专利名称：用作人蛋白激酶plk1至plk4的抑制剂以治疗增殖疾病的4-(9-(3,3-二氟环戊基)-5,7,7 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及可用作蛋白激酶抑制剂的化合物。本发明还提供包含本发明的化合物 的可药用组合物和在各种病症的治疗中使用该组合物的方法。本发明还提供了制备本发明 的化合物的方法。
背景技术：
近年来，对与疾病相关的酶和其它生物分子的结构的更好理解极大有助于对新型 治疗剂的探寻。已成为大量研究的主题的一种重要类型的酶是蛋白激酶。蛋白激酶构成负责控制细胞内的各种信号转导过程的一大类结构相关酶(参见 Hardie, G 禾口 Hanks，S.The Protein Kinase Facts Book，I 禾口 II，Academic Press, San Diego，CA:1995)。蛋白激酶被认为由共同祖先基因因其结构和催化功能的保存而产生。几 乎所有激酶都含有类似的250-300个氨基酸催化域。激酶可通过被它们磷酸化的底物分类 (例如蛋白质_酪氨酸、蛋白质_丝氨酸/苏氨酸、脂质等)。已经识别了大致与各激酶族对 应的序列基序(参见，例如，Hanks, S. K.，Hunter, Τ.，FASEB J. 1995，9，576-596 ；Knighton 等人，Science 1991，253，407-414 ；Hiles 等人，Cell 1992，70，419-429 ；Kunz 等人，Cell 1993，73，585-596 ；Garcia-Bustos 等人，EMBO J 1994，13，2352-2361)。通常，蛋白激酶通过实现从三磷酸核苷向参与信号传导通路的蛋白质受体的磷酰 基转移来介导细胞内信号传导。这些磷酸化事件充当可调制或调节靶蛋白生物功能的分子 开/关切换(on/off switches)。最终响应各种细胞外刺激和其它刺激来触发这些磷酸化 事件。这类刺激的实例包括环境和化学应力信号(例如休克、热休克、紫外线辐射、细菌内 毒素和H2O2)、细胞因子(例如，白细胞介素-I(IL-I)和肿瘤坏死因子α (TNF-a)和生长因 子(例如，粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)和成纤维细胞生长因子(FGF))。细胞 外刺激可能影响与细胞生长、迁移、分化、激素分泌、转录因子活化、肌肉收缩、葡萄糖代谢、 蛋白质合成控制、存活和细胞周期调节相关的一种或多种细胞响应。许多疾病与上述蛋白激酶介导事件触发的异常细胞响应相关联。这些疾病包括但 不限于，癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、骨病、代谢病、神经和神经变性疾病、心血管病、 过敏症和哮喘、阿尔茨海默氏症和激素相关疾病。相应地，在医药化学中，为找到有效充当 治疗剂的蛋白激酶抑制剂，已作出显著努力。Polo-样激酶(PLK)属于丝氨酸/苏氨酸激酶族，其在从酵母到人的各物种间高度 保留(Lowery DM等人在Oncogene 2005，24 ;248_259中综述)。PLK激酶在细胞周期中起到多种作用，包括控制进入和行经有丝分裂。 PLKl是最有代表性的PLK族成员。PLKl广泛表达并且最富集在具有高有丝分裂 指数的组织中。PLKl的蛋白质含量在有丝分裂中升高并达到峰值(Hamanaka，R等人，J Biol Chem 1995，270，21086-21091)。所报道的PLKl的底物是已知调节进入和行经有丝 分裂的所有分子，并包括CDC25C、周期蛋白(cyclirOB、p53、APC, BRCA2和蛋白酶体。PLKl 在多种癌类型中上调且表达水平与疾病严重程度相关联(Macmillan，JC等人，Ann Surg Oncol 2001，8，729-740)。PLKl是致癌基因并可以转化NIH-3T3细胞(Smith，MR等人， BiochemBiophys Res Commun 1997，234，397-405)。反义 siRNA造成的 PLKl 的脱除或抑制、 抗体的微注射或PLKl的显性负性结构转染到细胞中降低了肿瘤细胞的体外增殖和生存力 (Guan，R 等人，Cancer Res 2005，65，2698-2704 ；Liu，X 等人，Proc Natl Acad Sci U S A 2003，100，5789-5794，Fan，Y 等人，World J Gastroenterol 2005，11，4596-4599 ;Lane，HA 等人，J Cell Biol 1996，135，1701-1713)。已脱除PLKl的肿瘤细胞已在纺锤体形成、染色 体排列和分离以及胞质分裂中激活纺锤体检查点和缺陷。生存力的损失据报道是诱导细胞 凋亡的结果。相反，正常细胞据报道在PLKl脱除后保持生存力。siRNA造成的PLKl的体内 敲除或显性负性结构的使用在异种移植模型中导致肿瘤的生长抑制或阻遏。PLK2主要在细胞周期的Gl阶段中表达并定位至间期细胞中的中心体。敲除PLK2 的小鼠正常发育，繁殖并具有正常存活率，但比野生型小鼠小大约20%。来自敲除动物的细 胞比在正常小鼠中更慢地经过细胞周期(Ma，S等人，Mol Cell Biol 2003，23，6936-6943)。 siRNA造成的PLK2脱除或激酶无活性突变体转染到细胞中阻断了中心粒复制。PLK2的下调 也使肿瘤细胞对紫杉醇敏感并促进有丝分裂灾变，这部分通过遏止P53响应来进行(Burns TF 等人，Mol Cell Biol 2003，23，5556-5571)。PLK3在整个细胞周期中表达并从Gl到有丝分裂提高。表达在高度增殖的卵巢 肿瘤和乳腺癌中上调并与较差的预后相关联(Weichert，W等人，Br J Cancer 2004,90, 815-821 ；Weichert，W 等人，VirchowsArch 2005，446，442-450)。除调节有丝分裂外，PLK3 被认为还参与细胞周期中的高尔基体断裂和参与DNA-损伤响应。显性负性表达对PLK3的 抑制被报道促进DNA损伤后的不依赖p53的凋亡和通过肿瘤细胞抑制集落形成(Li，Z等 人，J Biol Chem 2005，280，16843-16850)。PLK4在结构上更不同于其它PLK族成员。这种激酶的脱除造成癌细胞的凋亡(Li， J等人，Neoplasia 2005，7，312—323)。PLK4敲除小鼠在E7. 5阻遏有丝分裂中的高比例细 胞和部分分离的染色体(Hudson，JW 等人，Current Biology 2001，11，441-446)。在肿瘤细胞生长、增殖和存活中涉及蛋白激酶族的分子。相应地，非常需要开发可 用作蛋白激酶抑制剂的化合物。暗示PLK激酶为细胞分化所必需的证据是强有力的。细胞 周期的阻断是抑制肿瘤细胞增殖和存活的临床批准方法。因此最好开发可用作PLK族蛋白 激酶(例如，PLK1、PLK2、PLK3和PLK4)的抑制剂的化合物，其抑制增殖和降低肿瘤细胞的 存活力，特别是因为在医学上非常需要开发新型癌症治疗法，包括口服实施的治疗法。发明概述本发明的化合物及其可药用组合物可用作蛋白激酶抑制剂。在一些实施方案中， 这些化合物可用作PLK蛋白激酶的抑制剂；在一些实施方案中，可用作PLKl蛋白激酶的抑 制剂。这些化合物具有如本文定义的式I或其可药用盐。
这些化合物及其可药用盐可用于治疗或预防各种疾病、病症或症状症状，包括但 不限于，自身免疫性疾病、炎性疾病、增殖疾病或过度增殖疾病、神经变性疾病、或免疫介导 疾病。本发明提供的化合物也可用于生物和病理现象中的激酶的研究；这类激酶介导的细 胞内信号转导通路的研究；和新型激酶抑制剂的对比评测。在一些情况下，本发明的化合物在小于InM的浓度下表现出PLK1抑制。在另一些 情况下，本发明的化合物在InM至lOnM的浓度下表现出PLK1抑制。此外，本发明的化合物 表现出有利的药物动力学性质。发明详述在一个方面中，本发明提供式I的化合物
权利要求
式I的化合物其中R1是R6是C1 4脂族或C3 6脂环族的，并任选被1或2个卤素原子取代；X是O且R2是 CH3；或X是NR5，且R2和R5与和它们连接的原子一起形成1，2，4 三唑；R3和R4各自独立地为H、甲基或乙基；或R3和R4与和它们连接的原子一起形成环丙基环；且n是0或1。FPA00001096878300011.tif,FPA00001096878300012.tif
2.权利要求1的化合物，其中X是0且R2是-CH3。
3.权利要求1的化合物，其中X是NR5，且R2和R5与和它们连接的原子一起形成1，2， 4-三唑。
4.权利要求1至3任一项的化合物，其中R6是CV4脂族或C3_6脂环族的，并任选被1至 2个卤素原子取代。
5.权利要求1至4任一项的化合物，其中R3和R4各自是甲基。
6.权利要求1至4任一项的化合物，其中R3是H且R4是乙基。
7.权利要求1至4任一项的化合物，其中R3和R4与和它们连接的原子一起形成环丙 基环。
8.权利要求1至7任一项的化合物，其中R6是任选被1或2个卤素原子取代的环丙基。
9.权利要求1至7任一项的化合物，其中R6是任选被1或2个卤素原子取代的环戊基。
10.权利要求1至7任一项的化合物，其中R6是任选被1或2个卤素原子取代的环己基。
11.权利要求1至7任一项的化合物，其中R6是任选被1或2个卤素原子取代的CV4脂族基团。
12.权利要求1的化合物，其中该化合物是N-环丙基-4- (9- (3，3- 二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-6-氧代_6，7，8，9-四氢-5H-嘧 啶开[4，5-b][l，4] 二氮杂革-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺；4-(9-(3，3- 二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4， 5-b] [1,4] 二氮杂箪-2-基氨基)-N- (3-氟环戊基)-3-甲氧基苯甲酰胺；^(3，3-二氟环戊基)-4-(9-(3，3-二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-6-氧代-6，7，8，9-四 氢-5H-嘧啶并[4，5-b] [1,4] 二氮杂革-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺；N-环丙基-4-(9' _(3，3-二氟环戊基)-5'-甲基-6'-氧代 _5'，6'，8'，9'-四 氢螺[环丙烷_1，7'-嘧啶并[4，5-b][l，4] 二氮杂罩]-2'-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰 胺；N-(3，3-二氟环戊基)-4-(9‘ _(3，3-二氟环戊基)-5'-甲基-6'-氧代 _5'，6'， 8'，9'-四氢螺[环丙烷_1，7'-嘧啶并[4，5-b][l，4] 二氮杂罩]-2'-基氨基)_3_甲 氧基苯甲酰胺；4-((R)-5-((R)-3，3-二氟环戊基)-4-乙基 _4，5-二氢-[1，2，4]三唑并[4,3-f]蝶 啶-7-基氨基)-N-乙基-3-甲氧基苯甲酰胺；N-环丙基-4-((R)-5-((R)-3，3-二氟环戊基)-4-乙基 _4，5_ 二氢-[1,2,4]三唑并 [4,3-f]蝶啶-7-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺；4-((R)-8-((R)-3，3-二氟环戊基)-7_乙基-5-甲基_6_氧代-5，6，7，8-四氢蝶 啶-2-基氨基)-N-乙基-3-甲氧基苯甲酰胺；或N-环丙基-4- ((R) -8- ((R) -3，3- 二氟环戊基)-7-乙基_5_甲基-6-氧代_5，6，7，8-四 氢蝶啶-2-基氨基)-3_甲氧基苯甲酰胺。
13.包含权利要求1至12任一项的化合物和可药用载体、辅助剂或赋形剂的药物组合物。
14.抑制有需要的患者中的蛋白激酶活性的方法，包括对该患者施用权利要求1至12 任一项的化合物或权利要求13的药物组合物。
15.抑制生物样品中的蛋白激酶活性的方法，包括使该生物样品与权利要求1至12任 一项的化合物或权利要求13的药物组合物接触。
16.权利要求14或15的方法，其中该蛋白激酶是PLK。
17.权利要求16的方法，其中该蛋白激酶是PLK1。
18.治疗有需要的患者的增殖性疾病、神经变性疾病、自身免疫性疾病、炎性疾病或免 疫介导疾病的方法，包括对该患者施用权利要求1至12任一项的化合物或权利要求13的 药物组合物的步骤。
19.根据权利要求18的方法，进一步包括对所述患者施用选自化疗或抗增殖剂、抗炎 剂、免疫调节或免疫抑制剂、神经营养因子、心血管病治疗剂、破骨性疾病治疗剂、肝病治疗 剂、抗病毒剂、血液病治疗剂、糖尿病治疗剂或免疫缺陷病治疗剂的附加治疗剂，其中该附 加治疗剂适用于正治疗的疾病并与权利要求1至12任一项的化合物或权利要求13的药物 组合物一起以单剂型给药或作为多剂型的一部分与该化合物或药物组合物分开给药。
20.治疗有需要的患者的黑素瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、成神经细胞瘤或选自结肠 癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、中枢神经系统(CNS)癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌或胰癌的癌症的方法，包括对该患者施用权利要求1至12任一项的化合物或权利要求13的 药物组合物。
21.治疗有需要的患者的癌症的方法，包括对该患者施用权利要求1至12任一项的化 合物或权利要求13的药物组合物。
22.权利要求21的方法，其中该方法包括通过用该化合物药物组合物抑制PLK来干扰 癌细胞有丝分裂的步骤。
23.制备式I-A的化合物的方法
24.权利要求23的方法，进一步包括使式4A的化合物与Me-LG3反应形成式5A的化合 物的步骤
25.权利要求24的方法，进一步包括式3A的化合物的还原性环化以形成式4A的化合 物的步骤
26.权利要求24的方法，进一步包括环化式3A-a的化合物
27.权利要求26的方法，进一步包括使式3A的化合物与还原剂反应形成式3A-a的化 合物的步骤
28.权利要求23或27的方法，进一步包括a)使式3A_a的化合物与烷基化剂反应形成式3A_b的化合物；和
29.权利要求25的方法，进一步包括使式2a的化合物与式1的化合物
30.权利要求29的方法，进一步包括使式11的化合物NH2与式12的化合物
31.权利要求29的方法，进一步包括a)使式11的化合物反应形成式13的六氢-1，3，5-三嗪；和
32.制备式I-C的化合物的方法
33.权利要求32的方法，进一步包括使式4C的化合物与Me-LG3反应形成式5C的化合 物的步骤
34.权利要求33的方法，进一步包括式3C的化合物还原性环化以形成式4C的化合物 的步骤
35.权利要求34的方法，进一步包括环化式3C-a的化合物以形成式4C的化合物
36.权利要求35的方法，进一步包括使式3C的化合物在合适的还原条件下反应形成式 3C-a的化合物的步骤
37.权利要求32或36的方法，进一步包括a)使式3C_a的化合物与烷基化剂反应形成式3C_b的化合物
38.权利要求34或36的方法，进一步包括使式2b的化合物
39.权利要求38的方法，进一步包括使式11的化合物；
40.制备式I-B的化合物的方法
41.权利要求40的方法，进一步包括使式9的化合物在环化条件下反应形成式10的化 合物的步骤
42.权利要求41的方法，进一步包括使式8的化合物与胼反应形成式9的化合物的步骤
43.权利要求42的方法，进一步包括使式4C的化合物反应形成式8的化合物
44.权利要求40-43任一项的方法，其中R2和R5与和它们连接的原子一起形成1，2， 4-三唑。
全文摘要
本发明的化合物及其可药用组合物可用作PLK1蛋白激酶的抑制剂。这些化合物如具有本文定义的式I或其可药用盐。这些化合物及其可药用盐可用于治疗多种疾病、病症和症状，包括但不限于自身免疫性疾病、炎性疾病、增殖疾病或过度增殖疾病、神经变性疾病、或免疫介导疾病。式I的化合物中，R1是(式)；R6是C1-4脂族或C3-6脂环族的，并任选被1或2个卤素原子取代；X是O且R2是-CH3；或X是NR5，且R2和R5与和它们连接的原子一起形成1，2，4-三唑；R3和R4各自独立地为H、甲基或乙基；或R3和R4与和它们连接的原子一起形成环丙基环；且n是0或1。
文档编号A61P35/00GK101952291SQ200880111548
公开日2011年1月19日 申请日期2008年8月15日 优先权日2007年8月15日
发明者F·皮拉德, J·-D·沙里耶 申请人:弗特克斯药品有限公司