利用组蛋白脱乙酰酶抑制物改善受损的内源纤维蛋白溶解作用的化合物和方法

利用组蛋白脱乙酰酶抑制物改善受损的内源纤维蛋白溶解作用的化合物和方法
【专利摘要】本发明提供了一种化合物，其是组蛋白脱乙酰酶（HDAC）抑制物或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物或盐，用于：（I）治疗或预防与过量血纤蛋白存沉积和/或血栓形成相关的病理状况；和/或（II）强化血纤蛋白沉积物的降解或预防与病理学状况相关的这种沉积，或其可以引起这样的状况，其中，HDAC抑制物和其剂量是如说明书中描述的。还提供了丙戊酸或其药学上可接受的盐，用于改善或标准化受局部或全身性炎症损害的内源纤维蛋白溶解作用。
【专利说明】利用组蛋白脱乙酰酶抑制物改善受损的内源纤维蛋白溶解
作用的化合物和方法
发明领域
[0001]本发明一般地涉及新的医药用途、方法和组合物。更具体地，它涉及利用不同的组蛋白脱乙酰酶抑制物来改善了标准化受抑制的内源血管纤维蛋白溶解作用。
[0002]相关串请
[0003]本申请要求2011年3月9日提交的美国临时申请US61/464，809、2011年3月9日提交的US61/464，776和2011年10月28日提交的US61/628，339的权益。上述申请的全部教导通过引用合并在本文中。
【背景技术】
[0004]心血管疾病是西方世界中发病和死亡的主要原因，在过去数十年，它在发展中国家也已经成为快速增长的问题。估计有8千万美国成年人(三分之一)具有心血管疾病(CVD)的一种或更多种表现，例如，高血压、冠心病、心力衰竭或中风。死亡数据显示，在美国2005年CVD是所有死亡人数的35%的根本死亡原因，大多数与心肌梗塞、中风或其并发症相关。遭遇急性心血管事件的绝大多数患者早先暴露于至少一种主要风险因素，例如，吸烟、异常血脂水平、高血压、糖尿病、腹部肥胖和低级炎症。
[0005]病理生理上，心肌梗塞和缺血性中风的主要事件是由于在动脉血管的腔内血凝块形成而导致的营养血液供给的突然停滞所引起的。大多数情况下，血栓是由于脆弱的动脉粥样硬化斑块的破裂而沉积形成的，所述动脉粥样硬化斑块暴露于活化血小板和血浆凝固系统的化学试剂。活化的血小板形成血小板栓，该血小板栓由凝血产生的血纤蛋白包围形成在血管腔内扩展的血块，直到它阻塞或阻断血流，这产生缺氧组织损伤(所谓的梗塞)。因而,血栓性的心血管事件作为两个独立过程的结果而发生，即，一方面是血管壁的慢性血管动脉粥样硬化的缓慢进展，以及另一方面，快速引起流动阻滞的突然的急性血块形成。本发明唯一地涉及后一过程。
[0006]近来，炎症已经被认为是血栓性事件的重要的风险因素。血管的炎症是动脉粥样硬化的血管壁的特征性特征，炎症活性是动脉粥样硬化斑块破裂和启动血管内血凝固的易感性的强决定因素。并且,全身性炎症的自体免疫性状况,例如,类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮以及各种形式的脉管炎，显著地提高心肌梗塞和中风的风险。
[0007]预防和治疗心血管事件的传统方法针对I)减慢基础的动脉粥样硬化过程的发展，2)在斑块破裂的情况下防止血块形成，或3)直接除去急性的血栓性流动阻塞。简言之，抗动脉粥样硬化治疗目的在于调节一般风险因素的影响，包括饮食建议、减肥、体育运动、戒烟、胆固醇和血压治疗，等等。血块形成的预防主要依靠使用抑制血小板活化和/或聚集的抗血小板药物，而且在某些情况下包括使用口服抗凝血剂例如华法令阻凝剂的血栓栓塞的预防。急性血栓形成事件的事后治疗需要通过血栓溶解试剂例如重组组织型纤溶酶原激活物对血块直接的药理学溶解，或经皮肤的阻塞血管的机械扩张。
[0008]尽管事实是多靶点的抗动脉粥样硬化治疗和通过抗血小板试剂的血块预防已经降低了心肌梗塞和缺血性中风的发生率，这样的事件仍然是主要的群体健康问题。这显示了，在具有心血管风险因素的患者中，这些预防措施不足以完全阻止血栓形成事件的发生。
[0009]类似地，循环的静脉侧的血栓状况，以及其栓塞的并发症例如肺栓塞，仍然导致大量的发病和死亡。静脉血栓形成具有不同的临床的表现，血小板活化与血浆凝结的相对重要性是稍微不同的，后者在静脉血栓形成中具有优势。然而，尽管有这些差异，引起血栓性血管闭塞的主要根本机制与动脉循环中起作用的机制是类似的。就这点而论虽然与动脉粥样硬化不相关，静脉血栓形成的风险与一般的心血管风险因素例如炎症和代谢失常是有关的。合起来，对于动脉和静脉循环，现有的疗法和一般风险因素管理没有提供对血栓性事件的充分保护，不能消除这类事件的严重后果。这促使开发新的预防和治疗目标，特别是在甚至没有发生症状的早期可以防止危险的组织缺血的更有效的手段。 [0010]有趣地，在健康的个体中，存在一种天然的“防御底线”系统，尽管是预防性的措施，如果凝血过程在血管系统中发生，其可以被活化。简言之，在循环的动脉侧和静脉侧的血栓形成机制的启动引起血管(内皮)的最深处细胞层的活化，作为响应，细胞快速地释放大量血块溶解物质组织型纤溶酶原激活物(t-PA)。这将腔内t-PA水平提高到与临床血栓溶解疗法(即，施用重组t-PA)类似的水平，但是由于极其快速的作用发动，这种内源响应的效价是100倍。
[0011]不断积累的临床的、流行病学的和实验的数据支持了这种观念，如果血管壁的这种凝血保护性功能是完整的，它提供了对抗流动阻滞性血栓的形成的强大的防御。然而遗憾的是，快速t-PA释放的能力在对血栓形成事件有提高的敏感性的几种状况中是受损的。这些包括动脉粥样硬化、高血压、腹部肥胖、吸烟、不动的生活方式以及低级炎症。这种损伤很可能是由于降低的合成，从而在内皮细胞中纤维蛋白溶解激活物的降低的可用性。
[0012]此外，我们和其他人已经显示了，在具有血栓形成事件的提高风险的患者中内源的纤维蛋白溶解响应的效力降低，例如在动脉粥样硬化的患者中(Osterlund, B., etal.Acta Anaesthesiol Scand52,1375-1384 (2008),Newby,D.E., et a/.Circulationl03,1936-1941 (2001))。近期的数据表明，在这种状况下炎症是受抑制的t_PA生产的关键根本致病机制。我们显示了对炎症性细胞因子肿瘤坏死因子α (TNF-α )和白细胞介素_1β(IL-1b)的长时间暴露引起t-PA转录的显著抑制(Ulfhammer, E., et al.Journal ofThrombosis and Haemostasis4,1781-1789 (2006), Larsson, P., et al.Thromb Resl23,342-351 (2008))。有趣地，已知的是动脉粥样硬化的斑块与血管壁中局部的、潜在严重的炎症性活化相关，可以设想的是这种炎症性的环境妨碍了血管系统的特定区域中纤维蛋白溶解响应，而这对于保持高的纤维蛋白溶解能力是关键的，因而提高了血栓形成事件的风险。类似地，还可能的是，患有全身性炎症状况(例如，自体免疫疾病和代谢综合征)的患者中血栓形成事件的提高的发生率也可以与对t-PA合成的循环促炎症性细胞因子抑制作用相关。
[0013]在这个背景下，降低临床的血栓形成事件发生率的可选择的第四种方案是在带有其功能损伤的患者中恢复纤维蛋白溶解的“防御系统底线”的能力。已经进行了大量的工作来寻找可行的手段来增强具有纤维蛋白溶解能力相关风险因素降低的受试者中基础的以及受刺激的内源纤维蛋白溶解。然而，使用例如斯特汀类药物(statins)和视黄酸改善t-PA合成的早前的努力是令人失望的。通过阻断t-PA活性的天然发生的抑制物，例如纤溶酶原激活物抑制物-1 (PA1-1)和羧肽酶U (CPU)来提高纤维蛋白溶解的其他方法也是不成功的，主要是由于有限的药物能力，例如，药物候选物的不良的药物代谢动力学性质。因而，迄今为止，尚没有描述可以临床上使用来逆转t-PA生产的损伤的手段。
[0014]我们近来报道了，临床上使用的抗癫痫药物丙戊酸(VPA)在相对高剂量下对t_PA 生产具有刺激作用(Larsson, P., et al The epigenetic modifier valproic acidstimulates tissue-type plasminogen activator expression in human endothelialcells.Poster presented at Epigenetics2009 (The epigenetics annual scientificconference2009),Melbourne Australia(2009))。VPA 被认为抑制组蛋白脱乙酸酶，即，所谓的诱导组蛋白的高度乙酰化的HDAC抑制物(HDACi )。这是一种改变染色质结构的外生的遗传控制机制，其使得DNA对转录机制更为可接近，一般增强转录率。我们现在收集了实验证据表明t-PA生产很大程度上受到这种机制的控制。此外，近来被报道了患有癫痫的患者的VPA治疗降低了血栓形成事件的风险达到40%(01esen, J.B., et al.PharmacoepidemiolDrug Saf (2010))，我们相信这种效果归功于在VPA治疗之后这些患者中提高的纤维蛋白溶解能力。遗憾的是，在抗惊厥VPA治疗(0.35-0.85mM)期间一般获得的VPA的血浆水平带来了显著的不良副作用的风险，例如，出血并发症、胰腺炎、肝衰竭、体重增加，等等。因此，当前的临床 的神经病学或精神病学的实践中使用的浓度下的VPA,由于其副作用，排除了它在心血管疾病的一级和二级预防中的用途。如Olesen等人声称的:“虽然对于认可的癫痫症适应症的风险/效益比是有利的，药物可能具有不良反应并且明显不适合于心血管病的预防本身”。
[0015]早先已经显示的是，当细胞用HDAC抑制物曲古抑菌素A(TSA)和丁酸酯处理时，内皮细胞中的 t-PA 生产提高(Arts et all995,Biochem J.1995Augl5 ;310(Ptl)171_6)。然而，由于毒性和不良的药物代谢动力学性质，这些物质不适合于临床的使用，因而从未讨论可能的体内使用。近来，延续了这项工作来描述在培养的内皮细胞中TSA、丁酸酯和MS-275处理之后t-PA的在增量调节背后的细胞信号传导机制(Dunoyer-Geindre and Kruithof,Cardiovascular Research90 (3)457-63 (2011))。在这篇文献中，当在癌症疗法中使用外生的调节物时，作者关于t-PA的潜在副作用进行了以下说明:“可能的是DNA甲基化的抑制物或HDAC抑制物的治疗用途对体内t-PA表达有影响”。然而，没有提出这些物质可以用作预防疗法来特异性针对受损的t-PA生产，以降低心血管事件的风险。此外，由于毒性(TSA)或仅在用于心血管预防中过高的剂量下才显示有效性(丁酸酯和MS-275)，后一研究中研究的物质被排出了临床使用。总的来说，据我们所知，早先没有数据显示HDAC抑制物可以在足够低的浓度下可以显著地加强t-PA生产，以允许作为针对心血管事件的预防试剂的临床使用而没有显著的或无法耐受的副作用。
[0016]近来，我们研究了当受到促炎症性的刺激的抑制时低浓度的VPA对t-PA生产的作用。我们惊人地发现，VPA在亚临床浓度下就已经是有效的t-PA诱导试剂，并且低浓度令人惊讶地就足以显著提高或标准化炎症抑制的t-PA生产。因此我们相信，VPA实际上在患有炎症抑制的t-PA生产的患者中在这些低浓度下对于心血管疾病预防是有用的。如先前提及的，在例如抗癫痫治疗中使用本领域早先已知的更高浓度/剂量的VPA发现的副作用，使得VPA不适合于心血管疾病的一级和二级预防。在本申请中描述的，通过使用出乎意料的低浓度/剂量的VPA来提高或标准化炎症抑制的t-PA生产，我们解决了这个难题。[0017]由于TNF-alpha是非常强的细胞激活物，对多种细胞功能具有深刻的影响，包括转录和转录后调节机制以及信号转导途径，不可能来完全预测VPA是否在TNF抑制的细胞中对t-PA表达具有任何作用(如在此描述的，这种考虑也适合于新一代的HDACi)。然而，我们惊人地发现，出乎意料的低浓度的VPA可以完全关闭TNF-alpha对t_PA表达的抑制作用。有趣地，逆转TNF-alpha的作用所需的浓度处于更适合于心血管病预防的范围内(低于0.35mM)。在TNF处理的内皮中VPA恢复t_PA生产的这种强的能力使得以相对少的副作用、为高效的预防性治疗使用低剂量的VPA来改善患有局部或全身性炎症的患者中内源的纤维蛋白溶解作用成为可能。早先显示的是，VPA可以对抗t-PA的这种炎症抑制。此外，当这种作用在令人惊讶的低浓度下呈现时，我们的发明使得使用这种治疗来预防心血管疾病而没有不能容忍的副作用成为可能。
[0018]我们更令人惊讶地发现，在更高的浓度下，TNF-alpha实际上强化VPA对t_PA的生产的刺激作用。因此，内皮细胞对TNF-alpha的暴露引起VPA剂量反应曲线的模式的深刻变化，显著地增强对VPA的最大效力应答。这种出乎意料地发现表明，在两种试剂的细胞效应之间存在复杂的相互作用，其也可以解释与预期相比低得多的浓度足以提高或标准化炎症抑制的纤维溶解功能的事实。再一次，这支持了以下观点，在这些患者中有可能使用VPA来对心血管疾病进行预防治疗，而没有在例如抗癫痫治疗中所见的不良副作用。
[0019]响应于VPA的提高的细胞t-PA生产进一步支持了以下观点，甚至在动脉粥样硬化中，当在斑块周围存在高度发炎的微环境时，低剂量的VPA足以恢复炎症抑制的纤维溶解功能。这些新的观察结果表明，低剂量或亚临床剂量的VPA足以恢复受炎症压力被抑制的受损的t-PA生产。
[0020]在美国专利申请号US2009/0270497中，描述了通过施用治疗有效量的作为泛HDAC抑制物的化合物治疗全身性非局部炎症状况的方法，主要是脓毒症。该申请中描述了许多物质，包括VPA。然而，该申请与炎症状况的特定治疗相关，因而，没有提及内源的血栓保护应答的潜在刺激。此外，在低浓度下VPA标准化炎症抑制的t-PA生产的能力在该申请中没有提及。
[0021]近来，已经开发了许多更为特异性的HDAC抑制物，由于它们更大的特异性，它们在更低的剂量下是更强力和有效的。例如，虽然VPA在mM范围内是有效的，新一代的HDAC抑制物通常在低的μΜ范围内引发类似的HDAC抑制作用。此外，开发了新的物质来优化药物代谢动力学以及降低毒性。然而，新一代HDACi在用于癌症治疗的剂量下仍然与不良副作用相关，使得它们不能用于心血管病预防治疗。
[0022]然而，我们新的观察结果出乎意料地但是清楚地展现了，与在临床癌症治疗中相比实质上更低浓度的HDACi的使用引起t-PA生产的显著提高。由于这些HDACi物质的惊人的低浓度足以提高或标准化受损的t-PA生产(由于，例如，炎症或遗传因素)，与在临床癌症治疗中发现的相比，在这些浓度下的治疗可能与显著更少或更不严重的有害副作用相关。因此，现在发现这些HDACi物质在这些低浓度下适合于血栓形成性心血管疾病的预防治疗。这样，我们解决了不良副作用的难题，因而使得使用这些物质用于心血管病预防治疗是可能的。
[0023]我们还惊人地发现，低浓度的HDACi可以完全关闭TNF-alpha对t_PA表达的抑制作用。实际上，需要的浓度处在被认为适合于心血管病预防的范围内(例如，对于Belinostat大约0.05-0.2 μ M)。值得注意的是，对t_PA表达的作用不能由抗炎作用本身来解释，而是由对非炎性途径的作用清楚地介导(参阅实施例78)。在TNF-alpha处理的内皮中HDACis恢复t-PA生产的这种强的能力使得以相为了少的副作用、为高效的预防性治疗使用低剂量的VPA来改善患有局部或全身性炎症的患者中内源的纤维蛋白溶解作用成为可能。
[0024]据我们所知，早先没有显示的是，HDACi物质可以对抗t-PA的这种炎症抑制。此外，当这种作用在非常低的浓度下显现时，我们的发明使得在由于局部或全身性炎症而具有受损的纤维蛋白溶解作用的患者中使用这种治疗来预防心血管疾病而没有不能容忍的副作用成为可能。这些新的观察结果表明，低剂量的HDACi足以恢复受损的t-PA生产。
[0025]本申请中描述的不同的HDACi属于不同的结构种类(例如，异羟肟酸盐类、苯甲酰胺和环肽)，对于不同的HDAC亚型具有选择性。异羟肟酸盐类(例如，Vorinostat、Belinostat、Givinostat、Panobinostat、PC1-24781, JNJ26481585 和 SB939)是泛 HDACi,即，它们以相对类似的效力抑制不同亚型的HDAC，而在不同的结构类别间存在HDAC酶选择性的差异。苯甲酰胺类(包括Mocetinostat和CXD101)对于HDAC种类I和II亚型(种类
I=HDACU2,3和8，种类I1:HDAC4、6、7和9)的抑制作用可能更有选择性。不同的HDACi之间的差异在它们内皮细胞基因表达的调节方面产生不可预见的差异。例如，难以预测E-选择素的调节，因为Mocetinostat强烈诱导表达，Givinostat强烈抑制表达,而VPA和Belinostat对基因的调节几乎没有作用。
[0026]然而，出乎我们的意料，我们发现本申请中描述的HDACi物质对t-PA生产具有相似的定性的的诱导作用。此外，对于所有的HDACi物质，这种作用出乎意料地在低浓度下呈现，虽然它们术语不同的化学类别并具有不同的选择性分布。因此，这些数据表明，t-PA对于HDAC抑制作用敏感，因而，不是对单个的分子敏感。然而有趣的是，我们发现，新一代的异羟肟酸盐类在非常地的浓度下是更为强力的t-PA诱导物，如在实施例77中展现的，使得这一类别作为内源t-PA生产的刺激物是更为优选的。
[0027]这些新的方法是第一种临床上可行的策略，来标准化由于降低的t-PA生产倾于血栓形成事件的患者中有缺陷的血管纤维蛋白溶解作用。因此，不考虑最佳的传统风险因素疗法，用低剂量的HDACi治疗改善了针对血栓形成事件例如心肌梗塞、缺血性中风或静脉血栓形成被触发时的“防御底线”。

【发明内容】

[0028]已经发现某些HDACi物质在低浓度下恢复受抑制的纤维蛋白溶解功能是令人惊讶地有效的，使得这些物质适合于预防或急性治疗来降低临床的动脉或静脉血栓事件的风险。此外，早先没有显示，HDACi物质可以对抗受炎症抑制的t-PA生产。当对t-PA生产的作用在令人惊讶的低浓度下显现时，我们的发明使得使用这种用于预防心血管疾病的治疗成为可能，而没有在更高的浓度下在其他疾病例如癌症中观察到的不良副作用。这是非常重要的，因为使用本申请中描述的HDACi物质解决了这样的问题，当涉及到用于大的患者群体的预防性治疗，例如在患有例如受炎症抑制的纤维蛋白溶解功能的患者中用于心血管疾病预防的很少的和可容忍的副作用时存在着更高的要求。
[0029]本发明的主要目的是在低浓度下使用这些HDACi物质来改善受抑制的内源的纤维蛋白溶解。
[0030]本发明的另一个目的是在低浓度下使用这些HDACi物质作为安全和有效的预防和/或急性治疗，以很少的副作用来改善受抑制的内源纤维蛋白溶解并因此降低人类中的血栓形成。
[0031]本发明的另一个目的是在低浓度下使用这些HDACi物质来恢复受炎症抑制的纤维蛋白溶解功能。
[0032]本发明的另一个目的是在低浓度下使用这些HDACi物质作为安全和有效的预防和/或急性治疗，以很少的副作用来改善人类中由局部或全身性炎症损害的内源纤维蛋白溶解作用。
[0033]本发明的另一个目的是在低浓度下使用这些HDACi物质作为安全和有效的预防和/或急性治疗，以很少的副作用来改善被诊断患有动脉粥样硬化的患者中的内源纤维蛋白溶解作用。
[0034]本发明的另一个目的是在低浓度下使用这些HDACi物质作为安全和有效的预防和/或急性治疗，以很少的副作用来改善被诊断为局部或全身性炎症的患者中的内源纤维蛋白溶解作用。
[0035]本发明的另一个目的是在低浓度下使用这些HDACi物质作为安全和有效的预防和/或急性治疗，以很少的副作用来改善具有指示局部或全身性炎症的生物标记物分布(一种或几种生物标记物)的患者中的内源纤维蛋白溶解。
[0036]本发明的另一个目的是在低浓度下使用这些HDACi物质作为安全和有效的预防和/或急性治疗，以很少的副作用来改善展现了提高的TNF-alpha水平的患者中的内源纤维蛋白溶解。
[0037]进一步地，已经发现丙戊酸在低浓度下恢复受炎症抑制的纤维蛋白溶解功能是令人惊讶地有效的，使得有可能使用低浓度的丙戊酸来降低患有受炎症抑制的纤维蛋白溶解功能的患者中的血栓形成性心血管事件的风险。早先没有显示，VPA可以对抗受炎症抑制的t-PA生产。此外，当这种作用在令人惊讶地低浓度下显现时，我们的发明使得使用这种用于预防心血管疾病的治疗成为可能，而没有在用更高浓度的VPA治疗的其他疾病中观察到的不良副作用。这是非常重要的，因为它解决了关于预防性治疗的副作用的更高要求的难题，其中副作用必需是很少的和可容忍的。因而，使得大的患者群体的预防性治疗成为可能，正如在患有受炎症抑制的纤维蛋白溶解功能的患者中使用VPA用于心血管疾病预防的情况一样。当内皮细胞暴露于TNF-alpha时，VPA对t_PA生产的最大效力显著地加强，这一发现进一步展现了在VPA、TNF-alpha和t_PA之间存在出乎意料的非线性关系。我们相信，这种关系意味着，根据我们对TNF抑制的t-PA生产的最初结果，我们可以使用比我们最初预期的还低的剂 量，来提高或标准化受炎症抑制的纤维蛋白溶解功能。这进一步改善了副作用分布，使得VPA更为适合于在患有受炎症抑制的纤维蛋白溶解功能的患者中针对心血管疾病的预防性治疗。
[0038]本发明的进一步的主要目标是在低浓度下使用丙戊酸来改善或标准化由局部或全身性炎症损害的内源纤维蛋白溶解。
[0039]本发明的另一个目的是在低浓度下使用丙戊酸作为安全的和有效的预防和/或急性治疗，以很少的副作用来改善或标准化人类中由局部或全身性炎症损害的内源纤维蛋白溶解。
[0040]本发明的另一个目的是在低浓度下使用丙戊酸作为安全的和有效的预防和/或急性治疗，以很少的副作用来改善或标准化被诊断为患有局部或全身性炎症的患者中的内源纤维蛋白溶解。
[0041]本发明的另一个目的是在低浓度下使用丙戊酸作为安全的和有效的预防和/或急性治疗，以很少的副作用来改善或标准化具有指示局部或全身性炎症的生物标记物分布(一种或几种生物标记物)的患者中的内源纤维蛋白溶解。
[0042]本发明的另一个目的是在低浓度下使用丙戊酸作为安全的和有效的预防和/或急性治疗，以很少的副作用来改善或标准化展现了提高的TNF-alpha水平的患者中的内源纤维蛋白溶解。
[0043]本发明的另一个目的是在低浓度下使用丙戊酸作为安全的和有效的预防和/或急性治疗，以很少的副作用来改善或标准化被诊断患有动脉粥样硬化的患者中的内源纤维蛋白溶解。
[0044]本发明的其他目的和优点对于读者将变得显而易见，希望这些目的和优点处在本发明的范围之内。
[0045]附图简要说明
[0046]图1A和IB分别显不了在人类内皮细胞中Belinostat和Vorinostat对t_PA mRNA表达的剂量反应曲线。显示了一个代表性的实验。
[0047]图2是显示了在人类内皮细胞中在低浓度下Belinostat和Vorinostat对抗TNF-alpha介导的t_PA抑制的图形。显示了一个代表性的实验。
[0048]图3显示了在HUVEC细胞中低浓度的VPA对抗TNF-alpha介导的t_PA抑制的能力。显不了一个代表性的实验。
[0049]图4是显示了在存在或缺少TNF-alpha (10ng/ml)的情况下VPA (0.3_4mM)的剂量反应曲线的图形。显示了一个代表性的实验。
[0050]图5显示了在HUVEC中在24h孵育之后Vorinostat对t_PA mRNA表达的剂量反应曲线(n=3)。
[0051]图6显示了在HUVEC中在24h孵育之后Belinostat对t_PA mRNA表达的剂量反应曲线(n=3)。
[0052]图7显示了在HUVEC中在24h孵育之后Givinostat对t_PA mRNA表达的剂量反应曲线(n=3)。
[0053]图8显示了在HUVEC中在24h孵育之后JNJ-26481585对t_PA mRNA表达的剂量反应曲线(n=3)。
[0054]图9显示了在HUVEC中在24h孵育之后SB939对t_PA mRNA表达的剂量反应曲线(n=3)。
[0055]图10显示了在HUVEC中在24h孵育之后Panobinostat对t_PA mRNA表达的剂量反应曲线(n=3)。
[0056]图11显示了在HUVEC中在24h孵育之后Mocetinostat对t_PA mRNA表达的剂量反应曲线(n=3)。
[0057]图12显示了在HUVEC中在24h孵育之后PC1-24781对t_PA mRNA表达的剂量反应曲线(一个代表性的实验)。
[0058]图13显示了 TNF-alpha (TNF_a)、givinostat和原型抗炎物质乙酰水杨酸(ASA)和布洛芬(IBU)对t-PA表达的作用(一个代表性实验)。
[0059]发明详细说明
[0060]本发明涉及纤维蛋白降解或分解(也称为纤维蛋白溶解作用)以及组合物和用于与过量的血纤蛋白沉积和/或血栓形成相关的病理状况的治疗方法。特别地，本发明涉及纤维蛋白降解或分解，以及组合物和用于与过量的血纤蛋白沉积和/或血栓形成相关的病理状况的治疗方法，特别是当由于受损的纤维蛋白溶解作用时。更特别地，本发明涉及纤维蛋白降解或分解，以及组合物和用于与过量的血纤蛋白沉积和/或血栓形成相关的病理状况的治疗方法，当由于由降低的内源t-PA生产所引起的受损的纤维蛋白溶解作用时。本发明还提供了强化血纤蛋白沉积物的降解和预防这样的沉积物的新的方法，所述沉积物与病理状况相关或可能引起这样的状况。 [0061]特别地，本发明包括向需要这样的治疗的受试者施用治疗有效量的HDAC抑制物，例如，在本申请中描述的任何HDAC抑制物，例如，Vorinostat (SAHA)、Belinostat(PXD-101)、Givinostat (ITF2357)、Panobinostat (LBH589)、PC1-24781、JNJ-26481585,SB939、Mocetinostat (MGCD0103)或CXD101，这些化合物可以单独或组合(例如相互组合)使用，或与HDAC抑制物丙戊酸(VPA)组合使用，以及任选地与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂和/或一种或多种靶向血块形成的药物结合使用。
[0062]本发明还提供了强化血纤蛋白沉积物的降解和预防这样的沉积物的新的方法，所述沉积物与病理学的状况相关或可能引起这样的状况，其包括向需要这样的治疗的受试者施用治疗有效量的丙戊酸，任选地与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂和一种或多种靶向血块形成的药物结合。
[0063]在本申请中，使用术语“纤维蛋白溶解作用”和“纤维蛋白溶解系统”不仅是指特定的成分和纤维蛋白溶解系统本身的作用，而且可以任选地包括与纤维蛋白溶解系统相互作用的其他生理功能和试剂，例如，血小板和它们释放的产物以及血浆凝结系统的成分。
[0064]根据本发明可以治疗的病理学的状况有完全或至少部分地由提高的血纤蛋白沉积和/或降低的纤维蛋白溶解能力引起的那些病理状况。这些包括但不限于动脉粥样硬化、心肌梗塞、缺血性中风、深静脉血栓形成、肺栓塞、弥漫性血管内凝血、肾血管疾病和间歇性跛行综合症。并且，在本发明的另一个实施方式中，一些物质在一些状况中使用，通过它们对血管纤维蛋白溶解系统的抑制作用，提高了上述疾病状态的风险。这样的状况包括但不限于高血压、肥胖、糖尿病、代谢综合征和吸烟。此外，我们的发明可以用于具有因其他原因而降低的纤维蛋白溶解活性的受试者，包括但不限于纤维蛋白溶解系统的成分中的遗传变异。
[0065]如上所述，血栓形成的心血管事件作为两个不同的过程的结果而发生，即，一方面是血管壁的慢性血管动脉粥样硬化的缓慢进展，以及另一方面，快速引起流动阻滞的突然的急性血块形成。可以治疗的特定的病理学的状况是与后一过程相关。
[0066]特别地，可以治疗的病理状况可以选自由心肌梗塞、稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛、间歇性跛行综合症、缺血性中风、短暂性脑缺血发作、深静脉血栓形成和肺栓塞构成的组。[0067]更特别地，所述病理状况选自由深静脉血栓形成和肺栓塞构成的组。[0068]此外，根据本发明可以治疗的病理学状况有完全或至少部分地由因为局部或全身性炎症而提高的血纤蛋白沉积和/或降低的纤维蛋白溶解能力引起的那些病理状况。这些包括但不限于动脉粥样硬化、代谢综合征、糖尿病、弥漫性血管内凝血、类风湿性关节炎、肾小球肾炎、系统性红斑狼疮、血管炎、自体免疫性神经病变和肉芽肿病以及与其他状况(例如，代谢综合征、糖尿病、弥漫性血管内凝血、类风湿性关节炎、肾小球肾炎、系统性红斑狼疮、血管炎、自体免疫性神经病变和肉芽肿病以及与其他状况相关的炎症)相关的炎症。
[0069]在进一步优选的实施方式中，根据本发明可以治疗的病理学状况有完全或至少部分地由因为局部或全身性炎症而提高的血纤蛋白沉积和/或降低的纤维蛋白溶解能力引起的那些病理状况。这些包括但不限于心肌梗塞、稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛、间歇性跛行综合症、缺血性中风、短暂性脑缺血性发作、深静脉血栓形成和肺栓塞。
[0070]在本发明的特别优选的方面，所述病理状况选自由深静脉血栓形成和肺栓塞构成的组。
[0071]除了如本领域已知的由医师进行的全身性或局部炎症的传统诊断之外，局部或全身性炎症可以使用与炎症相结合的一种或多种生物标记物在患者中测定。这些生物标记物包括但不限于C反应性蛋白、TNF-alpha、高灵敏度的C-反应性蛋白(hs-CRP)、纤维蛋白原、IL-1beta和IL_6。测定患者是否具有全身性或局部炎症的特定的方法包括下文中描述的那些。
[0072]此外，已知动脉粥样硬化斑块与非常局部化的炎症过程相关。因此，局部炎症也可以通过由血管超声或其他成像技术诊断的动脉粥样硬化斑块的存在来间接地测定。
[0073]现在将参考以下的方面和实施方式进一步限定本发明。
[0074]在本发明的第一个方面，提供了一种方法:
[0075](I)治疗或预防与过量的血纤蛋白沉积和/或血栓形成相关的病理状况；和/或
[0076](II)强化血纤蛋白沉积物的降解和预防这样的沉积物，所述沉积物与病理学的状况相关或可能引起这样的状况，
[0077]所述方法包括向需要这样的治疗的患者施用治疗有效量的HDAC抑制物,或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物或盐，
[0078]所述化合物、酯、酰胺、溶剂化物或盐在下文中可以称为“本发明的化合物”。
[0079]在本发明的可选的第一个方面中，提供了一种作为HDAC抑制物或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物或盐(即，本发明的化合物)的化合物，用于:
[0080](I)治疗或预防与过量的血纤蛋白沉积和/或血栓形成相关的病理状况；和/或
[0081](II)强化血纤蛋白沉积物的降解和预防这样的沉积物，所述沉积物与病理学的状况相关或可能引起这样的状况。
[0082]本领域技术人员将理解“作为HDAC抑制物的化合物”可以称为“HDAC抑制物”，反之亦然。此外，当提及作为HDAC抑制物的具体化合物或化合物类别时，它们可以用化合物的名称或化合物类别来简单地称呼(即，隐含的是这样的化合物是HDAC抑制物)。
[0083]在本发明还可选的第一个方面中，提供了 HDAC抑制物或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物或盐(即，本发明的化合物)在制造药物中的用途，所述药物用于:
[0084](I)治疗或预防与过量的血纤蛋白(也称纤维蛋白)沉积和/或血栓形成相关的病理状况；和/或
[0085](II)强化血纤蛋白沉积物的降解和预防这样的沉积物，所述沉积物与病理学的状况相关或可能引起这样的状况。
[0086]在本发明又进一步可选的第一个方面，提供了 HDAC抑制物或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物或盐(即，本发明的化合物)在以下方面中的用途:
[0087](I)治疗或预防与过量的血纤蛋白沉积和/或血栓形成相关的病理状况；和/或
[0088](ii)强化血纤蛋白沉积物的降解和预防这样的沉积物，所述沉积物与病理学的状况相关或可能引起这样的状况。
[0089]要理解的是，化合物是否是HDAC抑制物可以由技术人员容易地确定。例如，它将包括展现了 HDAC抑制效果的任何物质/化合物，所述抑制效果可以在此处描述的测试中测定(例如，在实施例64中)。
[0090]特别地，如果发现了在3mM或更低的浓度下展现50%的抑制作用，化合物/物质可以被分类为HDAC抑制物。优选地，如果发现在100 μ M或更低的浓度下展现50%的抑制作用，化合物/物质可以被分类为HDAC抑制物(例如，在低于90 μ M的浓度下，例如，低于50 μ Μ，或甚至低于10 μ Μ，例如，低于ΙμΜ)。
[0091]例如，当根据实施例64(下文)测试时，如果发现在低于100 μ M(例如，低于I μ Μ，或优选地，低于0.3 μ Μ)的浓度下对至少一种重组人类标准HDAC酶(HDACl-1 I)的活性(IC50)显现50%抑制作用，化合物/物质可以被分类为HDAC抑制物。
[0092]在本发明的优选的实施方式中(例如，本发明的第一方面的优选的实施方式)，存在用于治疗或预防与过量的血纤蛋白沉积和/或血栓形成相关的病理状况的方法、化合物。在进一步的实施方式中，存在用于治疗或预防与血栓形成相关的病理状况的方法、化合物。
[0093]在本发明的优选的实施方式中(例如，本发明的第一方面的优选的实施方式)，与过量的血纤蛋白沉积和/或血栓形成相关的病理状况是由于受损的纤维蛋白溶解。在更优选的实施方式中，受损的纤维蛋白溶解是由降低的内源t-PA生产引起的。
[0094]要理解的是，患者是否患有受损的纤维蛋白溶解和/或降低的内源t-PA生产可以由技术人员容易地确定。
[0095]在可以提及的本发明的第一个方面的实施方式中，HDAC抑制物是羟肟酸、或其O-烷基或O-芳基衍生物(包括其药学上可接受的盐)。特别地，可以提及的化合物包括其中HDAC抑制物是羟肟酸(包括其药学上可接受的盐)的那些。更特别的羟肟酸类包括在此提及的那些。
[0096]术语“异羟肟酸”将是本领域技术人员公知的。特别地，该术语可以指含有一个或多个(例如，一个)异羟肟酸部分(即，-C (O) NHOH部分)的化合物。同样，术语“其O-烷基或O-芳基衍生物”将被理解为是指含有一个或多个(例如，一个)衍生自异羟肟酸的部分、但是其中在末端-OH基团上的氢被替换为烷基(例如，任选地取代的甲基)或芳基基团(例如，任选地取代的苯基)的化合物。
[0097]优选的本发明的化合物(例如，对于本发明的第一个方面)包括在下文(i)到(XXXii)的任意一项或多项中限定的那些，或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物或盐。
[0098]在本发明的第二个方面中，提供了使用的方法、化合物或如本发明的第一方面中限定的用途，其中所述化合物如下文(i)到(xxxii)的任意一项或多项中限定，或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物或盐。
[0099]化合物(i)到(xxxii)
[0100](i)式A限定的化合物(特别是如W093/07148和US RE38506中描述的):
[0101]
【权利要求】
1.一种化合物，所述化合物是HDAC抑制物，所述化合物用于: (I)治疗或预防与过量血纤蛋白沉积和/或血栓形成相关的病理状况；和/或 (II)强化血纤蛋白沉积物的降解以及预防这样的沉积物，所述沉积物与病理状况相关或可能引起这样的状况， 其中:所述化合物选自以下构成的组: (a)Givinostat? (下式)或其盐、水化物或溶剂化物；
2.如权利要求1中的任一项要求使用的化合物，其中，所述与过量血纤蛋白沉积和/或血栓形成相关的病理状况是由于受损的纤维蛋白溶解作用。
3.如权利要求1至2中的任一项要求使用的化合物，其中，所述受损的纤维蛋白溶解作用是由降低的内源t-PA生产引起的。
4.如权利要求1至3中任一项要求使用的化合物，其中，所述病理状况是完全或至少部分地由提高的血纤蛋白沉积和/或降低的纤维蛋白溶解能力引起的。
5.如权利要求1至4中任一项要求使用的化合物，其中，所述病理状况选自由心绞痛、心肌梗塞、缺血性中风、深静脉血栓形成、肺栓塞、弥漫性血管内凝血、肾血管疾病、和间歇性跛行构成的组。
6.如权利要求1至4中任一项要求使用的化合物，其中，所述病理状况是完全或至少部分地由因为局部或全身性的炎症而提高的血纤蛋白沉积和/或降低的纤维蛋白溶解能力引起的。
7.如权利要求1至4和6中任一项要求使用的化合物,其中,所述病理状况选自由动脉粥样硬化、代谢综合征、糖尿病、弥漫性血管内凝血、类风湿性关节炎、肾小球肾炎、系统性红斑狼疮、血管炎、自体免疫性神经病变和肉芽肿病以及与其他状况相关的炎症构成的组。
8.如权利要求1至7中任一项要求使用的化合物，其中，所述化合物以按重量计以<50% (例如，I到40%)的剂量施用: (i)用于肿瘤学适应症的剂量；或 (ii)最大耐受剂量。
9.如权利要求1至8中任一项要求使用的化合物，其中，所述化合物以按最大耐受剂量的重量计≤10% (例如，0.1到10.0%)的剂量施用。
10.如权利要求1至9中任一项要求使用的化合物，其中，所述化合物以0.01-1OOOmg/天的数量施用，优选的产生0.1nM到10 μ M的最大血浆浓度(Cmax)。
11.如权利要求1至10中任一项要求使用的化合物，其中，所述化合物与治疗有效量的一种或更多种其他治疗试剂一起施用，任选地与一种或更多种药学上可接受的载体或赋形剂一起施用。
12.如权利要求1至11中任一项要求使用的化合物，其中，所述其他治疗试剂是:(a)丙戊酸或其药学上可接受的盐；和/或(b) —种或更多种靶向血块形成的药物。
13.如权利要求1至12中任一项要求使用的化合物，其中，所述化合物按以下各自的剂量施用: Vorinostat:大约 10-200mg/ 天，产生大约 InM-1 μ M 的 Cmax ； Belinostat:大约 2-1000mg/ 天，产生大约 InM-1 μ M 的 Cmax ；
Givinostat:大约 0.05_200mg/ 天，产生< 0.5 μ M 的 Cmax ；
Panobinostat:大约 0.1-1Omg/ 天，产生< 0.1 μ M 的 Cmax ；
PC1-24781:大约 0.05-300mg/ 天，产生大约 InM-1 μ M 的 Cmax ；
JNJ-26481585:大约 0.01-1OOmg/ 天，产生大约 0.1nM-0.1 μ M 的 Cmax ；
Mocetinostat:大约 l_75mg/ 天，产生< 0.5 μ M 的 Cmax ；
SB939:大约 0.05-50mg/ 天，产生≤ 0.5 μ M 的 Cmax ；
CXDlOl:大约 0.05-300mg/ 天，产生≤ 0.5 μ M 的 Cmax0
14.一种方法: (I)治疗或预防与过量血纤蛋白沉积和/或血栓形成相关的病理状况；和/或 (II)强化血纤蛋白沉积物的降解以及预防这样的沉积物，所述沉积物与病理状况相关或可能引起这样的状况， 所述方法包括向需要这样治疗的患者施用治疗有效量的如权利要求1要求的HDAC抑制物，或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物或盐。
15.一种药物组合物,所述药物组合物包括: (a)如权利要求1中任一项要求的HDAC抑制物； (b)一种或更多种药学上可接受的载体或赋形剂；和 (c)丙戊酸或其药学上可接受的盐。
16.—种成套试剂盒，所述成套试剂盒包括:(A)如权利要求1中任一项要求的HDAC抑制物；以及(B)丙戊酸或其药学上可接受的盐。
17.丙戊酸或其药学上可接受的盐，用于改善或标准化由局部或全身性的炎症损害的内源纤维蛋白溶解。
18.丙戊酸或其药学上可接受的盐，用于治疗或预防与过度血纤蛋白沉积和/或血栓形成相关的病理状况，其中，所述病理状况完全或至少部分地由因为局部或全身性的炎症而提高的血纤蛋白沉积和/或降低的纤维蛋白溶解能力所引起。
19.一种改善或标准化由局部或全身性的炎症损害的内源纤维蛋白溶解作用的方法，所述方法使用包括向需要这样治疗的受试者(或患者)施用治疗有效量的丙戊酸或其药学上可接受的盐。
20.一种治疗或预防与过度血纤蛋白沉积和/或血栓形成相关的病理状况的方法，其中所述病理状况完全或至少部分地由因为局部或全身性的炎症而提高的血纤蛋白沉积和/或降低的纤维蛋白溶解能力引起，所述方法使用包括向需要这样治疗的受试者(或患者)施用治疗有效量的丙戊酸，或其药学上可接受的盐。
21.如权利要求17或18中要求使用的化合物，或权利要求19或20中要求的方法，其中所述丙戊酸或其药学上可接受的盐以每天每公斤体重I μ g到30mg的数量施用，优选地产生大约I μ M-2mM的Cmax。
22.如权利要求17或18中要求使用的化合物，或权利要求19或20中要求的方法，其中所述改善或标准化由局部或全身性的炎症损害的内源纤维蛋白溶解作用是心血管疾病的治疗或预防的部分。
23.如权利要求17或18中要 求使用的化合物，或权利要求19或20中要求的方法，其中所述病理状况是心血管疾病。
【文档编号】A61P13/12GK103648492SQ201280012475
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2012年3月9日 优先权日:2011年3月9日
【发明者】皮亚·拉尔森, 尼克拉斯·伯格, 斯文克·吉尔恩 申请人:赛伦诺科学有限公司