专利名称：一种具有抑制单胺氧化酶b功能的保健食品和药品的生产方法及其在临床的应用的制作方法
—种具有抑制单胺氧化酶B功能的保健食品和药品的生产方法及其在临床的应用技术领域由红曲与淫羊藿组成的具有抑制单胺氧化酶B功能的保健食品和药品的生产方法及其在临床预防和治疗抑郁症，老年性痴呆和帕金森氏综合症的应用。
背景技术：
神经元退行性疾病是威胁人类健康的一大类疾病，包括阿尔采默茨病、帕金森病等。其病因和发病机制复杂，一直是神经科学研究的重点。单胺氧化酶(monoamine oxidase, MAO),是ー种线粒体膜复合酶,可在大脑和周围神经组织中催化ー些生物体产生的胺，氧化脱氨产生过氧化氢.根据底物选择性和对抑制剂的灵敏度，单胺氧化酶被分为A和B两种。单胺氧化酶A对底物血清素(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和抑制剂clorgyline具有高亲和性；而单胺氧化酶B则对苯こ基胺(PEA)、苯甲胺和抑制剂cbprenyl具有高亲和性.单胺氧化酶B活力的变化则与帕金森氏综合症有夫，已证明在老年人神经组织内单胺氧化酶B水平升高3倍，阿尔采默茨病(AD)患者单胺氧化酶B活性比正常者高，患者脑组织内单胺氧化酶A和单胺氧化酶B的mRNA水平也明显升高，单胺氧化酶抑制剂是ー类由于单胺氧化酶活性过高导致的疾病如抑郁症，帕金森病和老年性 痴呆等疾病具有预防和治疗作用的药物，如治疗抑郁症的苯こ肼、异唑肼、异丙肼、苯环丙胺、吗氯贝胺、溴法罗明、尼亚拉胺、托洛沙酮、德弗罗沙酮，治疗帕金森病药司立吉兰，治疗高血压的优降宁，抗菌药物呋喃唑酮、灰黄霉素、异烟肼，抗肿瘤药物甲基苄肼，复方药物益康宁等。这些药物在临床应用多年，取得一定的疗效，但对老年性神经元退行性疾病如阿尔采默茨病、帕金森病和抑郁症的治疗还是存在许多困难，主要是这些药物长期服用均有一些较严重的不良反应，影响这些疾病的治疗，目前急需寻找ー些副作用少的，可以长期服用的保健食品，或药品，解决这些疾病的治疗难题。红曲源于中国，至今已有一千多年的应用历史，是我国传统的食药双效的发酵产品，古往今来一直被广泛应用于食品着色、酿酒、发酵食品生产、中药等各个领域。红曲最早的药用记录为元代的《日用本草》，“破血行药势，杀山岚瘴气，治打扑伤损”。红曲味甘，性平，无毒，归脾、胃、肝、大肠经，明代李时珍在《本草纲目》评价它说“此乃人窥造化之巧者也”，“奇药也”。红曲为曲霉科真菌紫色红曲霉Monascus purpureus Went菌丝体及孢子,经人工培养使菌丝在粳米内部生长，最終整个米粒变为红色所得的制品。近年研究发现红曲中含有红曲色素、红曲多糖、洛伐他汀、麦角留醇、Y-氨基丁酸、生物黄酮、皂苷、膳食纤维、氨基多糖、辅酶QlO等丰富的生理活性物质，1998年，日本学者证实从红曲中提取的一系列香豆素衍生物(Monankarins A-D)具有小鼠脑组织MAO B活性抑制作用。红曲发酵液提取天然红色素后剰余的红曲酶菌丝体，经检测其中脂肪酸组成以不饱和脂肪酸为主(70% )，人体必需脂肪酸亚油酸、亚麻酸的含量占总脂肪的30%以上，可调节人体血脂平衡和減少氧化型低密度脂蛋白产生，有效地阻断氧化应激反应和心血管疾病的诱发因素。此外，红曲菌丝体中丰富的蛋白质和水溶性多糖可作为能源物质，其中的多糖类物质在免疫调节及抗氧化、抗衰老的作用等方面都表现出生物活性。现代药理研究表明，淫羊藿提取物能显著抑制利血平拮抗模型小鼠脑及肝脏的ΜΑ0_Α和ΜΑ0_Β活性，淫羊藿苷可以显著缩短小鼠強迫游泳实验和悬尾实验的不动时间，并逆转由于強迫游泳实验所致的小鼠脑组织ΜΑ0_Α和MAO_B的活性升高，提示淫羊藿提取物有可能通过抑制MAO活性，减少单胺类神经递质代谢，提高脑组织神经递质水平达到抗抑郁作用。鉴于淫羊藿抗抑郁样作用，红曲菌丝体调节血脂、抗氧化及其潜在香豆素衍生物的嫩0_8抑制作用，将两药组成一组具有抑制单胺氧化酶B功能的保健食品或药品。用于预防可治疗由于单胺氧化酶B活性升高导致的相关疾病，就是本发明的主要目的。发明内容取天然红曲经乙醇提取红色素后，剩下的红曲菌丝体，烤干，微粉化后，加入等量的淫羊藿，用10倍体积70%乙醇浸泡24h，85°C回流提取(2 X Ih)，过滤，滤渣再用10倍体积40%乙醇浸泡24h，回流提取(I X Ih)，过滤，合并3次滤液，减压浓缩，蒸干，制成可供临床应用的保健食品和药品，这些产品经实验研究，证明对单胺氧化酶B的活性有明显的抑制作用，可以用来制备抑制单胺氧化酶B活性的保健食品和药品，作为单胺氧化酶B抑制剂用于预防和治疗忧郁症，帕金森氏病和老年性痴呆等疾病。本发明提出，可取这些天然红曲和淫羊藿提取物按常规的药品生产规范制成可供临床应用的产品形式，如片剂，胶囊剂，颗粒剂，冲剂。这些天然红曲提取物还可做成饼干、饮料等保健食品应用，其中这些天然红曲提取物作为保健食品饼干的添加量为5 30% ;作为饮料的添加量为I 15%。
实施例一红藿制剂对动脉硬化小鼠脑组织单胺氧化酶_B活性的影响I材料和方法I. I药物配制与试剂红藿制剂的生产方法取天然红曲经乙醇提取红色素后，剩下的红曲菌丝体，烤干，微粉化后，加入等量的淫羊藿，用10倍体积70%乙醇浸泡24h，85°C回流提取(2Xlh)，过滤，滤渣再用10倍体积40%乙醇浸泡24h，回流提取(I X Ih)，过滤，合并3次滤液，减压浓缩，配成实验用的红藿制剂，供实验应用，另按同样工艺配置不含红曲的淫羊藿对照制剂组和不含淫羊藿的红曲菌丝体对照制剂组，同时选取血脂康胶囊(北京北大维信生物科技有限公司)作为阳性对照组，采用人与小鼠的体表面积换算，按成人每次服用两粒血脂康胶囊和小鼠灌胃量为5ml/(kg d)，即取一粒血脂康胶囊溶于19. 2ml蒸馏水配制成血脂康药液。实验用动物油则购买新鲜猪肠油炼制。单胺氧化酶_B测定试剂盒和组织蛋白定量测试盒均购于南京建成生物工程研究所。I. 2实验仪器贝利微粉机、BiotekSynergy 2 酶标仪、Synthetic QuarZ Glass 酶标板I. 3动物分组与给药方案SPF级KM雄性小鼠60只(购于广东省医学实验动物中心)，医学实验动物许可证号SCXK (粤)2008-0002，体重(35 40) g，按体重随机分成正常组、维生素D3+动物油模型组、血脂康组、红曲菌丝体组、淫羊藿组、红藿制剂组，每组10只。除正常组小鼠给予等量生理盐水做平行对照外，其余小鼠均在实验第I 4天灌胃给予300，OOOIU/(kg d)维生素D3注射液，第5天开始上午灌胃给予动物油造模，下午4个药物组给予相应药液，模型组则给予等量生理盐水，灌胃量均为5ml/(kg d)，每周根据小鼠体重变化调整灌胃量。I. 4指标检测实验六周后处死小鼠，迅速取脑、称重，并计算脑指数脑指数=脑重(mg)/体重(g)。按胺氧化__B測定试剂盒说明书的方法，以预冷的生理盐水制备脑组织匀浆用于MAO_B的活性測定，以正常组MAO_B活性为100%，计算各组MAO_B相对活性。I. 5统计学处理实验数据以i±s表示，采用SPSS 16. O统计软件中的单因素方差分析(One-WayAN0VA)进行检验,方差齐米用Bonferroni检验；方差不齐则米用Tajnhane’ s T2检验，以P
<O. 05表示差异具有统计学意义。 2 结果2. I各组小鼠体重随时间变化情况除正常组小鼠体重随时间逐渐增加外，第I周模型组和4个药物组小鼠体重急剧降低，第2周开始体重迅速増加，其中红藿制剂组与正常组体重变化趋势基本一致，其余四组体重变化趋势基本一致，第5周时体重基本达到正常水平，第I 5周各时间点小鼠体重高低为正常组>模型组>红曲菌丝体组>血脂康组>淫羊藿组。第6周实验结束时各组小鼠体重与正常组相比差异均无统计学意义，模型组和红曲菌丝体组有超过正常组的趋势，而血脂康组合淫羊藿组则维持在较低体重水平。2. 2各组小鼠脑指数和脑组织单胺氧化酶_B活性表I各组小鼠脑指数与脑组织ΜΑ0_Β活性比较G 土 s, η = 8)
μαο_β活性酶相对活性
组别脑指数
(U/mgprot)(%)
正常组5.96 土 1.0030,22土 2.46100
模型组6.15±0.4445.16±5.26a149.44
血脂康组7.30±0.33αδ43.31±5.16α143.32
红曲菌丝体组6.40±0.4248.3丨±9.6丨159.86
淫羊藿组7.28±0.69αλ46.77±6.40α154.77
红藿制剂组6.61±0.7829.65±2.46*δ98.11注与止常组比较，aP < O. 05 ;与模型组相比较，ΛΡ < O. 05 ;与血脂康组比较，*Ρ
<O. 05。如表I所示，与正常组和模型组相比，血脂康组和淫羊藿组小鼠脑指数均增高，且差异具有统计学意义(P <0.05)，红曲菌丝体组和红藿组脑指数虽有增高的趋势，但差异无统计学意义。与正常组相比，模型组、血脂康组和淫羊藿组小鼠脑组织ΜΑ0_Β活性升高，且差异具有统计学意义(P <0.05);与模型组和血脂康组相比，红藿制剂组小鼠脑组织ΜΑ0_Β活性降低，且差异具有统计学意义(P < O. 05)。各组ΜΑ0_Β相对活性高低为红曲菌丝体组>淫羊藿组>模型组>血脂康组>正常组>红藿制剂组。3 讨论结合体重和脏器指数的变化可反映动物机体中毒效应和判断药物作用靶器官的毒性综合情况，本实验结果显示，除正常组小鼠体重随时间逐渐增加外，其余小鼠第I周出现精神萎靡、肌张力下降、腹泻、嗜睡、体重急剧下降等急性维生素D3中毒症状。随着中毒症状的缓解、动物油脂的摄入增加和药物的干预，从第2周开始体重变化大致可分为3类红藿制剂组体重变化趋势与正常组基本一致，提示该复方能够快速恢复小鼠各项生理功能和调节体内脂肪平衡；模型组、红曲菌丝体组、血脂康组、淫羊藿组小鼠体重则呈直线增加，增幅大于正常组和红藿制剂组，；第五周开始模型组和红曲菌丝体组体重超过正常水平，并有继续增加的趋势，而血脂康组和淫羊藿组则一直维持在正常水平之下，推测血脂康和淫羊藿比红曲菌丝体在维持正常体重方面更有优势。组织器官萎缩及其功能逐渐衰退是衰老的重要表现，尤以脑组织的变化最为显著，血脂康组和淫羊藿组小鼠虽一直维持较低体重，但脑指数较正常组和模型组高，表明血脂康和淫羊藿有延缓脑衰老的作用。就理论而言，脑组织富含不饱和脂肪酸，需要利用大量氧来产生能量，因此容易发生脂质过氧化反应，加之脑组织与其他器官相比相对缺乏抗氧化酶系统，因此脑组织是活性氧自由基的易损部位。脑组织MA0_B异常升高会导致儿茶酚胺类神经递质氧化失活，生成大量活性氧自由基导致氧化应激，而氧化应激是神经退行性疾病和血管疾病的发病机理。自由基学说认为，衰老与氧化-抗氧化的失衡有一定关系，氧化剂增多会加速生物分子 的氧化损伤，会引发神经生化和神经内分泌功能紊乱，从而导致脑生理功能的退化、行为异常，出现忧郁症，帕金森氏病和老年性痴呆，故MA0_B的活性可作为评价脑衰老的一个重要指标。本实验联合运用300，OOOIU/ (kg d)维生素D3和动物油诱导小鼠动脉硬化，实验6周后模型小鼠脑组织MA0_BS性较正常组显著升高(P < 0. 05)，提示MA0_B参与脑血管硬化的病变过程并加快小鼠脑衰老的趋势。实验结果的另一个重要提示，超生理剂量维生素D3引起的MA0_B活性的升高会导致神经系统的氧化损伤。维生素D3与VitD受体形成受体一配体复合物之后方可发挥药理作用，而VitD受体广泛分布于体内多个组织器官，动脉硬化小鼠脑组织MA0_BS性升高的原因可能是超生理剂量的维生素D3上调细胞Vit D受体使细胞摄钙能力，细胞钙超载导致线粒体损伤；由于动脉硬化，脑血管狭窄和微血栓形成，脑组织易发生缺血缺氧，此时细胞能量耗竭，膜泵功能降低，细胞膜内外离子失衡导致细胞线粒体功能障碍，线粒体结构和功能受损必定会导致MA0_B活性异常变化；高脂饮食所致高胆固醇血症是氧化应激和DNA损伤的诱导因素，加之动脉硬化时脑缺血缺氧产生的氧化应激效应，脑组织中H2O2的大量积累诱使MA0_B活性升高。已有实验证明血脂康胶囊具有使高血脂症大鼠血清SOD水平升高，MDA水平降低而表现抗氧化作用，此外对脑缺血-再灌注的模型大鼠有脑缺血保护作用。血脂康组小鼠脑MA0_BS性高于正常组(P<0. 05)，但与模型组相比差异无统计学意义，说明血脂康并非通过抑制脑MA0_B的活性起抗氧化和神经保护作用。淫羊藿提取物(含淫羊藿总黄酮和淫羊藿苷)能显著抑制利血平拮抗模型小鼠脑及肝脏的MA0_A和MA0_B活性，提示淫羊藿提取物有可能通过抑制MAO活性，减少单胺类神经递质代谢，提高脑组织神经递质水平达到抗抑郁作用。本实验中淫羊藿提取物对MA0_B活性的影响与血脂康组相似，无法逆转动脉硬化小鼠MA0_B活性升高的作用。红曲菌丝体是提取了红色素之后的物质，以不饱和脂肪酸、蛋白质和水溶性多糖为主要成分，实验显示虽有升高正常小鼠的脑MA0_B活性的趋势(P = 0. 07)，但与模型组相比差异均无统计学意义，推测红曲菌丝体提取物中不含或仅含微量的MonankarinsA-D，故无显著的MAO_B抑制作用。上述结果显示，动脉硬化小鼠脑组织ΜΑ0_Β活性显著升高，但血脂庚、淫羊藿、红曲菌丝体单方均无法逆转这种作用，而红曲菌丝体+淫羊藿复方(红藿制剂)可使模型小鼠脑组织ΜΑ0_Β活性降至正常水平，与模型组和血脂康相比具有显著差异，提示该复方具有延缓脑衰老和预防神经退行性病变的作用，可作为单胺氧化酶B抑制剂用于预防和治疗忧郁症，帕金森氏病和老年性痴呆等疾病。由红曲菌丝体与淫羊藿组成的红藿制剂对单胺氧化酶B的活性有明显的抑制作用，可以用来制备抑制单胺氧化酶B活性的保健食品和药品，作为单胺氧化酶B抑制剂用于 预防和治疗忧郁症，帕金森氏病和老年性痴呆等疾病。可取这些天然红曲和淫羊藿提取物按常规的药品生产规范制成可供临床应用的产品形式，如片剂，胶囊剂，颗粒剂，冲剂。这些天然红曲和淫羊藿提取物还可做成饼干、饮料等保健食品应用，其中这些天然红曲和淫羊藿提取物作为保健食品饼干的添加量为5 30% ;作为饮料的添加量为I 15%。
权利要求
1.一种由红曲与淫羊藿组成的具有抑制单胺氧化酶B功能的保健食品和药品的生产方法及其在临床预防和治疗抑郁症，老年性痴呆和帕金森氏综合症的应用。
2.如权利要求I所述的由红曲与淫羊藿组成的具有抑制单胺氧化酶B功能的保健食品和药品的生产方法，其特征为该生产方法是取天然红曲经乙醇提取红色素后，剩下的红曲菌丝体，烤干，微粉化后，加入等量的淫羊藿，用10倍体积70 %乙醇浸泡24h，85°C回流提取(2 Xlh)，过滤，滤渣再用10倍体积40%乙醇浸泡24h，回流提取(I X Ih)，过滤，合并3次滤液，减压浓缩，制成可供临床应用的保健食品和药品。
3.如权利要求I所述的红曲与淫羊藿组成的单胺氧化酶B抑制剂的生产方法及在临床预防和治疗抑郁症，老年性痴呆和帕金森氏综合症的应用，产品形式为片剂，胶囊剂，颗粒剂，冲剂。
4.如权利要求I所述的红曲与淫羊藿组成的单胺氧化酶抑制剂B的生产方法及在临床预防和治疗抑郁症，老年性痴呆和帕金森氏综合症的应用，其中作为预防应用的产品形式为饼干、饮料。
全文摘要
取天然红曲经乙醇提取红色素后，烤干，微粉化后，加入等量的淫羊藿，用乙醇浸泡，回流提取，过滤，滤渣再用乙醇浸泡24h，回流提取，过滤，合并3次滤液，减压浓缩，制成可供临床应用的具有抑制单胺氧化酶B功能保健食品和药品，这些产品经实验研究，证明对单胺氧化酶B的活性有明显的抑制作用，可以作为单胺氧化酶B抑制剂用于预防和治疗忧郁症，帕金森氏病和老年性痴呆等疾病。
文档编号A61K36/296GK102813692SQ20121018321
公开日2012年12月12日 申请日期2012年5月24日 优先权日2012年5月24日
发明者吴铁, 谢爱媚, 崔燎, 司徒永立, 卢旱云 申请人:广东医学院, 湛江广医医药科技开发有限公司