具有肿瘤导向性治疗作用的多肽-药物缀合物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及提供具有肿瘤导向性治疗作用的多肽-药物缀合物，多肽-药物缀合物的制备方法及其应用。本发明多肽-药物缀合物可以特异性的将PD0325901类似物输送到整合素αvβ3过量表达的癌细胞内，进而起到对肿瘤导向性治疗的作用。
【专利说明】具有肿瘤导向性治疗作用的多肽-药物缀合物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及具有肿瘤导向性治疗作用的多肽-药物缀合物及其应用。本发明属于 生物医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 信号传导通路是机体细胞与外界传递信息、转运物质的重要方式，是细胞赖以生 存的重要生命活动。肿瘤细胞利用各种信号通路的过度激活加速肿瘤细胞的增殖、分化、侵 袭、迁移，以及抑制细胞凋亡等，导致癌症的发生和发展进程。包括PI3K/mT0R/AKT通路、 JAK/STAT通路和MAPK通路在内，各种信号传导通路都或多或少参与肿瘤发展进程，是目前 抗肿瘤药物研究的热分子靶点。ERK信号传导通路在细胞信号传导网络中处于枢纽地位，主 要与细胞的增殖和分化密切相关。ERK通路过度活化大大会促进肿瘤细胞增殖、新血管生 成、抑制细胞凋亡、影响它们分化，这涉及到大约25%的人类恶性肿瘤。近期的研究还发现， 此通道同时参与了肿瘤侵蚀和转移等多阶段过程。因此，直接抑制ERK通道活性是治疗许 多恶性肿瘤的高效方法。
[0003] MEK1和MEK2是双特异性激酶，它能够对丝氨酸、苏氨酸和色氨酸残基进行磷酸 化。由于在它们的激酶结构域具有较高的同源性，因此这两种亚型在生物学过程中具有相 同的活化机理。这就导致了这两种激酶的抑制剂具有相似的抑制活性和精致的选择性。 PD98059和U0126是第一代抑制剂，但是由于它们的药理性质不好，导致其不适合在临床 上应用。CI-1040(PD184352)是第一个被设计出来的非-ATP竞争的，具有较高特异性的 MEK1/2抑制剂，它已经被用于临床上多种肿瘤细胞的研究。但是，考虑到这些肿瘤细胞治疗 的安全性和不足的临床活性，这种抑制剂也被迫放弃。
[0004] PD0325901是一种可以口服的，细胞穿透力强的第二代非ATP竞争的MEK抑制 齐IJ。其MEK1/2酶的抑制活性是CI-1040的50倍以上，增加了其药理学和药代动力学性能。 PD0325901对于治疗晚期的恶性肿瘤细胞具有非常好的疗效，例如：黑色素瘤，乳腺癌，非 小细胞肺癌（NSCLC)和结肠癌。但是，研究表明，与CI-1040相比，PD0325901具有非常严 重的眼部和神经的毒副作用，因此停止在二期临床应用。另外，分布广泛的MEK1/2在细胞 生长、发育和肝脏再生中发挥着重要的作用。因此，靶向输送Η)0325901到肿瘤细胞以减少 对正常组织的伤害作用就成了它在晚期癌症治疗由于BRAF或NRAS突变导致癌症的先决条 件。
[0005] 多肽-药物缀合物对于抗癌药物的靶向性输送是一种有前途的策略。这种多肽能 够识别并键合到只对肿瘤细胞表达或者过量表达的特异性受体上。通过随后的配体-受体 的内化作用（受体参与的内吞作用），键合到多肽配体上的药物分子能够顺利地到达靶向 肿瘤细胞并发挥其治疗作用。与抗体-药物缀合物相比，多肽-药物缀合物分子小，使其具 有很好的细胞穿透性。而且多肽-药物缀合物载药性比较高，这就降低了其对正常组织的 伤害性。另外，与蛋白-药物缀合物、抗体-药物缀合物相比，多肽-药物缀合物具有较低 的免疫原性。
[0006] 随着分子肿瘤生物学的发展，越来越多的肿瘤受体和能对它们特异性表达的多肽 被发现。例如：整合素受体，生长激素抑制素受体（SST)，胃泌素释放肽受体（GRP)，R-黑色 素细胞刺激激素受体（R-MSH)，这些受体被用于肿瘤靶向作用。能够特异性识别这些受体 的多肽分子在肽链药物输送体系的发展中受到了极大的重视。整合素 ανβ 3受体为一跨 膜异二聚体糖蛋白复合物，它在血管的形成，生长和成熟的过程中发挥着重要的作用。这种 受体还能对肿瘤分级和组织类型进行特异性表达，而且它在黑素瘤，恶性胶质瘤，卵巢癌细 胞，乳腺癌细胞和前列腺癌细胞中过量表达。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的之一是提供具有肿瘤导向性治疗作用的多肽-药物缀合物；本发明 多肽-药物缀合物可以特异性的将Η)0325901类似物输送到整合素 α ν β 3过量表达的癌 细胞内，进而起到对肿瘤导向性治疗的作用。
[0008] 本发明的目的之二是提供制备上述的多肽-药物缀合物的合成方法；
[0009] 本发明的目的之三是本发明提供的多肽-药物缀合物在肿瘤导向性治疗中的应 用；
[0010] 本发明的目的之四是本发明提供的多肽-药物缀合物在制备肿瘤导向性治疗制 剂中的应用。
[0011] 本发明通过以下技术方案达到上述目：
[0012] 具有肿瘤导向性治疗作用的多肽-药物缀合物Α，其结构通式如下：
[0013]
【权利要求】
1. 具有肿瘤导向性治疗作用的多肽-药物缀合物A，其结构通式如下：
其中，X为〇、S或没有；Y为0或S原子；m为0或1 ;n选自0-10中任意数值；η'选自 1-10中任意数值；Ρ为含RGD序列的环状多肽化合物。
2. 根据权利要求1所述的多肽-药物缀合物Α，其特征在于，所述的Ρ为含有多聚甘氨 酸、多聚丝氨酸及多聚乙二醇链接臂的含R⑶序列的环状多肽化合物。
3. 根据权利要求1所述的多肽-药物缀合物Α，其特征在于，所述的Ρ选自c (RGDyK)、 c (RGDfK)或 c (RGDfE)，或 c (RGDyK)、c (RGDfK)、c (RGDfE)相应的二聚体、四聚体、八聚体等多 聚体；其中， c (RGDyK) :cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Tyr-Lys)，结构式如下： c (RGDyK) :cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Phe_Lys)，
结构式如下：
c (RGDfE) :cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Phe_Glu)，结构式为：
4.制备权利要求1-3所述的多肽-药物缀合物A的方法，包括以下步骤： (1) 合成带有侧链的Η)0325901类似物 ① 用（Boc)2与化合物1反应得到化合物2
② 步骤①获得的化合物2通过Mi tsunobu反应获得化合物3
③ 步骤②获得的化合物3在一水合肼的作用下发生肼解还原反应得到化合物4
④ 步骤③获得的化合物4与化合物5缩合，获得含有侧链的Η)0325901的类似物6
⑤ 步骤④获得的化合物6在TFA的条件下，脱去Boc保护基，得到化合物7
(2) 在化合物7上添加丁二酸类的连接臂得到化合物8
(3) P与化合物8偶联反应，即得多肽-药物缀合物A，优选的， 当P为c (RGDyK)时，在DIPEA和PyBOP的条件下直接缩合得到多肽-药物缀合物9-1
当P为PEG-c(RGDyK)、E[c(RGDyK)]2或连接三聚或五聚甘氨酸、丝氨酸链接臂的 c (RGDyK)时，在NHS，DCC的条件下将Η)0325901类似物转化成活化酯10,再在DIPEA的作 用下与相应的多肽进行缩合，得到多肽-药物缀合物9-2
5.具有肿瘤导向性治疗作用的多肽-药物缀合物B，其结构通式如下：
其中，P为含RGD序列的环状多肽化合物； 优选的，P为含有多聚甘氨酸、多聚丝氨酸及多聚乙二醇链接臂的含R⑶序列的环状多 肽化合物； 更优选的，P选自c (RGDyK)、c (RGDfK)、c (RGDfE)以及它们分别的二聚体、四聚体、八聚 体等多聚体；其中， c (RGDyK) :cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Tyr-Lys)，结构式如下：
c (RGDyK) :cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Phe_Lys)，结构式如下：
c(RGDfE) :cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Phe_Glu)，结构式为：
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6. 制备权利要求5所述的多肽-药物缀合物B的方法，包括以下步骤： (1) 在Η)0325901上添加丁二酸酐连接臂得到化合物11
(2) 将得到的化合物11在NHS，DCC的条件下转化成活化酯12
(3) 将得到的活化酯在DIPEA的作用下与P进行缩合，得到多肽-药物缀合物13,即多 肽-药物缀合物B :
7. 权利要求1-3中任一项所述的多肽-药物缀合物A在肿瘤导向性治疗作用中的应 用。
8. 权利要求5所述的多肽-药物缀合物B在肿瘤导向性治疗作用中的应用。
9. 权利要求1-3中任一项所述的多肽-药物缀合物A在制备肿瘤导向性治疗制剂中的 应用。
10. 权利要求5所述的多肽-药物缀合物B在制备肿瘤导向性治疗制剂中的应用。
【文档编号】A61P35/00GK104248770SQ201310259826
【公开日】2014年12月31日 申请日期:2013年6月26日 优先权日:2013年6月26日
【发明者】武芸, 陈自立, 候建军, 李肖肖 申请人:北京大学