专利名称：：槐果碱系列衍生物及其制备方法与用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药提取物槐果碱系列衍生物，本发明还涉及该槐果碱系列衍生物的制备方法及其用途。
背景技术：
：病毒性心肌炎是由亲心肌病毒引起的原发性心肌炎症，常累及心包，引起心包心肌炎。所谓特发性心肌炎极可能是因病毒感染引起。可引起心肌炎的病毒种类颇多，其中最常见的是柯萨奇(Coxsackie)病毒、ECHO病毒(即人肠孤病毒)、风疹病毒、流行性感冒病毒、腮腺炎病毒等。人类的心肌炎以柯萨奇病毒B组感染最为常见。一般而言，亲心肌病毒可直接破坏心肌细胞，但也可通过T细胞介导的免疫反应间接地破坏心肌细胞。由于此类病毒衣壳的糖蛋白分子结构与心肌细胞膜的糖蛋白相似，故在感染后，机体所产生的抗体(激活补体的抗体及中和病毒的抗体)既针对病毒，亦针对心肌细胞。因此，当细胞毒性T细胞被致敏后，即可破坏被病毒感染的心肌细胞。病毒性心肌炎是常见的心脏病之一，多发于青壮年，绝大多数为柯萨奇B病毒引起。可突发泵衰竭、高房室传导组滞、阿斯氏综合征或快速形成心律失常而猝死。如反复发作，发展为扩张型心肌病，75%于起病5年内死亡，后果十分严重。槐果碱是苦参中的有效成分，在苦豆子中含量更高，且提取较易。其具有多种的生物、生理活性。槐果碱在中枢神经系统、心血管系统、抗病毒、抗炎镇痛、免疫及抗肿瘤等方面均具有明确的药理学活性和应用前景，在临床上也得到了大量应用，陈曙霞等报道苦参总碱具有独特的抗柯萨基B组病毒(CVB)的作用，其中以槐果碱抗柯萨基B组3型(CVB3)的作用最强，而柯萨基B3病毒是人类病毒性心肌炎的主要病原。槐果碱对巴豆油、角叉菜胶等多种致炎剂诱发的动物急性渗出性炎症有明显的抗炎作用。其抗炎作用与垂体_肾上腺系统无关，可能是通过直接作用的方式。因此利用有机合成技术和生物学合成药物等手段，基于相似性原理，借助构效关系学研究，筛选出结构新颖、生物作用独特，药物的药学、药代、药效、安全性达到最佳匹配的活性化合物具有重大的意义和良好的可行性。上海第二医科大学仁济医院委托国家新药筛选研究中心在对抗SARS病毒活性的筛选中，发现槐果碱在100iig/mL以上浓度时，有明显的抗严重急性呼吸道综合征(severeacuterespiratorysyndrome,SARS)病毒的作用，(其EC50约为127iig/mL)。近日槐果碱注射液(用于治疗柯萨奇B病毒性心肌炎)已获得国家食品药品监督管理局关于中药第一类新药进入临床研究的批文。但是对于槐果碱结构衍生物的研究却迟迟没有取得重大的进展。目前在世界各地，病毒性疾病，如SARS、禽流感、疯牛病、艾滋病、病毒性肝炎等的全球性流行，使抗病毒药物的研究成为人们广泛关注的热点。目前认为人群中病毒性心肌炎的患病率在2.3%5.0%，在新生儿、儿童突发死亡病例中，20%为病毒性心肌炎所致，同期心血管疾病住院病人中占8.69%20.80%。病毒感染除造成急性损伤外，部分患者预后不佳，可引起扩张型心肌病，甚至心力衰竭；重症心肌炎患者还有可能发生碎死。抗病毒药物之所以发展缓慢，主要原因在于病毒的周期与宿主正常细胞的代谢过程关系密切，抑制病毒的繁殖势必导致对未感染细胞的损伤。随着对病毒特异性药物作用靶标的不断发现，以及大量特异性抗病毒药物的问世，人们逐渐认识到可以选择性治疗病毒感染，既抑制病毒繁殖而又不影响宿主细胞的生长。现在抗病毒药物研究的主要策略包括阻断病毒与靶细胞的结合、抑制逆转录酶、抑制病毒蛋白翻译、抑制蛋白质修饰或病毒颗粒的出芽释放、以及切断病毒基因组等此外，还有通过对已知疗效化合物进行结构改造、通过生物信息软件设计先导分子、义寡核普酸结构改造和化学合成、免疫调节剂研制、以及从植物和微生物中筛选天然抗病毒先导化合物等。但是，目前认为对病毒性心肌炎治疗有效而且能应用到临床的药物很少。
发明内容本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的、抗病毒活性高、毒性低的槐果碱系列衍生物。本发明所要解决的另一个技术问题是提供了一种如上所述的槐果碱系列衍生物的制备方法。本发明所要解决的另一个技术问题是提供了一种如上所述的槐果碱系列衍生物的用途。本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种槐果碱系列衍生物，其特点是，它具有下述通式(1)，(I)其中，R为CH3MgBr、EtMgBr、n-PrMgBr、i-PrMgBr、n-BuMgBr、i-BuMgBr、n-C5HnMgBr、i_C5HnMgBr、n_C6H13MgBr、n_C7H15MgBr、n_C12H25MgBr、BnMgBr、MgBr本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。本发明还提供了一种如以上技术方案所述的槐果碱系列衍生物的制备方法，其特点是，其反应方程5式如下，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>多种烷基格氏试剂/碘化铜+三氟化硼乙醚反应条件为--四氢呋喃通式(II)为槐果碱，R为CH3MgBr、EtMgBr、n-PrMgBr、i-PrMgBr、n-BuMgBr、i-BuMgBr、n-CsHuMgBr、i-CsHuMgBr、n_C6H13MgBr、n_C7H15MgBr、n_C12H25MgBr、BnMgBr、MgBr以下是发明人所做的相关试验及其结果。1、待测化合物1)、化合物1:化学名称16-methy1-15，16_seco-matridin-15-oicacidmethylester分子式C17H3。N202结构式2)、化合物2:化学名称(S)-13-methyl-matridin-15-one;分子式C16H26N20;结构式RMgBr/Cul+BF3.Et202.药物毒性实验分别按下列浓度将待测化合物加到含细胞维持液的HeLa细胞中8、16、32、125、250、500、2000、4000、8000yg/ml，每一浓度设4个重复孔，于37°C、5%C02培养箱中培养，逐日观察细胞毒性变化。计算细胞存活率。细胞存活率=(实验孔0D值/对照孔OD值)X100%3.体外抗病毒试验(CPE抑制法与MTT法)将待测化合物用RPMI1640培养基从1:2至1:128倍比稀释后加入40孔板(终浓度1.875120iig/mL)，每个稀释度加4孔，与100TCID5。CVB3m悬液一起置于C02孵箱中lh，每孔再加入浓度为3X107mL的HeLa细胞悬液，置C(U桴箱培养。同时设病毒、槐果碱和细胞对照组。培养第4天观察CPE。约在病毒对照、"+++++++"时用MTT法测各孔570nm处的OD值，并按下述公式计算对CVB3的抑制率。病毒抑制率=(药物处理组OD值-病毒对照组OD值)/(细胞对照组OD值-病毒对照组OD值)X100%治疗指数(TI)=TC50/IC50，用SPSS11.5的Probit回归法计算TC50和IC50。结果见表l与表2。表1药物对所致的CPE抑制作用及病毒抑制率<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表2药物对细胞的毒性<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>结果显不，16_methyl_15，16_seco_matridin_15_oicacidmethylester与(S)-13-methyl-matridin-15-one对体外CVB3感染的细胞具有明显保护作用。其半数有效剂量分别为7.2636±2.33415、6.2147±2.04095yg/ml，半数毒性剂量则分别是槐果碱的5.37、9.55倍。提不16_methyl_15，16_seco_matridin_15_oicacidmethylester与(S)-13-methyl-matridin-15-one具有确切抗病毒作用且毒性较低，安全性高于槐果碱。体外药效学筛选及毒性测定柯萨奇病毒B3(CVB3)是病毒性心肌炎的主要诱因之一。因此本研究以CVB3作为体外抗病毒活性筛选的目标靶点，建立CVB3感染HeLa细胞和心肌细胞的病毒性心肌炎细胞模型，选择利巴韦林和槐果碱作为阳性对照药物，并测定各衍生化合物在细胞水平的毒性。通过细胞病变抑制(CPE)实验、病毒繁殖抑制实验对化合物的抗病毒活性进行初步筛选。本发明是以槐果碱为基础的结构多样性合成和活性研究，通过运用有机化学合成手段对槐果碱分子进行结构的改造衍生，得到高效、低毒的抗病毒药物。本发明槐果碱系列衍生物具有较强的显著生物学活性，它作为一种新型的、高效低毒的抗病毒药物，对减轻广大患者的痛苦，提高患者的生活质量具有非常重要的作用。具体实施例方式以下进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。实施例1。一种槐果碱系列衍生物，它具有下述通式(I)，(II)(I).<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>多种烷基格氏试剂/碘化铜+三氟化硼乙醚反应条件为-四氢呋喃通式(II)为槐果碱，R为CH3MgBr、EtMgBr、n-PrMgBr、i-PrMgBr、n-BuMgBr、i一BuMgBr、n_C5HuMgBr、i_C5HuMgBr、n_C6H13MgBr、n_C7H15MgBr、n_C12H25MgBr、BnMgBr、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>10(I)其中，R为CH3MgBr、EtMgBr、n-prMgBr、i-PrMgBr、n-BuMgBr、i-BuMgBr,n-CsHuMgBr、i—CsHuMgBr、n_C6H13MgBr、n_C7H15MgBr、n_C12H25MgBr、BnMgBr、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其制备方法反应方程式如下，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>.RMgBr/Cul+BF3Et20权利要求一种槐果碱系列衍生物，其特征在于，它具有下述通式(I)，其中，R为CH3MgBr、EtMgBr、n-PrMgBr、i-PrMgBr、n-BuMgBr、i-BuMgBr、n-C5H11MgBr、i-C5H11MgBr、n-C6H13MgBr、n-C7H15MgBr、n-C12H25MgBr、F2008101563982C0000011.tif,F2008101563982C0000012.tif2.—种如权利要求1所述的槐果碱系列衍生物的制备方法，其特征在于，其反应方程式如下，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(II)(I)多种烷基格氏试剂/碘化铜+三氟化硼乙醚<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>通式(II)为槐果碱，R为CH3MgBr、EtMgBr、n-PrMgBr、n-C5HnMgBr、i_C5HnMgBr、n_C6H13MgBr、n_C7H15MgBr、-PrMgBr、n-BuMgBr、i一BuMgBr、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>3.—种如权利要求1所述的槐果碱系列衍生物在制备抗病毒药物或者治疗病毒性心肌炎的药物中的用途。全文摘要本发明是一种槐果碱系列衍生物，其特征在于，它的通式为(I)，其中，R为CH3MgBr、EtMgBr、n-PrMgBr、i-PrMgBr、n-BuMgBr、i-BuMgBr、n-C5H11MgBr、i-C5H11MgBr、n-C6H13MgBr、n-C7H15MgBr、n-C12H25MgBr等等。本发明还公开了上述槐果碱系列衍生物的制备方法与用途。本发明是以槐果碱为基础的结构多样性合成和活性研究，通过运用有机化学合成手段对槐果碱分子进行结构的改造衍生，得到高效、低毒的抗病毒药物。本发明槐果碱系列衍生物具有较强的显著生物学活性，它作为一种新型的、高效低毒的抗病毒药物，对减轻广大患者的痛苦，提高患者的生活质量具有非常重要的作用。文档编号A61P31/12GK101717398SQ200810156398公开日2010年6月2日申请日期2008年10月9日优先权日2008年10月9日发明者俞飚,王振中,肖伟,赵祎武申请人:江苏康缘药业股份有限公司