化合物mycoE的新用途的制作方法

专利名称：化合物mycoE的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及化合物mycoE的新用途。
背景技术：
代谢综合征是伴随肥胖增加而引起的一组常见的代谢紊乱征候群，是多种代谢成 分异常聚集的病理状态，其根本发病原因是机体的能量代谢失调。世界卫生组织诊断标准 定义代谢综合征为糖耐量或空腹血糖异常或糖尿病，和/或胰岛素抵抗，并伴有以下两项 或两项以上的现象高血压、高甘油三酰(TG)血症、低高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、中心 性肥胖、微量蛋白尿。以上这些都是造成心血管疾病的因素，代谢综合征严重影响人们健康 和生活质量，已成为现代世界医学研究的热点前沿。随着中国经济快速增长，人民生活水平提高，饮食习惯改变，代谢综合征的发生 率有明显增加的趋势，对公众健康有极大的影响，严重影响了人们的生活质量。据中华 医学会糖尿病学会的调查，目前在中国城市20岁以上的人群中，代谢综合征的患病率为 14%-16%。代谢综合征随着年龄的增高而增加，在50至70岁人群中达到发病高峰。据 预计，患有代谢综合征的病人在未来7年里，每8个人就会有1人因代谢综合征死亡。作为 代谢综合征最危险的因素之一，糖尿病导致的心血管疾病的发生数量是血糖正常者的4. 5 倍。而作为代谢综合征重要诱因之一的肥胖也是冠心病、高血压、中风等心脑血管疾病的重 要诱因。因此，分析代谢综合征病程中的关键分子，并以此作为靶标，研制、开发针对该靶标 的药物具有重要意义和应用前景。寻找合理的药物靶标用于代谢综合征的有效防治具有重 大的社会效益和经济效益。AMP激活的蛋白激酶(AMPK)处于调节细胞能量状态的蛋白激酶级联反应的中枢 部分，可启动分解代谢途径，如脂肪酸氧化和糖酵解，增加ATP的产生，同时可关闭合成代 谢途径，如脂肪酸合成和蛋白合成，减少ATP的消耗。AMH(不仅可以在细胞水平作为能量 的感受器，还可以通过激素和细胞因子，如瘦素、脂联素等来参与调节机体的能量消耗和能 量摄入。由于AMH(可影响与代谢综合征相关的多个环节，已成为代谢综合征领域研究的热 点，是预防和/或治疗代谢综合征的新的生理和药理作用靶点。建立AMPK激活剂的筛选模 型以发现具有增强AMH(活性作用的药物以促进机体新陈代谢，对于代谢综合征的防治具 有十分重要意义。1、AMPK的结构及活性调节AMPK是由α、β和Y 3个亚单位组成的异源三聚体蛋白。其中α亚单位起催化 作用，β和Y亚单位起调节作用。AMPK以异源三聚体形式广泛存在于所有已检测的线虫 到哺乳动物的各种真核细胞中。ΑΜΗ(的活性主要受细胞中ΑΜΡ/ΑΤΡ比值的调节。当细胞受 到任何引起ATP生成减少，消耗增加的应激刺激时，如包括代谢性产物、氧化应激、缺氧、低 糖等，ΑΜΡ/ΑΤΡ比值增加，AMPK则被激活。2、AMPK在调节代谢活动中的作用(1) AMPK对脂代谢的调节
乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和羟甲基戊二酸单酰CoA还原酶(HMGR)分别在脂肪酸 和胆固醇的合成中起关键作用，两者均是AMPK的靶分子，使其磷酸化，抑制其功能，从而抑 制脂肪酸和胆固醇的合成。ACC是脂肪酸合成的限速酶，糖代谢生成的乙酰辅酶A可在ACC 作用下合成丙二酰辅酶A。丙二酰辅酶A是脂肪合成的第一步产物，其通过负反馈抑制肉毒 碱棕榈酸转移酶21(CPT21)的活性，从而抑制线粒体的脂肪酸氧化以及酮体的生成。HMGR 为胆固醇合成的限速酶，可催化羟甲基戊二酸单酰CoA生成甲羟戊酸。以往的研究表明，过 表达重组激活的AMPKa可以负调节ACC的活性，减少肝细胞中脂质的含量；而抑制AMI3K则 可增加肝细胞中高糖所诱导的脂质聚集。此外，AMH(还参与了甘油三酯的调节。在脂肪细 胞中，AMPK激动剂不仅可通过ACC磷酸化而抑制脂肪生成，还可通过磷酸化抑制激素敏感 脂肪酶，从而抑制异丙肾上腺素所诱导的脂肪分解。AMPK这种既调节脂肪生成，又抗脂肪分 解的作用，可以减少血流中游离脂肪酸浓度，在代谢综合征中减少脂毒性的作用具有治疗
意义ο(2) AMPK对糖代谢的调节在脂肪细胞中，AMI3K可以增加葡萄糖转运以及GLUT4的转位。有研究表明，AMPK 可能通过远离磷脂酰肌醇激酶作用位点的胰岛素信号通路，或者是一条非胰岛素激活的信 号通路，激活脂肪细胞GLUT4的转位，从而增加葡萄糖的转运。此外，在肝细胞中激活AMPK 不仅可以通过抑制6-磷酸果糖激酶、L型丙酮酸激酶等抑制葡萄糖酵解，还能通过抑制果 糖1，6_ 二磷酸酶抑制糖异生。(3) AMI3K对胰岛β细胞功能的影响ΑΜΗ(不仅可以影响与胰岛素分泌相关蛋白的表达，还能调节胰岛素分泌的终末步 骤，包括囊泡的迁移以及囊泡的胞吐作用。有研究通过药理学和分子生物学的手段发现， AMPK在调控胰岛素释放的信号通路上游发挥作用。(4) AMPK对全身能量摄入与利用的影响下丘脑是中枢神经系统调节食欲的主要部位，下丘脑内的神经元可以感知各种不 同的神经内分泌和代谢信号，调节机体的能量供需平衡。激活下丘脑的ΑΜΗ(可以增加下丘 脑弓形核神经肽Y的表达，增加食物的摄入，减少能量消耗；而抑制下丘脑的AMPK可以减少 弓形核神经肽Y的表达，减少食物的摄入，增加能量消耗。瘦素可抑制下丘脑的ΑΜΡΚ，促使 食欲神经肽的释放减少，增加抑制食欲的神经肽释放，从而减少食物摄入。(ihrelin则可激 活下丘脑的AMPK，减少抑制食欲的神经肽释放，刺激食物的摄入。3、AMPK激活剂在代谢综合征中的应用前景综上所述，AMPK可影响与代谢综合征相关的多个环节，因而以AMPK及其信号通路 为靶点的抗肥胖和代谢综合征的治疗方案具有重要的应用前景。AMH(的激活可以改善代谢 综合征的代谢异常，如增加肌肉和其他组织对葡萄糖的摄入与代谢，减少肝脏葡萄糖的产 生，减少脂肪酸的合成，增加脂肪酸的氧化；并通过调节机体对食物的摄入、胰岛β细胞及 心血管系统的保护作用等为代谢综合征的治疗提供了新的靶点。此外，AMPK还可通过激素 和细胞因子，如瘦素、脂联素和(ihrelin，参与调节能量消耗和能量的摄入。关于AMH(激活剂的研究，现在国际已有多个报道，其中几种药物已进入临床实验 阶段，特别是采用高通量筛选手段得到的AMPK激活剂A-769662的应用让我们看到了以 AMH(为靶标的代谢综合征防治药物的研发前景。5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸(5-amino-4-imidazolecarboxamide-riboside，AICAR)是目前研究中应用较多的 AMPK 激活剂。AICAR 是腺苷的类似物，在细胞内转换为环腺苷磷酸衍生物5-aminoimidazole-4-carboxamide-l -β -D-ribofuranosyl-5-monophate (ZMP)。ZMP 是 AMP 的类似物，具有激活 AMPK 的作用。但 值得注意的是，AICAR是介导嘌呤生物合成的物质，同ZMP、ZDP和ZTP —样它还有其它细胞 效应，并非AMPK的特异激活剂。目前广泛应用于临床的两类治疗代谢综合征的药物，二甲 双胍和罗格列酮，它们均可以激活肌肉和其他组织中的AMPK。但由于这两类药物尚无组织 选择性，二甲双胍会造成胃肠道不适以及乳酸过多症，而罗格列酮会引起脂肪生成及造成 一定的肝损害等，限制了它们应用适应症的进一步扩大。

发明内容
本发明的目的是提供化合物mycoE的新用途。化合物mycoE是一种含有氧桥的以环二烯为骨架的化合物，是真菌聚酮类化合 物，其化学结构式如式I所示式 I。本发明所提供的化合物mycoE的新用途具体为1)化合物mycoE及其衍生物在制备AMPK激活剂中的应用；2)化合物mycoE及其衍生物在制备降低脂类合成和/或增加胰岛素的敏感性和/ 或降低血清中糖化蛋白的含量和/或降低体重和/或降低甘油三酯含量和/或降低胆固醇 含量的药物中的应用。本发明的另一个目的是提供以化合物mycoE及其衍生物为活性成分的预防和/或 治疗代谢综合征和/或糖尿病和/或心血管疾病的药物；以化合物mycoE及其衍生物为活性成分的AMPK的激活剂；以化合物mycoE及其衍生物为活性成分的降低脂类合成和/或增加胰岛素的敏感 性和/或降低血清中糖化蛋白的含量和/或降低体重和/或降低甘油三酯含量和/或降低 胆固醇含量的药物。本发明应用ELISA方法，建立了 AMI3K激活剂的筛选模型，应用此模型检测发现， mycoE对AMPK有直接和强烈的激活作用。通过细胞实验证明，mycoE可以在细胞水平上激活 AMPK，降低脂类的合成。细胞毒性实验结果表明，在mycoE激活AMPK的浓度范围内，mycoE 的细胞毒性极小，排除由于mycoE的细胞毒性引起的AMPK激活的可能；mycoE的急性毒性 实验结果表明，mycoE的毒性较低，具备了一个候选药物良好的基本前提。通过荧光光谱和 圆二色分析表明，mycoE与AMH(之间存在强烈的相互作用。利用分子模拟研究mycoE与AMPK的作用位点，结果表明，mycoE与AMPK主要结合在AMPK的γ亚基上；根据分子模拟 的结果，构建了 AMPK γ亚基单氨基酸点突变，通过mycoE对点突变AMPK复合体的荧光光谱 和活性的影响，表明AMPKy亚基上的H297位点是mycoE的结合位点之一。小鼠实验表明， mycoE可以显著增加胰岛素的敏感性(P < 0. 05)，降低血清中糖化蛋白的含量、还可以降低 小鼠的体重、降低甘油三酯和胆固醇(P < 0. 05)的含量。mycoE对代谢综合征、糖尿病和心 血管疾病的预防和/或治疗具有受体选择性强、高效、长效、应用剂量小、副作用小等特点， 研发前景良好。 通过对国内外相关文献数据库和专利数据库检索，未见有涉及以mycoE为活性成 分、以AMPK为靶点的防预和/或治疗代谢综合征、糖尿病和心血管疾病药物的研究报道。


图1为AMP对AMPK的激活效果图2为mycoE对AMPK的激活效果图3为mycoE对突变体AMPK蛋白(AMPK-T172D)的激活效果图4为mycoE对AMPK过表达的细胞中AMPK的激活作用图5为mycoE对Hela细胞中AMPK的激活作用图6为mycoE对H印G2细胞中AMPK的激活作用图7为mycoE在Hela细胞中的细胞毒性测定结果图8为mycoE对H印G2细胞中脂类含量的影响图9为mycoE对AMPK蛋白荧光峰的改变图10为mycoE浓度和对应的荧光峰值图11为求解离常数曲线12为MycoE对AMPK圆二色曲线的影响图13为分子模拟中mycoE结合到AMPK的γ亚基上图14为mycoE对突变体蛋白进行的荧光滴定结果图15为mycoE与突变体AMPK H297E或AMPK的荧光滴定比较图16为mycoE对突变体AMPK H297E或AMPK的激活情况比较图17为mycoE处理后C57小鼠的GTT检测结果图18为mycoE处理后C57小鼠体重的变化图19为mycoE处理后C57小鼠血清中糖化蛋白(GSP)含量的变化图20为mycoE处理后C57小鼠甘油三酯和胆固醇的变化
具体实施例方式下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材 料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例1、AMPK激活剂筛选模型的建立一、重组载体的构建1、重组载体 pGST-mACCaa32_1Q(1 的构建以小鼠肝脏 cDNA为模板，设计引物Pl 5' -acggatccatggatgaaccatctccgttggc-3'禾口 P2:5' -acctcgagcagaagtccacattggtactg-3'进 亍 PCR扩增。25 μ 1 PCR 反应体系 为2. 5 μ 110 XPCR buffer，2μ 1 模板，0. 5μ 1 dNTP (IOmM)，上下游引物各 0. 2 μ g，IU DNA 聚合酶(Pfu或Taq)，最后加入双蒸水将体积补到25 μ 1。PCR扩增产物经BioI和BamHI双酶切后与经过同样酶切的载体pGEX4Tl (购自 hvitrogen公司)相连接，连接产物转化大肠杆菌DH5ci感受态细胞，将转化后的感受态细 胞涂布于含有50ug/ml氨苄青霉素的抗性平板上，挑取单菌落培养，提取质粒酶切鉴定，将 鉴定结果正确的重组载体命名为pGST-mACCaa32_1Q(1。2、重组载体 CMV5-mAMPK- α 1、CMV5_mAMPK- β 1 和 CMV5_mAMPK- Y 1 的构建以小鼠肝脏 cDNA 为模板，设计引物 AMPK Alphalsense 5' -ggaattccatatgatgcg cagactcagttcctg-3‘和 AMPK Alphal antisense 5' -ttactgtgcaagaattttaattagatttg c-3'进行 PCR 扩增。25 μ 1 PCR 反应体系为2. 5μ 1 10XPCR buffer，2 μ 1 模板，0. 5 μ 1 dNTP (IOmM)，上下游引物各0. 2 μ g，IU DNA聚合酶(pfu或Taq)，最后加入双蒸水将体积补 至Ij 25 μ 1。PCR扩增产物经jM DNA Polymerase补平末端后与经过SmaI酶切的载体pBKS (购 自Initrogen公司)相连接，得到重组载体pBKS-mAMPK-α 1 ；重组载体pBKS-mAMPK-α 1经 Ndel和^Cbal双酶切后与经过同样酶切的载体pCMV5(购自genmed公司)相连接，连接产 物转化大肠杆菌DH5ci感受态细胞，将转化后的感受态细胞涂布于含有50ug/ml氨苄青霉 素的抗性平板上，挑取单菌落培养，提取质粒酶切鉴定，将鉴定结果正确的重组载体命名为 CMV5-mAMPK-α 1。以小鼠肝脏 cDNA 为模板，设计引物 AMPK Betal sense 5' -ggaattccatatgatgg gcaacacgagcagcga-3‘禾口 AMPK Betal antisense 5' tcatatcggcttgtagaggagggtggtgac -3'进行 PCR 扩增。25 μ 1 PCR 反应体系为2. 5μ 1 10XPCR buffer，2 μ 1 模板，0. 5 μ 1 dNTP (IOmM)，上下游引物各0. 2 μ g，IU DNA聚合酶(pfu或Taq)，最后加入双蒸水将体积补 至Ij 25 μ 1。PCR扩增产物经jM DNA Polymerase补平末端后与经过SmaI酶切的载体pBKS (购 自Initrogen公司)相连接，得到重组载体pBKS-mAMPK-β 1 ；重组载体pBKS-mAMPK-β 1经 Ndel和^Cbal双酶切后与经过同样酶切的载体pCMV5(购自genmed公司)相连接，连接产 物转化大肠杆菌DH5ci感受态细胞，将转化后的感受态细胞涂布于含有50ug/ml氨苄青霉 素的抗性平板上，挑取单菌落培养，提取质粒酶切鉴定，将鉴定结果正确的重组载体命名为 CMV5-m AMPK- β 1。以小鼠肝脏 cDNA 为模板，设计引物 AMPK Gammal sense 5' -ggaattccatatgatg gagtcggttgctgcaga-3‘和 AMPK Gammal antisense 5' -gcgatatctcagggcttcttctctcca c-3'进行 PCR 扩增。25 μ 1 PCR 反应体系为2. 5μ 1 10XPCR buffer，2 μ 1 模板，0. 5 μ 1 dNTP (IOmM)，上下游引物各0. 2 μ g，IU DNA聚合酶(pfu或Taq)，最后加入双蒸水将体积补 至Ij 25 μ 1。PCR扩增产物经jMDNA Polymerase补平末端后与经过SmaI酶切的载体pBKS (购 自Initrogen公司)相连接，得到重组载体pBKS-mAMPK- γ 1 ；重组载体pBKS-mAMPK- γ 1经 Ndel和EcoRV双酶切后与经过Ndel和smal双酶切的载体CMV5 (购自genmed公司)相连 接，连接产物转化大肠杆菌DH5 α感受态细胞，将转化后的感受态细胞涂布于含有50ug/ml氨苄青霉素的抗性平板上，挑取单菌落培养，提取质粒酶切鉴定，将鉴定结果正确的重组载 体命名为 CMV5-m AMPK- γ 1。3、重组载体ρ γ 1β lHis-a 1'的构建质粒ργ 1β IHi S-a l(py 1β lHis-a 1质粒是能同时表达大鼠AMPK的三个不同 亚基的原核表达载体，由瑞士 Swiss Federal Institute of ^Technology细胞生物学中 心Neumann D博士赠送)。该质粒具体的构建方法详见Neumann D, Woods A, CarlingD, Wallimann Τ, Schlattner U.Mammalian AMP-activated protein kinase -functional, heterotrimeric complexes by co-expression of subunits in Escherichia coli. Protein ExprPurif. 2003 Aug ；30 (2) :230_237。可以在一个载体中同时表达 AMPK 的 3 个 亚基α 、β 1、y 1,进而表达纯化得到AMPK蛋白。针对ρ γ 1 β IHis- α 1质粒的α 1亚基 进行氨基酸点突变，采用两步PCR法将α 1亚基的自氮末端第172位的苏氨酸(T)点突变 为天门冬氨酸(D)。具体方法如下在需要突变的部位合成一对引物P15'-TTT TTA AGA GAC AGC TGT GGCTCG C-3， 和P2 :5，-G CGA GCC ACA GCT GTC TCT TAA AAA-3’，通过引物中碱基的强行突变，产生需 要突变位点；再合成一对扩增全长片段的引物P3 :5’ -GTTGGA CGA AAA GGA GAG TCG ACG T-3，禾口 P4 :5，-TAC GAT CAA TAA CGA GTCGCC ACC G-3，，分别将突变引物的上游引物与全 长引物的下游引物进行配对，将突变引物的下游引物与全长引物的上游引物进行配对，以 质粒ρ Y 1 β IHis-α 1为模板进行PCR扩增；之后，将两种PCR产物混合作为模板，用全长引 物进行PCR扩增，得到突变体。将突变后得到的重组载体命名为pYliilHis-al'。二、可溶性GST融合蛋白和可溶性His标签蛋白的表达与纯化1、可溶性GST融合蛋白的表达与纯化将上述步骤一获得的重组载体pGST-mACCaa32_1(1(1导入到大肠杆菌中，经IPTG诱导 后，表达得到含有GST标签的融合蛋白GST-mACCaa32_1(1(1。收集蛋白进行SDS-PADE，再经考马 斯亮蓝染色鉴定，或进一步以anti-GST抗体(购自sigma公司)为一抗作Western印迹检 测，将该蛋白鉴定为GST融合蛋白。2、可溶性His标签蛋白的表达与纯化1)将质粒ργ β lHis-α 1和上述步骤一获得的重组载体ργ β lHis-a 1' 分别导入到大肠杆菌中，用IPTG进行诱导，分别收集800ml IPTG诱导的含有质粒 ρ Y 1 β IHis- a 1或ρ γ 1 β IHis- a 1 ‘大肠杆菌培养液，以4，OOOrpm离心IOmin,收集菌体 沉淀，加入40ml裂解缓冲液重悬菌体沉淀，将菌悬液转移到50ml离心管中；在离心管中加 入溶菌酶至终浓度为0. lmg/ml，冰上孵育20min，然后冰浴中超声lOmin，至液体呈现透明 状；4°C条件下12，OOOrpm离心20min，将上清转移至烧杯中，用针头剪切DNA ；用滤膜对上 清过滤，将滤出液转移至一新的50ml离心管中。2)取l-2ml的Ni-NTA琼脂糖(购自QIAGEN公司)用50ml水平衡，再加入20ml
裂解缓冲液平衡。3)在上述步骤1)的含有质粒ρ Y 1 β IHis- a 1或ρ γ 1 β IHis- a 1丨的滤出液中 分别加入经步骤2)预处理的Ni-NTA琼脂糖柱料，4°C温和孵育过夜；然后将混合物上柱，用 裂解缓冲液洗脱，检测0D_至基线走平；再用洗涤缓冲液进行洗脱，直至基线走平；最后用 洗脱缓冲液进行洗脱，收集流出峰，并用50ml水冲洗镍柱柱材，将M-NTA琼脂糖置于4°C保
9存的体积百分含量为20%的酒精溶液中，收集各个组分的蛋白进行SDS-PAGE，确定各个组 分蛋白的纯度与浓度，得到AMPK蛋白和突变体AMPK蛋白(即AMPK-T172D蛋白)。裂解缓冲液的组成终浓度为50mM的NaH2PO4、终浓度为300mM的NaCl和终浓度 为IOmM的咪唑，pH 8. 0 ；洗涤缓冲液的组成终浓度为50mM的NaH2PO4、终浓度为300mM的NaCl和终浓度 为20mM的咪唑，pH 8. 0 ；洗脱缓冲液的组成终浓度为50mM的NaH2PO4、终浓度为300mM的NaCl和终浓度 为250mM的咪唑，pH 8. 0。
权利要求
1.式I结构的化合物及其衍生物在制备AMH(激活剂中的应用；
2.权利要求1所述式I结构的化合物及其衍生物在制备降低脂类合成和/或增加胰岛 素的敏感性和/或降低血清中糖化蛋白的含量和/或降低体重和/或降低甘油三酯含量和 /或降低胆固醇含量的药物中的应用。
3.以权利要求1所述式I结构的化合物及其衍生物为活性成分的AMPK激活剂。
4.以权利要求1所述式I结构的化合物及其衍生物为活性成分的降低脂类合成和/或 增加胰岛素的敏感性和/或降低血清中糖化蛋白的含量和/或降低体重和/或降低甘油三 酯含量和/或降低胆固醇含量的药物。
5.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述式I结构的化合物的制备方法 包括以下步骤1)将菜豆间座壳菌(Diaporthephaseolorum)HLY2CCTCC No :M204061 接种于PDA液体 培养基中发酵培养，收集发酵液，用乙酰乙酯进行萃取，收集萃取所得的有机相进行浓缩；2)将上述步骤1)获得的浓缩液用硅胶进行分离，采用真空液相色谱法进行洗脱，洗 脱液的组成及洗脱顺序为环己烷、环己烷乙酸乙酯=49 1、环己烷乙酸乙酯= 48 2、环己烷乙酸乙酯=46 4、环己烷乙酸乙酯=42 8、环己烷乙酸乙酯= 38 12、环己烷乙酸乙酯=34 16、环己烷乙酸乙酯=25 25、环己烷乙酸乙酯= 16 34、环己烷乙酸乙酯=10 40、乙酸乙酯、乙酸乙酯甲醇=46 4、乙酸乙酯 甲醇=42 8、乙酸乙酯甲醇=34 16、乙酸乙酯甲醇=25 25、乙酸乙酯甲醇 =16 34、乙酸乙酯甲醇=1 3、乙酸乙酯甲醇=1 4、乙酸乙酯甲醇=1 9、 甲醇；所述各物质之间的配比为体积比；收集每个梯度的流出液，浓缩，氯仿溶解后挥干溶 剂；3)取上述步骤幻中用环己烷乙酸乙酯=25 25组成的洗脱液洗脱的物质，用硅 胶进行分离，采用真空液相色谱法进行洗脱，洗脱液的组成及洗脱顺序为环己烷三氯甲 烷=4 1、环己烷三氯甲烷=3 1、环己烷三氯甲烷=2 1、环己烷三氯甲烷 =1 1、环己烷三氯甲烷=1 3、环己烷三氯甲烷=1 5、环己烷三氯甲烷= 1 6、环己烷三氯甲烷=1 9、三氯甲烷、三氯甲烷甲醇=30 1、三氯甲烷甲醇 =20 1、三氯甲烷甲醇=15 1、三氯甲烷甲醇=10 1、三氯甲烷甲醇=8 1、 三氯甲烷甲醇=5 1、三氯甲烷甲醇=1 1、三氯甲烷甲醇=1 4、三氯甲烷 甲醇=1 8;所述各物质之间的配比为体积比；收集每个梯度的流出液，浓缩，氯仿溶解后 挥干溶剂；4)将上述步骤幻中用环己烷三氯甲烷=1 6组成的洗脱液洗脱的物质用甲醇溶 解后常温条件下重结晶。
全文摘要
本发明公开了化合物mycoE及其衍生物的新用途。所述新用途是化合物mycoE及其衍生物在制备AMPK激活剂以及在制备降低脂类合成和/或增加胰岛素的敏感性和/或降低血清中糖化蛋白的含量和/或降低体重和/或降低甘油三酯含量和/或降低胆固醇含量的药物中的应用。本发明应用ELISA方法，建立了AMPK激活剂的筛选模型，发现mycoE对AMPK有直接和强烈的激活作用。细胞实验证明，mycoE可以在细胞水平上激活AMPK，降低脂类的合成且细胞毒性极小。利用分子模拟研究mycoE与AMPK的作用位点，AMPKγ亚基上的H297位点是mycoE的结合位点之一。小鼠实验表明，mycoE可以显著增加胰岛素的敏感性，降低血清中糖化蛋白的含量、还可以降低小鼠的体重、降低甘油三酯和胆固醇的含量。
文档编号A61P3/06GK102085200SQ20091024172
公开日2011年6月8日 申请日期2009年12月2日 优先权日2009年12月2日
发明者李志辉, 李蓬, 沈月毛 申请人:厦门大学, 清华大学