专利名称：一种三七多糖提取物及其制备方法与制剂及应用的制作方法
技术领域：
本发明属于药物制备应用技术领域，具体涉及一种三七多糖提取物及其制备方法与制剂及应用。
背景技术：
中药三七为五加科植物人参三七Panax notoginseng (Burk. ) F H. Chen的干燥根，主产于云南、广西等地，野生或栽培。其味甘、微苦，性温，主入肝、胃、大肠经，具有滋补、强壮、补血、消肿镇痛、止血散癖、增强免疫力等功效。20世纪末，国内外学者对三七进行了广泛的药理研究和临床实验，取得了大量的新成果，使三七的医学应用领域得到了拓展。迄今为止，我国学者已对三七中的化学成分进行了较为系统的研究，三七主要成 分为三七总皂苷、多糖类、三七素、黄酮、挥发油、氨基酸及各种微量元素等。多年来三七的研究主要集中在皂苷的化学和药理作用上，研究已证实，三七总皂苷有心肌保护作用；预防血栓和抗血栓作用；镇痛作用；保护肝脏；抗炎症作用；抗辐射作用；增加超氧化物歧化酶活性等，其他成分的研究则较少。随着科学的发展，高等植物的生物活性成分多糖越来越引起人们的兴趣，多糖的作用研究也逐渐深入。目前，三七化学成分中应用较多的为三七总皂苷，在提取三七总皂苷的过程中，遗留下的残渣通常都被当作废渣处理。实际上，在这些废渣中还含有较多的除三七总皂苷外的其他活性物质，当作废渣处理，对三七资源造成了相当的浪费，不利于三七资源的综合利用。因此，开发一种变废为宝、能综合利用三七原料的方法是非常必要的。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种三七多糖提取物；第二目的在于提供所述三七多糖提取物的制备方法；第三目的在于提供所述三七多糖提取物制成的制剂；第四目的在于提供所述三七多糖提取物由于具有增强免疫力的作用，而且由于免疫力的提高产生抗癌的药理活性，可用于制备抗肿瘤药物和增强免疫力药物中的应用。本发明第一目的是这样实现的，所述三七多糖提取物是以提取三七总皂苷后的废渣为原料经提取、浓缩、精制、干燥、粉碎、检验步骤得到，其中三七多糖含量不低于15%。本发明的第二目的是这样实现的，包括提取、浓缩、精制、干燥、粉碎、检验步骤，具体包括
A、提取取提取三七总皂苷后的废渣置入提取罐中，加入体积比8 24倍量的纯化水在温度为5(T60°C下浸提4 8h，循环浸提2飞次，过滤，合并滤液备用；
B、浓缩将二次提取后的滤液在压力彡O.8MPa，温度彡90°C，浓缩蒸汽压力彡O. 3MPa下浓缩至相对密度为I. 16^1. 24的浸膏；
C、精制将浸膏静置8 24h，加入体积比31倍量的乙醇沉淀8 24h后，过滤将粗多糖与母液分离，粗多糖再用乙醇清洗2飞次得目标物；
D、干燥精制后的三七多糖提取物经干燥至含水量为广9%得到三七多糖提取物干燥品;
E、粉碎混合将三七多糖提取物干燥品进行粉碎过80目筛，得到三七多糖提取物细粉，将连续生产的产品混合；
F、检验将混合好的三七多糖提取物细粉分装，取样检验，出具检验报告单。本发明的第三目的是这样实现的，所述三七多糖提取物加入医学或食品上适宜的辅料制成散剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂或丸剂。本发明的第四目的是这样实现的，所述的三七多糖提取物在制备抗肿瘤药物和/或增强免疫力药物中的应用。本发明以提取三七总皂苷后的废渣进行再次利用，变废为宝，有助于三七资源的综合利用，降低成本，提高经济效益。
图I为本发明工艺流程 图2为三七多糖对荷瘤H22小鼠的生存曲线图。
具体实施例方式下面结合附图及实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。本发明所述的三七多糖提取物是以提取三七总皂苷后的废渣为原料经提取、浓缩、精制、干燥、粉碎、检验步骤得到，其中三七多糖含量不低于15%。所述的三七多糖含量为15 45%。所述的三七多糖含量为45 70%。本发明所述的三七多糖提取物的制备方法包括提取、浓缩、精制、干燥、粉碎、检验步骤，具体包括
提取是将提取三七总皂苷后的废渣置入提取罐中，加入体积比8 24倍量的纯化水在温度为5(T60°C下浸提4 8h，循环浸提2飞次，过滤，合并滤液备用；
浓缩是将二次提取后的滤液在压力彡O. 8MPa，温度彡90°C，浓缩蒸汽压力彡O. 3MPa下浓缩至相对密度为I. 16^1. 24的浸膏；
精制是将浸膏静置8 24h，加入体积比31倍量的乙醇沉淀8 24h后，过滤将粗多糖与母液分离，粗多糖再用乙醇清洗2飞次得目标物；
干燥是精制后的三七多糖提取物经干燥至含水量为广9%得到三七多糖提取物干燥
品;
粉碎混合是将三七多糖提取物干燥品进行粉碎过80目筛，得到三七多糖提取物细粉，将连续生产的产品混合；
检验是将混合好的三七多糖提取物细粉分装，取样检验，出具检验报告单。所述的提取步骤中过滤为使用100目不锈钢筛网实现。所述的精制步骤中乙醇为浓度大于90%的食品级醇；过滤为经滤布孔径5(Tl00mm的离心机实现。所述的滤布优选全棉滤布；所述离心机优选三足式离心机。所述的干燥步骤中干燥为真空干燥、冷冻干燥、常压干燥、红外线干燥、微波干燥、吸湿干燥中的一种或几种。优选真空干燥，干燥温度彡110°c，真空度彡O. 08MPa，蒸汽压力^ O. 3MPa。所述的粉碎混合步骤中粉碎为使用不锈钢粉碎机完成；混合为使用二维或三维运动混合机进行实现，混合时间> lh。本发明所述的三七多糖提取物制成的制剂为所述的三七多糖提取物加入药用辅料制成散剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂或丸剂。本发明所述的三七多糖提取物的应用为所述的三七多糖提取物用于制备抗肿瘤药物和/或增强免疫力药物中的应用。本发明所用原料——提取三七总皂苷后的废渣不受限制，均可以实现本发明，下 面仅以部分三七总皂苷提取工艺中所得残渣对本发明做进一步说明
实施例I
取三七750 kg，清洗，干燥至水分含量为10%，粉碎至粒径为6X6、X9mm的粗粉备用；将粗粉置入提取罐中，加入体积比10倍量的60%的乙醇在温度为50°C下浸提12h，循环浸提5次，经100目不锈钢筛网过滤，合并滤液作为生产三七总皂苷使用，合并残渣备用。实施例2
取三七750 kg，清洗，干燥至水分含量为20%，粉碎至粒径为8 X 8mm的粗粉备用；将粗粉置入提取罐中，加入体积比14倍量的90%的乙醇在温度为60°C下浸提8h，循环浸提3次，经100目不锈钢筛网过滤，合并滤液作为生产三七总皂苷使用，合并残渣备用。实施例3
取三七750 kg，清洗，干燥至水分含量为10%，粉碎至粒径为9 X 9mm的粗粉备用；将粗粉置入提取罐中，加入体积比10倍量的60%的乙醇在温度为55°C下浸提10h，循环浸提4次，经100目不锈钢筛网过滤，合并滤液作为生产三七总皂苷使用，合并残渣备用。实施例4
取三七750 kg，清洗，干燥至水分含量为15%，粉碎至粒径为IOmm的粗粉备用；将粗粉置入提取罐中，加入体积比13倍量的70%的乙醇在温度为58°C下浸提10h，循环浸提5次，经100目不锈钢筛网过滤，合并滤液作为生产三七总皂苷使用，合并残渣备用。实施例5
取三七750埯，清洗，干燥至水分含量为11%，粉碎至粒径为8mm的粗粉备用；将粗粉置入提取罐中，加入体积比12倍量的75%的乙醇在温度为55°C下浸提10h，循环浸提4次，经100目不锈钢筛网过滤，合并滤液作为生产三七总皂苷使用，合并残渣备用。实施例6
取实施例I所得残渣置入提取罐中，加入体积比8倍量的纯化水在温度为50°C下浸提8h，循环浸提6次，经100目不锈钢筛网过滤，合并滤液备用；将二次提取后的滤液在压力为
O.8MPa，温度为90°C，浓缩蒸汽压力为O. 3MPa下进行浓缩至60°C时相对密度为I. 16的流浸膏；将流浸膏静置24h，加入体积比3倍量的90%的乙醇沉淀24h后，过滤为经全棉滤布孔径50mm的三足式离心机过滤过滤将粗多糖与母液分离，粗多糖再用90%的乙醇清洗2次得目标物三七多糖提取物；精制后的三七多糖提取物经真空干燥，干燥温度为110°C，真空度为O. 08MPa,蒸汽压力为O. 3MPa，当含水量为5%得到三七多糖提取物干燥品；将三七多糖提取物干燥品用不锈钢式粉碎机粉碎过80目筛得到三七多糖提取物细粉，将连续生产的同一批产品二维运动混合机进行混合，混合时间为Ih ;将混合好的三七多糖提取物细粉分装，取样检验，出具检验报告单，其中三七多糖含量为54. 05%。实施例7
取实施例2所得残渣置入提取罐中，加入体积比24倍量的纯化水在温度为60°C下浸提5h，循环浸提2次，经100目不锈钢筛网过滤，合并滤液备用；将二次提取后的滤液在压力为O. 6MPa，温度为85°C，浓缩蒸汽压力为O. 2MPa下进行浓缩至60°C时相对密度为I. 24的流浸膏；将流浸膏静置8h，加入体积比4倍量的95%的乙醇沉淀14h后，过滤为经全棉滤布孔径IOOmm的三足式离心机过滤将粗多糖与母液分离，粗多糖再用95%的乙醇清洗6次得目标物三七多糖提取物；精制后的三七多糖提取物经真空干燥，干燥温度为100°C，真空度为O. 06MPa,蒸汽压力为O. 2MPa，当含水量为9%得到三七多糖提取物干燥品；将三七多糖提取物干燥品用不锈钢式粉碎机粉碎过80目筛得到三七多糖提取物细粉，将连续生产的同一批产品用三维运动混合机进行混合，混合时间为2h ;将混合好的三七多糖提取物细粉 分装，取样检验，出具检验报告单，其中三七多糖含量为54. 36%。实施例8
取实施例3所得残渣置入提取罐中，加入体积比15倍量的纯化水在温度为55°C下浸提6h，循环浸提3次，经100目不锈钢筛网过滤，合并滤液备用；将二次提取后的滤液在压力为O. 7MPa，温度为80°C，浓缩蒸汽压力为O. IMPa下进行浓缩至60°C时相对密度为I. 21的流浸膏；将流浸膏静置12h，加入体积比4倍量的93%的乙醇沉淀Ilh后，过滤为经全棉滤布孔径50mm的三足式离心机过滤将粗多糖与母液分离，粗多糖再用93%的乙醇清洗4次得目标物三七多糖提取物；精制后的三七多糖提取物经真空干燥，干燥温度为98°C，真空度为O. 06MPa,蒸汽压力为O. 3MPa，当含水量为2%得到三七多糖提取物干燥品；将三七多糖提取物干燥品用不锈钢式粉碎机粉碎过80目筛得到三七多糖提取物细粉，将连续生产的同一批产品用二维运动混合机进行混合，混合时间3h ;将混合好的三七多糖提取物细粉分装，取样检验，出具检验报告单，其中三七多糖含量为62. 43%。实施例9
取实施例4所得残渣置入提取罐中，加入体积比16倍量的纯化水在温度为58°C下浸提7h，循环浸提3次，经100目不锈钢筛网过滤，合并滤液备用；将二次提取后的滤液在压力O. 8MPa，温度80°C，浓缩蒸汽压力O. 2MPa下进行浓缩至60°C时相对密度为I. 19的流浸膏；将流浸膏静置12h，加入体积比5倍量的94%的乙醇沉淀12h后，过滤为经全棉滤布孔径IOOmm经滤布孔径为3mm的三足式离心机过滤将粗多糖与母液分离，粗多糖再用94%的乙醇清洗4次得目标物三七多糖提取物；精制后的三七多糖提取物经真空干燥，干燥温度为98°C，真空度为O. 05MPa，蒸汽压力为O. IMPa,当含水量为7%得到三七多糖提取物干燥品；将三七多糖提取物干燥品用不锈钢式粉碎机粉碎过80目筛，得到三七多糖提取物细粉，将连续生产的同一批产品用二维运动混合机进行混合，混合时间为2h ;将混合好的三七多糖提取物细粉分装，取样检验，出具检验报告单，其中三七多糖含量为65. 89%。实施例10
取实施例5所得残渣置入提取罐中，加入体积比16倍量的纯化水在温度为55°C下浸提6h，循环浸提3次，经100目不锈钢筛网过滤，合并滤液备用；将二次提取后的滤液在压力O. 8MPa，温度90°C，浓缩蒸汽压力O. 3MPa下进行浓缩至60°C时相对密度为I. 24的流浸膏；将流浸膏静置14h，加入体积比5倍量的96%的乙醇沉淀14h后，过滤为经全棉滤布孔径50mm经滤布孔径5mm的三足式离心机过滤将粗多糖与母液分离，粗多糖再用96%的乙醇清洗4次得目标物三七多糖提取物；精制后的三七多糖提取物经真空干燥，干燥温度为110°C，真空度为O. 08MPa，蒸汽压力为O. 3MPa，当含水量为6%得到三七多糖提取物干燥品；将三七多糖提取物干燥品用不锈钢式粉碎机粉碎过80目筛，得到三七多糖提取物细粉，将连续生产的同一批产品用二维运动混合机进行混合，混合时间为I. 5h ;将混合好的三七多糖提取物细粉分装，取样检验，出具检验报告单，其中三七多糖含量为70. 99%。实施例11
取实施例5 10中任意一种三七多糖，加入药用辅料，分装即为散剂。实施例12
取实施例5 10中任意一种三七多糖，加入药用辅料，经制粒、烘干，填充至胶囊内，即 得胶囊剂。实施例13
取实施例5 10中任意一种三七多糖，加入1%的硬脂酸镁，混匀，填充至胶囊内，即得胶囊剂。实施例14
取实施例5 10中任意一种三七多糖，加入药用辅料，经制粒、烘干，即得颗粒剂。实施例15
取实施例5 10中任意一种三七多糖，加入药用辅料，经制粒、压片，即得片剂。实施例16
取实施例5 10中任意一种三七多糖，加入药用辅料，制丸、烘干，即得丸剂。试验例I三七多糖胶囊对小鼠免疫力的调节研究 I材料和方法
I.I样品云科牌三七多糖胶囊，规格0. 4g/粒，产品批号20101018，云南云科药业有限公司。置阴凉干燥处保存。人口服推荐用量为每人(成人)每日2次，每次2粒，成人体重按60kg计算，折合剂量为26. 7mg/kg BW。I. 2实验动物与分组SPF级健康昆明种雄性小鼠240只，体重为18 22克，
由广东省医学实验动物中心繁殖，实验动物生产许可证号SCXK (粤)2008-0002，实验
动物质量合格证号0087715。每40只小鼠为一组，共6组。免疫I组，进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验；免疫II组，进行迟发型变态反应实验；免疫III组，进行脏/体比值测定，血清溶血素测定和抗体生成细胞数测定；免疫IV VI组，分别进行碳廓清实验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验和NK细胞活性测定。I. 3实验动物房环境条件SPF级实验动物使用许可证号SYXK (桂)2007-0003。实验动物室温度22 25°C，相对湿度55 70%。I. 4剂量选择与受试物给予方式根据人口服推荐用量，设样品低、中、高 剂量组分别为133. 5、267.0、534.0 mg/kg Bff (分别相当于人体推荐用量的5、10、20
倍)，设一个阴性对照组，每组10只动物。分别称取云科牌三七多糖胶囊内容物667. 5、1335. 0,2670. Omg，各加纯水至 IOOmL,混匀、配成 6. 675、13. 350,26. 700mg/mL 浓度溶液，按
O.2mL/10g Bff的体积给予相应剂量组动物灌胃，阴性对照组予以等体积的纯水，每天灌胃一次，连续灌胃30天。
1.5主要仪器与试剂动物台秤、电子分析天平、离心机、洁净工作台、二氧化碳培养箱、恒温水浴箱、显微镜、半自动生化分析仪、酶标仪等。无菌手术器械、微量注射器、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、载玻片、试管、200目筛网、计时器、血色素吸管等。RPMI1640培养液、小牛血清、2-ME、青霉素、链霉素、ConA、lmol/L的HCL溶液、异丙醇、MTT、Hank，s 液(pH 7. 2 7. 4)、PBS 缓冲液(Ph7. 2 7. 4)、台酚蓝、DNFB、丙酮、硫化钡、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、琼脂糖、绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、印度墨汁、O. I %的碳酸钠、鸡红细胞、甲醇、Gimsa染液、YAC-I细胞、乳酸锂、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0. 2mol/L的Tris-HCL缓冲液、I %冰醋酸、I %的NP40等。1.6实验方法按照卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)_，进行脏 器/体重比值测定；ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)；二硝基氟苯诱导的小鼠DTH实验(耳肿胀法)；抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)；血清溶血素的测定(血凝法)；小鼠碳廓清实验；小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)；NK细胞活性测定(LDH测定法)。I. 7实验数据统计应用SPSS统计软件进行方差分析统计处理。I. 8结果判定在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。2 结果
2.I样品对小鼠体重的影响
实验初、实验中期、实验末期样品各剂量组的小鼠体重及实验期间小鼠的体重增长与阴性对照组间比较，差异均无显著性(P>0. 05)，表明该样品对小鼠的体重增长无明显影响。2. 2样品对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响
经口给予小鼠不同剂量的云科牌三七多糖胶囊30天，小鼠的胸腺/体重及脾脏/体重比值与阴性对照组比较，均无显著性差异(P>0. 05)，表明该样品对小鼠的免疫器官重量无明显影响。2. 3样品对小鼠的细胞免疫的影响
2.3. I样品对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力的影响
表I 云科牌三七多糖胶囊的小鼠脾淋巴细胞转化实验结果(JC ±s)
iiiSii_εμ_·力pi
(nf/lglW|(HI(PO 麵
SMU οoj |+±|a_ijos
2§FUωQJOO ± 0.§43O.Ki
HlJ10OJM ± 0Λ6ΒΛ7β3
Pftt对SIm± ο —
从表I可见，经口给予小鼠不同剂量的云科牌三七多糖胶囊30天，各剂量组的淋巴细胞转化能力均高于阴性对照组，且高剂量组与阴性对照组的差异具有显著性(P〈0. 01)，表明该样品具有促进小鼠的淋巴细胞增殖、转化能力的作用。2. 3. 2样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
表2云科牌三七多糖胶囊的小鼠迟发型变态反应(DTH)实验结果(i ±s)
权利要求
1.一种三七多糖提取物，其特征在于是以提取三七总皂苷后的废渣为原料经提取、浓缩、精制、干燥、粉碎、检验步骤得到，其中三七多糖含量不低于15%。
2.根据权利要求I所述的三七多糖提取物，其特征在于所述的三七多糖含量为I5 45%。
3.根据权利要求I所述的三七多糖提取物，其特征在于所述的三七多糖含量为45 70%。
4.一种权利要求I所述的三七多糖提取物的制备方法，其特征在于包括提取、浓缩、精制、干燥、粉碎、检验步骤，具体包括 A、提取取提取三七总皂苷后的废渣置入提取罐中，加入体积比8 24倍量的纯化水在温度为5(T60°C下浸提4 8h，循环浸提2飞次，过滤，合并滤液备用； B、浓缩将二次提取后的滤液在压力彡O.8MPa，温度彡90°C，浓缩蒸汽压力彡O. 3MPa下浓缩至相对密度为I. 16^1. 24的浸膏； C、精制将浸膏静置8 24h，加入体积比31倍量的乙醇沉淀8 24h后，过滤将粗多糖与母液分离，粗多糖再用乙醇清洗2飞次得目标物； D、干燥精制后的三七多糖提取物经干燥至含水量为广9%得到三七多糖提取物干燥品; E、粉碎混合将三七多糖提取物干燥品进行粉碎过80目筛，得到三七多糖提取物细粉，将连续生产的产品混合； F、检验将混合好的三七多糖提取物细粉分装，取样检验，出具检验报告单。
5.根据权利要求4所述的三七多糖提取物的制备方法，其特征在于所述的A步骤中过滤为使用100目不锈钢筛网实现。
6.根据权利要求4所述的三七多糖提取物的制备方法，其特征在于所述的C步骤中乙醇为浓度大于90%的食品级醇；过滤为经滤布孔径5(Tl00mm的离心机实现。
7.根据权利要求4所述的三七多糖提取物的制备方法，其特征在于所述的D步骤中干燥为真空干燥、冷冻干燥、常压干燥、红外线干燥、微波干燥、吸湿干燥中的一种或几种。
8.根据权利要求I所述的三七多糖提取物的制备方法，其特征在于所述的E步骤中粉碎为使用不锈钢粉碎机完成；混合为使用二维或三维运动混合机进行实现，混合时间>Ih0
9.一种权利要求广3所述的三七多糖提取物制成的制剂，其特征在于所述三七多糖提取物加入医学或食品上适宜的辅料制成散剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂或丸剂。
10.根据权利要求f3所述的三七多糖提取物用于制备抗肿瘤药物和/或增强免疫力药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种三七多糖提取物及其制备方法与制剂及应用，所述的三七多糖提取物是以提取三七总皂苷后的废渣为原料经提取、浓缩、精制、干燥、粉碎、检验步骤得到，其中三七多糖含量不低于15%。所述的三七多糖提取物的制备方法包括提取、浓缩、精制、干燥、粉碎、检验步骤，具体包括将提取三七总皂苷后的废渣加入纯化水提取，过滤，浓缩，加入乙醇沉淀，过滤，精制，干燥得到目标物干燥品；所述的三七多糖提取物加入药用辅料制成散剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂或丸剂；所述的三七多糖提取物用于制备抗肿瘤药物和增强免疫力药物中的应用。本发明以提取三七总皂苷后的废渣进行再次利用，变废为宝，有助于三七资源的综合利用，降低成本，提高经济效益。
文档编号A61P35/00GK102961424SQ20121048137
公开日2013年3月13日 申请日期2012年11月23日 优先权日2012年11月23日
发明者陈彤, 赵洪 申请人:云南云科药业有限公司