专利名称：具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊及其制备方法
技术领域：
本发明涉及具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊及其制备方 法，属于高分子药物领域。
技术背景阿霉素为一种蒽环类抗肿瘤抗生素，为细胞周期非特异性药，对S期作 用最强，对M、 G1和G2期也有作用，其作用机制主要是阿霉素不经分子 嵌入DNA而抑制核酸的合成。主要用于治疗急性白血病、恶性淋巴瘤、肝 癌、肺癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、宫颈癌、膀胱癌、睾丸癌、甲状腺癌、 软组织肿瘤、骨肉瘤和神经母细胞癌等。目前临床给药多为静脉滴注，但 阿霉素不能透过血脑屏障，且静注后该药迅速分布全身，对骨髓和心脏都有较为严重的毒副作用，尽管用药剂量很大，能到达病灶部位发挥疗效的 比例却很低。高分子作为药物输送的载体，具有多种形式。近期迅速发展起来的是 微米和纳米尺度的高分子药物载体，包括微米或纳米颗粒、胶束、囊泡和 纤维。它们的基本特征，是将药物分子物理分散到这些微米或纳米载体中， 利用载体的某种特性，实现药物的定位输送和/或控制释放。这种担载方式 总有一个难以克服的缺点初期暴释。克服上述缺点的有效办法是改成"化 学担载"，即将药物分子化学键合到高分子上。通过与高分子的键合，改 善药物本身的某种性能或不足，如水溶性，从而开发新的剂型，提高原药的疗效，降低原药的毒副作用。 一些脂溶性药物如紫杉醇和阿霉素与具聚 乙二醇或聚氨基酸的键合物，属于这一类。已进入临床或临床前研究阶段。 纳米至微米尺度高分子药物或高分子微粒担载药物的显著特征是"增 强的渗透和滞留效应"，即EPR效应。EPR效应的直接结果，就是抗癌药物在癌变部位的富集，形成"病灶部位靶向"，到达病灶部位的药物的药 效得到充分发挥，因而可以减少给药频率和剂量，减少非靶部位的药物聚集和毒副作用。到目前为止，EPR效应作为高分子载体药物设计的基础和 依据，已经引起了人们广泛的研究兴趣。但毛细血管的通透性本身就是一 个很复杂的问题，不同的器官、组织，不同的病变，以及不同的病变阶段， 毛细血管的结构和通透性都会变化，因此，至今尚不能主动地利用EPR效 应来精确设计高分子药物的大小。在朝着"细胞靶向"努力奋斗的过程中，人们创造了一系列的靶向技 术，除了基于材料pH敏感性的胃肠靶向外，还有基于叶酸的癌变组织靶向， 基于乳糖的肝靶向，以及"磁靶向"等。中国专利(申请号200610034163.7) 公开了一种同时负载药物和纳米磁性颗粒的可生物降解胶囊的制备方法； 中国专利CN 101032623 A公开了一种有叶酸受体介导的靶向性壳聚糖类 载体及制备方法和应用；中国专利CN 1683016A公开了一种胶质瘤靶向化 疗的表面含转铁蛋白载药微粒制备方法。在发明人已经申请的中国专利(中国专利申请号200410011176.3和 200610016559.9)中，公开了两种紫杉醇高分子键合药。 发明内容本发明的目的之一是提供一种具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳 米胶囊。该纳米胶囊由两种聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(PEG-PLA-Dox和 Lac-PEG-PLA)混合组装而成，两者的聚乙二醇链段之间和聚乳酸链段之 间数均分子量的差别，均不超过±10%;其中一种嵌段共聚物的聚乳酸链端 接有阿霉素(Dox)，即PEG-PLA-Dox，在纳米胶囊中的摩尔比例为98-70%; 另一种嵌段共聚物的聚乙二醇链端接有乳糖(Lac)，即Lac-PEG-PLA，在 纳米胶囊中的摩尔比例为2-30%。这种纳米胶囊的结构示意图见图1。连接 在聚乳酸链段上的阿霉素(Dox)处于胶囊内核，受聚乳酸和聚乙二醇的双重保护，具有缓释功能；连接在聚乙二醇链端的乳糖处于胶囊外层，具有靶向功能，靶标为乳糖受体过表达的癌细胞。所以本发明将"键合技术"和 "耙向技术"相结合，可同时实现阿霉素的靶向输送和可控释放，并以"混 合胶束"作为自己的特征。本发明的另一目的是提供上述具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊的制备方法，其步骤和条件如下(1)含有端羧基的嵌段共聚物PEG-PLA-COOH和阿霉素的氨基縮合， 合成聚乙二醇-聚乳酸-阿霉素键合药(PEG-PLA-Dox)，该合成反应如下反应条件为在三乙胺(TEA)的存在下，在二甲基亚砜(DMSO)溶 液中，将嵌段共聚物的端羧基与阿霉素的氨基进行縮合反应，获得高分子 阿霉素键合药；其中，端羧基嵌段共聚物在DMSO溶液中的质量浓度为 5-20%;阿霉素的用量是嵌段共聚物端羧基摩尔数的1-2倍，TEA与阿霉 素等摩尔量，反应时间是12-36h，反应温度为O'C，合成的聚乙二醇-聚乳 酸-阿霉素键合药(PEG-PLA-Dox)中阿霉素的质量含量为10-30%，聚乙 二醇的数均分子量400-5000，聚乳酸的数均分子量1000-10000。典型的 PEG-PLA-Dox的核磁共振图谱见图2。(2)合成乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(Lac-PEG-PLA)，其中聚DMSO， TEAPEG"PLA隱Dox乙二醇的数均分子量400-5000，聚乳酸的数均分子量1000-10000，聚乙二 醇和聚乳酸分别与步骤(l)的聚乙二醇段和聚乳酸段的数均分子量相差不超过±腦；所述的步骤(2)中的乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物的合成反应如下所示<formula>formula see original document page 9</formula>
其步骤和条件如下(a)以叔丁氧羰基保护的氨基聚乙二醇^Boc-PEG-OH)为引发剂，以辛 酸亚锡或二乙基锌为催化剂，在甲苯溶液中进行左旋丙交酯的开环聚合， 获得带保护端氨基的嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA，其中NBOC-PEG-OH中 PEG的数均分子量为400-5000，与步骤(l)所用PEG-PLA-COOH中的PEG链段的数均分子量相差不超过±10%;丙交酯的用量由NBooPEG-OH的用 量计算得到，参照步骤(l)所用PEG-PLA-COOH中PEG与PLA的比例，过 量0-10%;辛酸亚锡或二乙基锌催化剂的用量是丙交酯单体摩尔量的 0.01-0.5%，甲苯用量是WBoc-PEG-OH和丙交酯总质量的3-10倍，聚合温 度110-180°C，聚合时间12-48h;聚合产物用沉淀剂甲醇、乙醇或乙醚沉 降，过滤，洗涤，真空干燥。(b) 脱除嵌段共聚物WBoc-PEG-PLA中的保护基团WBoc，具体方法是 将步骤(a)中所得到的带保护端氨基的嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA在二氯甲 烷和三氟乙酸的混合溶剂中0 。C条件下搅拌2-4 h; 二氯甲烷与三氟乙酸的 体积比为(l-3) : 1，聚合物在混合溶剂中的质量百分数为10-20%,然后旋 转蒸发除去二氯甲垸和三氟乙酸，向得到的固体中加入三乙胺，三乙胺的 体积是三氟乙酸体积的1-2倍，10-30 。C条件下搅拌6-10h，聚合产物用 沉淀剂甲醇、乙醇或乙醚沉降，过滤，洗涤，真空干燥，获得端氨基的嵌段 共聚物NH2-PEG-PLA。(c) 将嵌段共聚物NH2-PEG-PLA的端氨基和乳糖反应，得到聚乙二醇 端含有乳糖基元的嵌段共聚物Lac-PEG-PLA。其中乳糖用量是嵌段共聚物 端氨基的5-10倍，反应介质是二甲基亚砜(DMSO)，其用量是反应物总 量的5-20倍，反应催化剂是NaBH3CN，其用量与乳糖等摩尔，反应温度 为20-50 °C,反应时间为l-3天，最后用沉淀剂甲醇、乙醇或乙醚沉降，过滤，洗涤，真空干燥。典型Lac-PEG-PLA样品的核磁共振图谱见图3。 (3)把PEG-PLA-Dox和Lac-PEG-PLA按摩尔比(98-70) : (2-30)混合，用透析法制成混合纳米胶囊，具体的步骤和条件是(a)将两种嵌段共聚物溶于有机溶剂中，所用的有机溶剂是丙酮、四氢 呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或它们中任意两种或三种的混合物，有机溶剂体积的毫升数是高分子键合药质量克数的4-100倍；PEG-PLA-Dox和Lac-PEG-PLA的摩尔比为(98—70): (2-30)。(b) 在搅拌条件下，向上述两种嵌段共聚物的混合溶液中滴加二次蒸馏 水，形成混合纳米胶束水溶液，水的体积是有机溶剂体积的1-5倍。(c) 将混合纳米胶束水溶液进行透析，除去溶液中的有机溶剂，透析膜 截流分子量3000g/mo1，透析介质为二次蒸馏水，4-8小时更换一次，共透 析24-72小时。(d) 将透析后的混合纳米胶束水溶液浓縮到质量浓度0.5-5%，可以采 用旋转蒸发或超滤膜法浓缩。(e) 将浓缩后的混合纳米胶束水溶液冷冻干燥，得到具有靶向功能的高 分子阿霉素键合药纳米胶囊。上述具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊的制备方法中，如 在步骤(3)的(a)中使用挥发性较强的有机溶剂丙酮或四氢呋喃或者两者的 混合溶剂，步骤(c)和(d)改用旋转蒸发的方法，除去阿霉素键合药纳米胶束 混合水溶液中的挥发性有机溶剂，旋转蒸发的时间是2-8小时，至溶液总 体积的毫升数达到键合药质量克数的20~200倍。为了增加冻干后的纳米胶囊的溶解性，在步骤(3)中(e)的冻干之前，在 纳米胶束水溶液中添加增溶剂乳糖、甘露醇、水解明胶、氯化钠、葡萄糖 或它们的混合物，混合均匀；增溶剂用量为胶束水溶液中生物降解高分子 阿霉素键合药质量的50-200%。图4给出了具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊的形貌和粒 径分布。它们分别由透射电镜和光散射方法测定。本发明的有益效果本发明采用混合胶束的方法制备具有靶向功能的 高分子阿霉素键合药纳米胶囊。由聚乳酸分子链端接有阿霉素和聚乙二醇 分子链端接有乳糖单元的两种聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物按给定比例混合组装而成。众所周知，聚乳酸是一种完全生物降解的聚合物，己被美国FDA批准在人体内使用。它以玉米淀粉为原料，价廉易得，经发酵获得乳 酸，再聚合为聚乳酸，生产成本相对较低。本发明所制备的高分子阿霉素键合药和乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共 聚物都具有双亲性，而且它们中的聚乙二醇-聚乳酸嵌段的长度相同或相 近，它们的混合物可以在水介质中自组装成复合纳米颗粒，由于阿霉素连 接在聚乳酸链端，它被包裹在纳米粒子的内部(见图1)，受聚乳酸和聚乙 二醇双重保护，免受人体免疫系统的攻击，因而可以降低用药剂量，减少 毒副反应；由于与高分子结合牢固，阿霉素分子不会直幾通过扩散从胶囊 中逃逸出来。由于乳糖分子连接在聚乙二醇链端，它处于纳米胶囊的最外 层，发挥"探针"的作用，容易被乳糖的受体所识别和结合，因而使整个 纳米胶囊对乳糖受体过表达的细胞有靶向作用，优先将阿霉素送到携带乳 糖受体的细胞。本发明所使用的聚乙二醇的高度亲水性使它处于纳米胶束的外围，由 于人体免疫系统对聚乙二醇不敏感，这种在聚乙二醇保护下的阿霉素键合 药的纳米胶束可以在血液循环系统中滞留很长时间而不被免疫细胞吞噬， 具有长期药效。所选用的聚乙二醇的分子量在5000以下，在聚乳酸段降解 后，可经肾脏排出体外。本发明所制备的Lac-PEG-PLA/PEG-PLA-Dox混合纳米胶束的靶向性 能见图5。这是用人的肝癌H7402细胞试验的结果。红色是阿霉素的荧光。 由图可见，由于乳糖单元的靶向效应，纳米颗粒不但在肝癌细胞的表面聚 集，而且被内吞到细胞内。这些阿霉素纳米颗粒显然会有较好的杀灭癌细 胞的作用。如图6所示，Lac-PEG-PLA/PEG-PLA-Dox混合纳米胶束的细胞 抑制率和纯的阿霉素相当，与单纯的PEG-PLA-Dox纳米胶束相比，有显著 的差异。考虑到纳米胶束的缓释功能，在较长的时间尺度上观察，混合纳米胶束的细胞抑制率会更好。
图1:耙向胶束自组装的示意图，其中DOF阿霉素，PLA二聚乳酸链段，PEG二聚乙二醇链段，Lac二乳糖。图2:高分子键合阿霉素PEG-PLA-Dox的HNMR谱图。图3:含糖端基的嵌段共聚物Lac-PEG-PLA的^NMR谱图。图4:典型Lac-PEG-PLA/PEG-PLA-Dox混合纳米胶束的形貌图(a)和粒径分布图(b)。图5: H7402细胞的荧光显微照片。细胞培养液中分别添加 Lac-PEG-PLA/PEG-PLA-Dox混合纳米胶束(质量比3:7)，有效Dox含量 100ng/mL。细胞培养4小时。图6: H7402细胞的细胞抑制率。细胞培养液中分别添加 Lac-PEG-PLA/PEG-PLA-Dox混合纳米胶束(■) 、 PEG-PLA-Dox纳米胶束(▲)和Dox纯药(▼)。细胞培养4小时。
具体实施方式
实施例l:聚乙二醇-聚乳酸-阿霉素键合药(PEG-PLA-Dox)的合成在50 ml的安瓶中加入1.1 g端羧基嵌段聚合物PEG-PLA-COOH，其中 PEG段分子量为400， PLA段分子量为4000。然后加入20 ml无水二甲基 亚砜，待聚合物溶解后，加入200mg阿霉素、0.06mlTEA和50mgDMAP， 0。C下反应24 h，滤掉反应过程中生成的沉淀，滤液用无水乙醚沉降，得 到白色沉淀物，真空干燥。阿霉素在键合药中的质量含量为12%。 实施例2:叔丁氧羰基保护的氨基的嵌段共聚物(NBoc-PEG-PLA)的制备 将2 g分子量为400的NBoc-PEG-OH加入到带有分水器、回流冷凝管 和磁搅拌子的干燥安瓶中，加入无水甲苯40ml，共沸除水30分钟，然后 冷却到室温，加入20g用乙酸乙酯重结晶三次的丙交酯(LA)单体，反应瓶用高纯氩气换气三次，然后加入为LA单体摩尔数1/500的辛酸亚锡，110 。C下搅拌反应12h，然后将产物溶于适量二氯甲垸，用乙醚沉降，得到白 色产物，在40。C下真空干燥，即得WBoc-PEG-PLA嵌段聚合物，其数均分 子量为4400 (由^NMR算出)。实施例3:端氨基的嵌段共聚物NH2-PEG-PLA的合成1.1 g嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA溶解在10ml 二氯甲烷和5ml三氟乙酸 的混合溶剂中，在0。C条件下搅拌2h，然后旋转蒸发除去二氯甲烷和三 氟乙酸。向得到的固体中加入10ml三乙胺，室温搅拌8h。反应产物用乙 醚沉降，过滤，洗涤，真空干燥，得到端氨基的嵌段共聚物NH2-PEG-PLA， 其数均分子量为4300。实施例4:乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(Lac-PEG-PLA)的合成将0.55g端氨基的聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物和0.2 g乳糖溶于5ml DMSO中，加入0.3 gNaBH3CN,反应体系在2(TC反应72 h。产物用乙醚 沉降，洗涤，过滤，真空干燥。实施例5:制备PEG-PLA-Dox和Lac-PEG-PLA的混合纳米胶囊。取0.98 g阿霉素键合药PEG-PLA-Dox和0.02 g连接有乳糖的嵌段共聚 物Lac-PEG-PLA，溶解于10 ml丙酮中，缓慢加入50 ml 二次蒸馏水，旋 转蒸发除去丙酮，至混合胶束水溶液体积减至40ml。在得到的纳米胶束水 溶液中添加增溶剂乳糖和氯化钠各0.5g，混合均匀；然后冷冻干燥，得到 具有乳糖靶向的高分子阿霉素键合药纳米胶束的冻干粉。 实施例6:聚乙二醇-聚乳酸-阿霉素键合药(PEG-PLA-Dox)的合成在50ml的安瓶中加入l g端羧基嵌段聚合物PEG-PLA-COOH，其中 PEG段分子量为1000， PLA段分子量为1000。然后加入20 ml无水二甲基 亚砜，待聚合物溶解后，加入300mg阿霉素、0.1mlTEA和80mgDMAP， Q。C下反应24 h，滤掉反应过程中生成的沉淀，滤液用无水乙醚沉降，得到白色沉淀物，真空干燥。阿霉素在键合药中的质量含量为21%。实施例7:叔丁氧羰基保护的氨基的嵌段共聚物(NBoc-PEG-PLA)的制备 将2 g分子量为1000的NBoc-PEG-OH加入到带有分水器、回流冷凝 管和磁搅拌子的干燥安瓶中，加入无水甲苯40 ml，共沸除水30分钟，然 后冷却到室温，加入2g用乙酸乙酯重结晶三次的丙交酯(LA)单体，反应 瓶用高纯氩气换气三次，然后加入为LA单体摩尔数1/500的辛酸亚锡，110 。C下搅拌反应12h，然后将产物溶于适量二氯甲烷，用乙醚沉降，得到白 色产物，在4(TC下真空干燥，即得WBoc-PEG-PLA嵌段聚合物，其数均分 子量为2000 (由iHNMR算出)。实施例8:端氨基的嵌段共聚物NH2-PEG-PLA的合成1 g嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA溶解在10 ml 二氯甲烷和8 ml三氟乙酸 的混合溶剂中，在0 °C条件下搅拌3 h。然后旋转蒸发除去二氯甲烷和三氟 乙酸。向得到的固体中加入15 ml三乙胺。室温搅拌8h.聚合产物用乙醚 沉降，过滤，洗涤，真空干燥，得到端氨基的嵌段共聚物NH2-PEG-PLA， 其数均分子量为1900。实施例9:乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(Lac-PEG-PLA)的合成将实施例8得到的端氨基的聚乙二醇-脂肪族聚酯嵌段共聚物0.5g和 0.4 g乳糖溶于10 ml DMSO中，加入0.6 g NaBH3CN,反应体系在20'C反 应36h。产物用乙醚沉降，洗涤，过滤，真空千燥。 实施例10:制备PEG-PLA-Dox和Lac-PEG-PLA混合胶束的纳米胶囊。取0.75 g阿霉素键合药PEG-PLA-Dox和0.25 g链接有乳糖的嵌段共聚 物Lac-PEG-PLA溶解于10 ml四氢呋喃中，缓慢加入20 ml 二次蒸馏水， 用截流分子量3500的透析袋透析2天得到混合胶束水溶液。在得到的纳米 胶束水溶液中添加增溶剂乳糖、甘露醇和葡萄糖各0.5g，混合均匀；然后 冷冻干燥，得到具有乳糖靶向的高分子阿霉素键合药纳米胶束的冻干粉。
权利要求
1、具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊，其特征在于，该纳米胶囊由两种聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物混合组装而成，两者的聚乙二醇链段之间和聚乳酸链段之间数均分子量的差别，均不超过±10％；其中一种聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物的聚乳酸链端接有阿霉素，其为聚乙二醇-聚乳酸-阿霉素，在纳米胶囊中的摩尔比例为98-70％；另一种聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物的聚乙二醇链端接有乳糖，其为乳糖-聚乙二醇-聚乳酸，在纳米胶囊中的摩尔比例为2-30％；连接在聚乳酸链段上的阿霉素处于胶囊内核；连接在聚乙二醇链端的乳糖处于胶囊外层。
2、如权利要求1所述具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊的制备方法，其特征是包括以下步骤和条件(1)含有端羧基的嵌段共聚物PEG-PLA-COOH和阿霉素的氨基縮合， 合成聚乙二醇-聚乳酸-阿霉素键合药PEG-PLA-Dox，该合成反应如下<formula>formula see original document page 2</formula>反应条件为在三乙胺(TEA)的存在下，在二甲基亚砜(DMSO)溶 液中，将嵌段共聚物的端羧基与阿霉素的氨基进行縮合反应，获得高分子 阿霉素键合药；其中，端羧基嵌段共聚物在DMSO溶液中的质量浓度为5-20%;阿霉素的用量是嵌段共聚物端羧基摩尔数的1-2倍，TEA与阿霉 素等摩尔量，反应时间是12-36h，反应温度为0。C，合成的聚乙二醇-聚乳 酸-阿霉素键合药(PEG-PLA-Dox)中阿霉素的质量含量为10-30%，聚乙 二醇的数均分子量400-5000，聚乳酸的数均分子量1000-10000;(2)合成乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物Lac-PEG-PLA，其中聚乙二 醇的数均分子量400-5000，聚乳酸的数均分子量1000-10000，聚乙二醇和 聚乳酸分别与步骤(l)的聚乙二醇段和聚乳酸段的数均分子量相差不超过±10%;所述的步骤(2)中的乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物的合成反应如下所示<formula>formula see original document page 3</formula>其步骤和条件如下(a) 以叔丁氧羰基保护的氨基聚乙二醇WBoc-PEG-OH为引发剂，以辛 酸亚锡或二乙基锌为催化剂，在甲苯溶液中进行左旋丙交酯的开环聚合， 获得带保护端氨基的嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA，其中NBoc-PEG-OH中 PEG的数均分子量为400-5000，与步骤(l)所用PEG-PLA-COOH中的PEG 链段的数均分子量相差不超过±10%;丙交酯的用量由NBoc-PEG-OH的用 量计算得到，参照步骤(l)所用PEG-PLA-COOH中PEG与PLA的比例，过 量0-10%;辛酸亚锡或二乙基锌催化剂的用量是丙交酯单体摩尔量的 0.01-0.5%,甲苯用量是WBoc-PEG-OH和丙交酯总质量的3-10倍，聚合温 度110-180°C，聚合时间12-48h;聚合产物用沉淀剂甲醇、乙醇或乙醚沉 降，过滤，洗涤，真空干燥；(b) 脱除嵌段共聚物WBoc-PEG-PLA中的保护基团WBoc，具体方法是 将步骤(a)中所得到的带保护端氨基的嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA在二氯甲 烷和三氟乙酸的混合溶剂中0。C条件下搅拌2-4h; 二氯甲烷与三氟乙酸的 体积比为(l-3) : 1，聚合物在混合溶剂中的质量百分数为10-20%,然后旋 转蒸发除去二氯甲烷和三氟乙酸，向得到的固体中加入三乙胺，三乙胺的 体积是三氟乙酸体积的1-2倍，10-30 °C条件下搅拌6-10h，聚合产物用 沉淀剂甲醇、乙醇或乙醚沉降，过滤，洗涤，真空干燥，获得端氨基的嵌段 共聚物NH2-PEG-PLA;(c) 将嵌段共聚物NHrPEG-PLA的端氨基和乳糖反应，得到聚乙二醇 端含有乳糖基元的嵌段共聚物Lac-PEG-PLA，其中乳糖用量是嵌段共聚物 端氨基的5-10倍，反应介质是二甲基亚砜DMSO，其用量是反应物总量的 5-20倍，反应催化剂是NaBH3CN，其用量与乳糖等摩尔，反应温度为20-50 °C，反应时间为1-3天，最后用沉淀剂甲醇、乙醇或乙醚沉降，过滤，洗 涤，真空干燥；(3)把PEG-PLA-Dox和Lac-PEG-PLA按摩尔比(98-70):(2-30)混合，用透析法制成混合纳米胶囊，具体的步骤和条件是(a) 将两种嵌段共聚物溶于有机溶剂中，所用的有机溶剂是丙酮、四氢 呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或它们中任意两种或三种的混合物， 有机溶剂体积的毫升数是高分子键合药质量克数的4-100倍； PEG-PLA-Dox和Lac-PEG-PLA的摩尔比为(98-70) : (2-30);(b) 在搅拌条件下，向上述两种嵌段共聚物的混合溶液中滴加二次蒸馏水，形成混合纳米胶束水溶液，水的体积是有机溶剂体积的1-5倍；(c) 将混合纳米胶束水溶液进行透析，除去溶液中的有机溶剂，透析膜截流分子量3000g/mo1，透析介质为二次蒸馏水，4-8小时更换一次，共透 析24-72小时；(d) 将透析后的混合纳米胶束水溶液浓縮到质量浓度0.5-5%，可以采 用旋转蒸发或超滤膜法浓縮；(e) 将浓縮后的混合纳米胶束水溶液冷冻干燥，得到具有靶向功能的高 分子阿霉素键合药纳米胶囊。
3、 如权利要求2所述的具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊 的制备方法，其特征在于在步骤(a)中使用挥发性有机溶剂丙酮或四氢呋喃 或者两者的混合溶剂，相应地，步骤(c)和(d)采用旋转蒸发的方法，除去阿 霉素键合药纳米胶束混合水溶液中的挥发性有机溶剂；旋转蒸发的时间是 2-8小时，至溶液总体积的毫升数达到键合药质量克数的20~200倍。
4、 如权利要求2所述的具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊 的制备方法，其特征在于，在步骤(e)的冻干之前，在纳米胶束水溶液中添 加增溶剂乳糖、甘露醇、水解明胶、氯化钠、葡萄糖或它们的混合物，混 合均匀；增溶剂用量为胶束水溶液中生物降解高分子阿霉素键合药质量的 50-200%。
全文摘要
本发明提供一种具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊及其制备方法。该纳米胶囊由两种聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物混合组装而成，其中一种嵌段共聚物的聚乳酸链端接有阿霉素，在纳米胶囊中的摩尔比例为98-70％；另一种嵌段共聚物的聚乙二醇链端接有乳糖，在纳米胶囊中的摩尔比例为2-30％。连接在聚乳酸链段上的阿霉素处于胶囊内核，受聚乳酸和聚乙二醇的双重保护，具有缓释功能；连接在聚乙二醇链端的乳糖处于胶囊外层，具有靶向功能，使纳米胶囊优先进入携带乳糖受体的细胞。
文档编号A61K47/48GK101234205SQ200810050408
公开日2008年8月6日 申请日期2008年2月28日 优先权日2008年2月28日
发明者吕常海, 景遐斌, 时 柳, 胡秀丽, 郑勇辉, 陈学思, 黄宇彬 申请人:中国科学院长春应用化学研究所