专利名称：芹菜素衍生物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于有机合成领域，具体涉及芹菜素衍生物、其制备方法和用于治疗女性生殖系统癌症如宫颈癌、卵巢癌等有关疾病用途。
背景技术：
女性生殖系统肿瘤，约占全身肿瘤的1/5，尤其子宫与卵巢更易发生肿瘤。在发展中国家，宫颈癌属于常见多发的妇科肿瘤，排行榜首。卵巢癌是女性生殖器官常见的肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位，但因卵巢癌致死者，却占各类妇科肿瘤的首位，女性生殖系统癌症严重威胁着妇女的生活质量和生命，因此寻找新的、有效的药物已经成为科研工作者研究的热点。黄酮类化合物是一类多酚化合物，广泛存在于显花植物特别是食用植物中。在亚洲，数千年来用于预防和治疗疾病用的药用植物和香料中多含有黄酮类化合物或其衍生物。经过筛选发现黄酮类化合物许多抗肿瘤效应。其中抗肿瘤活性较好的芹菜素是一种分布广泛的羟基黄酮化合物，大量存在于水果、蔬菜、豆类及茶叶中，在芹菜中含量最高。研究表明芹菜素可通过抗肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、干扰细胞信号通路、抑制肿瘤细胞侵袭和转移以及抗氧化等方面发挥抗癌的作用。芹菜素资源储蓄量大，分布较广，用来研究开发抗肿瘤药物具有广泛的应用前景。因此，有必要对其进行更好地开发利用。Konnoshima等通过对多个黄酮类化合物的筛选(包括芹菜素)发现，C2-C3双键能抑制癌细胞活化，7位羟基能加强抑制作用，4位羰基是必要的，但甙化则会导致活性降低。Yasukawa等用抑制TPA诱导小鼠耳部肿瘤试验模型的抗促癌作用进行筛选，其中5， 7-二羟基_3，4’ - 二甲氧基黄酮的抗促癌活性最强，其中，C2-C3双键是抗促癌作用的必要条件。从以上生物活性与结构关系中分析，芹菜素的5，7，4’位羟基、C2-C3双键及4-位羰基是活性部位，如果对其进行结构修饰，应在其它位置连接别的化学基团，以期得到活性更好的化合物。
发明内容
本发明的目的是提供一类芹菜素衍生物，其结构通式见图1，其中R为H、卤素、氰基、烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、烷氧基、硫醚基、烷羰基、羧基、烷氧基羰基、羰基氨基、被取代的羰基氨基、磺酰基氨基、氨基羰基、被取代的氨基羰基或被取代的氨基磺酰基。其中R优选杂芳基或硫醚基中的氮杂环芳香基或三硫醚基。本发明的另一目的是提供芹菜素黄酮类衍生物的制备方法(如图幻，具体步骤如下(1)酰化反应将芹菜素加入合适的有机溶剂中溶解，加入适量的酰化试剂、催化剂在温度为10 100°C，反应时间为0. 5 6小时的条件进行。其中酰化试剂包括酸酐(乙酸酐、甲酸酐、碳酸酐等)、酰氯(乙酰氯、苯甲酰氯、肉桂酰氯等)、羧酸酯(C1CH2C00C2H5、 CH3C0CH2C00C2H5等)；有机溶剂为无水有剂溶剂(吡啶、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、二氧六环等)；催化剂为三乙胺、吡啶、4-(N，N-二甲胺基)吡啶等。(2)烷氧化反应将乙酰化的芹菜素溶解到无水有机溶剂中，加入被取代的丙烯基，在温度为10 100°C，反应时间为0. 5 6小时的条件进行，其中被取代的丙烯基为 RCHXCH = CH2(R为H、卤素、氰基、烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、烷氧基、硫醚基、烷羰基、羧基、烷氧基羰基、羰基氨基、被取代的羰基氨基、磺酰基氨基、氨基羰基、被取代的氨基羰基或被取代的氨基磺酰基。其中R优选杂芳基或硫醚基中的氮杂环芳香基或三硫醚基；X为Cl、Br、I等卤素)(3) Claisen重排将烷氧化后的芹菜素衍生物加热，发生Claisen重排，将取代的丙烯基重拍到6位碳上。反应温度为0 100°C。(4)去酰基保护在碱性条件下，将步骤(3)中得到的化合物水解，去掉酰基化的保护，即得到目标化合物。根据本发明所述组合物，其含有至少一种式1化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。药学上可接受的载体或赋形剂包括填充剂、粘合剂、防腐剂、矫味剂、稀释剂、着色剂等，本发明药物组合物可以按照药剂领域已知的制备方法制备。根据本发明药物的性质及使用形式，药物的剂型视情况而定，可根据需要按照药剂学领域的常规方法制成适合口服、直肠给药、肌肉注射、滴注液等剂型。如片剂、胶囊、膏剂、贴剂、悬浮液，注射液或滴液。本发明所得的化合物从初步的抗癌实验观察，有比较好的效果，可用于治疗女性生殖系统癌症如宫颈癌、卵巢癌等有关疾病。
图1是本发明芹菜素衍生物的结构通式图2是本发明芹菜素衍生物的反应流程图3是本发明的化合物1合成的反应流程图4是本发明的化合物2合成的反应流程
具体实施例方式下面的实施例是对本发明的进一步详细描述，但不意味着对本发明的任何限制。实施例一在200ml的烧瓶中加入0. 405g的芹菜素，用60ml的无水吡啶溶解，加入0. 254ml 的乙酸酐试剂，室温下搅拌2小时后，用乙酸乙酯萃取3次、浓缩后用硅胶柱层析分离，得到酰化产物。将乙酰化的芹菜素0.03g溶解到无水DMF中，加入适量的被取代的丙烯基 R1CHClCH = CH2 (R1为吡啶)，在室温下，搅拌3小时，用乙酸乙酯萃取3次，浓缩后用硅胶柱层析分离，得到烷氧化产物。烷氧化产物200°C下发生Claisen重排，在5%的NaOH乙醇溶液中发生水解，除掉7，4’位酰基保护，经过硅胶柱层析得到最终产物化合物1，反应流程如图3。1H-WR(CDCl3) δ :6. 40 (1H, d, J = 2. IHz, H-8) ；6. 68 (1H, s, H-3) ；7. 80 (2H, dd, J = 8. 5,2. 0Hz, H-2，，6，) ；7. 12 (2H, dd, J = 8. 5,2. 1Hz, H_3，，5，) ；12. 15 (1H, s, C5-OH)；10. 72 (1H, s, C7-OH) ；2. 21(2H, d, J = 3. 2,H-1") ；4· 53 (1H，m，H_2”)；4. 86 (1H，d，H_3，，)； 7. 32 (2H, d, J = 6. 0，H_3”，5”)；8. 52 (2H, d, J = 6. 0，H_4”，6”)。实施例二在200ml的烧瓶中加入0. 398g的芹菜素，用60ml的无水吡啶溶解，加入0. 254ml 的乙酸酐试剂，室温下搅拌2小时后，用乙酸乙酯萃取3次、浓缩后用硅胶柱层析分离，得到酰化产物。将乙酰化的芹菜素0. 034g溶解到无水DMF中，加入适量的被取代的丙烯基 R1CHClCH = CH2 (R1为大蒜新素)，在室温下，搅拌3小时，用乙酸乙酯萃取3次，浓缩后用硅胶柱层析分离，得到烷氧化产物。烷氧化产物200°C下发生Claisen重排，在5%的NaOH乙醇溶液中发生水解，除掉7，4’位酰基保护，经过硅胶柱层析得到最终产物化合物2，反应流程如图4。1H-WR(CDCl3) δ :6. 38 (1H, d, J = 2. IHz, H-8) ；6. 65 (1H, s, H-3) ；7. 75 (2H, dd, J = 8. 4,2. 0Hz, H-2，，6，) ；7. 07 (2H, dd, J = 8. 4,2. 1Hz, H_3，，5，) ；12. 02 (1H, s, C5-OH)； 10. 62 (1H, s, C7-OH) ；2. 14 (2H, d, J = 3. 4, H-1") ；4. 45 (1H，m，H-2”)；4. 76 (1H，d，H-3，，)； 2. 14 (1H，m, H-4”)；4. 31 (1H, m, H—5”)；2. 35 (2H, d, H—6”)；2. 14 (2H, d, J = 3. 4，H—7”)； 4. 43 (1H, m, H—8”)；3. 85 (2H, d, H—9”)。实施例三化合物1和化合物2的抗肿瘤实验1、对宫颈癌Hela细胞的凋亡实验(1)材料化合物1和化合物2由沈阳亿灵医药科技有限公司自制；人宫颈癌Hela 细胞株购于中国医学科学院。(2)方法细胞培养人宫颈癌Hela细胞用含10 %小牛血清的DMEM培养液，于 37°C,5% CO2饱和湿度条件下静置培养。选择对数生长期细胞进行分组实验。MTT法检测化合物1和2对细胞增殖的影响细胞以5X 104/ml的密度接种于96 孔培养板中，培养4 后，每孔加入不同浓度的芹菜素、化合物1和2各100 μ 1，浓度分别为l、5、10、20g/ml，对照组加入含10% FBS的培养基，分别培养12、对、4他后，分别向每孔加入20 μ 1 MTT (5mg/ml)溶液，继续培养4h，弃培养液，每孔加入DMSO 100 μ 1，振荡5min， 酶标仪检测。每时间浓度组设3个复孔，实验重复3次。所得OD值根据公式计算细胞抑制率。细胞抑制率(％) = (1-0D实验组/OD正常组)X 100%，以空白组OD值调零。(3)实验结果MTT结果显示1 10 μ g/ml芹菜素、化合物1和2均能抑制Hela 细胞的增殖，呈时间-剂量依赖性关系；20 μ g/ml芹菜素、化合物1和2细胞毒性作用明显， 作用Mh，芹菜素细胞抑制率为82. 71 %，化合物1和2作用Mh以后细胞几乎全部死亡，见表1。表1对Hela细胞增殖的抑制作用
权利要求
1.-类具有抗肿瘤活性的芹菜素衍生物，其特征在于该类衍生物由下列结构式表示
2.根据权利要求1所述的芹菜素衍生物，其特征在于所述的R为H、卤素、杂芳基或烷硫基。
3.根据权利要求2所述的芹菜素衍生物，其特征在于所述的R为杂芳基或硫醚基，优选氮杂环芳香基或三硫醚基。
4.权利要求1-3所述的芹菜素衍生物的制备方法，其特征在于首先对芹菜素的7，4’ 羟基进行酰基化保护，通过烷氧化在5位羟基上连接被取代的丙乙烯基，再通过Claisen重排，将取代的丙烯基重排到6位碳上，在碱性条件下脱去7，4’的酰基保护，即得到目标化合物。
5.药物组合物，其含有至少一种如权利要求1所述的式1化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
6.权利要求5的药物组合物，其为片剂、胶囊、膏剂、贴剂、悬浮液，注射液或滴液
7.权利要求6所述的组合物可用于治疗女性生殖系统癌症如宫颈癌、卵巢癌等有关疾病。
全文摘要
本发明提供一类具有如下结构的芹菜素衍生物(结构式1)、它们的制备方法及用途。这些化合物对Hela细胞、CAOV3细胞等具有良好的抑制活性，可用于治疗女性生殖系统癌症如宫颈癌、卵巢癌等有关疾病。
文档编号A61K31/4433GK102161655SQ20111004504
公开日2011年8月24日 申请日期2011年2月25日 优先权日2011年2月25日
发明者关屹, 闫冬 申请人:关屹, 辽宁亿灵科创生物医药科技有限公司