专利名称：作为蛋白激酶c抑制剂的取代的吡咯－2,5－二酮的制作方法
技术领域：
本发明涉及吲哚基马来酰亚胺衍生物、它们的制备方法以及包含它们的药物组合物。
更具体地讲，本发明提供了式I化合物 其中Ra是H、C1-4烷基或被OH、NH2、NHC1-4烷基或N(C1-4烷基)2取代的C1-4烷基；Rb是H、卤素、C1-6烷基或C1-6烷氧基，并且R是式(a)的基团 其中R1和R2各自独立地是或H甲基；R3是F、Cl、乙酰胺基、硝基或氨基；R4是H、CH3、CF3、F或Cl；当R3是Cl时，R4不是H、CH3或CF3。
在式I化合物中，单独地或以任何亚组合优选以下含义1.Ra是H或甲基；2.Rb是H、甲基或乙基；3.R1是甲基；
4.R2是H；5.R3是F、Cl或硝基；6.R3连接在2位；7.R4是H或F，其中当R3是Cl时，R4不是H；8.R4连接在4位。
式I化合物可以以游离形式或盐形式存在，例如与如有机或无机酸，例如盐酸、乙酸或三氟乙酸的加成盐。
可以理解，式I化合物可以以旋光异构体、外消旋体或非对映异构体的形式存在。例如在哌嗪残基的3位具有取代基的环碳原子是不对称的并且可以具有D-或L-构型。应当理解为本发明包含所有的对映异构体和它们的混合物。类似的考虑也适用于所提及的存在不对称碳原子的原料。
本发明也包括制备式I化合物的方法，该方法包括将式II化合物 其中Ra和Rb如上文所定义，与式III化合物反应R-CH2-CO-NH2(III)其中R如上文所定义，并且，如果需要，将获得的游离形式的式I化合物转化为所需的盐形式，反之亦然。
该方法可方便地在强碱例如t-BuOK的存在下进行，例如WO02/38561中所公开的。
式II和III的化合物可以根据已知的方法制备，例如在WO 02/38561和WO 03/082859中公开的。
在没有具体描述原料的制备的情况下，这些化合物是已知的或者可以根据与本领域中公知的方法相类似的方法或如下文中所描述的那样进行制备。
用下面的实施例来对本发明进行说明。
RT＝室温DMF＝二甲基甲酰胺THF＝四氢呋喃FCC＝快速柱色谱法TLC＝薄层色谱法TBAF＝氟化四丁基铵DBU＝1，8-二氮杂双环[5，4，0]十一-7-烯EtOAc＝乙酸乙酯MTBE＝甲基叔丁基醚实施例13-(1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯基]-吡咯-2，5-二酮 在0℃、氩气下，向含2-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯基]-乙酰胺(278mg，1.00mmol)和(1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(366mg，1.80mmol)的干燥的THF(8.0mL)溶液中加入1.0M t-BuOK的THF溶液(4.0mL，4.0mmol)。在0℃下搅拌30分钟并且在室温下搅拌1小时后，TLC表明乙酰胺完全消耗。将紫色的反应混合物在EtOAc(50mL)和盐水(50mL)之间分配，将两层分开，水层用EtOAc(50mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。粗产物通过FCC纯化(EtOAc/AcOH/H2O 7∶1∶1)获得标题化合物，为其水溶性乙酸盐。橙色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.84(s，6H，CH3COO-)，1.97-2.15(m，4H)，2.03(s，3H)，2.95-3.21(m，4H)，6.51(d，J＝7.8Hz，1H)，6.54(d，J＝2.7Hz，1H)，6.73(t，J＝7.8Hz，1H)，7.01-7.07(m，2H)，7.41(d，J＝8.1Hz，1H)，8.00(s，1H)，8.13(d，J＝9.4Hz，1H)，10.8-11.4(br，1H)，11.95(bs，1H)。ES+-MS431[M+H]+。
2-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯基]-乙酰胺的制备将[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯基]-乙酸乙酯(1.54g，5.01mmol)混悬于33％NH4OH水溶液(400mL)中，在室温下搅拌3天。在真空下小心地减少体积直至剩余黄色固体状的标题化合物，将其在高真空下进一步干燥。ES+-MS279[M+H]+。-乙酸乙酯的制备在氩气下，将(5-溴-2-硝基-苯基)-乙酸乙酯(2.02g，7.00mmol)和1-甲基-哌嗪(1.40g，14.0mmol)的混合物在65℃下加热24小时。将反应混合物在CH2Cl2(25mL)和H2O(25mL)之间分配，并且水层用CH2Cl2(2×25mL)萃取。合并的有机层用盐水(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。粗产物通过FCC纯化(CH2Cl2/MeOH 97.5∶2.5)获得标题化合物，为黄色油状物。ES+-MS308[M+H]+。
(5-溴-2-硝基-苯基)-乙酸乙酯的制备在-40℃、氩气下，向1.0M t-BuOK的THF溶液(60mL，60mmol)中历经15分钟缓慢加入含4-溴-硝基苯(5.05g，25.0mmol)和氯-乙酸乙酯(3.68g，30.0mmol)的THF(30mL)溶液。将深蓝色反应混合物在-40℃下搅拌1小时。TLC分析表明在此时间点有一些原料存在。但是，在继续搅拌中没有观察到原料的进一步转化。反应混合物用2M HCl水溶液(40mL)小心地处理并且用MTBE(2×100mL)萃取。合并的有机相用H2O(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。粗产物通过FCC纯化(环己烷/EtOAc 97∶3)获得标题化合物，为无色油状物。ES+-MS289[M+H]+。
实施例23-[2-氨基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮 在0℃、氩气下，向含2-[2-氨基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酰胺(124mg，0.50mmol)和(1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(183mg，0.90mmol)的干燥的THF(4.0mL)溶液中加入1.0M t-BuOK的THF溶液(2.0mL，2.0mmol)。在0℃下搅拌30分钟并且在室温下搅拌30分钟后，TLC表明乙酰胺完全消耗。将深红色反应混合物在EtOAc(25mL)和盐水(25mL)之间分配，将两层分开。用饱和的NH4Cl水溶液将水层pH调节至6。水层用EtOAc(2×25mL)萃取并且将合并的有机层用盐水(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。粗产物通过FCC纯化(EtOAc/AcOH/H2O5.5∶1∶1)获得标题化合物，为其水溶性乙酸盐。红色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.70(s，9H，CH3COO-)，2.25(s，3H)，2.22-2.38(m，4H)，2.78-2.84(m，4H)，6.51(d，J＝8.7Hz，1H)，6.63(d，J＝2.8Hz，1H)，6.64-6.68(m，2H)，6.77(dd，J＝8.7Hz，J＝2.8Hz，1H)，6.97-7.02(m，1H)，7.35(d，J＝8.0Hz，1H)，7.90(s，1H)，11.91(bs，1H)。ES+-MS402[M+H]+。2-[2-氨基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酰胺的制备向含2-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯基]-乙酰胺(468mg，1.68mmol)的MeOH(8.0mL)溶液中加入10％钯炭(59mg)。将反应混合物在氢气气氛下(1atm)搅拌18小时，通过微纤维过滤器(0.45μM)过滤，并且滤液在减压下浓缩。将剩余的棕色油状物溶解于MeOH(1mL)中，加入MTBE(5mL)，并且在减压下小心地除去溶剂以获得标题化合物，为米黄色粉末。ES+-MS249[M+H]+。
实施例3N-[2-[4-(1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酰胺 在0℃、氩气下，向含2-[2-乙酰氨基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酰胺(145mg，0.50mmol)和(1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(183mg，0.90mmol)的干燥的THF(6.0mL)混悬液中加入1.0M t-BuOK的THF溶液(2.0mL，2.0mmol)。所得的黄色混悬液在室温下搅拌18小时。将此刻为深红色的反应混合物在EtOAc(25mL)和盐水(25mL)之间分配，将两层分开。用饱和的NH4Cl水溶液将水层pH调节至6。水层用EtOAc(2×25mL)萃取并且将合并的有机层用盐水(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。粗产物通过FCC纯化(EtOAc/AcOH/H2O 5.5∶1∶1)获得标题化合物，为其水溶性乙酸盐。橙色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.75(s，12H，CH3COO-)，2.16(s，3H)，2.31-2.38(m，4H)，2.92-2.99(m，4H)，6.61(d，J＝7.8Hz，1H)，6.66(t，J＝7.4Hz，1H)，6.75(d，J＝2.5Hz，1H)，6.92(dd，J＝9.0Hz，J＝2.7Hz，1H)，6.99(t，J＝7.5Hz，1H)，7.32(d，J＝8.1Hz，1H)，7.47(d，J＝8.9Hz，1H)，7.75(s，1H)，8.69(s，1H)，11.86(bs，1H)。ES+-MS444[M+H]+。
2-[2-乙酰氨基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酰胺的制备将[2-乙酰氨基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酸乙酯(450mg，1.41mmol)混悬于33％NH4OH水溶液(200mL)中，并且在室温下搅拌16小时。在真空下小心地减少体积直至剩余棕色固体状的标题化合物，将其在高真空下进一步干燥。ES+-MS291[M+H]+。-乙酸乙酯的制备在氩气下，向含[2-氨基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酸乙酯(438mg，1.58mmol)的CHCl3(8.0mL)溶液中加入乙酸酐(322mg，3.16mmol)和三乙胺(240mg，2.37mmol)。所得的反应混合物在室温下搅拌1小时并回流1小时。将反应混合物在CH2Cl2(25mL)和水(20mL)之间分配并且将两层分开。水相用CH2Cl2(2×25mL)萃取并且将合并的有机层用水(2×25mL)、盐水(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩获得淡红色固体。ES+-MS320[M+H]+。-乙酸乙酯的制备向含[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯基]-乙酸乙酯(1.10g，3.58mmol)的MeOH(25.0mL)溶液中加入10％钯炭(114mg)。反应混合物在氢气气氛下(1atm)搅拌4小时，通过微纤维过滤器(0.45μM)过滤，并且将滤液在减压下浓缩获得标题化合物，为红色油状物。ES+-MS278[M+H]+。
按照实施例1、2和3或在WO 02/38561中描述的方法，但应用适当的原料，可以获得式A化合物，其中Ra、Rb、R3和R4如下表1中说明。
表1
游离形式或可药用盐形式的式I化合物表现出有价值的药理学活性，例如抑制蛋白激酶C(PKC)，如PKC同种型如α、β、δ、ε、η或θ的活性，例如通过抑制T细胞对细胞因子如IL-2的增殖应答来抑制T细胞或细胞因子如IL-2的产生，从而抑制T细胞的活化和增殖，如在体外和体内试验中所显示的那样，并且因此它们适合用于治疗。
A体外1.蛋白激酶C试验根据以下方法测定本发明化合物对不同的PKC同种型的活性。试验在白色透明底的具有非结合表面的384孔微量滴定板上进行。反应混合物(25μL)在pH 7.4的20mM Tris-HCl缓冲液中包含1.5μM的十三肽受体底物(用Ala→Ser替换模仿PKCα假底物序列)、10μM33P-ATP、10mMMg(NO3)2、0.2mM CaCl2、蛋白浓度从25至400ng/mL变化(取决于所使用的同种型)的PKC、最终脂质浓度为0.5mM的脂囊泡(包含30mol％磷脂酰丝氨酸、5mol％DAG和65mol％磷脂酰胆碱)以及0.1％BSA。培养在室温下进行60分钟。反应通过加入50μL终止混合物(含100mM EDTA、200μM ATP、0.1％Triton X-100、0.375mg/孔链霉抗生物素包被的SPA珠的磷酸缓冲盐水w/o Ca、Mg)终止。在室温下培养10分钟后，混悬液以300g旋转沉降10分钟。掺入的放射性在Trilux计数器中测量1分钟。IC50测定根据常规原理通过用浓度在1-1000μM范围内的系列稀释的抑制剂培养来进行。IC50值通过用XL fit软件拟合的曲线图计算。
2.蛋白激酶Cθ试验在以上描述的试验条件下应用人重组PKCθ。在此试验中，式I化合物抑制PKCθ的IC50≤1μM。例如，实施例1的化合物抑制PKCθ的IC50为8.9nM并且实施例4的化合物抑制PKCθ的IC50为10.2nM。
3.蛋白激酶Cα试验人重组PKCα从Oxford Biomedical Research获得并且在以上A.1部分中描述的试验条件下应用。在此试验中，式I化合物抑制PKCα的IC50≤1μ。例如，实施例1的化合物抑制PKCα的IC50为2.6nM，实施例4的化合物抑制PKCα的IC50为2.9nM。
4.蛋白激酶Cβ1试验人重组PKCβ1从Oxford Biomedical Research获得并且在以上A.1部分中描述的试验条件下应用。在此试验中，式I化合物抑制PKCβ1的IC50≤1μM。
5.蛋白激酶Cδ试验人重组PKCδ从Oxford Biomedical Research获得并且在以上A.1部分中描述的试验条件下应用。在此试验中，式I化合物抑制PKCδ的IC50≤1μM。
6.蛋白激酶Cε试验人重组PKCε从Oxford Biomedical Research获得并且在以上A.1部分中描述的试验条件下应用。在此试验中，式I化合物抑制PKCε的IC50≤1μM。
7.蛋白激酶Cη试验人重组PKCη从PanVera获得并且在以上A.1部分中描述的试验条件下应用。在此试验中，式I化合物抑制PKCη的IC50≤1μM。
8.CD28共刺激试验试验用人白细胞介素-2启动子/报道基因构建体转染的Jurkat细胞进行，所述启动子/报道基因构建体如Baumann G等人在Transplant.Proc.1992；2443-8中所述，β-半乳糖苷酶报道基因被萤光素酶基因代替(de WetJ.，等人.，Mol.Cell Biol.1987，7(2)，725-737)。通过固相连接的抗体或乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)和Ca++离子载体离子霉素按照如下描述刺激细胞。对于抗体介导的刺激，将Microlite TM1微量滴定板(Dynatech)用每孔含3μg/mL羊抗鼠IgG Fc抗体(Jackson)的55μL磷酸缓冲盐水(PBS)在室温下包被3小时。在移去抗体后，通过与含2％牛血清白蛋白(BSA)的PBS(每孔300μL)在室温下培养2小时封闭该板。在用每孔300μL PBS洗涤三次后，加入含10ng/mL抗-T细胞受体抗体(WT31，Becton & Dickinson)和300ng/mL抗-CD28抗体(15E8)的50μL 2％BSA/PBS溶液作为刺激抗体并且在4℃培养过夜。最后将板用每孔300μL PBS洗涤三次。在另外的板中一式两份的配制七次三倍系列稀释于试验培养基(包含50μM 2-巯基乙醇、100单位/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI 1640/10％胎牛血清(FCS))中的试验化合物，与转染的Jurkat细胞(克隆K22290-H23)混合并且在37℃5％CO2中培养30分钟。接着将100μL包含1×105个细胞的该混合物转移至抗体包被的试验板中。平行地将100μL与40ng/mL PMA和2μM离子霉素一起培养。37℃5％CO2中培养5.5小时后，通过生物发光方法测定萤光素酶的水平。板在500g下离心10分钟并且弹出上层清液。加入包含25mM Tris-磷酸，pH7.8、2mM DTT、2mM 1，2-二氨基环己烷-N，N，N’，N-四乙酸、10％(v/v)甘油和1％(v/v)Triton X-100的溶胞缓冲液(每孔20μL)。板在恒定摇摆下室温培养10分钟。在自动加入每孔50μL包含20mM三(羟甲基)甲基甘氨酸、1.07mM(MgCO3)4Mg(OH)2×5H2O、2.67mM MgSO4、0.1mM EDTA、33.3mM DTT、270μM辅酶A、470μM萤光素(Chemie Brunschwig AG)、530μM ATP的pH7.8的萤光素酶反应缓冲液后，用生物发光读数仪(Labsystem，Helsinki，Finland)评价萤光素酶活性。延迟时间是0.5秒，总的测量时间是1或2秒。低对照值是来自抗-T细胞受体或PMA刺激的细胞的发光单位，高对照值来自于没有任何试验样品的抗-T细胞受体/抗-CD28或PMA/离子霉素刺激的细胞。从所有的值中减去低对照值。在试验化合物存在下获得的抑制以高对照值的抑制百分比计算。引起50％抑制的试验化合物的浓度(IC50)通过剂量应答曲线确定。在此试验中，式I化合物抑制抗-T细胞受体/抗-CD28和PMA/离子霉素刺激的Jurkat细胞的IC50≤1μM。
例如，实施例1的化合物的IC50为25.5nM并且实施例4的化合物的IC50为17.0nM。
9.同种异基因混合淋巴细胞反应(MLR)根据标准方法(J.Immunol.Methods，1973，2，279和Meo T.等人.，Immunological Methods，New York，Academic Press，1979，227-39)进行双向MLR。简言之，将CBA和BALB/c小鼠的脾细胞(每孔每种细胞1.6×105个放于平底组织培养微量滴定板上，总计3.2×105个细胞)在RPMI培养基中培养，该培养基包含10％FCS、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素(Gibco BRL，Basel，Switzerland)、50μM 2-巯基乙醇(Fluka，Buchs，Switzerland)和系列稀释的化合物。每个试验化合物一式两份地进行七次三倍稀释步骤。培养4天后加入1μCi3H-胸腺嘧啶核苷。再培养5小时后，收获细胞，并且根据标准方法测定掺入的3H-胸腺嘧啶核苷。MLR的背景值(低对照)是单独的BALB/c细胞增殖。从所有的值中减去低对照。无任何样品的高对照作为100％增殖。计算样品的抑制百分比并且确定50％抑制所需的浓度(IC50值)。例如，实施例1化合物的IC50为17.5nM并且实施例4化合物的IC50为24.0nM。
B.体内大鼠心脏移植联合使用的种类雄性Lewis(RT1单元型)和BN(RT1单元型)。将动物用吸入型异氟烷麻醉。通过腹部下腔静脉使供体大鼠肝素化并同时通过主动脉进行放血，然后开胸并使心脏迅速冷却。结扎主动脉并向远端剥离至第一分支，并且将头臂动脉干在第一杈处剥离。将左侧肺动脉结扎并且剥离，将右侧剥离但保持开放。切除所有其它血管、结扎并剥离，然后将供体心脏移至冰冷的生理盐水中。
受体作如下准备切断并夹紧肾下腹主动脉和腔静脉。采用端边吻合术，使用10/0单丝缝线，在供体头臂动脉干和受体主动脉以及供体右侧肺动脉和受体腔静脉之间进行移植物的移植。移去钳子，将移植物束缚在后腹腔，腹部内容物用温生理盐水洗涤并且将动物缝合，使其在加热灯下恢复。移植物的存活通过每日触诊腹壁的供体心脏跳动来监控。当心跳停止时认为排斥完成。在用式I化合物以日剂量1-30mg/kg，每日两次口服施用治疗的动物中获得了增加的移植物存活。
移植物抗宿主模型将Wistar/F大鼠脾细胞(2×107)皮下注射到(Wistar/F×Fischer 344)F1杂交大鼠的右后足垫内。左足垫未处理。动物连续4天(0-3)用试验化合物治疗。在第7天取出腘淋巴结，并且确定两个对应淋巴结之间的重量差异。比较试验组淋巴结重量差异与未用试验化合物治疗的动物组的相应的淋巴结重量差异，结果表示为淋巴结增大的抑制(以百分比计)。
因此，式I化合物可用于治疗和/或预防T淋巴细胞和/或PKC介导的疾病或病症，例如器官或组织的同种异体移植物或异种移植物的急性或慢性排斥反应、移植物抗宿主疾病、动脉粥样硬化、血管损伤如血管成形术引起的血管闭塞、再狭窄、肥胖症、X综合征、葡萄糖耐受异常、多囊卵巢综合征、高血压、心力衰竭、慢性阻塞性肺病、中枢神经系统疾病如阿尔茨海默病或肌萎缩性侧索硬化、癌症、感染性疾病如AIDS、脓毒性休克或成人呼吸窘迫综合征、局部缺血/再灌注损伤如心肌梗死、中风、肠局部缺血、肾衰竭或出血性休克，或外伤性休克如外伤性脑损伤。式I化合物也可用于治疗和/或预防T-细胞介导的急性或慢性炎性疾病或病症或自身免疫病如类风湿性关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮、桥本甲状腺炎、多发性硬化、重症肌无力、I型或II型糖尿病和与其相关的病症、呼吸疾病如哮喘或炎性肺损伤、炎性肝损伤、炎性肾小球损伤、免疫介导的病症或疾病的皮肤表现、炎性和过度增殖性皮肤疾病(如银屑病、特应性皮炎、变应性接触性皮炎、刺激性接触性皮炎和其他的湿疹性皮炎、脂溢性皮炎)、炎性眼病如舍格伦综合征、角膜结膜炎或眼色素层炎、炎性肠病、克隆病或溃疡性结肠炎。对于以上用途，所需剂量当然将根据施用方式、治疗的具体症状和所希望的效果而变化。一般而言，以约0.1至约100mg/kg体重的日剂量全身性施用时表明可获得令人满意的效果。在较大的哺乳动物例如人中，适用的日剂量在约0.5mg至约2000mg范围内，该日剂量可以方便地例如以每天4次的分剂量或以缓释形式施用。
式I化合物可以通过任何常规的途径施用，特别是肠道施用，例如口服施用，例如以片剂或胶囊剂的形式；或非肠道施用，例如以可注射溶液剂或混悬剂的形式；局部施用，例如以洗剂、凝胶剂、软膏剂或乳膏剂的形式；或以鼻用形式或栓剂形式施用。包含游离形式或可药用盐形式的式I化合物以及至少一种可药用的载体或稀释剂的药物组合物可以用常规方法通过与可药用载体或稀释剂混合来制备。口服施用的单位剂型包含例如约0.1mg至约500mg的活性成分。
局部施用是例如对皮肤施用，局部施用的另一种形式是眼部施用。
式I化合物可以以游离形式或以可药用盐形式，如上述的可药用盐形式施用。该类盐可以用常规方法制备并且具有与游离化合物相同级别的活性。
根据前述内容，本发明还提供了1.1在需要这类治疗的个体中预防或治疗如上所述的T淋巴细胞和/或PKC或GSK-3β介导的病症或疾病的方法，该方法包括对所述个体施用有效量的式I化合物或其可药用盐；1.2在需要这类治疗的个体中预防或治疗如上所述的急性或慢性移植物排斥反应或T细胞介导的炎性或自身免疫病的方法，该方法包括对所述个体施用有效量的式I化合物或其可药用盐；2.例如在以上1.1和1.2项下所述的任意一种方法中用作药物的游离形式或可药用盐形式的式I化合物。
3.例如在以上1.1和1.2项下所述的任意一种方法中使用的药物组合物，该药物组合物包含游离形式或可药用盐形式的式I化合物以及可药用的稀释剂或载体。
4.用于制备以上1.1或1.2项下所述的任意一种方法中所用的药物组合物的式I化合物或其可药用盐。
式I化合物可以作为单独的活性成分施用或者与其它药物联合施用，所述的其它药物是免疫调节剂或其它抗炎剂，例如用于治疗或预防同种异体移植物或异种移植物的急性或慢性排斥反应或炎性或自身免疫性病症。例如，它们可以与以下物质联合使用环孢菌素，或子囊霉素或它们的免疫抑制类似物或衍生物，例如环孢菌素A、ISA Tx247、FK-506、ABT-281、ASM 981；mTOR抑制剂，例如雷帕霉素、40-O-(2-羟基)乙基-雷帕霉素、CCI779、ABT578或雷帕霉素类似物，例如AP23573等；皮质类固醇；环磷酰胺；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤；S1P受体激动剂，例如FTY720或其类似物；来氟米特或其类似物；咪唑立宾；麦考酚酸或其盐，例如钠盐；麦考酚吗乙酯；15-去氧斯潘格宁或其类似物；免疫抑制单克隆抗体，例如白细胞受体的单克隆抗体，如MHC、CD2、CD3、CD4、CD11a/CD18、CD7、CD25、CD27、B7、CD40、CD45、CD58、CD137、ICOS、CD150(SLAM)、OX40、4-1BB或其配体例如CD154的单克隆抗体；或其它的免疫调节化合物，例如具有至少一部分CTLA4或其突变体的胞外结构域，例如至少与非-CTLA4蛋白序列结合的CTLA4或其突变体，例如CTLA4Ig(例如ATCC68629)或其突变体的胞外部分的重组结合分子，如LEA29Y；或其它的粘附分子抑制剂，例如mAb或低分子量抑制剂，包括LFA-1拮抗剂、选择素拮抗剂和VLA-4拮抗剂。式I化合物也可以在例如癌症治疗中与抗增殖药物，如化疗药物联合使用，或在糖尿病治疗中与抗糖尿病药物、胰岛素促分泌剂、胰岛素分泌加强剂或胰岛素增敏剂联合施用。
根据上述内容，本发明在另一方面还提供了5.上述定义的方法，包括共同施用，例如以同时或相继的方式共同施用治疗有效量的GSK-3β、PKC或T-细胞活化和增殖抑制剂，例如游离形式或可药用盐形式的式I化合物，以及第二种药物，所述的第二种药物是如上所述的免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎、抗增殖或抗糖尿病药物。
6.治疗联合形式，如药盒，其包含a)GSK-3β、PKC或T-细胞活化和增殖抑制剂，例如游离形式或可药用盐形式的式I化合物，和b)至少一种选自免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎、抗增殖或抗糖尿病药物的第二种药物。组分a)和组分b)可以同时或相继使用。该药盒可以包含关于其施用的说明书。
如以上说明的，当GSK-3β、PKC或T-细胞活化和增殖抑制剂，例如式I化合物与其它的免疫抑制剂/免疫调节剂、抗炎、抗增殖或抗糖尿病治疗联合施用，如用于预防或治疗以上说明的急性或慢性移植物排斥反应或炎性或自身免疫病症时，共同施用的免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎、抗增殖或抗糖尿病化合物的剂量当然将根据使用的联合药物的类型如其是类固醇还是环孢菌素、应用的具体药物、治疗的症状等而变化。
权利要求
1.式I化合物或其盐 其中Ra是H、C1-4烷基或被OH、NH2、NHC1-4烷基或N(C1-4烷基)2取代的C1-4烷基；Rb是H、卤素、C1-6烷基或C1-6烷氧基，并且R是式(a)的基团 其中R1和R2各自独立地是H或甲基；R3是F、Cl、乙酰胺基、硝基或氨基；R4是H、CH3、CF3、F或Cl；当R3是Cl时，R4不是H、CH3或CF3。
2.根据权利要求1中所述的化合物，其中Ra是H或甲基；Rb是H、乙基或甲基；R1是甲基；R2是H；R3是F、Cl或硝基；R3连接在2位；R4是H或F，其中当R3是Cl时R4不是H并且R4连接在4位。
3.根据权利要求1或2中所述的化合物，其选自3-(1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯基]-吡咯-2，5-二酮；3-[2-氨基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；N-[2-[4-(1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酰胺；3-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯基]-吡咯-2，5-二酮；3-[2-氨基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；N-[2-[4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酰胺；3-[2-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；3-[2-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；3-[2-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；3-[2，4-二氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；3-[2，4-二氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；3-[2，4-二氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-4-(1，7-二甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；3-[4-氯-2-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；3-[4-氯-2-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮。
4.用作药物的根据权利要求1-3中任意一项所述的游离形式或可药用盐形式的化合物。
5.药物组合物，包含根据权利要求1-3中任意一项所述的游离形式或可药用盐形式的化合物以及可药用稀释剂或载体。
6.根据权利要求1-3中任意一项所述的游离形式或可药用盐形式的化合物或根据权利要求5中所述的药物组合物在制备用于治疗或预防T淋巴细胞和/或PKC介导的疾病或病症的药物中的用途。
7.根据权利要求1-3中任意一项所述的游离形式或可药用盐形式的化合物或根据权利要求5中所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防T-细胞介导的急性或慢性炎性疾病或病症、自身免疫病、移植物排斥反应、癌症或感染性疾病的药物中的用途。
8.药物联合形式，包含根据权利要求1-3中任意一项所述的游离形式或可药用盐形式的化合物以及选自免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎剂、化疗剂、抗增殖剂和抗糖尿病药物的另一种药物。
9.制备根据权利要求1或权利要求2中所述的式I化合物的方法，该方法包括将式II化合物 其中Ra和Rb如权利要求1和权利要求2中所定义，与式III化合物反应R-CH2-CO-NH2(III)其中R如权利要求1和权利要求2中所定义；并且，如果需要，将获得的游离形式的式I化合物转化为所需的盐形式，反之亦然。
10.在需要这类治疗的个体中治疗或预防T淋巴细胞和/或PKC介导的病症或疾病的方法，该方法包括对所述个体施用有效量的根据权利要求1-3中任意一项所述的化合物或其可药用盐。
全文摘要
本发明涉及式(I)化合物，其中R、R
文档编号A61P37/00GK1950360SQ200580015044
公开日2007年4月18日 申请日期2005年5月12日 优先权日2004年5月13日
发明者M·范艾斯, J·瓦格纳, P·冯马特 申请人:诺瓦提斯公司