专利名称：靶向复合纳米粒子的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种靶向诊疗一体化复合纳米粒子的制备方法。
背景技术：
据世界卫生组织官员指出到2010年，恶性肿瘤将取代心血管疾病成为世界死亡人数最多的疾病。目前临床可用于 诊断肿瘤有光学成像、正电子发射断层显像、磁共振显像、超声以及计算机断层扫描成像；治疗肿瘤有手术、放疗、药物治疗三大主要方法，光动力学治疗、热疗等辅助方法，以上各种疗法均已收到很好的诊疗效果。如用卟啉类化合物进行光学成像，通过其结构卟吩环较强的吸收波长为405nm光吸收后激发产生630nm及690nm近红外区荧光对肿瘤组织成像，具有低能量辐射、高敏感性等的优势；用羟基喜树碱(HCPT)类药物，通过选择性抑制肿瘤细胞DNA拓扑异构酶，切断DNA单链，干扰DNA链的复制，具有较强的抗肿瘤活性；用卟啉类化合物进行光动力治疗，通过卟啉选择性的在肿瘤细胞上富集，当使用一定波长的光照射肿瘤区时将诱发生物组织附近产生具有活性的单线态氧(·02)导致肿瘤细胞因氧化失活死亡，具有抗瘤谱广、适应症广、可多次重复治疗的显著优点，并与化疗联合使用协同性好、与手术联合缩小手术范围和减少术后复发的优异肿瘤治疗效果；及用金壳纳米粒子进行光热治疗，通过其可调的表面纵向等离子吸收与其共振的近红外波长，释放热量后杀死肿瘤干细胞，从而抑制肿瘤转移；当与药物治疗共同作用时具有化学增敏作用可改善肿瘤周边的血液循环及增强细胞膜的通透性，增强药物的渗透进入肿瘤内部。但在肿瘤诊断治疗药物中存在的三个共两同问题是一、药物靶向性差；以羟基喜树碱(HCPT)类药物为例，HCPT在不同的pH条件下存在两种形式α -羟基-δ -内酯环形式及羧酸乙酯形式，但是两种形式中仅内酯结构形式具有抗肿瘤活性，并且内酯结构形式的水溶性较差，如何提高内酯结构喜树碱类药物靶向肿瘤细胞一直为此类药物的研究难点；二、由于肿瘤组织特有的生物环境，使于诊疗药物浓度难达到有效浓度；三、在肿瘤的诊疗中，使用单一疗法疗效低，无法治疗恶性肿瘤。因此在目前的肿瘤诊疗研究中两个核心问题是，如何选择合适的药物载体改进各种治疗方法本身以及构建能够科学和合理结合多种疗法综合治疗肿瘤药物。随着科学技术的发展，以微纳米制造技术与纳米材料为基础的肿瘤诊断治疗技术为解决这两大问题提供了一条有效途径。将纳米粒子用作载体后可以使药物靶向作用于肿瘤细胞，后聚集病灶，并能增强细胞对其药物的渗透作用。目前已经被研发出的纳米载体有聚合物微球纳米粒子、微囊脂质和微乳液、金纳米粒子等；在诸多纳米粒子中，金纳米粒子具有能够进一步表面功能化对肿瘤细胞有靶向作用的生物分子如单克隆抗体、叶酸、蛋白、糖类等的优点，修饰后能够使纳米粒子准确定位于特定的肿瘤细胞，显著提高药物在特定肿瘤组织的浓度，进一步减小副作用；并且金纳米粒子还可制备成多种在特定部位及条件下释放药物控释系统，在不减弱诊疗疗效的前提下同时减少药物的用量，因而金纳米粒子是一类理想的纳米载体。
近几年在上述纳米载体研究基础上，构建多重靶向能力、并能将多种诊疗方法结合的一体化复合纳米已经成为一个新的研究热点，如基于脂质体纳米材料以Fe3O4磁性纳米粒子与突光染料构建的磁祀向光学成像复合纳米粒子；基于金纳米粒子构建的光学成像和磁共振成像复合纳米粒子、光热治疗和传统药物治疗复合纳米粒子。但是此类复合纳米粒子的研究处于初级阶段，仍存在三方面的缺陷，第一方面是此类载药系统的载药量较少、稳定性及靶向性较低；第二方面是制备过程中需要使用有机溶剂、表面活性剂、超声或同质化，这都将限制肿瘤药物的诊疗过程；第三方面难以有机结合多种诊疗方式，具有较长的诊疗时间。
发明内容
本发明为了解决目前抗肿瘤药物载体稳定性差、载药量小的技术问题，提供了一种靶向复合纳米粒子的制备方法。靶向复合纳米粒子的制备方法按照以下步骤进行
一、制备磁性纳米粒子将IOmL 浓度为 lmol/L 的 FeCljK溶液、2. 5mLFeS04 ·7Η20 的 HCl 溶液加入到 125mL浓度为O. 7mol/L的NH3 ·7Η20，继续搅拌30min，离心分离并收集上清液中的产物，将上清液中的产物用去离子水洗涤3次，然后再分散在150mL去离子水中，得到Fe3O4纳米粒子溶液；所述的Fe804 · 7H20的HCl溶液中FeSO4 · 7H20的浓度为2mol/L、HCl的浓度为2mol/L ；二、制备 Fe3O4-HCPT 纳米粒子将IOmLFe3O4纳米粒子溶液分散到IOml聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超声反应30min,磁力分离，然后用浓度为O. 51mol/L的NaCl溶液洗涤，最后分散在水中，得到浓度为7. 5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液；步骤二中所述的聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氢氯丙烯胺浓度为lmg/ml，NaCl 的浓度为 O. 5mol/L ；三、将IOmLPAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液分散到IOml聚苯乙烯磺酸酸钠的NaCl水溶液中超声反应30min,得到Fe3O4磁性纳米粒子前体；步骤三中所述的聚苯乙烯磺酸酸钠的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸钠的浓度为lmg/ml, NaCl 的浓度为 O. 5mol/L ；四、将364mgl0-羟基喜树碱溶解在150mLNa0H溶液中，调节pH值为11，在加入浓度为lmol/L的HCl调节pH值为4. 8，得到HCPT微乳液，将IOmlFe3O4磁性纳米粒子前体加入到IOmLHCPT微乳液中，搅拌并通过紫外吸收监测反应，当10-羟基喜树碱的特征吸收峰消失时，停止反应，磁力分离收集沉淀，并用PH值为4. 8的HCl溶液洗涤，然后加入150mL去离子水中，得到聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液；五、制备Fe3O4-HCPTIgSiO2 :将ImL正硅酸乙酯与30mL乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，将2. 5mLNH3 · H20、38mLH20、38mL乙醇及IOmL聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反应4小时，磁力分离，收集沉淀，并用水与乙醇的混合溶液洗涤3次，再分散在IOOmL去离子水中，得到Fe304-HCPT@Si02水溶液；
六、然后在转速为IOOOOrpm的条件下离心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入乙醇洗涤，超声分散15-20min ；七、重复步骤六3-4次，得到浓度为7. 5mg/mLFe304-HCPTiSi02乙醇溶液；八、将IOmLFe3O4-HCPTIgSiO2乙醇溶液与O. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的条件下搅拌3小时，然后按照在转速为IOOOOrpm的条件下离心30min，向沉淀中加入乙醇，超声分散15-20min的顺序，重复5次，得到表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液；九、制备金纳米粒子向40mL蒸馏水中加入O. Olml浓度为O. 25mol/L氯金酸水溶液 、O. 2mL浓度为
0.2mol/L碳酸钾水溶液、O. 6mL浓度为O. 5mol/L硼氢化钠水溶液，在600rpm的条件下搅拌lOmin，再加入浓度为O. 5mol/L的硼氢化钠水溶液，直到溶液的蓝紫色变为橙红色停止加入硼氢化钠水溶液，再搅拌5min，得到金纳米粒子溶液；十、制备草莓状金纳米复合粒子将O. 07ml表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液稀释至50ml，然后再滴入到金纳米粒子溶液中，然后以600rpm的速度离心90min，得到Au/Si02溶液；^^一、制备金纳米壳将25mg碳酸钾溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度搅拌IOmin,然后加入
1.5ml浓度为O. 25mol/L的氯金酸水溶液，继续搅拌30分钟，得混合液，将4ml混合液与Au/SiO2溶液混合，然后以5000rpm离心30min，然后再将离心后的沉淀分散于IOmL水中并超声lOmin，得到包裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液；十二、将0.03g 1，2-二巯基-3-环己烷基聚乙二醇和3 4ml四氢呋喃加入到离心管中，再加入I 5ml裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液和50mg卟啉类光敏剂分子,反应72小时，反应结束后在转速为6000rpm的条件下离心10分钟，收集沉淀，并将沉淀分散在甲醇中，得到浓度为7. 5mg/mL的Fe3O4-HCPTlgSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液；十三、将50mg IOOmg Fe3O4-HCPTiSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、lOmLN，N-二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时，然后在转速为HOOOrpm、温度为4°C的条件下离心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向复合纳米粒子的甲醇溶液；步骤十二中所述的卟啉类光敏剂分子为5-(4-氯乙酰氧基苯基)-10，15，20_三(4-羧基苯基)P卜啉或四氯乙酰氧基苯基P卜啉；步骤十三中所述的靶向性生物分子为叶酸；步骤十三中所述的抗肿瘤药物为单克隆抗体赫赛汀、紫杉醇、阿霉素、5-氟尿嘧啶或甲氨蝶吟。本方明将聚苯乙烯磺酸(PSS)与10-羟基喜树碱自组装方式吸附在Fe3O4磁性纳米粒子，本发明首先得到了一种高效的疏水药物载药系统；本方法可行性高；具有本身Fe3O4磁性纳米粒子的物理靶向作用及进一步表面功能化修饰生物分子的主动靶向作用，在双重靶向作用下显著增加病变部位的药物浓度，以达到副作用最小的条件下，有高效的诊疗效果。此种制备方法能够解决载药体系生物相容性差载药量及靶向性低、药物在运输过程中易发生自组装的技术难题。
此种载药体系另外还是一种新型的靶向性一体化纳米粒子在Fe3O4-IO-羟基喜树碱OSiO2包覆金纳米壳，第一能够通过金纳米壳的热疗杀死肿瘤细胞及肿瘤干细胞，不仅能够治疗肿瘤而且能抑制肿瘤转移；第二可通过热疗化学增敏作用增强细胞膜的通透性提高药物的渗透吸收，及改善肿瘤周边的血液循环增加药物进入肿瘤内部以提高肿瘤/正常组织的药物浓度比。由双硫键连接的生物分子叶酸的卟啉类光敏剂，使Fe3O4-IO-羟基喜树碱OSiO2OAu具备光动力学诊疗的作用。
图I是实验一制备的靶向复合纳米粒子的SEM图像；图2是实验一制备靶向复合纳米粒子中步骤二所得Fe3O4-HCPT纳米粒子TEM图像；图3是实验一制备的靶向复合纳米粒子的TEM图像； 图4是在水溶液中单分散的实验一制备的靶向复合纳米粒子的动态激光光散射图像；图5是实验一制备的靶向复合纳米粒子在不同pH值的37°C的PBS溶液中的药物自发释放累积行为曲线，其中一零^代表pH值为9. 2的37°C的PBS溶液中的药物自发释放累积行为曲线，一#_代表pH值为8. O的37°C的PBS溶液中的药物自发释放累积行为曲线，
代表PH值为7. 4的37°C的PBS溶液中的药物自发释放累积行为曲线。
具体实施例方式本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式
，还包括各具体实施方式
间的任意组合。
具体实施方式
一本实施方式靶向复合纳米粒子的制备方法按照以下步骤进行一、制备磁性纳米粒子将IOmL 浓度为 lmol/L 的 FeCljK溶液、2. 5mLFeS04 ·7Η20 的 HCl 溶液加入到 125mL浓度为O. 7mol/L的NH3 ·7Η20，继续搅拌30min，离心分离并收集上清液中的产物，将上清液中的产物用去离子水洗涤3次，然后再分散在150mL去离子水中，得到Fe3O4纳米粒子溶液；所述的FeSO4 · 7H20的HCl溶液中FeSO4 · 7H20的浓度为2mol/L、HCl的浓度为2mol/L ；二、制备 Fe3O4-HCPT 纳米粒子将IOmLFe3O4纳米粒子溶液分散到IOml聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超声反应30min,磁力分离，然后用浓度为O. 51mol/L的NaCl溶液洗涤，最后分散在水中，得到浓度为7. 5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液；步骤二中所述的聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氢氯丙烯胺浓度为lmg/ml，NaCl 的浓度为 O. 5mol/L ；三、将IOmLPAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液分散到IOml聚苯乙烯磺酸酸钠的NaCl水溶液中超声反应30min,得到Fe3O4磁性纳米粒子前体；步骤三中所述的聚苯乙烯磺酸酸钠的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸钠的浓度为lmg/ml, NaCl 的浓度为 O. 5mol/L ；
四、将364mgl0-羟基喜树碱溶解在150mLNa0H溶液中，调节pH值为11，在加入浓度为lmol/L的HCl调节pH值为4. 8，得到HCPT微乳液，将IOmlFe3O4磁性纳米粒子前体加入到IOmLHCPT微乳液中，搅拌并通过紫外吸收监测反应，当10-羟基喜树碱的特征吸收峰消失时，停止反应，磁力分离收集沉淀，并用PH值为4. 8的HCl溶液洗涤，然后加入150mL去离子水中，得到聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液；五、制备Fe3O4-HCPTIgSiO2 :将ImL正硅酸乙酯与30mL乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，将
2.5mLNH3 · H20、38mLH20、38mL乙醇及IOmL聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反应4小时，磁力分离，收集沉淀，并用水与乙醇的混合溶液洗涤3次，再分散在IOOmL去离子水中，得到Fe304-HCPT@Si02水溶液；
六、然后在转速为IOOOOrpm的条件下离心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入乙醇洗涤，超声分散15-20min ；七、重复步骤六3-4次，得到浓度为7. 5mg/mLFe304-HCPTiSi02乙醇溶液；八、将IOmLFe3O4-HCPTlgSiO2乙醇溶液与O. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的条件下搅拌3小时，然后按照在转速为IOOOOrpm的条件下离心30min，向沉淀中加入乙醇，超声分散15-20min的顺序，重复5次，得到表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液；九、制备金纳米粒子向40mL蒸馏水中加入O. Olml浓度为O. 25mol/L氯金酸水溶液、O. 2mL浓度为
0.2mol/L碳酸钾水溶液、O. 6mL浓度为O. 5mol/L硼氢化钠水溶液，在600rpm的条件下搅拌lOmin，再加入浓度为O. 5mol/L的硼氢化钠水溶液，直到溶液的蓝紫色变为橙红色停止加入硼氢化钠水溶液，再搅拌5min，得到金纳米粒子溶液；十、制备草莓状金纳米复合粒子将O. 07ml表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液稀释至50ml，然后再滴入到金纳米粒子溶液中，然后以600rpm的速度离心90min，得到Au/Si02溶液；-| 、制备金纳米壳将25mg碳酸钾溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度搅拌IOmin,然后加入
1.5ml浓度为O. 25mol/L的氯金酸水溶液，继续搅拌30分钟，得混合液，将4ml混合液与Au/SiO2溶液混合，然后以5000rpm离心30min，然后再将离心后的沉淀分散于IOmL水中并超声lOmin，得到包裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液；十二、将0.03g 1，2-二巯基-3-环己烷基聚乙二醇和3 4ml四氢呋喃加入到离心管中，再加入I 5ml裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液和50mg卟啉类光敏剂分子,反应72小时，反应结束后在转速为6000rpm的条件下离心10分钟，收集沉淀，并将沉淀分散在甲醇中，得到浓度为7. 5mg/mL的Fe3O4-HCPTlgSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液；十三、将50mg IOOmg Fe3O4-HCPTiSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、lOmLN，N-二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时，然后在转速为HOOOrpm、温度为4°C的条件下离心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向复合纳米粒子的甲醇溶液；步骤十二中所述的卟啉类光敏剂分子为5-(4-氯乙酰氧基苯基)_10，15，20-三(4-羧基苯基)P卜啉或四氯乙酰氧基苯基P卜啉；步骤十三中所述的靶向性生物分子为叶酸；步骤十三中所述的抗肿瘤药物为单克隆抗体赫赛汀、紫杉醇、阿霉素、5-氟尿嘧啶或甲氨蝶吟。
具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤十二中将O. 03gI，2-二巯基-3-环己烷基聚乙二醇和3. 5ml四氢呋喃加入到离心管中。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤十三中将60mg 90mgFe304-HCPTiSi02偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤十三中将70mg 80mgFe304-HCPTiSi02偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤十三中将75mgFe304-HCPTiSi02偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
六本实施方式靶向复合纳米粒子的制备方法按照以下步骤进行一、制备磁性纳米粒子将IOmL 浓度为 lmol/L 的 FeCljK溶液、2. 5mLFeS04 ·7Η20 的 HCl 溶液加入到 125mL浓度为O. 7mol/L的NH3 ·7Η20，继续搅拌30min，离心分离并收集上清液中的产物，将上清液中的产物用去离子水洗涤3次，然后再分散在150mL去离子水中，得到Fe3O4纳米粒子溶液；所述的FeSO4 · 7H20的HCl溶液中FeSO4 · 7H20的浓度为2mol/L、HCl的浓度为2mol/L ；二、制备 Fe3O4-HCPT 纳米粒子将IOmlFe3O4纳米粒子溶液分散到IOml聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超声反应30min,磁力分离，然后用浓度为O. 51mol/L的NaCl溶液洗涤，最后分散在水中，得到浓度为7. 5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液；步骤二中所述的聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氢氯丙烯胺浓度为lmg/ml，NaCl 的浓度为 O. 5mol/L ；三、将IOmLPAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液分散到IOmL聚苯乙烯磺酸钠的NaCl水溶液中超声反应30min,得到Fe3O4磁性纳米粒子前体；步骤三中所述的聚苯乙烯磺酸钠的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸钠的浓度为Img/ml, NaCl 的浓度为 O. 5mol/L ；四、将364mgl0-羟基喜树碱溶解在150mLNa0H溶液中，调节pH值为11，在加入浓度为lmol/L的HCl调节pH值为4. 8，得到HCPT微乳液，将IOmLFe3O4磁性纳米粒子前体加入到IOmLHCPT微乳液中，搅拌并通过紫外吸收监测反应，当10-羟基喜树碱的特征吸收峰消失时，停止反应，磁力分离，并用PH值为4. 8的HCl溶液洗涤，得到聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子；五、将聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子分散到150ml去离子水中，得到聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子分散液，将IOmL聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子分散液分散到IOmL聚苯乙烯磺酸钠的NaCl水溶液中超声反应30min，Fe3O4磁性纳米粒子前体a ；将364mgl0_羟基喜树碱溶解在150mLNa0H溶液中，调节pH值为11，在加入浓度为lmol/L的HCl调节pH值为4. 8，得到HCPT微乳液，将IOmLFe3O4磁性纳米粒子前体a加入到IOmLHCPT微乳液中，搅拌并通过紫外吸收监测反应，当10-羟基喜树碱的特征吸收峰消失时，停止反应，磁力分离，并用PH值为4. 8的HCl溶液洗涤，得到2层聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子；所述的聚苯乙烯磺酸钠的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸钠的浓度为lmg/ml，NaCl 的浓度为O. 5mol/L ；六、重复步骤五，然后加入150mL去离子水中，得到n+2层聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液，其中η为正整数；七、制备Fe3O4-HCPTOSiO2 将ImL正硅酸乙酯与30mL乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，将
2.5mLNH3 ·Η20、38ιΛΗ20、38ιΛ乙醇及10mLn+2层聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反应4小时，磁力分离，收集沉淀，并用水与乙醇的混合溶液洗涤3次，再分散在IOOmL去离子水中，得到Fe304-HCPT@Si02水溶液；八、然后在转速为IOOOOrpm的条件下离心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入适量的乙醇洗涤，超声分散15-20min ；九、重复步骤八3-4次，得到浓度为7. 5mg/mLFe304-HCPTiSi02乙醇溶液；十、将IOmLFe3O4-HCPTIgSiO2乙醇溶液与O. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的条件下搅拌3小时，然后按照在转速为IOOOOrpm的条件下离心30min，向沉淀中加入乙醇，超声分散15-20min的顺序，重复5次，得到表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液；^^一、制备金纳米粒子向40mL蒸馏水中加入O. Olml浓度为O. 25mol/L氯金酸水溶液、O. 2mL浓度为
0.2mol/L碳酸钾水溶液、O. 6mL浓度为O. 5mol/L硼氢化钠水溶液，600rpm搅拌lOmin，再加入浓度为O. 5mol/L的硼氢化钠水溶液，直到溶液的蓝紫色变为橙红色停止加入硼氢化钠水溶液，再搅拌5min，得到金纳米粒子溶液；十二、制备草莓状金纳米复合粒子将O. 07ml表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液稀释至50ml，然后再滴入到金纳米粒子溶液中，然后以600rpm的速度离心90min，得到Au/Si02溶液；十三、制备金纳米壳将25mg碳酸钾溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度搅拌IOmin,然后加入
1.5ml浓度为O. 25mol/L的氯金酸水溶液，继续搅拌30分钟，得混合液，将4ml混合液与Au/SiO2溶液混合，然后以5000rpm离心30min，然后再将离心后的沉淀分散于IOmL水中并超声lOmin，得到包裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液；
十四、将0.03g 1，2-二巯基-3-环己烷基聚乙二醇和3 4ml四氢呋喃加入到离心管中，再加入I 5ml裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液和50mg卟啉类光敏剂分子,反应72小时，反应结束后在转速为6000rpm的条件下离心10分钟，收集沉淀，并将沉淀分散在甲醇中，得到浓度为7. 5mg/mL的Fe3O4-HCPTlgSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子；十五、将50mg IOOmg Fe3O4-HCPTiSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、lOmLN，N-二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时，然后在转速为HOOOrpm、温度为4°C的条件下离心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向复合纳米粒子的甲醇溶液；步骤十三中所述的卟啉类光敏剂分子为5-(4-氯乙酰氧基苯基)-10，15，20_三(4-羧基苯基)P卜啉或四氯乙酰氧基苯基P卜啉；步骤十四中所述的靶向性生物分子为叶酸；步骤十四中所述的抗肿瘤药物为单克隆抗体赫赛汀、紫杉醇、阿霉素、5-氟尿嘧啶 或甲氨蝶吟。
具体实施方式
七本实施方式与具体实施方式
六不同的是步骤十四中将O. 03gI，2-二巯基-3-环己烷基聚乙二醇和3. 5ml四氢呋喃加入到离心管中。其它与具体实施方式
六相同。
具体实施方式
八本实施方式与具体实施方式
六不同的是步骤十五中将60mg 90mgFe304-HCPTiSi02偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时。其它与具体实施方式
六相同。
具体实施方式
九本实施方式与具体实施方式
六不同的是步骤十五中将70mg 80mgFe304-HCPTiSi02偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时。其它与具体实施方式
六相同。
具体实施方式
十本实施方式与具体实施方式
六不同的是步骤十五中将75mgFe304-HCPTiSi02偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时。其它与具体实施方式
六相同。采用下述实验验证本发明效果实验一靶向复合纳米粒子的制备方法按照以下步骤进行一、制备磁性纳米粒子将IOmL 浓度为 lmol/L 的 FeCljK溶液、2. 5mLFeS04 ·7Η20 的 HCl 溶液加入到 125mL浓度为O. 7mol/L的NH3 ·7Η20，继续搅拌30min，离心分离并收集上清液中的产物，将上清液中的产物用去离子水洗涤3次，然后再分散在150mL去离子水中，得到Fe3O4纳米粒子溶液；所述的FeSO4 · 7H20的HCl溶液中FeSO4 · 7H20的浓度为2mol/L、HCl的浓度为2mol/L ；二、制备 Fe3O4-HCPT 纳米粒子将IOmLFe3O4纳米粒子溶液分散到IOml聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超声反应30min,磁力分离，然后用浓度为O. 51mol/L的NaCl溶液洗涤，最后分散在水中，得到浓度为7. 5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液；步骤二中所述的聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氢氯丙烯胺浓度为lmg/ml，NaCl 的浓度为 O. 5mol/L ；三、将IOmLPAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液分散到IOml聚苯乙烯磺酸酸钠的NaCl水溶液中超声反应30min,得到Fe3O4磁性纳米粒子前体；步骤三中所述的聚苯乙烯磺酸酸钠的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸钠的浓度为lmg/ml, NaCl 的浓度为 O. 5mol/L ； 四、将364mgl0-羟基喜树碱溶解在150mLNa0H溶液中，调节pH值为11，在加入浓度为lmol/L的HCl调节pH值为4. 8，得到HCPT微乳液，将IOmlFe3O4磁性纳米粒子前体加入到IOmLHCPT微乳液中，搅拌并通过紫外吸收监测反应，当10-羟基喜树碱的特征吸收峰消失时，停止反应，磁力分离收集沉淀，并用PH值为4. 8的HCl溶液洗涤，然后加入150mL去离子水中，得到聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液；五、制备Fe3O4-HCPTIgSiO2 :将ImL正硅酸乙酯与30mL乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，将2. 5mLNH3 · H20、38mLH20、38mL乙醇及IOmL聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反应4小时，磁力分离，收集沉淀，并用水与乙醇的混合溶液洗涤3次，再分散在IOOmL去离子水中，得到Fe304-HCPT@Si02水溶液；六、然后在转速为IOOOOrpm的条件下离心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入乙醇洗涤，超声分散20min ；七、重复步骤六3次，得到浓度为7. 5mg/mLFe304-HCPTiSi02乙醇溶液；八、将IOmLFe3O4-HCPTIgSiO2乙醇溶液与O. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的条件下搅拌3小时，然后按照在转速为IOOOOrpm的条件下离心30min，向沉淀中加入乙醇，超声分散15-20min的顺序，重复5次，得到表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液；九、制备金纳米粒子向40mL蒸馏水中加入O. Olml浓度为O. 25mol/L氯金酸水溶液、O. 2mL浓度为
0.2mol/L碳酸钾水溶液、O. 6mL浓度为O. 5mol/L硼氢化钠水溶液，在600rpm的条件下搅拌lOmin，再加入浓度为O. 5mol/L的硼氢化钠水溶液，直到溶液的蓝紫色变为橙红色停止加入硼氢化钠水溶液，再搅拌5min，得到金纳米粒子溶液；十、制备草莓状金纳米复合粒子将O. 07ml表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液稀释至50ml，然后再滴入到金纳米粒子溶液中，然后以600rpm的速度离心90min，得到Au/Si02溶液；^^一、制备金纳米壳将25mg碳酸钾溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度搅拌IOmin,然后加入
1.5ml浓度为O. 25mol/L的氯金酸水溶液，继续搅拌30分钟，得混合液，将4ml混合液与Au/SiO2溶液混合，然后以5000rpm离心30min，然后再将离心后的沉淀分散于IOmL水中并超声lOmin，得到包裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液；十二、将0.03g 1，2-二巯基-3-环己烷基聚乙二醇和4ml四氢呋喃加入到离心管中，再加入5ml裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液和50mg卟啉类光敏剂分子，反应72小时，反应结束后在转速为6000rpm的条件下离心10分钟，收集沉淀，并将沉淀分散在甲醇中，得到浓度为7. 5mg/mL的Fe3O4-HCPTlgSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液；十三、将50mg Fe3O4-HCPTiSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N-二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子在室温搅拌反应2小时，然后在转速为HOOOrpm、温度为4°C的条件下离心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向复合纳米粒子的甲醇溶液；步骤十二中所述的卟啉类光敏剂分子为5-(4-氯乙酰氧基苯基)-10，15，20_三(4-羧基苯基)卟啉；步骤十三中所述的靶向性生物分子为叶酸。
实验二靶向复合纳米粒子的制备方法按照以下步骤进行一、制备磁性纳米粒子将IOmL 浓度为 lmol/L 的 FeCljK溶液、2. 5mLFeS04 ·7Η20 的 HCl 溶液加入到 125mL浓度为O. 7mol/L的NH3 ·7Η20，继续搅拌30min，离心分离并收集上清液中的产物，将上清液中的产物用去离子水洗涤3次，然后再分散在150mL去离子水中，得到Fe3O4纳米粒子溶液；所述的FeSO4 · 7H20的HCl溶液中FeSO4 · 7H20的浓度为2mol/L、HCl的浓度为2mol/L ；二、制备 Fe3O4-HCPT 纳米粒子将IOmlFe3O4纳米粒子溶液分散到IOml聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超声反应30min,磁力分离，然后用浓度为O. 51mol/L的NaCl溶液洗涤，最后分散在水中，得到浓度为7. 5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液；步骤二中所述的聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氢氯丙烯胺浓度为lmg/ml，NaCl 的浓度为 O. 5mol/L ；三、将IOmLPAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液分散到IOmL聚苯乙烯磺酸钠的NaCl水溶液中超声反应30min,得到Fe3O4磁性纳米粒子前体；步骤三中所述的聚苯乙烯磺酸钠的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸钠的浓度为Img/ml, NaCl 的浓度为 O. 5mol/L ；四、将364mgl0_羟基喜树碱溶解在150mLNa0H溶液中，调节pH值为11，在加入浓度为lmol/L的HCl调节pH值为4. 8，得到HCPT微乳液，将IOmLFe3O4磁性纳米粒子前体加入到IOmLHCPT微乳液中，搅拌并通过紫外吸收监测反应，当10-羟基喜树碱的特征吸收峰消失时，停止反应，磁力分离，并用PH值为4. 8的HCl溶液洗涤，得到聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子；五、将聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子分散到150ml去离子水中，得到聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子分散液，将IOmL聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子分散液分散到IOmL聚苯乙烯磺酸钠的NaCl水溶液中超声反应30min，Fe3O4磁性纳米粒子前体a ；将364mgl0_羟基喜树碱溶解在150mLNa0H溶液中，调节pH值为11，在加入浓度为lmol/L的HCl调节pH值为4. 8，得到HCPT微乳液，将IOmLFe3O4磁性纳米粒子前体a加入到IOmLHCPT微乳液中，搅拌并通过紫外吸收监测反应，当10-羟基喜树碱的特征吸收峰消失时，停止反应，磁力分离，并用PH值为4. 8的HCl溶液洗涤，得到2层聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子；所述的聚苯乙烯磺酸钠的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸钠的浓度为lmg/ml, NaCl的浓度为O. 5mol/L ；六、重复步骤五，然后加入150mL去离子水中，得到n+2层聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液，其中η为正整数；七、制备Fe3O4-HCPTIgSiO2 :将ImL正硅酸乙酯与30mL乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，将
2.5mLNH3 ·Η20、38ιΛΗ20、38ιΛ乙醇及10mLn+2层聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反应4小时，磁力分离，收集沉淀，并用水 与乙醇的混合溶液洗涤3次，再分散在IOOmL去离子水中，得到Fe304-HCPT@Si02水溶液；八、然后在转速为IOOOOrpm的条件下离心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入适量的乙醇洗涤，超声分散15-20min ；九、重复步骤八4次，得到浓度为7. 5mg/mLFe304-HCPTiSi02乙醇溶液；十、将IOmLFe3O4-HCPTlgSiO2乙醇溶液与O. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的条件下搅拌3小时，然后按照在转速为IOOOOrpm的条件下离心30min，向沉淀中加入乙醇，超声分散15-20min的顺序，重复5次，得到表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液；^^一、制备金纳米粒子向40mL蒸馏水中加入O. Olml浓度为O. 25mol/L氯金酸水溶液、O. 2mL浓度为
0.2mol/L碳酸钾水溶液、O. 6mL浓度为O. 5mol/L硼氢化钠水溶液，600rpm搅拌lOmin，再加入浓度为O. 5mol/L的硼氢化钠水溶液，直到溶液的蓝紫色变为橙红色停止加入硼氢化钠水溶液，再搅拌5min，得到金纳米粒子溶液；十二、制备草莓状金纳米复合粒子将O. 07ml表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液稀释至50ml，然后再滴入到金纳米粒子溶液中，然后以600rpm的速度离心90min，得到Au/Si02溶液；十三、制备金纳米壳将25mg碳酸钾溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度搅拌IOmin,然后加入
1.5ml浓度为O. 25mol/L的氯金酸水溶液，继续搅拌30分钟，得混合液，将4ml混合液与Au/SiO2溶液混合，然后以5000rpm离心30min，然后再将离心后的沉淀分散于IOmL水中并超声lOmin，得到包裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液；十四、将0.03g 1，2-二巯基-3-环己烷基聚乙二醇和3ml四氢呋喃加入到离心管中，再加入4ml裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液和50mg卟啉类光敏剂分子，反应72小时，反应结束后在转速为6000rpm的条件下离心10分钟，收集沉淀，并将沉淀分散在甲醇中，得到浓度为7. 5mg/mL的Fe3O4-HCPTlgSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子；十五、将80mgFe304-HCPT@Si02偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、lOmLN，N-二甲基甲酰胺和50mg抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时，然后在转速为HOOOrpm、温度为4°C的条件下离心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向复合纳米粒子的甲醇溶液；
步骤十三中所述的卟啉类光敏剂分子为四氯乙酰氧基苯基卟啉； 步骤十四中所述的抗肿瘤药物为单克隆抗体赫赛汀。
权利要求
1.靶向复合纳米粒子的制备方法，其特征在于靶向复合纳米粒子的制备方法按照以下步骤进行 一、制备磁性纳米粒子 将IOml浓度为lmol/L的FeCl3水溶液、2. 5ml FeSO4 7H20的HCl溶液加入到125ml浓度为0. 7mol/L的NH3 *7H20，继续搅拌30min，离心分离并收集上清液中的产物，将上清液中的产物用去离子水洗涤3次，然后再分散在150ml去离子水中，得到Fe3O4纳米粒子溶液； 所述的FeSO4 7H20的HCl溶液中FeSO4 7H20的浓度为2mol/L、HCl的浓度为2mol/L ； 二、制备Fe3O4-HCPT纳米粒子 将IOml Fe3O4纳米粒子溶液分散到IOml聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超声反应.30min,磁力分离，然后用浓度为0. 5ImoI/L的NaCl溶液洗涤，最后分散在水中，得到浓度为.7. 5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液； 步骤二中所述的聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氢氯丙烯胺浓度为lmg/ml，NaCl的浓度为0. 5mol/L ； 三、将IOmlPAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液分散到IOml聚苯乙烯磺酸酸钠的NaCl水溶液中超声反应30min,得到Fe3O4磁性纳米粒子前体； 步骤三中所述的聚苯乙烯磺酸酸钠的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸钠的浓度为Img/ml, NaCl 的浓度为 0. 5mol/L ； 四、将364mgl0-羟基喜树碱溶解在150mlNaOH溶液中，调节pH值为11，在加入浓度为lmol/L的HCl调节pH值为4. 8，得到HCPT微乳液，将IOmlFe3O4磁性纳米粒子前体加入到IOml HCPT微乳液中，搅拌并通过紫外吸收监测反应，当10-羟基喜树碱的特征吸收峰消失时，停止反应，磁力分离收集沉淀，并用pH值为4. 8的HCl溶液洗涤，然后加入150mL去离子水中，得到聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液；五、制备Fe3O4-HCPTlgSiO2 将Iml正硅酸乙酯与30ml乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，将2. 5mLNH3 H2O,.38mL H20、38mL乙醇及IOmL聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反应4小时，磁力分离，收集沉淀，并用水与乙醇的混合溶液洗涤3次，再分散在IOOml去离子水中，得到Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液； 六、然后在转速为IOOOOrpm的条件下离心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入乙醇洗漆,超声分散15-20min ； 七、重复步骤六3-4次，得到浓度为7.5mg/mLFe304-HCPTiSi02乙醇溶液； 八、将IOmlFe3O4-HCPTiSiO2乙醇溶液与0. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的条件下搅拌3小时，然后按照在转速为IOOOOrpm的条件下离心30min，向沉淀中加入乙醇，超声分散15-20min的顺序，重复5次，得到表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液； 九、制备金纳米粒子 向40ml蒸馏水中加入0. Olml浓度为0. 25mol/L氯金酸水溶液、0. 2ml浓度为0. 2mol/L碳酸钾水溶液、0. 6ml浓度为0. 5mol/L硼氢化钠水溶液,在600rpm的条件下搅拌IOmin,再加入浓度为0. 5mol/L的硼氢化钠水溶液，直到溶液的蓝紫色变为橙红色停止加入硼氢化钠水溶液，再搅拌5min，得到金纳米粒子溶液；十、制备草莓状金纳米复合粒子 将0. 07ml表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTIgSiO2溶液稀释至50ml，然后再滴入到金纳米粒子溶液中，然后以600rpm的速度离心90min，得到Au/Si02溶液； i 、制备金纳米壳 将25mg碳酸钾溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度搅拌IOmin,然后加入I. 5ml浓度为0. 25mol/L的氯金酸水溶液，继续搅拌30分钟，得混合液，将4ml混合液与Au/Si02溶液混合，然后以5000rpm离心30min，然后再将离心后的沉淀分散于IOml水中并超声IOmin,得到包裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液； 十二、将0.03g I，2-二巯基-3-环己烷基聚乙二醇和3 4ml四氢呋喃加入到离心管中，再加入I 5ml裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液和50mg卟啉类光敏剂分子,反应72小时，反应结束后在转速为6000rpm的条件下离心10分钟，收集沉淀，并将沉淀分散在甲醇中，得到浓度为7. 5mg/mL的Fe3O4-HCPTlgSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液； 十三、将50mg IOOmg Fe3O4-HCPTiSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、IOml N，N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时，然后在转速为14000rpm、温度为4°C的条件下离心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向复合纳米粒子的甲醇溶液； 步骤十二中所述的卟啉类光敏剂分子为5- (4-氯乙酰氧基苯基)-10，15，20-三(4-羧基苯基)P卜啉或四氯乙酰氧基苯基P卜啉； 步骤十三中所述的靶向性生物分子为叶酸； 步骤十三中所述的抗肿瘤药物为单克隆抗体赫赛汀、紫杉醇、阿霉素、5-氟尿嘧啶或甲氨蝶吟。
2.根据权利要求I所述靶向复合纳米粒子的制备方法，其特征在于步骤十二中将0.03gl，2- 二巯基-3-环己烷基聚乙二醇和3. 5ml四氢呋喃加入到离心管中。
3.根据权利要求I所述靶向复合纳米粒子的制备方法，其特征在于步骤十三中将60mg 90mg Fe3O4-HCPTiSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、lOmlN，N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时。
4.根据权利要求I所述靶向复合纳米粒子的制备方法，其特征在于步骤十三中将70mg 80mg Fe3O4-HCPTiSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、lOmlN，N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时。
5.根据权利要求I所述靶向复合纳米粒子的制备方法，其特征在于步骤十三中将75mgFe304-HCPTiSi02偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、IOml N，N-二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时。
6.靶向复合纳米粒子的制备方法，其特征在于靶向复合纳米粒子的制备方法按照以下步骤进行 一、制备磁性纳米粒子 将IOml浓度为lmol/L的FeCl3水溶液、2. 5ml FeSO4 7H20的HCl溶液加入到125ml浓度为0. 7mol/L的NH3 *7H20，继续搅拌30min，离心分离并收集上清液中的产物，将上清液中的产物用去离子水洗涤3次，然后再分散在150ml去离子水中，得到Fe3O4纳米粒子溶液；所述的FeSO4 7H20的HCl溶液中FeSO4 7H20的浓度为2mol/L、HCl的浓度为2mol/L ； 二、制备Fe3O4-HCPT纳米粒子 将IOmlFe3O4纳米粒子溶液分散到IOml聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超声反应30min,磁力分离，然后用浓度为0. 51mol/L的NaCl溶液洗涤，最后分散在水中，得到浓度为7.5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液； 步骤二中所述的聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氢氯丙烯胺浓度为lmg/ml，NaCl的浓度为0. 5mol/L ； 三、将IOmlPAH-包裹的Fe3O4纳米粒子溶液分散到IOml聚苯乙烯磺酸钠的NaCl水溶液中超声反应30min,得到Fe3O4磁性纳米粒子前体； 步骤三中所述的聚苯乙烯磺酸钠的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸钠的浓度为lmg/ml,NaCl 的浓度为 0. 5mol/L ； 四、将364mgl0-羟基喜树碱溶解在150mlNaOH溶液中，调节pH值为11，在加入浓度为lmol/L的HCl调节pH值为4. 8，得到HCPT微乳液，将IOml Fe3O4磁性纳米粒子前体加入到IOml HCPT微乳液中，搅拌并通过紫外吸收监测反应，当10-羟基喜树碱的特征吸收峰消失时，停止反应，磁力分离，并用PH值为4. 8的HCl溶液洗涤，得到聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子； 五、将聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子分散到150ml去离子水中，得到聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子分散液，将IOml聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子分散液分散到IOml聚苯乙烯磺酸钠的NaCl水溶液中超声反应30min，Fe3O4磁性纳米粒子前体a ； 将364mgl0-羟基喜树碱溶解在150ml NaOH溶液中，调节pH值为11，在加入浓度为lmol/L的HCl调节pH值为4. 8，得到HCPT微乳液，将IOml Fe3O4磁性纳米粒子前体a加入到IOml HCPT微乳液中，搅拌并通过紫外吸收监测反应，当10-羟基喜树碱的特征吸收峰消失时，停止反应，磁力分离，并用PH值为4. 8的HCl溶液洗涤，得到2层聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子； 所述的聚苯乙烯磺酸钠的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸钠的浓度为lmg/ml, NaCl的浓度为 0. 5mol/L ； 六、重复步骤五，然后加入150mL去离子水中，得到n+2层聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液，其中n为正整数；七、制备Fe3O4-HCPTlgSiO2 将Iml正硅酸乙酯与30ml乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，将2. 5mLNH3 H2O,38mL H20、38mL乙醇及IOmL n+2层聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反应4小时，磁力分离，收集沉淀，并用水与乙醇的混合溶液洗涤3次，再分散在IOOml去离子水中，得到Fe304-HCPT@Si02水溶液； 八、然后在转速为IOOOOrpm的条件下离心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入适量的乙醇洗涤，超声分散15-20min ； 九、重复步骤八3-4次，得到浓度为7.5mg/mL Fe3O4-HCPTiSiO2乙醇溶液； 十、将IOml Fe3O4-HCPTiSiO2乙醇溶液与0. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的条件下搅拌3小时，然后按照在转速为IOOOOrpm的条件下离心30min，向沉淀中加入乙醇，超声分散15-20min的顺序，重复5次，得到表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液；i^一、制备金纳米粒子 向40ml蒸馏水中加入0. Olml浓度为0. 25mol/L氯金酸水溶液、0. 2ml浓度为0. 2mol/L碳酸钾水溶液、0. 6ml浓度为0. 5mol/L硼氢化钠水溶液，600rpm搅拌lOmin，再加入浓度为0. 5mol/L的硼氢化钠水溶液，直到溶液的蓝紫色变为橙红色停止加入硼氢化钠水溶液，再搅拌5min,得到金纳米粒子溶液； 十二、制备草莓状金纳米复合粒子 将0. 07ml表面氨基化修饰的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液稀释至50ml，然后再滴入到金纳米粒子溶液中，然后以600rpm的速度离心90min，得到Au/Si02溶液； 十三、制备金纳米壳 将25mg碳酸钾溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度搅拌IOmin,然后加入I. 5ml浓度为0. 25mol/L的氯金酸水溶液，继续搅拌30分钟，得混合液，将4ml混合液与Au/Si02溶液混合，然后以5000rpm离心30min，然后再将离心后的沉淀分散于IOml水中并超声IOmin,得到包裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液； 十四、将0.03g I，2-二巯基-3-环己烷基聚乙二醇和3 4ml四氢呋喃加入到离心管中，再加入I 5ml裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液和50mg卟啉类光敏剂分子,反应72小时，反应结束后在转速为6000rpm的条件下离心10分钟，收集沉淀，并将沉淀分散在甲醇中，得到浓度为7. 5mg/mL的Fe304-HCPT@Si02偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子； 十五、将50mg IOOmg Fe3O4-HCPTiSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、IOml N，N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时，然后在转速为14000rpm、温度为4°C的条件下离心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向复合纳米粒子的甲醇溶液； 步骤十三中所述的卟啉类光敏剂分子为5- (4-氯乙酰氧基苯基)-10，15，20-三(4-羧基苯基)P卜啉或四氯乙酰氧基苯基P卜啉； 步骤十四中所述的靶向性生物分子为叶酸； 步骤十四中所述的抗肿瘤药物为单克隆抗体赫赛汀、紫杉醇、阿霉素、5-氟尿嘧啶或甲氨蝶吟。
7.根据权利要求6所述靶向复合纳米粒子的制备方法，其特征在于步骤十四中将0.03gl，2- 二巯基-3-环己烷基聚乙二醇和3. 5ml四氢呋喃加入到离心管中。
8.根据权利要求6所述靶向复合纳米粒子的制备方法，其特征在于步骤十五中将60mg 90mg Fe3O4-HCPTiSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、lOmlN，N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时。
9.根据权利要求6所述靶向复合纳米粒子的制备方法，其特征在于步骤十五中将70mg 80mg Fe3O4-HCPTiSiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、10mlN，N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时。
10.根据权利要求6所述靶向复合纳米粒子的制备方法，其特征在于步骤十五中将75mgFe304-HCPTiSi02偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、IOml N，N-二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时。
全文摘要
靶向复合纳米粒子的制备方法，它涉及一种靶向诊疗一体化复合纳米粒子的制备方法。本发明解决了目前抗肿瘤药物载体稳定性差、载药量小的技术问题。本方法如下制备Fe3O4-HCPT@SiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液；将Fe3O4-HCPT@SiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、N，N-二甲基甲酰胺和靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应，然后离心，即得；本方明将聚苯乙烯磺酸(PSS)与10-羟基喜树碱自组装方式吸附在Fe3O4磁性纳米粒子上，本方法可行性高；具有本身磁性纳米粒子的物理靶向作用及进一步表面功能化修饰生物分子的主动靶向作用，在双重靶向作用下能增加药物浓度。
文档编号A61K39/395GK102961337SQ201210543590
公开日2013年3月13日 申请日期2012年12月14日 优先权日2012年12月14日
发明者郭喜明, 郭斌, 薄璇 申请人:哈尔滨工业大学