专利名称：凝血酶抑制剂ssr182289a磁性纳米微球及其的制备方法
技术领域：
本发明属于酶抑制剂类药物磁性纳米微球制备领域，特别是涉及一种凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球及其制备方法。
背景技术：
最新研制的低分子量的凝血酶抑制剂SSR182289A可竞争性的作用于凝血酶的活性位点；作为市场主力抗凝药物肝素的潜在的替代品，SSR182289A在临床实验中的结果令人鼓舞，在生物学特性和药物动力学上比肝素更优越，尤其是与肝素等传统抗凝药联合应用时可能会增加疗效(Christopher N. B. , Gilbert L. , Catherine L. , et al. , J.Pharmacol. Exp. Ther. , 2002, 303(3): 1189-1198)。磁性靶向给药系统是近年来国内外研究较多的一种新型靶向给药系统，通常由磁性材料、载体材料、药物其它辅料组成，可通过静脉、动脉导管、口服或注射等途径给药；磁性靶向给药系统是将药物与磁性物质通过适当的载体制成稳定体系，在足够强的外磁场作用下，使药物在体内定向移动、定位浓集并释放，从而集中在病变部位发挥疗效，具有高效低毒的特点；目前磁性靶向给药系统有磁性纳米微球、磁性纳米粒、磁性脂质体、磁性乳齐U、磁性片剂、磁性胶囊和将单克隆抗体偶联在磁性制剂表面的免疫磁性制剂，而磁性纳米微球是给药系统研究的重点和热点。迄今为止未见凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球及其制备的相关文献报导。
发明内容
本发明的目的是要提供一种工艺简单、重复性好、成本低的凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球制备方法。本发明提出的SSR182289A磁性纳米微球，所述磁性纳米微球由磁性材料、载体材料、包裹药物组成，其特征在于所述包裹药物为凝血酶抑制剂SSR182289A，磁性纳米颗粒为Fe3O4，载体材料为生物可降解的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA);聚乳酸-羟基乙酸共聚物作为磁性纳米微球的包裹层；磁性纳米微球的内核为Fe3O4磁性纳米颗粒和凝血酶抑制剂 SSR182289A。所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中的乳酸(LA):羟基乙酸的重量比为50 :50，分子量Mr为20000，因为乳酸(LA):羟基乙酸的重量比为50 50的PLGA最容易降解。所述Fe3O4磁性纳米颗粒粒径为10 40nm。_
本发明提出的凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球的制备方法，包括下列步骤
(1)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)和SSR182289A溶于有机溶剂后，再加入磁性纳米颗粒Fe3O4,超声分散，作为有机相；
(2)在PVA水溶液中加入电解质，作为水相；在搅拌条件下，缓慢的把有机相加入到水相中，室温下继续搅拌至有机溶剂挥发完全，然后将所得混悬液置于磁铁之上，除去上清液，再用蒸馏水洗涤，高速离心，反复3次将所得的沉淀物冷冻干燥、真空干燥、灭菌即得凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球。所述步骤(I)中的有机溶剂是乙醇。所述凝血酶抑制剂SSR182289A在有机相中的浓度是5 10mg/mL ;经过试验表面，如果假如药物含量较少，那样需用比较繁琐的HPLC来检测；药物浓度加大，将会产生突释现象，就是说大量的药物分子在我们的微球的表面附近，达不到缓释目的。
所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物在有机相中的浓度是15 25mg/mL，便于纳米微球的形成；
所述磁性纳米颗粒Fe3O4在有机相中的浓度是5"l0mg/mL,保证了磁性纳米微球在磁场中可以定向移动，也降低了由于磁性纳米颗粒Fe3O4的加入也引起的磁性纳米微球的形困难；
所述步骤(2)中的聚乙烯醇的规格是PVA-124，醇解度的摩尔百分数为98、9%，平均聚合度η为240(Γ2500，聚乙烯醇的水溶液的质量浓度为广2%，因为该浓度的聚乙烯醇对磁性纳米微球起到最适的增粘、辅助乳化、润湿的效果。所述步骤(2)中的电解质是氯化钠，在聚乙烯醇PVA的水溶液中的质量浓度为1-5%。所述有机相与水相的聚乙烯醇PVA的水溶液的体积比为1:2(Tl: 50。所述步骤(2)中搅拌转速为80(Tl200 rpm，控制搅拌转速能够获得合适尺寸的磁性纳米微球；所述SSR182289A磁性纳米微球的平均粒径在7. 8 Mm。所述步骤(2)中缓慢的把有机相加入到水相中指控制滴加速度为O. lmL/min。所述步骤(2)中室温下继续搅拌至有机溶剂挥发完全的时间为48飞2小时。本发明的有益效果
(1)Fe3O4磁性纳米颗粒对人体细胞无毒，不存在体内蓄积中毒的现象；
(2)聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)具有良好的生物相容性和生物可降解性，安全可靠，在人体内能够达到很好的缓释效果；
(3)该微球具有良好的磁响应性，可用于体内靶向给药；
(4)制备的纳米微球粒径在8Mm以下，磁性纳米颗粒含量可达10%，药物包封率可达
18%。
图I是凝血酶抑制剂SSR182289A化学结构式；
图2是制备的凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球的显微镜照片；
图3是SSR182289A磁性纳米微球的粒径分布 图4是SSR182289A磁性纳米微球磁性能评价；
图5是SSR182289A磁性纳米微球的药物释放曲线。
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明；应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围；此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例I
精确称取聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA，LA:GA=50 :50，Mr=20000) lOOmg，溶于5mL乙醇后，加入SSR182289A 25mg，超声溶解，再加入Fe3O4 25mg，超声分散，作为有机相；配置200mL I. 5wt%PVA水溶液，再加入3gNaCl (含量为I. 5%)，作为水相；在搅拌条件下(lOOOrpm)，缓慢的(O. lmL/min)把有机相加入到水相中，室温下连续搅拌48h，然后将所得混悬液置于磁铁之上，除去上清液，再用蒸馏水洗涤，高速离心，反复3次。所得的沉淀物冷冻干燥、真空干燥、灭菌即得SSR182289A磁性聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米微球。实施例2
精确称取聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA，LA:GA=50 :50，Mr=20000) 75mg，溶于5mL乙醇后，加入SSR182289A 50mg，超声溶解，再加入Fe3O4 50mg，超声分散，作为有机相；配置IOOmL I. 5wt%PVA水溶液，再加入5gNaCl (含量为5%)，作为水相；在搅拌条件下(800rpm)，缓慢的(O. lmL/min)把有机相加入到水相中，室温下连续搅拌52h，然后将所得混悬液置于磁铁之上，除去上清液，再用蒸馏水洗涤，高速离心，反复3次。所得的沉淀物冷冻干燥、真空干燥、灭菌即得SSR182289A磁性聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米微球。
实施例3
精确称取聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA，LA:GA=50 50, Mr=20000) 125mg，溶于5mL乙醇后，加入SSR182289A 40mg，超声溶解，再加入Fe3O4 40mg，超声分散，作为有机相；配置250mL I. 5wt%PVA水溶液，再加入7. 5gNaCl (含量为I. 5%)，作为水相；在搅拌条件下(1200rpm),缓慢的(O. lmL/min)把有机相加入到水相中，室温下连续搅拌50h，然后将所得混悬液置于磁铁之上，除去上清液，再用蒸馏水洗涤，高速离心，反复3次。所得的沉淀物冷冻干燥、真空干燥、灭菌即得SSR182289A磁性聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米微球。磁性纳米微球形貌和粒径尺寸
通过光学显微镜拍摄的微球照片(图2)，可以看到，制备所得的微球表面形貌光滑圆整、无粘连；用激光粒径仪测得微球的粒径(图3)，平均粒径为7. 8 Mm。磁性纳米微球磁性能评价
Fe3O4磁性纳米颗粒和磁性纳米微球的磁滞回线的可逆矫顽力和剩磁均接近零(图4)，表明Fe3O4磁性纳米颗粒和制备的磁性纳米微球都具有超顺磁性；而且从图2-3还可知，Fe3O4磁性纳米颗粒的最大比饱和磁化强度σ s为48 emu/g,而制备的磁性纳米微球的最大比饱和磁化强度σ s为40 emu/g (图4);由此可见,与纯的Fe3O4磁性纳米颗粒相比,制备的磁性纳米微球的最大比饱和磁化强度有所降低，这是由于形成了 PLGA壳层，影响了 Fe3O4磁性纳米颗粒的磁性，但是超顺磁性并没有影响，磁性纳米微球仍然具有很好的超顺磁性。载药量及其包封率计算
称取IOmg磁性纳米微球,并加入ImL 95%乙醇与试管中，超声加热破坏I h后,用微孔滤膜抽滤，精密吸取滤液I ml，以95%乙醇为空白，在280 nm处测得吸光度A，代入所作的标准曲线中，便可得到SSR182289A含量为15%。，然后根据下列公式可以计算得到包封率为88%
#封率(1)= 微球中 SSR1S2289A含量%) χ 10Q(%)
一.…制备微球时投入的SSRl 822S9戒]量占投。
入的总量的百分比30
磁性纳米微球缓释性能评价
药物释放缓慢，到第15天累积释药率达到87% (图5)，说明该磁性纳米微球具有良好的缓释性能。
权利要求
1.凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球，所述磁性纳米微球由磁性材料、载体材料、包裹药物组成，其特征在于所述包裹药物为凝血酶抑制剂SSR182289A，磁性纳米颗粒为Fe3O4，载体材料为生物可降解的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA);聚乳酸-羟基乙酸共聚物作为磁性纳米微球的包裹层；磁性纳米微球的内核为Fe3O4磁性纳米颗粒和凝血酶抑制剂 SSR182289A。
2.如权利要求I所述的凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球，其特征在于所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中的乳酸(LA):羟基乙酸的重量比为50 :50，分子量Mr为20000。
3.如权利要求I所述的凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球，其特征在于所述 Fe3O4磁性纳米颗粒粒径为IOlOnm ;所述SSR182289A磁性纳米微球的平均粒径在7. 8 Mm。
4.如权利要求I所述的凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球的制备方法，包括下列步骤(1)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)和SSR182289A溶于有机溶剂后，再加入磁性纳米颗粒Fe3O4,超声分散，作为有机相；(2)在PVA水溶液中加入电解质，作为水相；在搅拌条件下，缓慢的把有机相加入到水相中，室温下继续搅拌至有机溶剂挥发完全，然后将所得混悬液置于磁铁之上，除去上清液，再用蒸馏水洗涤，高速离心，反复3次将所得的沉淀物冷冻干燥、真空干燥、灭菌即得凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球。
5.如权利要求4所述的凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球的制备方法，其特征在于所述步骤(I)中的有机溶剂是乙醇；所述步骤(I)中的凝血酶抑制剂SSR182289A在有机相中的浓度是5 10mg/mL ;所述步骤(I)中的聚乳酸_羟基乙酸共聚物在有机相中的浓度是15 25mg/mL ;所述步骤(I)中的磁性纳米颗粒Fe3O4在有机相中的浓度是5"l0mg/mL。
6.如权利要求4所述的凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中的聚乙烯醇的规格是PVA-124，醇解度的摩尔百分数为98 99%，平均聚合度n为240(T2500，聚乙烯醇的水溶液的质量浓度为f 2% ;所述步骤(2)中的电解质是氯化钠，在聚乙烯醇PVA的水溶液中的质量浓度为1-5%;所述步骤(2)中搅拌转速为80(Tl200 rpm ;所述步骤(2)中缓慢的把有机相加入到水相中指控制滴加速度为0. lmL/min ;所述步骤(2)中室温下继续搅拌至有机溶剂挥发完全的时间为48 52小时。
7.如权利要求4所述的凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球的制备方法，其特征在于所述有机相与水相的聚乙烯醇PVA的水溶液的体积比为l:2(Tl:50。
全文摘要
本发明属于酶抑制剂类药物磁性纳米微球制备领域，特别是涉及一种凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球及其制备方法。本发明将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)和SSR182289A溶于有机溶剂后，再加入磁性纳米颗粒Fe3O4，超声分散，作为有机相；在PVA水溶液中加入电解质，作为水相；在搅拌条件下，缓慢的把有机相加入到水相中，室温下继续搅拌至有机溶剂挥发完全，然后将所得混悬液置于磁铁之上，除去上清液，再用蒸馏水洗涤，高速离心，反复3次将所得的沉淀物冷冻干燥、真空干燥、灭菌即得凝血酶抑制剂SSR182289A磁性纳米微球。
文档编号A61K47/34GK102614128SQ20121006771
公开日2012年8月1日 申请日期2012年3月15日 优先权日2012年3月15日
发明者张 杰, 李树白, 柳建华, 胡金波, 顾月 申请人:江苏晔铭生物医药科技有限公司