用N，O-二(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(BSA-110mL，0.45mol)处理，随后用三乙胺(152.4mL，1.09mol)和二甲氨基吡啶(DMAP-13g)处理。15分钟后，加入磺酰氯(105.5g，0.49mol)的CH2Cl2(186mL)溶液，然后在室温下搅拌该混合物19小时(过夜)。加入THF(450mL)和5％盐酸(800mL)，然后搅拌混合物1小时。分离各层，然后有机层用5％NaHCO3、随后用水洗涤。浓缩溶液，得到油，然后通过硅胶塞，用30％EtOAc/己烷洗脱。真空浓缩含产物的流份，促进结晶。加入己烷，过滤收集固体，得到87.1g(55％)目标化合物，为白色固体。浓缩母液，得到第二批目标化合物12.6g，收率8％。
实施例145-氯-N-[1-(4，4-二氟环己基)-2-羟乙基]噻吩-2-磺酰胺 A.{[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]氨基}(4，4-二氟环己基)乙酸将氨基(4，4-二氟环己基)乙酸(2.68g，10.973mmol)溶于2N NaOH(20mL)。将该溶液冷却至0℃，滴加入(5min)5-氯噻吩-2-磺酰氯(3.25g，12.42mmol)的THF(10mL)溶液。使溶液升温最高至25℃过夜。19h后，真空除去THF，用2N HCl(20mL)酸化混合物至pH约1至约2。水层用EtOAc(4×50mL)洗涤。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗油状{[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]氨基}(4，4-二氟环己基)乙酸(3.8g，98.2％)。
质谱(-ESI)372(M-H)-。
B. 5-氯-N-[1-(4，4-二氟环己基)-2-羟乙基]噻吩-2-磺酰胺在0℃下、20min内，向LAH(0.406g，10.70mmol)的THF(20mL)浆状物中滴加{[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]氨基}(4，4-二氟环己基)乙酸(2.0g，5.35mmol)。
反应加热至70℃保持18h。将浆状反应物(浅棕色)冷却至0℃，然后用H2O(1.5mL)、1N NaOH(4.5mL)和H2O(1.5mL)猝灭反应。搅拌反应物4h，得到白色浆状物。过滤该浆状物，母液然后经MgSO4进一步干燥，过滤，然后真空浓缩，得到粗黄色油(1.68g)。粗产物通过洗脱液EtOAc-己烷1∶2用Biotage FlashTM40色谱纯化，得到5-氯-N-[1-(4，4-二氟环己基)-2-羟乙基]噻吩-2-磺酰胺白色无定形固体(0.15g，7.8％)。
质谱(-ESI)358(M-H)-。
分析C12H16ClNF2O3S2·0.17EtOAc计算值C，41.02；H，4.49；N，3.76。
实测值C，40.63；H，4.67；N，3.74。
实施例155-氯-N-[1-(6，6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)-2-羟乙基]噻吩-2-磺酰胺 A.氨基(6，6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)乙酸甲酯在0℃下、10min内，向氨基(6，6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)乙酸(1.0g，5.23mmol)的CH2Cl2∶MeOH(4∶1)溶液中滴加TMSCHN2(10.5mL)直至氖黄色保持。使反应混合物升温至25℃保持19h。真空除去溶剂，得到浅黄色油状氨基(6，6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)乙酸甲酯(0.9g，84.11％)。
质谱(-ESI)206(M+H)+。
B.{[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]氨基}(6，6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)乙酸甲酯将5-氯噻吩-2-磺酰氯(1.26g，4.82mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液滴加(5min)至0℃下的氨基(6，6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)乙酸甲酯(0.9g，4.38mmol)的CH2Cl2(10mL)/三乙胺(1.22mL，8.77mmol)溶液中。使该溶液升温至25℃过夜(19h)。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶4)表明反应完成。用CH2Cl2(100mL)稀释，然后有机层用1N HCl(20mL)和饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗淡黄色固体(1.69g)。粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶4通过Biotage FlashTM40色谱仪纯化，得到无色油状{[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]氨基}(6，6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)乙酸甲酯(0.230g，12.23％)。质谱(-ESI)384(M+H)+。
C. 5-氯-N-[1-(6，6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)-2-羟乙基]噻吩-2-磺酰胺在0℃下、20min内，向LAH(0.030g，0.78mmol)的THF(5mL)浆状物中滴加{[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]氨基}(6，6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)乙酸甲酯(0.154g，0.38mmol)。使该浆状物(灰色)升温至25℃保持19h。将反应浆状物冷却至0℃，然后用H2O(0.5mL)、1N NaOH(1.5mL)和H2O(0.5mL)猝灭反应。搅拌反应物4h，得到白色浆状物。过滤该浆状物，然后母液经MgSO4进一步干燥，过滤，然后真空浓缩，得到粗黄色油(0.162g)。粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶4通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化，得到无色油状5-氯-N-[1-(6，6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)-2-羟乙基]噻吩-2-磺酰胺(0.105g，77.77％)。
质谱(-ESI)356(M-H)-。
分析C13H14ClNF2O4S2·0.20EtOAc
计算值∶C，41.41；H，3.84；N，3.56。
实测值C，41.08；H，3.90；N，3.47。
实施例165-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-甲酰基-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺 在氮气、0℃下，搅拌5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺(按实施例1制备，3.0g，8.53mmol)的水饱和CH2Cl2溶液(30mL)。一次性加入Dess-Martin过碘烷试剂(7.59g，17.90mmol)。在25℃下，搅拌得到的悬浮液，通过TLC分析(EtOAc/己烷1∶2)监测反应进程。当原料的转化率减少时，再加入每批2mL的水饱和CH2Cl2(15min内，三批)。在25℃下、19h后，TLC表明反应完成。溶液用Et2O(50mL)稀释，并加入硫代硫酸钠Na2S2O3(93.83mmol，14.8g，11当量)的80％饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)的溶液。快速搅拌该混合物10min直至两相澄清。分离各层，水相然后用乙醚(30mL)萃取。合并的有机层依次用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(15mL)洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗油(2.67g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过Biotage FlashTM60色谱系统纯化，得到无色油状5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-甲酰基-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺(2.65g，88.93％)。
质谱(+ESI)350(M+H)+。
分析C10H11ClNF3O3S2·0.35H2O计算值C，33.34；H，2.83；N，3.87。
实测值C，33.74；H，3.31；N，3.93。
实施例17N-[(1S，2R)-1-乙酰基-4，4，4-三氟-2-甲基丁基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺 A. 5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(1-羟乙基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺在氮气、0℃下，搅拌5-氯N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-甲酰基-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺(按实施例16制备，1.0g，2.86mmol)的THF(10mL)溶液。滴加入甲基溴化镁(3.0M的乙醚溶液，1.9mL，5.71mmol)，然后在25℃下搅拌得到的溶液1h。然后，TLC(EtOAc/己烷1∶2)表明反应完成。溶液用饱和NH4Cl水溶液(10mL)猝灭，然后用乙醚(40mL)萃取。有机层用盐水(20mL)洗涤，然后经MgSO4干燥，得到粗油(0.867g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过Biotage FlashTM60色谱系统纯化，得到无色油状5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(1-羟乙基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺(0.495g，49.5％)。
质谱(-ESI)364(M-H)-。
B. N-[(1S，2R)-1-乙酰基-4，4，4-三氟-2-甲基丁基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺在氮气、0℃下，搅拌5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(1-羟乙基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺(0.390g，1.06mmol)的水饱和CH2Cl2溶液(30mL)。一次性加入Dess-Martin过碘烷试剂(0.95g，2.23mmol)。在25℃下，搅拌得到的悬浮液，通过TLC分析(EtOAc/己烷1∶2)监测反应进程。当原料的转化率减小时，再加入每批1mL的水饱和CH2Cl2(15min内，三批)。在25℃下、19h后，TLC表明反应完成。溶液用Et2O(50mL)稀释，并加入硫代硫酸钠Na2S2O3(11.83mmol，4.8g，11当量)的80％饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)的溶液中。快速搅拌该混合物10min直至两相澄清。分离各层，然后水相用乙醚(20mL)萃取。合并的有机层依次用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(15mL)洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗油(0.38g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化，得到N-[(1S，2R)-1-乙酰基-4，4，4-三氟-2-甲基丁基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺白色固体(0.265g，73.10％)。
质谱(-ESI)362(M-H)-。
分析C11H13ClNF3O3S2计算值 C，36.32；H，3.6；N，3.85。
实测值 C，36.08；H，3.2；N，3.74。
实施例185-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(1-羟基-1-甲基乙基)2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺 在氮气、0℃下，搅拌N-[(1S，2R)-1-乙酰基-4，4，4-三氟-2-甲基丁基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺(按实施例17制备，0.100g，0.275mmol)的THF(5mL)溶液。滴加甲基溴化镁(3.0M的乙醚溶液，0.266mL，0.824mmol)，然后在25℃下，搅拌得到的溶液19h。然后，TLC(EtOAc/己烷1∶2)表明反应完成。溶液用饱和NH4Cl水溶液(10mL)猝灭，然后用乙醚(40mL)萃取。有机层用盐水(20mL)洗涤，然后经MgSO4干燥，得到粗油(0.110g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶4通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化，得到5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(1-羟基-1-甲基乙基)2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺白色固体(0.049g，46.6％)。
质谱(-ESI)378(M-H)-。
分析C12H17ClNF3O3S2计算值 C，37.94；H，4.51；N，3.69。
实测值C，37.45；H，4.03；N，3.68。
实施例194-溴-5-氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺 A. 4，4，4，4′4′4′-六氟-dl-缬氨酸甲酯在氮气、0℃下，搅拌4，4，4，4′，4′，4′-六氟-dl-缬氨酸(1.1g，4.88mmol)的CH2Cl2-MeOH(4∶1，25mL)溶液。滴加入TMS-重氮甲烷(2.0M的己烷溶液，20mL，19.55mL)，然后在25℃下，搅拌得到的氖绿色溶液19h。然后，TLC(10％MeOH的氯仿溶液)表明反应完成。浓缩后，得到的残余物4，4，4，4′，4′，4′-氟-dl-缬氨酸甲酯(1.1g)在下一步中直接使用，无需进一步纯化。质谱(-ESI)238(M-H)-。
B. N-[(4-溴-5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-4，4，4，4′4′4′-六氟-dl-缬氨酸甲酯在氮气氛、25℃下，搅拌4，4，4，4′，4′，4′-六氟缬氨酸甲酯(1.0g，4.18mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液。滴加入吡啶(0.81mL，10.04mmol)，随后一次性加入4-溴-5-氯噻吩-2-磺酰氯(1.486g，5.05mmol)，然后在25℃下，搅拌得到的溶液19h。然后，TLC(EtOAc-己烷1∶4)表明反应完成。用水(1.0mL)猝灭后，混合物用CH2Cl2(30mL)稀释。有机层依次用1N盐酸(10mL)、饱和NaHCO3水溶液(10mL)和盐水(15mL)洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗油(2.1g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化，得到N-[(4-溴-5-氯-噻吩-2-基)磺酰基]-4，4，4，4′，4′，4′-六氟-dl-缬氨酸甲酯白色固体(1.62g，83.07％)。
质谱(-ESI)497(M-H)-。
C. 4-溴-5-氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基]噻吩-2-磺酰胺在氮气氛、0℃下，向N-[(4-溴-5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-4，4，4，4′，4′，4′-六氟缬氨酸甲酯(1.45g，2.907mmol)的THF(20mL)溶液中加入硼氢化锂(LiBH4)(5.82mL，11.64mmol)。使反应升温至25℃保持19h。将反应冷却至0℃，用2N HCl猝灭(缓慢加入)，用乙醚(40mL)稀释，有机层依次用1N盐酸(10mL)、饱和NaHCO3水溶液(10mL)和盐水(15mL)洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗油(1.3g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化，得到4-溴-5-氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺白色固体(1.13g，84.32％)。
质谱(-ESI)469(M-H)-。
分析C9H7ClBrNF6O3S2计算值C，22.97；H，1.50；N，2.98。
实测值 C，23.11；H，1.16；N，2.78。
实施例204-溴-5-氯-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺 将4-溴-5-氯噻吩-2-磺酰氯(0.193g，0.654mmol)的CH2Cl2(1.0mL)溶液滴加(5min)到0℃下的(2S)-2-氨基-3，3，3-三氟-3-(三氟甲基)丁-1-醇(按实施例13方法制备，0.115g，0.548mmol)的CH2Cl2(10mL)和吡啶(0.9mL，1.09mmol)溶液中。使该溶液升温至25℃过夜(19h)。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶1)表明反应完成。反应混合物用CH2Cl2(100mL)稀释，然后有机层用1N HCl(2×50mL)和饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤。经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗灰白色固体(0.270g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化，得到4-溴-5-氯-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺白色固体(39mg，15.11％)。质谱(-ESI)469(M-H)-。
实施例215-氯4-氟-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺
A. 5-氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基]噻吩-4-(三丁基甲锡烷基)-2-磺酰胺将二(三丁基锡)(0.939g，2.87mmol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.221g，0.191mmol)加入4-溴-5-氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2磺酰胺(按实施例19制备，0.9g，1.91mmol)的1，4-二噁烷(42mL)溶液中。加热该棕色溶液至回流过夜(19h)。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶1)表明反应完成。然后过滤浆状物，真空除去溶剂，得到黄色油(1.31g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化，得到5-氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-4-(三丁基甲锡烷基)-2-磺酰胺白色固体(0.220g，18.86％)。
质谱(-ESI)554(M-H)-。
B. 5-氯-4-氟-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺在氮气、25℃下，搅拌5-氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-4-(三丁基甲锡烷基)-2-磺酰胺(0.220g，0.396mmol)的无水乙腈(10mL)溶液。一次性加入Selectfluor试剂(0.147g，0.416mmol)，然后在25℃下，搅拌溶液19h。3h后，开始出现白色沉淀。19h后，取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应没有完成。存在大部分原料。加热反应物至80℃保持6h。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应完成。然后过滤浆状物，然后真空除去溶剂，得到黄色油(0.11g)。该粗产物通过制备RP-HPLC(PrimesphereTM2×25cm柱，洗脱液55％MeCN/0.01％三氟乙酸(TFA)水溶液，流速＝25mL/min，Rt，4.401min)纯化，得到5-氯4-氟-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺无定形白色固体(0.004g，24.69％)。
质谱(-ESI)408(M-H)-。
实施例225-溴-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺 A. N-[(5-溴噻吩-2-基)磺酰基]-4，4，4，4′，4′，4′-六氟-dl-缬氨酸乙酯在氮气氛、25℃下，搅拌按(J.Med Chem.1981，24，1043-1047)所述方法制备4，4，4，4′，4′，4′-六氟-dl-缬氨酸乙酯(1.64g，6.48mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液。滴加入吡啶(0.81mL，10.04mmol)，随后一次性加入5-溴噻吩-2-磺酰氯(2.034g，7.77mmol)，然后25℃下，搅拌得到的溶液19h。然后，TLC(EtOAc-己烷1∶4)表明反应完成。用水(2.0mL)猝灭后，混合物用CH2Cl2(40mL)稀释。有机层依次用1N盐酸(20mL)、饱和NaHCO3水溶液(20mL)和盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗油(3.3g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化，得到N-[(5-溴噻吩-2-基)磺酰基]-4，4，4，4′，4′，4′-六氟-dl-缬氨酸乙酯白色固体(2.40g，80.0％)。
质谱(-ESI)477(M-H)-。
B. 5-溴-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺在氮气氛、0℃下，向N-[(5-溴-噻吩-2基)磺酰基]-4，4，4，4′，4′，4′-六氟缬氨酸乙酯(2.4g，5.02mmol)的THF(20mL)溶液中加入LiBH4(20mL，20.07mmol)。使反应升温至25℃保持19h。将反应冷却至0℃，然后用2N HCl(缓慢加入)猝灭，用乙醚(50mL)稀释，然后有机层依次用1N盐酸(10mL)、饱和NaHCO3水溶液(10mL)和盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗油(2.31g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化，得到5-溴-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺白色固体(1.3g，59.63％)。
质谱(-ESI)435(M-H)-。
分析C9H8BrNF6O3S2计算值C，24.78；H，1.85；N，3.21。
实测值C，24.74；H，1.32；N，3.11。
实施例235-氟-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺 A. N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-5-(三丁基甲锡烷基)-2-磺酰胺将二(三丁基锡)(1.36g，4.13mmol)和四(三苯基膦)合钯(O)(0.32g，0.275mmol)加入5-溴-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺(按实施例22制备，1.2g，2.75mmol)的1，4-二噁烷(40mL)溶液中。加热该棕色溶液至回流过夜(19h)。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应完成。然后过滤浆状物，真空除去溶剂，得到黄色油(1.4g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化，得到N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-5-(三丁基甲锡烷基)-2-磺酰胺白色固体(0.400g，27.97％)。质谱(-ESI)520(M-H)-。
B. 5-氟-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺在氮气、25℃下，搅拌N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-5-(三丁基甲锡烷基)-2-磺酰胺(0.400g，0.76mmol)的无水乙腈(10mL)溶液。一次性加入Selectfluor试剂(0.285g，0.806mmol)，然后在25℃下，搅拌溶液19h。3h后，开始出现白色沉淀。19h后，取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应没有完成。存在大部分原料。加热反应物至80℃保持6h。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应完成。然后过滤浆状物，然后真空除去溶剂，得到黄色油(0.191g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化，得到5-氟-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺无定形白色固体(0.010g，34.72％)。
质谱(-ESI)374(M-H)-。
实施例245-溴-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺 将5-溴噻吩-2-磺酰氯(0.149g，0.568mmol)的CH2Cl2(1.0mL)溶液滴加(5min)到0℃下的(2S)-2-氨基-4，4，4-三氟-3-(三氟甲基)丁-1-醇(0.100g，0.474mmol)的CH2Cl2(10mL)和吡啶(0.1mL，0.95mmol)溶液中。使该溶液升温至25℃过夜(19h)。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应完成。用CH2Cl2(10mL)稀释，然后有机层用1N HCl(2×10mL)、饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗灰白色固体(0.120g)。该粗产物用CH2Cl2己烷(1∶7)重结晶，得到5-溴-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺白色蓬松固体(0.0541g，27.05％)。质谱(-ESI)435(M-H)-。
实施例255-氟-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺 A. N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-5-(三丁基甲锡烷基)-2-磺酰胺将二(三丁基锡)(1.36g，4.13mmol)和四(三苯基膦)合钯(O)(0.32g，0.275mmol)加入5-溴-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺(按实施例24制备，1.1g，2.52mmol)的1,4--二唿烷(40mL)溶液中。加热该棕色溶液至回流过夜(19h)。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应完成。然后过滤浆状物，真空除去溶剂，得到黄色油(1.05g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过BiotageFlashTM40色谱系统纯化，得到N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-5-(三丁基甲锡烷基)-2-磺酰胺白色固体(0.350g，26.7％)。质谱(-ESI)520(M-H)-。
B. 5-氟-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺在氮气、25℃下，搅拌N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-5-(三丁基甲锡烷基)-2-磺酰胺(0.400g，0.76mmol)的无水乙腈(10mL)溶液。一次性加入Selectfluor试剂(0.285g，0.806mmol)，然后在25℃下，搅拌溶液19h。3h后，开始出现白色沉淀。19h后，取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应没有完成。存在大部分原料。加热反应物至80℃保持6h。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应完成。然后过滤浆状物，然后真空除去溶剂，得到黄色油(0.078g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过BiotageFlashTM40色谱系统纯化，得到5-氟-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺无定形白色固体(0.0061g，2.8％)。
质谱(-ESI)374(M-H)-。
实施例265-氯-N-[4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-(2，2，2-三氟乙基)丁基]噻吩-2-磺酰胺 A.碘化(3，3，3-三氟丙基)-三苯基鏻在23℃下，向1-碘-3，3，3-三氟丙烷(19.3g，86.1mmol)的甲苯(50mL)溶液中加入三苯基膦(25.8g，98.5mmol)。使反应混合物升温至回流，并搅拌28h。在冰浴中将得到的混合物冷却至0℃，然后过滤，收集白色固体产物。该产物用甲苯洗涤(3×)，然后风干，得到纯产物(33.4g，80％)，为白色固体。
B. 4，4，4-三氟-2-(三苯基-l5-亚磷烷基(phosphanylidene))-丁酸乙酯在-78℃、氮气下，通过加料漏斗向碘化(3，3，3-三氟丙基)-三苯基鏻(23.5g，48.4mmol)的THF(100mL)悬浮液中缓慢加入二(三甲基甲硅烷基)氨基化钾(0.5M的甲苯溶液，175mL)溶液。在-78℃下，搅拌得到的混合物45min，随后滴加入氯代甲酸乙酯(纯，5.0mL)。然后在搅拌下，使该反应混合物在3h内升温至-20℃。然后倾入盐水(100mL)中猝灭反应，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取。干燥(Na2SO4)有机萃取液，然后减压浓缩。通过硅胶柱(120g)用乙酸乙酯-己烷(0-100％)快速层析，得到浅黄色固体产物。用Et2O重结晶该物质，得到纯产物(6.7g，32％)，为白色固体。质谱(+ESI)431[M+H]+C. 4，4，4-三氟-2-(2，2，2-三氟乙基)-丁-2-烯酸乙酯向4，4，4-三氟-2-(三苯基-λ5-亚磷烷基)-丁酸乙酯(2.0g，4.65mmol)的THF(5mL)溶液中加入1mL三氟乙醛水合物(tech.)。将该混合物密封在压力管中，然后在100℃下加热3.5h。冷却至23℃后，反应混合物通过硅胶(100g)和Na2SO4垫用Et2O(100mL)洗脱，除去副产物氧化三苯基膦和水。蒸馏洗脱液除去Et2O，得到无色液体产物(1.0g，86％)。
D. 4，4，4-三氟-2-(2，2,2-三氟乙基)-丁酸乙酯在25℃下，用Pd/C(2.5g，5％)和H2(1大气压)处理4，4，4-三氟-2-(2，2，2-三氟乙基)-丁-2-烯酸乙酯(5.0g，20.0mmol)的THF(20mL)溶液17h。通过Celite试剂垫过滤反应混合物，用Et2O(50mL)冲洗，然后蒸馏滤液，除去Et2O和THF，得到无色液体产物(5.0g，99％)。
E. 4，4，4-三氟-2-(2，2，2-三氟乙基)-丁-1-醇在25℃下，向LAH(1.0g)的Et2O(100mL)悬浮液中缓慢加入4，4，4-三氟-2-(2，2，2-三氟乙基)-丁酸乙酯(5.0g，19.8mmol)。回流下搅拌得到的混合物4h。冷却后的反应混合物依次用水(1.0mL)、15％NaOH水溶液(1.0mL)和水(3.0mL)猝灭。在25℃下，搅拌得到的混合物17h后，加入Na2SO4(20g)。然后在25℃下继续搅拌1h。通过Celite试剂和Na2SO4垫过滤得到的悬浮液。蒸馏滤液，除去所有溶剂，得到需要的产物(1.7g，41％)，为无色液体。质谱(-ESI)269[M+OAc]-F. 4，4，4-三氟-2-(2，2，2-三氟-乙基)-丁醛在氮气、0℃下，搅拌4，4，4-三氟-2-(2，2，2-三氟乙基)丁-1-醇(1.5g，7.14mmol)的水饱和CH2Cl2(30mL)溶液。一次性加入Dess-Martin过碘烷试剂(6.35g，14.99mmol)。在25℃下，搅拌得到的悬浮液，通过TLC分析(1∶2 EtOAc/己烷)监测反应进程。当原料的转化率减小时，再加入一批2mL的水饱和CH2Cl2溶液(15min内，三批)。在25℃下、19h后，TLC表明反应完成。溶液用Et2O(50mL)稀释，并加入硫代硫酸钠Na2S2O3(73.33mmol，11.6g，11当量)的80％饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)的溶液。快速搅拌该混合物10min直至两相澄清。分离各层，然后水相用乙醚(30mL)萃取。合并的有机层依次用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(15mL)洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩至其原体积的50％，得到4，4，4-三氟-2-(2，2，2-三氟-乙基)-丁醛溶液(20mL)。质谱(+ESI)(M+H)+。
G. 5-(3，3，3-三氟-1-(2，2，2-三氟乙基)丙基)咪唑烷-2，4-二酮向氰化纳(0.425g，8.65mmol)和碳酸铵(0.9g，11.54mmol)的H2O(30mL)溶液中加入4，4，4-三氟-2-(2，2，2-三氟乙基)丁醛(0.6g，2.88mmol)的乙醇(30mL)溶液。加热该黑色反应混合物至90℃。1h后，混合物变均匀，然后在90℃下搅拌18h。冷却至25℃后，真空除去约40mL溶剂。加入浓HCl(4mL)酸化混合物至pH 1-2，沉淀形成。过滤。母液用EtOAc(3×50mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到棕色油状5-(3，3，3-三氟-1-(2，2，2-三氟乙基)丙基)咪唑烷-2，4-二酮(1.01g，100％)。质谱(+ESI)279，280(M+H)+。
H. 5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)-dl-正缬氨酸将5-(3，3，3-三氟-1-(2，2，2-三氟乙基)丙基)咪唑烷-2，4-二酮(1.0g，3.59mmol)溶于10mL NaOH水溶液(0.575g溶于10mL H2O中，14.38mmol)。将该溶液分装于2个用于微波技术的特殊容器中。在密闭的容器中，用微波加热溶液1h。微波条件在150℃、50psi下、约100％功率15min，然后停止5min，0％功率。重复进行该顺序直至反应完成。真空除去反应混合物中的水和氨，得到粗5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)-dl-正缬氨酸(0.92g，100％)和NaOH混合物，在下一步反应中使用时无需进一步纯化。
质谱(+ESI)254(M+H)+。
I. N-[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)-dl-正缬氨酸将粗5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)-dl-正缬氨酸(0.92g，3.56mmol)和NaOH混合物溶于水(10ml)。在冰浴中冷却该混合物至0℃。将5-氯噻吩-2磺酰氯(0.852g，3.9mmol)溶于THF(10mL)，然后在10min内滴加至反应混合物中。60min后，使反应混合物逐步升温至25℃，然后搅拌16h。真空除去THF，然后用1N HCl酸化混合物至pH＜2。15min后，沉淀开始从乳白色混合物中析出。60min后，将混合物在冰箱中冷却45min，然后过滤。沉淀用1N HCl(10mL)洗涤，得到粘性白色固体并取出。将其溶于EtOAc(100mL)。水层用EtOAc(3×50mL)洗涤，然后有机层用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到棕色油状N-[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)-dl-正缬氨酸(1.3g，86.3％)。
质谱(+ESI)434(M+H)+。
J. N-[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)-dl-正缬氨酸甲酯在0℃下、10min内，向N-[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)-dl-正缬氨酸(1.3g，5.23mmol)的CH2Cl2∶MeOH(4∶1)溶液中滴加TMSCHN2(6mL，12mmol)直至氖黄色保持。滴加结束后，使反应混合物升温至25℃保持19h。真空除去溶剂，得到N-[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)-dl-正缬氨酸甲酯(0.5g，37.31％)。质谱(-ESI)445(M-H)-。
K. 5-氯-N-[4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-(2，2，2-三氟乙基)丁基]噻吩-2-磺酰胺在氮气氛、0℃下，向N-[(5-氯噻吩-2-基)磺酰基]-5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)-dl-正缬氨酸甲酯(0.5g，1.11mmol)的THF(10mL)溶液中加入LiBH4(2.28mL，4.46mmol)。使反应升温至25℃保持19h。将反应冷却至0℃，然后用2N HCl(缓慢加入)猝灭，用乙醚(40mL)稀释，有机层依次用1N盐酸(10mL)、饱和NaHCO3水溶液(10mL)和盐水(15mL)洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗油(0.362g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过Biotage FlashTM12色谱系统纯化，得到无色油状5-氯-N-[4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-(2，2，2-三氟乙基)丁基]噻吩-2-磺酰胺(0.001g，2.36％)。质谱(-ESI)418(M-H)-。
实施例275-氯-N-[(1S)-(4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-(2，2，2-三氟乙基)丁基)]噻吩-2-磺酰胺 A. 4-甲基-N-[(1Z)-4，4，4-三氟-2-(2，2，2-三氟乙基)亚丁基)苯亚磺酰胺向4，4，4-三氟-2-(2，2，2-三氟乙基)丁醛(按实施例26第F部分制备，0.6g，2.88mmol)的乙醚(5mL)溶液粗有机萃取液中加入乙醇钛(IV)(2.63g，11.54mmol)，随后加入(S)-(+)-甲苯亚磺酰胺(0.537g，3.46mmol)，然后加热该溶液至回流5h。然后冷却混合物至0℃，然后加入水(35mL)沉淀钛盐。通过Celite试剂垫过滤悬浮液，滤饼用CH2Cl2洗涤。分离滤液层，然后水层用CH2Cl2萃取。合并的有机萃取液用Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗黄色油(1.05g)。该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶9通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化，得到黄色油状4-甲基-N-[(1Z)-4，4，4-三氟-2-(2，2，2-三氟乙基)亚丁基]苯亚磺酰胺(0.41g，41.2％)。质谱(-ESI)344(M-H)-。
B. 4-甲基-N-[(1S)-4，4，4-三氟1-异氰基-2-(2，2，2-三氟乙基)丁基]苯亚磺酰亚胺在0℃下，向氰化二乙基铝(0.223mL，1.73mmol)的THF(10mL)溶液加入异丙基醇(76mg，1.27mmol)。15min后，将该溶液加入-78℃下的4-甲基-N-[(1Z)-4，4，4-三氟-2-(2，2，2-三氟乙基)亚丁基]苯磺酰胺(0.4g，1.158mmol)的THF(10mL)溶液中。15min后，使该反应混合物升温至25℃。5h后，TLC(1∶4 EtOAc-己烷)表明原料反应完。冷却混合物至-78℃，然后加入饱和NH4Cl水溶液(30mL)。通过Celite试剂垫过滤所得悬浮液，滤垫用EtOAc(2×50mL)洗涤。分离滤液层，然后水层用EtOAc萃取。合并的有机萃取液经Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗油(0.360g)。
该粗产物用洗脱液EtOAc-己烷1∶6通过Biotage FlashTM40色谱系统纯化，得到4-甲基-N-[(1S)-4，4，4-三氟-1-异氰基-2-(2，2，2-三氟乙基)丁基]苯亚磺酰亚胺(0.065g，15.18％)，为无色油状物。
质谱(-ESI)371(M-H)-。
C. 5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)-L-正缬氨酸将4-甲基-N-[(1S)-4，4，4-三氟-1-异氰基-2-(2，2，2-三氟乙基)丁基]苯亚磺酰亚胺(0.065g，0.170mmol)的浓HCl(10mL)溶液加热至100℃保持19h。将混合物冷却至25℃后，用乙醚洗涤几次。真空浓缩水层，得到5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)-L-正缬氨酸、NH4Cl和4-甲基苯亚磺酸的混合物(0.045g，100％)。该粗氨基酸在下一步骤使用时无需进一步纯化。质谱(+ESI)255(M+H)+。
D.(2S)-2-氨基-5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)戊-1-醇在0℃下，向LiBH4(0.35mL，0.71mmol)的THF(5mL)溶液中加入氯代三甲基硅烷(0.112mL，0.885mmol)。将该反应混合物升温至25℃，30min后，滴加至0℃下的粗5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)-L-正缬氨酸盐酸盐(0.045g，0.177mmol)的THF(1mL)悬浮液中。使混合物升温至25℃，21h后，用MeOH猝灭。真空除去挥发物，得到残余物，将它溶于1N NaOH水溶液(5mL)，然后用CH2Cl2(4×10mL)萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗(2S)-2-氨基-5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)戊-1-醇(0.046g，100％)，为浅黄色油状物。该粗氨基醇在下一步骤使用时无需进一步纯化。
质谱(+ESI)240(M+H)+。
E. 5-氯-N-[(1S)-(4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-(2，2，2-三氟乙基)丁基)]噻吩-2-磺酰胺将5-氯噻吩-2-磺酰氯(0.193g，0.654mmol)的CH2Cl2(1.0mL)溶液滴加(5min)至0℃下的(2S)-2-氨基-5，5，5-三氟-3-(2，2，2-三氟乙基)戊-1-醇(0.042g，0.175mmol)的CH2Cl2(1.0mL)和吡啶(0.1mL，1.09mmol)溶液中。使该溶液升温至25℃过夜(19h)。取等分试样，TLC(EtOAc-己烷1∶2)表明反应完成。用CH2Cl2(10mL)稀释，然后有机层用1N HCl(2×5mL)、饱和NaCl水溶液(5mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗灰白色固体(0.014g)。粗产物通过BiotageFlashTM12色谱系统纯化，洗脱液EtOAc-己烷1∶4，得到5-氯-N-[(1S)-(4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-(2，2，2-三氟乙基)丁基)]噻吩-2-磺酰胺白色固体(0.003g，4.1％)。质谱(+ESI)420(M+H)+。
实施例284，5-二氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺 A. 3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-(羟甲基)丙胺在25℃下，将硼氢化锂溶液(2M THF，19.8mL)加入按(J.MedChem.1981，24，1043-1047)所述方法制备的2-氨基-4，4，4-三氟-3-三氟甲基-丁酸乙酯(5g，19.8mmol)的THF(80mL)溶液中，然后搅拌4h。非常小心地将2M HCl加入该反应混合物中直至pH小于2。真空除去有机溶剂，然后水层用饱和NaHCO3中和直至pH＝7。水层用EtOAc(2×50mL)萃取，然后有机萃取液经Na2SO4干燥，浓缩，得到黄色油状3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-(羟甲基)丙胺(3.2g，77％收率)。该粗油具有足够的纯度可在随后的反应中使用。
B. 4，5-二氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺在氮气、25℃下，搅拌3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-(羟甲基)丙胺(0.192g，0.9mmol)的THF(1mL)溶液。加入吡啶(0.147mL，1.82mmol)，随后加入4，5-二氯噻吩-2-磺酰氯(0.226g，0.391mmol)的THF(1mL)溶液，然后在25℃下搅拌得到的溶液18h。浓缩后，将残余物溶于EtOAc(15mL)，然后用1N盐酸(10mL)、盐水(10mL)洗涤，然后干燥(Na2SO4)。浓缩后，粗产物通过制备型TLC纯化，洗脱液EtOAc∶己烷 30∶70，得到4，5-二氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺白色固体(0.037g，9％收率，外消旋混合物)。质谱(-ESI)423.9(M-H)-。
实施例29N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-3-磺酰胺 在氮气、25℃下，搅拌(1S)-3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-(羟甲基)丙胺(按实施例13方法制备，0.100g，0.4mmol)的CH2Cl2(1mL)溶液。加入吡啶(0.097mL，1.2mmol)，随后加入3-噻吩磺酰氯(0.072g，0.4mmol)的CH2Cl2(0.5ml)溶液，然后在25℃下搅拌得到的溶液18h。将粗反应混合物装填在TsOH SyntageTMsamplet上，浓缩后通过Biotage FlashTM12色谱系统纯化，洗脱液EtOAc∶己烷30∶70，得到N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-3-磺酰胺白色固体(0.053g，35％收率)。
质谱(-ESI)355.9(M-H)-。
分析C9H8ClF6NO3S2计算值 C，30.25；H，2.54；N，3.92；实测值 C，30.55；H，2.27；N，3.77。
实施例302，5-二氯-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-3-磺酰胺 除了使用2，5--二氯噻吩-3-磺酰氯外，其余按照实施例29中所述方法，得到2，5-二氯-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-3-磺酰胺白色固体(0.026g，17％收率)。
质谱(-ESI)423.8(M-H)-。
实施例31N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺 除了使用2-噻吩磺酰氯外，其余按照实施例29中所述方法，得到N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺白色固体(0.024g，17％收率)。质谱(-ESI)355.9(M-H)-。
实施例324，5-二氯-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺 除了使用4，5-二氯噻吩-2-磺酰氯外，其余按照实施例29中所述方法，得到4，5-二氯-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺白色固体(0.050g，29％收率)。
质谱(-ESI)423.8(M-H)-。
实施例33N-(3，3，3-三氟-1-羟甲基-2-三氟甲基-丙基)-噻吩-2-磺酰胺
向3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-(羟甲基)丙胺(按实施例28第A部分方法制备，105mg，0.5mmol)的CH2Cl2(1mL)溶液中加入吡啶(100μL)和2-噻吩磺酰氯(90.5mg，0.5mmol)的CH2Cl2(1mL)溶液。在25℃下，搅拌该溶液约8h至约16h，然后浓缩。加入EtOAc(1mL)，然后溶液用1M HCl(1mL)、盐水(1mL)洗涤，经Na2SO4干燥，然后浓缩。粗产物通过Biotage FlashTM12色谱系统纯化，用EtOAc/己烷(2∶3)洗脱，得到N-(3，3，3-三氟-1-羟甲基-2-三氟甲基-丙基)-噻吩-2-磺酰胺白色固体(26.5mg)。
按实施例33中所述方法，用2-噻吩磺酰氯、3-噻吩磺酰氯和2，5-二氯噻吩-3-磺酰氯制备以下化合物(实施例33-35，表1)。
表1 (LCMS数据*分子离子和保留时间)
*Hewlett Packard系列1100HPLC/MS，Luna C18 2×30mm柱，洗脱梯度3分钟内，40％乙腈/水(0.1％HCOOH)至100％乙腈(0.1％HCCOH)，流速0.6mL/min。
实施例36二溴-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺 向3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-(羟甲基)丙胺(按实施例28第A部分方法制备，105mg，0.5mmol)的CH2Cl2(1mL)溶液中加入吡啶(100μL)和4，5-二溴噻吩-2-磺酰氯(170mg，0.5mmol)的CH2Cl2(1mL)溶液。在25℃下，搅拌该溶液约8h至约16h，然后浓缩。加入EtOAc(1mL)，然后溶液用1M HCl(1mL)、盐水(1mL)洗涤，经Na2SO4干燥，然后浓缩。将粗固体溶于DMSO(0.5mL)，并通过反相HPLC(GilsonHPLC仪，LunaC18 100×30mm柱，洗脱梯度15min内，40％乙腈/水(0.075％TFA)至100％乙腈(0.075％TFA)，流速20mL/min)纯化，得到标题化合物(13.8mg)白色固体。
按照实施例36中所述方法，用4，5-二溴噻吩-2-磺酰氯、2-溴-5-氯噻吩-2-磺酰氯、3-溴-2，5-二氯噻吩-3-磺酰氯和苯并噻吩-2-磺酰氯制备以下化合物(实施例36-39，表2)。

表2 (LCMS数据*分子离子和保留时间)
*Hewlett Packard系列1100HPLC/MS，Luna C182×30mm柱，洗脱梯度3分钟内40％乙腈/水(0.1％HCOOH)至100％乙腈(0.1％HCCOH)，流速0.6mL/min。
实施例40氯-N-(3，3，3-三氟-1-羟甲基-丙基)-噻吩-2-磺酰胺
A.2-氨基-4，4，4-三氟-丁-1-醇在25℃下，将三甲基氯硅烷(1.38g，12.73mmol)溶液加入硼氢化锂(3.2mL，2.0M THF溶液)的THF(5mL)溶液中。搅拌5min后，在5min内分批加入2-氨基-4，4，4-三氟-丁酸(0.50g，3.18mmol)。搅拌反应物48h。小心滴加MeOH(5mL)来猝灭反应。蒸发溶剂，残余物用氢氧化钾(KOH)溶液(20％，6mL)处理。水相用二氯甲烷萃取3次(每次10mL)。合并有机相，然后经无水硫酸钠干燥。过滤后，蒸发溶剂，得到油状2-氨基-4，4，4-三氟-丁-1-醇(0.174g，38％)。该油直接在下一步反应中使用无需进一步纯化。
B.5-氯-(3，3，3-三氟-1-羟甲基-丙基)-噻吩-2-磺酰胺在氮气、25℃下，向2-氨基-4，4，4-三氟-丁-1-醇(0.161g，1.12mmol)的无水CH2Cl2(4mL)溶液中滴加入Et3N(0.17mL，1.23mmol)，随后滴加入5-氯噻吩-2-磺酰氯(0.243g，1.12mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液。在25℃下搅拌反应物18h。将其倾入含有饱和NaHCO3溶液的分液漏斗中猝灭反应。再加入CH2Cl2(15mL)。萃取后，有机层用1NHCl溶液、蒸馏水和盐水洗涤。然后有机相经MgSO4干燥，然后浓缩至粗固体。浓缩后，该粗产物通过快速层析纯化，洗脱液己烷∶EtOAc，4∶1至2∶1，得到5-氯-(3，3，3-三氟-1-羟甲基-丙基)-噻吩-2-磺酰胺(0.191g，53％)，为澄清油状物，真空下结晶，质谱(-ESI)321.9(M-H)-。
分析C8H9ClF3NO3S2计算值 C，29.68；H，2.80；N，4.33；实测值 C，29.75；H，2.72；N，4.10。
实施例415-氯-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-[(1R)-1-羟乙基]-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺 A.5-氯-N-[3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-S-(甲酰基)丙基]噻吩-2-磺酰胺在氮气、0℃下，搅拌5-氯-N-[3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-S-(羟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺(按实施例5制备，0.200g，0.511mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液。一次性加入Dess-Martin过碘烷试剂(0.325g，0.767mmol)，然后在0℃下搅拌该溶液1h。在25℃下，再搅拌1h后，通过TLC(EtOAc∶PE 30∶70)确认反应完成。溶液用Et2O(100mL)稀释，然后向该溶液中加入Na2S2O3(1.10g)的饱和NaHCO3水溶液(10mL)的溶液。搅拌得到的混合物0.5h。分离液层，然后有机层再用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤，然后干燥(Na2SO4)。浓缩后，得到的残余物(0.190g，95％)直接在下一步反应中使用无需进一步纯化。
B.5-氯-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-[(1R)-1-羟乙基]-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺在氮气、0℃下，搅拌5-氯-N-[3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-S-(甲酰基)丙基]噻吩-2-磺酰胺(0.188g，0.482mmol)的THF(5mL)溶液。滴加入甲基溴化镁(0.482mL，3.0M的Et2O溶液)，在25℃下搅拌得到的溶液2h。然后，通过TLC(EtOAc∶PE 30∶70)确认反应完成。溶液用饱和NH4Cl水溶液(10mL)猝灭，然后用Et2O(100mL)萃取。有机层用盐水(10mL)洗涤，然后干燥(Na2SO4)。浓缩后，粗产物通过制备板层析纯化，洗脱液EtOAc∶PE 30∶70，随后通过手性HPLC[ChiralcelOJ柱；2×25cm，254nm，0.6mL进样；流动相10mL/min10％EtOH/7200；第一峰为产物，Rf＝6.106，99.9％纯度]纯化，得到主要的非对映体5-氯-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1- [(1R)-1-羟乙基]-2-(三氟甲基)-丙基]噻吩-2-磺酰胺灰白色固体(0.043g，22％)。
质谱(-ESI)404(M-H)-。
分析C10H10ClF6NO3S2计算值 C，29.60；H，2.48；N，3.45。
实测值 C，29.59；H，2.40；N，3.41。
实施例42Aβ40/42酶联免疫吸附测定(ELISA)试验A.该试验简述在细胞培养基中，用DMSO贮备液将化合物稀释至2μM以及2μM以下。然后将化合物施用于带有APP-REP-NL质粒的CHO细胞[Sudhir等，J.Biolog.Chem.26725602-25608(1992)]22小时。该条件作用期后，收集培养基，用含蛋白的测定缓冲液稀释，然后在制备ELISA板上温育样品、对照品及合成肽标准品。使用具有特异性直接抗β淀粉样蛋白40或42羧基末端的抗体的夹心ELISA[与Haugabook等，J.Neurosci.Methods 108171-179(2001)报告的方法类似，但使用山羊抗小鼠IgGl(来源Southern Biotech)作锚钩，6E10作捕捉抗体(来源SENETEK)、兔抗Aβ40和抗Aβ42(来源QCB)及APL-驴抗兔IgG(H+L，来源Southern Biotech)作检查抗体]，将化合物处理细胞生成细胞外β淀粉样蛋白的效果定量。随后将经化合物处理的细胞在含MTS-甲肤的细胞培养基中温育。短暂温育后，在分光光度计上阅读含有MTS/培养基的板，以确定化合物毒性影响细胞代谢和合成β淀粉样蛋白能力的程度。
B.试验材料(i)试样化合物样品以20mM贮备溶液提供，用100％DMSO溶液制备。
(ii)APP-REP-NL细胞用1∶100稀释液使合格细胞系按星期传代(carried)，并在用1×抗生素/抗霉菌剂、200μg/ml G418抗生素以及10％合格胎牛血清补加的DMEM中培养。细胞还用液氮贮存。定期评价β淀粉样蛋白生成，细胞保存在培养基中，或用完全表达的祖细胞(progenitors)替换。
(iii)抗体来自合格批号，在本试验中证明合格。将抗体在-80℃下以小等分试样冷冻保存，使用时解冻。
(iv)试剂具备现有的最高质量。某些试剂为“特定批”，且只可使用来自那个特定制造商的试剂和批。
(v)塑料制品具备现有的最高质量。
C.活性标准如果化合物减少Aβ40的EC50＜100μM，并且在EC50附近的剂量下无毒性，可认为化合物有活性。
D.标准β淀粉样蛋白抑制剂按WO 98/22494中所述方法制备参比γ分泌酶(secretase)抑制剂DAPT(LY374973、AN37124Dovey H.F.等，J.Neurochem.76173-181(2001))，在Ab40/42 ELISA中测试，得到Aβ40EC50＝171nM和Aβ42EC50＝128nM。
实施例43阻抑蛋白释放试验(RRA)根据[Shuey，D.J.，Sheiffele，P.，Jones，D.，Cockett，M.I.和Quinet，E.M.(1999)，"Repressor releasea useful tool for monitoring amyloidprecursor protein(APP)proteolysis in mammalian cells"(阻抑蛋白释放用于监测哺乳动物细胞中淀粉样蛋白前体蛋白(APP)蛋白水解的有用工具)，Society for Neuroscience Abstracts，第25卷，第29届神经科学学会年度大会，Miami Beach，Florida，1999年10月23-28日]公布的技术，用RRA测试按以上实施例中所述方法生成的化合物。简而言之，该试验按如下方法进行。
A.细胞培养在37℃、5％ CO2下，在完全DMEM培养基(DMEM-高浓度葡萄糖及10％胎牛血清、1％非必需氨基酸和1％青霉素-链霉素)中培养CHO-K1细胞。在转染前24hr，将2百万细胞置于10-cm皿中。
按Gibco BRL推荐的方法，用他们的Lipofectamine Plus系统完成瞬时转染。首先，将构建DNA的6μg pRSVO-1uc和6μg APP-1acI加入到460μL Opti-Mem转染培养基中，然后和30μL Plus试剂一起温育15分钟。然后将40μL Lipofectamine Plus试剂和460μLOpti-Mem转染培养基的脂质混合物与DNA-Plus试剂混合物一起温育15分钟。DNA-脂质温育期间，洗涤CHO-Kl细胞一次，用5.0mL无青霉素-链霉素的DMEM培养基覆盖。然后将该DNA-脂质制剂分层铺在这些细胞上，并在37℃下温育过夜。
将150万转染细胞/孔(总体积100μL)置于无菌、不透明的Packard96孔Cultur-PlatesTM中的澄清DMEM完全培养基(DMEM-无酚红)中，并在37℃、5％ CO2下温育3-5小时。
B.化合物稀释用两个不同方案稀释化合物；一个方案用于提供纯的化合物(小瓶中称重粉末)，另一个方案用于以溶液提供化合物(在96孔板中，20mM的DMSO溶液)。对于两个方案，新鲜制备25mM Hepes和25mMHepes/l％DMSO，作为稀释液使用。在所有的试验板中，Hepes/DMSO均作为对照稀释液使用。
下表描述的是稀释化合物的步骤(请注意最后步骤为将化合物加至组织培养板中的细胞/培养基)表3
因为某些化合物以20mM加至96孔格式中，以下代表它们的稀释方案(注意用这些化合物的平均分子量计算这些稀释度，且如上所述最后步骤为在组织培养板中将化合物加入细胞/培养基)
表4
一旦化合物稀释，将它们一式二份施用于组织培养板中的细胞(制备如上)。在37℃、5％ CO2下，使细胞和化合物一起再温育36-48小时。
C.测定进行萤光素酶测定(LucLite试剂，Packard)，然后在PackardTopCount仪器上读数。从每个96孔板中除去培养基，且用100μLPBS/孔(有Mg2+和Ca2+)替换。向各孔中加入等体积(100μL)LucLite溶胞/底物缓冲液，然后密封这些板，在暗处、室温下，在旋转震动器上混合约15至约30分钟。然后在TopCount仪器上读取萤光素酶读数。测定以相对光单位(RLU)表示，且用MS Excel程序计算和分析如下。
D.数据分析有关本文中例举化合物的测定结果见下表。如果化合物在20μg/mL下导致萤光素酶活性至少增加1.5倍且无毒性，则认为化合物在RRA中有活性，通过信号损失确定(≤0.75倍增加)。增加倍数为萤光素酶活性(测量的相对光单位)比稀释对照的量。SEM代表平均增加倍数的标准误差(未显示)。发现所有测试化合物均无毒性。
E.标准β淀粉样蛋白抑制剂按国际专利公布号WO 98/22494所述方法制备参比γ分泌酶抑制剂DAPT(LY374973，AN37124Dovey，H.F等，J.Neurochem.76173-181(2001))，且在20μg/mL在RRA中测试，表明萤光素酶活性增加18.5-28.1倍。
表5-本发明示例性化合物
*APPI增加的倍数，所有化合物均在20μg/mL测试。
本说明书中引用的所有出版物通过引用结合到本文中。虽然根据特别优选的实施方案对本发明进行了描述，但将认识到可进行各种修改而不偏离本发明的宗旨。这类修改将落入权利要求书的范围内。
权利要求
1.一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐、水合物或前体药物 其中T选自CHO、COR8和C(OH)R1R2；R1和R2独立选自氢、低级烷基、取代低级烷基、CF3、烯基、取代烯基、炔基和取代炔基；R3选自氢、低级烷基和取代低级烷基；R4选自(CF3)n烷基、(CF3)n(取代烷基)、(CF3)n烷基苯基、(CF3)n烷基(取代苯基)和(F)n环烷基；n＝1-3；R5选自氢、卤素、CF3、Y＝C时稠合至Y的二烯和Y＝C时稠合至Y的取代二烯；W、Y和Z独立选自C、CR6和N，条件是W、Y或Z中的至少一个必须为C；R6选自氢、卤素、低级烷基和取代低级烷基；X选自O、S、SO2和NR7；R7选自氢、低级烷基、取代低级烷基、苄基、取代苄基、苯基和取代苯基；和R8选自低级烷基、CF3、苯基和取代苯基。
2.权利要求1的化合物，其中R5为卤素。
3.权利要求2的化合物，其中R5为氯、溴或氟。
4.权利要求1-3中任一项的化合物，其中R1和R2各自为氢。
5.权利要求1-4中任一项的化合物，其中W为C，且Z为CR6。
6.权利要求1-4中任一项的化合物，其中X为S，且W、Y和Z独立选自C或CR6，条件是W、Y或Z中的一个为C。
7.权利要求1-6中任一项的化合物，其中R4选自S-立体化学的(CF3)n低级烷基、(CF3)n(取代低级烷基)、(CF3)n低级烷基苯基和(CF3)n低级烷基(取代苯基)。
8.权利要求1的化合物，其中X为S，W为C，Y为CH，Z为CH，R5为氯，R4为CF3CH2CHCH3，R3、R1和R2各自为氢，所述化合物具有1S、2R立体化学。
9.权利要求1的化合物，其中X为S，W为C，Y为CH，Z为CH，R5为氯，R4为CF3CHCF3，R3、R1和R2各自为氢，所述化合物具有1S立体化学。
10.权利要求1的化合物，其中W为N，且X为NR7。
11.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、水合物或前体药物，所述化合物选自1)5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺；2)5-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺；3)5′-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基，4，4，4-三氟-1-(1-羟乙基)丁基]噻吩-2′-磺酰胺；4)5′-氯-N-[3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-羟甲基)丙基]噻吩-2′-磺酰胺；5)5′-氯-N-[3，3，3-三氟-2-(三氟甲基)-1-S-(羟甲基)丙基]噻吩-2′-磺酰胺；6)5-氯-N-[(1R，2S)-2-乙基-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺；7)5-氯-N-[4，4，4-三氟-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺；8)5-氯-N-{(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-[(1S)-1-羟乙基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺酰胺；9)5-氯-N-{(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-[(1R)-1-羟乙基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺酰胺；10)5-氯-N-[(1S，2S)-4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺；11)(2S，3S)-2-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-磺酰基)-酰氨基-5，5，5-三氟-3-乙基-戊-1-醇；12)(2S，3R)-2-(5-氯-1，3-二甲基-1H-吡唑-4-磺酰基)-酰氨基-5，5，5-三氟-3-苯基-戊-1-醇；13)5-氯-N-[1-(4，4-二氟环己基)-2-羟乙基]噻吩-2-磺酰胺；14)5-氯-N-[1-(6，6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)-2-羟乙基]噻吩-2-磺酰胺；15)5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-甲酰基-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺；16)N-[(1S，2R)-1-乙酰基-4，4，4-三氟-2-甲基丁基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺；17)5-氯-N-[(1S，2R)-4，4，4-三氟-1-(1-羟基-1-甲基乙基)2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺；18)4-溴-5-氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺；19)4-溴-5-氯-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺；20)5-氯4-氟-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺；21)5-溴-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺；22)5-氟-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺；23)5-溴-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺；24)5-氟-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺；25)5-氯-N-[4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-(2，2，2-三氟乙基)丁基]噻吩-2-磺酰胺；26)5-氯-N-[(1S)-(4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-(2，2，2-三氟乙基)丁基)]噻吩-2-磺酰胺；27)4，5-二氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺；28)N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-3-磺酰胺；29)2，5-二氯-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-3-磺酰胺；30)N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺；31)4，5-二氯-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺；32)N-(3，3，3-三氟-1-羟甲基-2-三氟甲基-丙基)噻吩-2-磺酰胺；33)N-(3，3，3-三氟-1-羟甲基-2-三氟甲基-丙基)噻吩-3-磺酰胺；34)2，5-二氯-N-(3，3，3-三氟-1-羟甲基-2-三氟甲基-丙基)噻吩-3-磺酰胺；35)4，5-二溴-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺；36)3-溴-5-氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺；37)4-溴-2，5-二氯-N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺；38)N-[3，3，3-三氟-1-(羟甲基)-2-(三氟甲基)丙基]苯并[b]噻吩-2-磺酰胺；39)5-氯-N-(3，3，3-三氟-1-羟甲基-丙基)-噻吩-2-磺酰胺；和40)5-氯-N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-[(1R)-1-羟乙基]-2-(三氟甲基)丙基]噻吩-2-磺酰胺。
12.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、水合物或前体药物，所述化合物为5-氯-N-[(1S)-(4，4，4-三氟-1-(羟甲基)-2-(2，2，2-三氟乙基)丁基)]噻吩-2-磺酰胺。
13.权利要求1的化合物，其中X为O，且W、Y和Z独立选自C和CR6，条件是W、Y或Z中的一个为C。
14.权利要求13的化合物，其中R5为卤素，R4选自S-立体化学的(CF3)n低级烷基、(CF3)n(取代低级烷基)、(CF3)n低级烷基苯基、(CF3)n低级烷基(取代苯基)，且R3、R1和R2均为H。
15.权利要求1的化合物，其中T为C(OH)R1R2，R1、R2和R3为H，且R4为(F)n环烷基。
16.权利要求1的化合物，其中T为C(OH)R1R2，R1、R2和R3为H，且R4为(CF3)n烷基。
17.权利要求1的化合物，其中T为C(OH)R1R2，R1为CH3，R2为H，R3为H，且R4为(CF3)n烷基。
18.权利要求1的化合物，其中T为CHO，R3为H，且R4为(CF3)n烷基。
19.权利要求1的化合物，其中T为C(OH)R1R2，R1、R2和R3为H，且R4为S-立体化学的(CF3)2CH。
20.权利要求1的化合物，其中T为CHO，R3为H，且R4为S-立体化学的CH(CH3)CH2CF3。
21.权利要求1的化合物，其中T为C(O)R8，R3为H，R4为S-立体化学的CH(CH3)CH2CF3，且R8为CH3。
22.权利要求1的化合物，其中T为C(OH)R1R2，R1、R2和R3为H，且R4为S-立体化学的CH(CH2CF3)2。
23.权利要求1的化合物，其中T为C(OH)R1R2，R1、R2和R3为H，且R4为S-立体化学的CH(CH3)CH2CF3。
24.权利要求1的化合物，其中T为C(OH)R1R2，R1为CH3，R2和R3为H，且R4为S-立体化学的CH(CF3)2。
25.权利要求1的化合物，其中T为C(OH)R1R2，R1、R2和R3为H，且R4为(F)n环烷基。
26.权利要求1的化合物，其中所述药学上可接受的盐选自有机酸盐、无机酸盐、碱盐及其混合物。
27.权利要求26的化合物，其中所述有机酸盐和无机酸盐选自乙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、苹果酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、甲苯磺酸及其混合物。
28.权利要求26的化合物，其中所述碱盐选自氢氧化钠、氢氧化锂和氢氧化钾及其混合物。
29.一种药用组合物，所述组合物包含权利要求1-28中任一项的化合物和生理上相容的载体。
30.一种药用组合物，所述组合物包含权利要求1-28中任一项化合物的前体药物和生理上相容的载体。
31.一种抑制患者β3淀粉样蛋白生成的方法，所述方法包括释放权利要求1-28中任一项的化合物或权利要求29或30的药用组合物的步骤。
32.权利要求31的方法，其中所述化合物经口、通过注射或吸入释放。
33.一种治疗患者疾病的方法，所述疾病选自阿尔茨海默病、淀粉样蛋白血管病、脑淀粉样蛋白血管病、系统性淀粉样变性、伴随Dutch型淀粉样变性的遗传性脑出血、包涵体肌炎、轻度认知缺损(MCI)和唐氏综合征，所述方法包括步骤以足以缓解所述疾病症状或发展的量给予所述患者权利要求1-28中任一项的化合物或权利要求29或30的组合物。
34.一种药剂盒，所述药剂盒包含含权利要求29或30的药用组合物的容器。
35.一种制备三氟甲基化或氟化杂环磺酰胺化合物的方法，所述方法包括步骤(a)过滤氨基酯的非对映体混合物，所述氨基酯具有至少一个手性中心和至少一个通过烷基与至少一个手性中心连接的三氟甲基或氟基；(b)用DIBAL-H的甲苯溶液处理所述氨基酯，得到N-苄基氨基醇；(c)用催化剂氢化该N-苄基氨基醇，并得到氨基醇；(d)用杂环磺酰氯使(c)的氨基醇磺酰化；和(e)使(d)的磺酰化产物结晶，得到手性纯三氟甲基化或氟化杂环磺酰胺化合物。
36.权利要求35的方法，其中所述三氟甲基化杂环磺酰胺化合物为权利要求1的化合物。
37.权利要求36的方法，其中所述结晶步骤用乙酸乙酯和己烷进行。
38.一种制备三氟甲基化或氟化杂环磺酰胺化合物的方法，所述方法包括步骤(a)用脱水剂和手性亚磺酰胺处理三氟甲基化或氟化醛，形成三氟甲基化或氟化手性亚磺酰胺；(b)用氰化剂处理所述三氟甲基化或氟化手性亚磺酰亚胺，形成三氟甲基化或氟化非对映体α-氨基腈；(c)将所述三氟甲基化或氟化非对映体α-氨基腈水解为三氟甲基化α-氨基酸；(d)将所述三氟甲基化或氟化α-氨基酸还原为三氟甲基化或氟化β-氨基醇；和(e)使所述三氟甲基化或氟化β-氨基醇与杂环磺酰氯反应，形成所述三氟甲基化或氟化杂环磺酰胺。
39.权利要求38的方法，所述方法还包括(f)萃取所述三氟甲基化或氟化杂环磺酰胺。
40.权利要求38或39的方法，所述方法还包括纯化所述三氟甲基化或氟化杂环磺酰胺。
41.权利要求40的方法，其中所述三氟甲基化或氟化杂环磺酰胺使用层析法纯化。
42.权利要求38的方法，其中所述脱水剂为乙醇钛、镁、硫酸盐或4分子筛。
43.权利要求38的方法，其中所述手性亚磺酰胺为S-(+)-甲苯亚磺酰胺或叔丁烷亚磺酰胺。
44.权利要求38的方法，其中所述氰化剂为乙基异丙氧基氰化铝。
45.权利要求38的方法，其中所述脱水剂为乙醇钛，所述手性磺酰胺为S-(+)-甲苯亚磺酰胺，且所述氰化剂为乙基异丙氧基氰化铝。
46.权利要求1-28中任一项的化合物或其所述可接受的盐或权利要求29或30的组合物在制备药物中的用途。
47.权利要求1-28中任一项的化合物或权利要求29或30的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于给予哺乳动物患者以抑制β淀粉样蛋白生成。
48.权利要求47的用途，其中所述化合物经口、通过注射或吸入给药。
49.权利要求1-28中任一项的化合物或权利要求29或30的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗选自以下的疾病阿尔茨海默病、淀粉样蛋白血管病、脑淀粉样蛋白血管病、系统性淀粉样变性、伴随Dutch型淀粉样变性的遗传性脑出血、包涵体肌炎、轻度认知缺损(MCI)和唐氏综合征。
全文摘要
提供式(I)化合物，其中T为CHO、COR
文档编号A61K31/381GK1780829SQ200480008781
公开日2006年5月31日 申请日期2004年3月26日 优先权日2003年3月31日
发明者A·F·克雷夫特, L·雷斯尼克, S·C·迈尔, G·迪亚曼蒂迪斯, D·C·科尔, 王听中, R·J·加兰特, M·霍克, B·L·哈里森, 张民生 申请人:惠氏公司