专利名称：Aspochalasin U及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种拮抗TNF-α活性新化合物，尤其是涉及一种拮抗肿瘤坏死因子-α的一种新结构化合物的分离纯化方法和应用。
背景技术：
肿瘤坏死因子-alpha(TNF-a )的过表达是导致目前临床上尚不能完全医治的多种疾病，如内风湿性关节炎、g罗恩病、脑细胞缺血性坏死等的一个重要原因。目前，针对这类疾病采取的治疗方式是延缓和阻止疾病的进展、减轻疾病造成的疼痛，包括采用糖皮质激素(如强的松)、非甾体抗炎药(如C0X-2抑制剂)和免疫抑制剂(如阿贝西普)，但这类药物均不能根治疾病。针对TNF-α的蛋白质性质开发出的抗体类拮抗剂类药物，如依那西普^tanerc印t)、英夫利昔(Infliximab)、阿达木单抗(Adalimumab)等，能利用抗原-抗体相互结合的特性与过量表达的TNF-α结合，起到拮抗TNF-α的作用。但这类生物拮抗剂价格昂贵，一年的治疗费用约需1万美元，而且只能采取注射的方式给药，这给患者带来诸多不便。小分子的可口服的TNF-α抑制剂药物，具有TNF-α生物拮抗剂作用靶点明确的优点，又没有给药不便的弊病，是目前亟待开发的新型药物，但到目前为止，尚没有一个针对TNF-α过表达的小分子药物问世。中国专利CN101485661公开一种青藤碱衍生物通过拮抗TNF- α信号通路治疗自身免疫病，即如式I的青藤碱衍生物的用途，它可用于制备预防或治疗自身免疫疾病的组合物。该发明还公开了式I化合物在制备肿瘤坏死因子-α (TNF-α)信号通路阻断剂组合物中的用途。
发明内容
本发明的目的在于提供一种Aspochalasin U及其制备方法和应用。所述化合物Aspochalasin U 是分离自曲霉 F00685 Aspergillus sp. F00685 在 PDA培养基上的代谢产物，所述曲霉F00685 Aspergillus sp. F00685已于2011年5月19 日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏中心保藏编号为 CCTCCNO :M2011179o所述曲霉F00685 Aspergillus sp. F00685分离自福建晋江东石晒盐厂，可称为真菌次级代谢产物Aspochalasin U。所述Aspochalasin U 的结构为(3S，3aR，6S，6aR，12R，13R，151R，E) _6， 12,13-trihydroxy-3-isobutyl-4,5,8-trimethyl-3,3a,6,6a,9,10,11,12,13, 14-decahydro-lH-cycloundeca[d] isoindole-1,15 (2H) -dione,其结构式如下
所述Aspochalasin U的分子式为C24H37NO5，分子量为419 ；白色粉末，易溶于甲醇、 丙酮等有机溶剂，难溶于氯仿等低极性溶剂。该化合物的结构为尚未见报道的新结构。在 TNF-α拮抗剂筛选的细胞模型上，该化合物表现出中等的拮抗活性，该化合物在制备抗炎症药物或具有其他生物活性的先导物中应用。所述Aspochalasin U的制备方法如下
权利要求
1.Aspochalasin U，其特征在于其分离自曲霉 F00685 Aspergillus sp. F00685 在 PDA 培养基上的代谢产物，所述曲霉F00685 Aspergillus sp. F00685已于2011年5月19日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏中心保藏编号为CCTCC NO :M2011179 ；所述 Aspochalasin U 的结构为(3S，3aR，6S，6aR，12R，13R，151R，E)-6， 12,13-trihydroxy-3-isobutyl-4,5,8-trimethyl-3,3a,6,6a,9,10,11,12,13, 14-decahydro-lH-cycloundeca[d] isoindole-1,15 (2H) -dione,其结构式如下
2.如权利要求1所述的AspochalasinU的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)将曲霉F00685 Aspergillus sp. F00685 发酵；2)划线接种于半海水PDA平板上，培养活化，待菌落长出后重新接种到新鲜的半海水 PDA平板上，待菌落布满整个平板且产孢后作为种子板；3)将种子平板划成3mmX3mm的小块，以挑块的方式接种半海水固体PDA发酵平板后培养，艮口得 Aspochalasin U。
3.如权利要求2所述的AspochalasinU的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述发酵采用葡萄糖-土豆-琼脂培养基，所述葡萄糖-土豆-琼脂培养基的配方为葡萄糖20g， 土豆200g，琼脂15g，半海水定容至1L。
4.如权利要求2所述的AspochalasinU的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述培养活化的温度为^°C。
5.如权利要求2所述的AspochalasinU的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述培养的条件置于培养箱培养14天。
6.如权利要求1所述的AspochalasinU的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤.1)将权利要求2步骤幻所获得的培养物切成边长为0.5cm小块后，用乙酸乙酯、甲醇和冰醋酸混合溶液浸提，所述乙酸乙酯、甲醇和冰醋酸按体积比为乙酸乙酯甲醇冰醋酸=80 15 5;所述浸提可浸提3 4次，再将滤液减压浓缩至干，得提取物浸膏；.2)将提取物浸膏用乙酸乙酯水溶液萃取至水相无色，所述乙酸乙酯水的体积比为 1 1，所述减压浓缩采用旋转蒸发仪42°C减压浓缩至干，然后再用甲醇和石油醚萃取，所述甲醇石油醚的体积比为1 1，甲醇相减压浓缩至干得发酵提取物；.3)将发酵提取物用甲醇溶解后经中压液相反相硅胶柱层析，分别用纯水、30%甲醇-水、50%甲醇-水、70%甲醇-水、100%甲醇-水系统洗脱，其中50%甲醇洗脱的组分按每200mL/管收集，根据薄层层析(TLC)检测的结果合并含有Aspochalasin U的组分并浓缩至干；.4)含AspochalasinU组分再经分子筛凝胶柱层析，甲醇洗脱，流速15s/滴，3600s/管进行收集，经TLC检测合并含有Aspochalasin U的组分；目标化合物组分再次经凝胶柱层析，丙酮洗脱，可得到Aspochalasin U纯品。
7.如权利要求1所述Aspochalasin U在制备抗炎症药物或具有其他生物活性的先导物中的应用。
全文摘要
Aspochalasin U及其制备方法和应用，涉及一种拮抗TNF-α活性新化合物。提供一种Aspochalasin U及其制备方法和应用。Aspochalasin U的分子式为C24H37NO5，分子量为419。将曲霉F00685 Aspergillus sp.F00685发酵；划线接种于半海水PDA平板上，培养活化，待菌落长出后重新接种到新鲜的半海水PDA平板上，待菌落布满整个平板且产孢后作为种子板；将种子平板划成3mm×3mm的小块，以挑块的方式接种半海水固体PDA发酵平板后培养，即得产物。该化合物在制备抗炎症药物或具有其他生物活性的先导物中应用。
文档编号A61K31/403GK102584680SQ20111045169
公开日2012年7月18日 申请日期2011年12月29日 优先权日2011年12月29日
发明者刘军亮, 徐庆妍, 胡志钰, 郑忠辉, 黄耀坚 申请人:厦门大学