专利名称：遗传工程猪流感病毒及其应用的制作方法
遗传工程猪流感病毒及其应用本申请是申请日为2005年6月I日的中国申请号200580026048. 9的分案申请。本发明要求于2004年6月I日提交的美国临时申请第60/576,418号的权益，本发明将其引入作为参考。
1.发明领域本发明一般性地涉及拮抗细胞干扰素(IFN)反应的能力受损的减毒猪流感病毒，以及这种减毒病毒在疫苗和药物制剂中的用途。本发明特别涉及猪NSl基因被修饰以减弱或消除NSl基因产物对细胞IFN反应的拮抗能力的减毒猪流感病毒。这些病毒在体内复制，但表现出降低的毒力和增强的减毒性，因此适合用于活病毒疫苗和药物制剂。
2.
背景技术：
2. I流感病毒 含包被的反义基因组单链RNA的病毒家族可分为具有非分段基因组的组群(副粘病毒科、棒状病毒科、纤状病毒科(Filoviridae)和博尔纳病病毒(Borna Disease病毒))，或者具有分段基因组的其它组群(正粘病毒科、布尼亚病毒科(Bunyaviridae)和沙粒样病毒科(Arenaviridae))。以下详述并用在本发明实施例之中的正粘病毒科家族包括流感病毒A型、B型和C型，以及索戈托(Thogoto)病毒、多理病毒(Dhori)病毒和传染性鲑鱼贫血病毒。流感病毒体由内部的含单链RNA基因组的核糖核蛋白核心(螺旋形核壳体)和外部的被基质蛋白(Ml)内联的脂蛋白包膜组成。流感病毒A型的分段基因组由8种(C型流感为7种)线形、负极性、单链RNA分子组成，单链RNA编码7种多肽，包括RNA依赖性RNA聚合酶蛋白(PB2、PB1和PA)和形成核壳体的核蛋白(NP);基质膜蛋白(M1、M2);从含脂质的包膜伸出的两种表面糖蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA);非结构蛋白(NSl)、核输出蛋白(NEP);以及促凋亡因子PB1-F2。基因组的转录和复制在核内进行，通过在质膜上出芽装配。在混合感染中这些病毒可以发生基因重排。流感病毒通过HA吸附在细胞膜糖蛋白和糖脂的唾(液)酸寡糖上。病毒体内吞后，在细胞内涵体中发生HA分子的构象变化，该内涵体促进膜的融合，由此引发脱壳。核壳体移至核，在核中病毒mRNA被转录。病毒mRNA通过独特的机制来转录，其中病毒核酸内切酶从细胞异源mRNA中剪切5'帽状末端，该帽状末端随后作为引物通过病毒转录酶转录病毒RNA模板。转录产物在距离其模板末端15-22碱基处终止，在那里寡(U)序列作为添加多poly (A)结构的信号。在这样产生的8种病毒RNA分子中,6种为单顺反子信使,它们被直接翻译成代表HA、NA、NP和病毒聚合酶蛋白、PB2、PBl和PA的蛋白质。其它的两种转录子进行剪接，每种产生两种mRNA，这些mRNA在不同的阅读框内被翻译产生M1、M2、NS1和NEP。通过使用可供选择地ATG，该PBl片段编码第二种蛋白质非结构性PB1-F2蛋白。换言之，所述8种病毒RNA片段编码11种蛋白9种结构性蛋白和两种非结构性蛋白。流感病毒基因和其蛋白产物的总结如下表I所示。
表I :流感病毒基因组RNA片段及其编码分配a
权利要求
1.免疫原性制剂，其含有干扰素拮抗表型受损的遗传工程化减毒猪流感病毒和生理学可接受的赋形剂，其中所述病毒包含具有突变的猪流感病毒NSl基因，所述突变导致除氨基酸残基1-126之外的所有NSl氨基酸残基的缺失，且其中氨基末端氨基酸为I位。
2.如权利要求I所述的免疫原性制剂，其中所述猪流感病毒NSl基因中的突变位于猪流感病毒 A/Swine/Texas/4199_2/98NS1 基因。
3.如权利要求I所述的免疫原性制剂，其中所述猪流感病毒NSI基因中的突变位于以下猪流感病韋的 NSl 基因中A/Swine/CoIorado/1/77、A/Swine/Colorado/23619/99、A/Swine/Co te d 1 Armor/3633/84、A/Swine/Cote d 1 Armor/3633/84、A/Swine/England/195852/92Λ A/Swine/Finistere/2899/82Λ A/Swine/HongKong/10/98、A/Swine/HongKong/9/98、A/Swine/Hong Kong/81/78、A/Swine/Illinois/100084/01、A/Swine/Illinois/100085A/01、A/Swine/Illinois/21587/99、A/Swine/Indiana/1726/88、A/Swine/Indi ana/9K035/99 λ A/Swine/Indiana/P 12439/00 Λ A/Swine/Iowa/30、A/Swine/Iowa/15/30、A/Swine/Iowa/533/99、A/Swine/Iowa/569/99、A/Swine/Iowa/3421/90、A/Swine/Iowa/8548-1/98λ A/Swine/Iowa/930/01、A/Swine/Iowa/17672/88Λ A/Swine/Italy/1513-1/98、A/Swine/Italy/1523/98、A/Swine/Korea/CY02/02、A/Swine/Minnesota/55551/00λ A/Swine/Minnesota/593/99、A/Swine/Minnesota/9088-2/98、A/Swine/Nebraska/1/92、A/Swine/Nebraska/209/98、A/Swine/Netherlands/12/85、A/Swine/NorthCarolina/16497/99、A/Swine/North Carolina/35922/98、A/Swine/NorthCarolina/93523/01 λ A/Swine/North Carolina/98225/01、A/Swine/0edenrode/7C/96、A/Swine/0hio/891/01 λ A/Swine/0 klahcma/18717/99、A/Swine/0klahoma/18089/99、A/Swine/0ntario/01911-l/99、A/Swine/0ntario/01911-2/99、A/Swine/Ontario/41848/97、A/Swine/0ntario/97、A/Swine/Quebec/192/81 Λ A/Swine/Quebec/192/91、A/Swine/Quebec/5393/91、A/Swine/Taiwan/7310/70Λ A/Swine/Tennessee/24/77、A/Swine/Texas/4199-2/98 λ A/Swine/Wi scons in/125/97 Λ A/Swine/Wi scons in/136/97 Λ A/Swine/Wi scons in/163/97 λ A/Swine/Wi scons in/164/97 Λ A/Swine/Wi scons in/166/97 Λ A/Swine/Wi scons in/168/97 λ A/Swine/Wi scons in/235/97 Λ A/Swine/Wi scons in/238/97 Λ A/Swine/Wisconsin/457/98λ A/Swine/Wisconsin/458/98λ A/Swine/Wisconsin/464/98 或 A/Swine/Wi sconsin/14094/99o
4.如权利要求1-3中任意一项所述的免疫原性制剂，其中所述减毒猪流感病毒为表达异源序列的嵌合病毒。
5.如权利要求4所述的免疫原性制剂，其中所述异源序列包含来源于另ー种病毒的抗原决定簇或至少ー个片段。
6.如权利要求1-3中任意一项所述的免疫原性制剂，其中所述减毒猪流感病毒为表达肿瘤抗原的嵌合病毒。
7.如权利要求1-3中任意一项所述的免疫原性制剂，其中所述减毒猪流感病毒为表达外源病原体的抗原决定簇的嵌合病毒。
8.如权利要求I所述的免疫原性制剂，其中所述减毒猪流感病毒为TX/98/del126。
9.有效量的如权利要求1-8中任一项所述的免疫原性制剂在制备用于在猪中免疫或诱导免疫应答，和治疗猪流感病毒感染，或用于在猪中预防与猪流感病毒感染相关的不适的药物中的用途。
10.制备如权利要求1-8中任一项所述的免疫原性制剂的方法，所述方法包括 (a)在培养基中増殖如权利要求1-8中任一项所述的遗传工程化减毒猪流感病毒；和 (b)收集子代病毒， 其中所述培养基为细胞、细胞系或含胚蛋。
全文摘要
本发明一般性地涉及拮抗细胞干扰素(IFN)反应的能力受损的减毒猪流感病毒，以及这种减毒病毒在疫苗和药物制剂中的用途。本发明特别涉及猪NS1基因被修饰以减弱或消除NS1基因产物对细胞IFN反应的拮抗能力的减毒猪流感病毒。这些病毒在体内复制，但表现出降低的复制、毒力，和增强的减毒性，因此适合用于活病毒疫苗和药物制剂中。
文档编号A61P31/16GK102727880SQ20121011128
公开日2012年10月17日 申请日期2005年6月1日 优先权日2004年6月1日
发明者乔根·A·里希特, 凯利·M·莱格, 彼得·帕雷斯, 理查德·J·威比, 罗伯特·韦伯斯特, 阿道夫·加西亚-塞斯特 申请人:圣祖德儿童研究医院, 美国政府(美国农业部代表), 西奈山医学院